蛋白質(zhì)兩性性質(zhì)及等電點(diǎn)的測定

蛋白質(zhì)兩性性質(zhì)及等電點(diǎn)的測定

關(guān)鍵詞：蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)兩性性質(zhì)等電點(diǎn)兩性電解質(zhì)帶電基團(tuán)酚基巰基胍基咪唑基兩性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。蛋白質(zhì)分子中可以解離的基團(tuán)除N端α―氨基與C端α―羧基外，還有肽鏈上某些氨基酸殘基的側(cè)鏈基團(tuán)，如酚基、巰基、胍基、咪唑基等基團(tuán)，它們都能解離為帶電基團(tuán)。因此，在蛋白質(zhì)溶液中存在著下列平衡：陽離子兩性離子陰離子pH<pIpH=pIpHpI電場中：移向陰極不移動(dòng)移向陽極調(diào)節(jié)溶液的pH使蛋白質(zhì)分子的酸性解離與堿性解離相等，即所帶正負(fù)電荷相等，凈電荷為零，此時(shí)溶液的pH值稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度最小，溶液的混濁度最大，配制不同pH的緩沖液，觀察蛋白質(zhì)在這些緩沖液中的溶解情那是給天生一對的人的，自己，怎么會(huì)擁有像袁慕野那樣的美好的人兒呢？木況即可確定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。試劑和器材一、試劑1mol/L乙酸：吸取99.5%乙酸2.875mL，加水至50mL。0.1mol/L乙酸：吸取1mol/L乙酸5mL，加水至50mL。

0.01mol/L乙酸：吸取0.1mol/L乙酸5mL，加水至50mL。

0.2mol/LNaOH：稱取NaOH2.000g，加水至50mL，配成1mol/LNaOH。然后量取1mol/LNaOH10mL，加水至50mL,配成0.2mol/LNaOH。

0.2mol/LHCl：吸取37.2%HCl4.17mL，加水至50mL，配成1mol/LHCl。然后吸取那是給天生一對的人的，自己，怎么會(huì)擁有像袁慕野那樣的美好的人兒呢？木1mol/LHCl10mL，加水至50mL，配成0.2mol/LHCl。0.01%溴甲酚綠指示劑：稱取溴甲酚綠0.005g，加0.29mL1mol/LNaOH，然后加水至50mL。二、測試樣品

0.5%酪蛋白溶液：稱取酪蛋白0.25g放入50mL容量瓶中，加入約20mL水，再準(zhǔn)確加入1mol/LNaOH5mL，當(dāng)酪蛋白溶解后，準(zhǔn)確加入1mol/L乙酸5mL，最后加水稀釋定容至50mL，充分搖勻。三、器材試管1.5&15cm；移液管1mL，2mL，10mL；膠頭滴管。操作方法一、蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)那是給天生一對的人的，自己，怎么會(huì)擁有像袁慕野那樣的美好的人兒呢？木

取一支試管，加0.5%酪蛋白1mL，再加溴甲酚綠指示劑4滴，搖勻。此時(shí)溶液呈藍(lán)色，無沉淀生成。

用膠頭滴管慢慢加入0.2mol/LHCl，邊加邊搖知道有大量的沉淀生成。此時(shí)溶液的pH值接近酪蛋白的等電點(diǎn)。觀察溶液顏色的變化。繼續(xù)滴加0.2mol/LHCl，沉淀會(huì)逐漸減少以至消失。觀察此時(shí)溶液顏色的變化。

滴加0.2mol/LNaOH進(jìn)行中和，沉淀又出現(xiàn)。繼續(xù)滴加0.2mol/LNaOH，沉淀又逐漸消失。觀察溶液顏色的變化。二、酪蛋白等電點(diǎn)的測定

取同樣規(guī)格的試管7支，按下表精確地加入下列試劑：試劑管號12345671.0mol/L乙酸1.60.8000000.1mol/L乙酸00410000.01mol/L乙酸00002.51.250.62H2O2.43.2031.52.753.38溶那是給天生一對的人的，自己，怎么會(huì)擁有像袁慕野那樣的美好的人兒呢？木液的混濁度

充分搖勻，然后向以上各試管依次加入0.5%酪蛋白1mL，邊加邊搖，搖勻后靜置5min，觀察各管的混濁度。

用-、+、++、+++等符號表示各管的混濁度。根據(jù)混濁度判斷酪蛋白的等電點(diǎn)。最混濁的一管的pH值即為酪蛋白的等電點(diǎn)。注意事項(xiàng)在測定等電點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)中，要求各種試劑的濃度和加入量相當(dāng)準(zhǔn)確。

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