TCIRA 56-2023 輻照滅活高致病性病毒劑量的確定方法

中國(guó)同位素與輻射行業(yè)協(xié)會(huì)IT/CIRA56—2023前言 Ⅲ1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 1 25材料與設(shè)備 26指示病毒預(yù)試驗(yàn) 27高致病性病毒輻照滅活試驗(yàn) 38病毒滅活有效性與最低有效輻照滅活劑量判定 3附錄A(規(guī)范性)輻照設(shè)備劑量標(biāo)定方法 4 7Ⅲ1T/CIRA56—2023輻照滅活高致病性病毒劑量的確定方法本文件規(guī)定了輻照滅活高致病性病毒劑量的確定方法，包括材料與設(shè)備、指示病毒預(yù)試驗(yàn)、高致病性病毒輻照滅活試驗(yàn)、病毒滅活有效性與最低有效輻照滅活劑量判定等要求。本文件適用于在BSL3、BSL4實(shí)驗(yàn)室中使用電子束輻照滅活高致病性病毒劑量的確定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB18871電離輻射防護(hù)與輻射源安全基本標(biāo)準(zhǔn)WS/T367—2012醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范WS/T775—2021新型冠狀病毒消毒效果實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院424號(hào)令3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。高致病性病毒highlypathogenicvirus能夠引起人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的病毒。病毒滅活virusinactivation通過物理或化學(xué)方法使病毒失去感染性。吸收劑量absorbeddose電離輻射授予質(zhì)量為dm的物質(zhì)的平均能量de除以物質(zhì)質(zhì)量dm的商。最低有效滅活劑量minimumeffectivedose為達(dá)到滅活病毒目的所需要的最低吸收劑量，即工藝劑量下限值。病毒滴度virustiter單位體積液體中具有感染能力病毒的數(shù)目。2半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量50%tissuecultureinfectivedose能在50%細(xì)胞培養(yǎng)板孔引起細(xì)胞病變(cytopathiceffect,CPE)的病毒量，是病毒滴度常用的測(cè)量在病毒去除和滅活工藝驗(yàn)證研究中使用的用于顯示工藝處理效果的感染性活病毒。4原理失去感染性。用細(xì)胞感染法測(cè)定輻照處理前后樣本中病毒滅活效果，以細(xì)胞病變作為判斷指標(biāo)；輻照處理使病毒滴度對(duì)數(shù)值不低于4的樣品失去感染性，判斷為有效滅活。使病毒滴度值等于4的樣品失5材料與設(shè)備應(yīng)滿足以下條件：b)單次輻照劑量0～150kGy;c)加速器能放置于BSL3、BSL4實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。需滿足以下條件：c)輻照設(shè)備使用前應(yīng)進(jìn)行劑量率標(biāo)定，具體按照附錄A執(zhí)行。6指示病毒預(yù)試驗(yàn)需滿足以下條件：a)所選指示病毒應(yīng)和擬開展試驗(yàn)的高致病性病毒屬于同一種屬；b)所選指示病毒應(yīng)屬于低致病性或宿主為非靈長(zhǎng)類的病毒，可在低安全等級(jí)實(shí)驗(yàn)室開展相關(guān)3對(duì)指示病毒采取的輻照滅活試驗(yàn)方法、條件、操作步驟和判定標(biāo)準(zhǔn)等應(yīng)與擬開展試驗(yàn)的高致病性病毒一致。