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蛋白質(zhì)兩性性質(zhì)及等電點(diǎn)的測定
關(guān)鍵詞:蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)兩性性質(zhì)等電點(diǎn)兩性電解質(zhì)帶電基團(tuán)酚基巰基胍基咪唑基兩性反應(yīng)實(shí)驗原理蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。蛋白質(zhì)分子中可以解離的基團(tuán)除N端α―氨基與C端α―羧基外,還有肽鏈上某些氨基酸殘基的側(cè)鏈基團(tuán),如酚基、巰基、胍基、咪唑基等基團(tuán),它們都能解離為帶電基團(tuán)。因此,在蛋白質(zhì)溶液中存在著下列平衡:陽離子兩性離子陰離子pH<pIpH=pIpHpI電場中:移向陰極不移動移向陽極調(diào)節(jié)溶液的pH使蛋白質(zhì)分子的酸性解離與堿性解離相等,即所帶正負(fù)電荷相等,凈電荷為零,此時溶液的pH值稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。在等電點(diǎn)時,蛋白質(zhì)溶解度最小,溶液的混濁度最大,配制不同pH的緩沖液,觀察蛋白質(zhì)在這些緩沖液中的溶解情那是給天生一對的人的,自己,怎么會擁有像袁慕野那樣的美好的人兒呢?木況即可確定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。試劑和器材一、試劑1mol/L乙酸:吸取99.5%乙酸2.875mL,加水至50mL。0.1mol/L乙酸:吸取1mol/L乙酸5mL,加水至50mL。
0.01mol/L乙酸:吸取0.1mol/L乙酸5mL,加水至50mL。
0.2mol/LNaOH:稱取NaOH2.000g,加水至50mL,配成1mol/LNaOH。然后量取1mol/LNaOH10mL,加水至50mL,配成0.2mol/LNaOH。
0.2mol/LHCl:吸取37.2%HCl4.17mL,加水至50mL,配成1mol/LHCl。然后吸取那是給天生一對的人的,自己,怎么會擁有像袁慕野那樣的美好的人兒呢?木1mol/LHCl10mL,加水至50mL,配成0.2mol/LHCl。0.01%溴甲酚綠指示劑:稱取溴甲酚綠0.005g,加0.29mL1mol/LNaOH,然后加水至50mL。二、測試樣品
0.5%酪蛋白溶液:稱取酪蛋白0.25g放入50mL容量瓶中,加入約20mL水,再準(zhǔn)確加入1mol/LNaOH5mL,當(dāng)酪蛋白溶解后,準(zhǔn)確加入1mol/L乙酸5mL,最后加水稀釋定容至50mL,充分搖勻。三、器材試管1.5&15cm;移液管1mL,2mL,10mL;膠頭滴管。操作方法一、蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)那是給天生一對的人的,自己,怎么會擁有像袁慕野那樣的美好的人兒呢?木
取一支試管,加0.5%酪蛋白1mL,再加溴甲酚綠指示劑4滴,搖勻。此時溶液呈藍(lán)色,無沉淀生成。
用膠頭滴管慢慢加入0.2mol/LHCl,邊加邊搖知道有大量的沉淀生成。此時溶液的pH值接近酪蛋白的等電點(diǎn)。觀察溶液顏色的變化。繼續(xù)滴加0.2mol/LHCl,沉淀會逐漸減少以至消失。觀察此時溶液顏色的變化。
滴加0.2mol/LNaOH進(jìn)行中和,沉淀又出現(xiàn)。繼續(xù)滴加0.2mol/LNaOH,沉淀又逐漸消失。觀察溶液顏色的變化。二、酪蛋白等電點(diǎn)的測定
取同樣規(guī)格的試管7支,按下表精確地加入下列試劑:試劑管號12345671.0mol/L乙酸1.60.8000000.1mol/L乙酸00410000.01mol/L乙酸00002.51.250.62H2O2.43.2031.52.753.38溶那是給天生一對的人的,自己,怎么會擁有像袁慕野那樣的美好的人兒呢?木液的混濁度
充分搖勻,然后向以上各試管依次加入0.5%酪蛋白1mL,邊加邊搖,搖勻后靜置5min,觀察各管的混濁度。
用-、+、++、+++等符號表示各管的混濁度。根據(jù)混濁度判斷酪蛋白的等電點(diǎn)。最混濁的一管的pH值即為酪蛋白的等電點(diǎn)。注意事項在測定等電點(diǎn)的實(shí)驗中,要求各種試劑的濃度和加入量相當(dāng)準(zhǔn)確。
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