a)先對(duì)高致病性病毒樣品進(jìn)行滴度測(cè)定，試驗(yàn)病毒滴度對(duì)數(shù)值應(yīng)≥4.0;b)通過調(diào)整上樣量和稀釋，使至少一次試驗(yàn)的樣品中待測(cè)病毒滴度對(duì)數(shù)值等于4.0;取病毒載體置于細(xì)胞培養(yǎng)板中，并進(jìn)行密封處理，再放入加速器輻照裝置內(nèi)腔內(nèi)。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)置不同輻照劑量梯度，輻照處理至相應(yīng)的時(shí)間取出。輻照后的樣品放入用10min,混勻洗脫。7.2滅活組和7.3對(duì)照組按照終點(diǎn)稀釋法分別進(jìn)行病毒滴度測(cè)定，試驗(yàn)重復(fù)3次。具體步驟按照WS/T775—2021中載體制備和載體法滅活試驗(yàn)。8病毒滅活有效性與最低有效輻照滅活劑量判定用細(xì)胞感染法測(cè)定輻照處理前后樣本中病毒的量，以病毒侵染后細(xì)胞病變作為判斷指標(biāo)。使用a)陰性對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)正常；b)陽性對(duì)照組病毒滴度對(duì)數(shù)值應(yīng)≥4.0;滿足8.2有效性判定標(biāo)準(zhǔn)且病毒滴度對(duì)數(shù)值等于4.0對(duì)應(yīng)的輻照劑量最小值，即為最低有效輻照滅活劑量。4(規(guī)范性)輻照設(shè)備劑量標(biāo)定方法A.1劑量計(jì)采用B3薄膜劑量片。A.2.1分光光度計(jì)：能提供520nm光波波長(zhǎng)；波長(zhǎng)精度±2±0.5%(T)(SRM930D);透射比重復(fù)性0.3%(T);光譜帶寬6nm;雜光≤0.5%(T)(360nm,NaNO?)。A.2.4鑷子：用于夾取劑量片，防止其他拿取方式污染薄膜劑量片。A.3.1將一張A4紙平鋪在托盤上(公司提供的標(biāo)準(zhǔn)高度24mm托盤),要求紙張要與金屬托盤貼合A.3.2將紙張多余部分去除。標(biāo)注1個(gè)測(cè)量點(diǎn)(一側(cè)1個(gè)，共3個(gè)點(diǎn))。如圖A.15托盤托盤劑量片圖A.2劑量片在托盤上的放置位置示意圖A.3.5劑量片放置好后需要對(duì)其進(jìn)行固定(設(shè)備在輻照時(shí)設(shè)備會(huì)通入氮?dú)猓鲃?dòng)的氮?dú)鈺?huì)將輕薄的劑量片吹移位置)。固定方法是在劑量片的邊緣采用紙膠帶粘接固定。粘接固定需要固定在對(duì)角上的兩個(gè)點(diǎn)，同時(shí)需要注意劑量片要平貼在A4紙上。粘接方法如圖A.3所示。圖A.3劑量片紙膠帶粘接方法示意圖A.3.6劑量片固定好后邊可放入設(shè)備進(jìn)行劑量測(cè)量標(biāo)定。劑量點(diǎn)擊啟動(dòng)。A.3.8輻照完成后將劑量片依次貼在紙上放入烘箱(烘箱溫度60℃)保溫15min,然后采用分光光度儀讀取參數(shù)δ。分光光度儀使在用前需要預(yù)熱30min。A.3.9在使用分光光度儀讀數(shù)前需要對(duì)儀器進(jìn)行校驗(yàn)。首先打開電源開關(guān)等待30min預(yù)熱，預(yù)熱完成后按下述步驟操作：a)按“MODE”鍵進(jìn)入“T”擋；在完成上述操作就即可進(jìn)行劑量片讀數(shù)。6T/CIRA56—2023的參數(shù)δ做好記錄。然后用δ參數(shù)的劑量對(duì)照表讀取3個(gè)讀取參數(shù)δ1、δ2、0?分別所對(duì)應(yīng)的劑量讀數(shù)值記為D?、D?、D?。最后根據(jù)公式(A.1)計(jì)算輻照平均劑量D:通過分光光度儀測(cè)量的劑量讀數(shù)值。7T/CIRA56—2023[1]GB/T25306輻射加工用電子加速器工程通用規(guī)范[2]T/CIRA29—2022冷鏈?zhǔn)称繁砻娴男滦凸跔畈《緶缁顒┝恳骩3]WS588—2018手足口病診斷perimentPatholuPharmakol.1931;162:480-483[5]孫廷麗，韓玉茹，王青柏，等.噬菌體作為指示病毒的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].微