化妝品中壬二酸及其鹽類的檢驗(yàn)方法

附件2化妝品中壬二酸及其鹽類的檢驗(yàn)方法DeterminationofAzelaicAcidanditssaltsinCosmetics1范圍本方法規(guī)定了高效液相色譜法測定化妝品中壬二酸及其鹽類（以壬二酸計(jì)）的含量。本方法適用于膏霜乳類、液體類、凝膠類、粉劑類、泥類、貼膜類化妝品中壬二酸及其鹽類（以壬二酸計(jì)）的測定。2方法提要樣品提取凈化后，經(jīng)高效液相色譜儀分離，二極管陣列檢測器檢測，根據(jù)保留時(shí)間和紫外光譜定性，峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。本方法壬二酸的檢出限為0.05μg，定量下限為0.17μg；當(dāng)取樣量為1.0g，稀釋定容體積為20mL時(shí)壬二酸的檢出濃度為0.005%，最低定量濃度為0.017%。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1甲醇。3.2氨水。3.3磷酸。3.4乙腈，色譜純。3.5氨溶液：量取氨水（3.2）1mL，用水稀釋至100mL。3.62%磷酸甲醇溶液：量取磷酸（3.3）2mL，用甲醇（3.1）稀釋至100mL。3.70.1%磷酸溶液：量取磷酸（3.3）1.0mL，用水稀釋至1000mL。3.8標(biāo)準(zhǔn)品：壬二酸（英文名稱：AzelaicAcid，分子式：C9H16O4；分子量：188.22；CAS號(hào)：123-99-9）。3.9壬二酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取壬二酸標(biāo)準(zhǔn)品40mg（精確到0.00001g）于10mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度[可先加少量甲醇（3.1）超聲助溶]，搖勻，即得濃度為4mg/mL的壬二酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，避光密封保存，20日內(nèi)穩(wěn)定。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器。4.2天平，感量0.0001g和0.00001g。4.3超聲波清洗器，功率≥120W。4.4渦旋振蕩器。4.5離心機(jī)。4.6混合陰離子固相萃取柱（填料質(zhì)量≥150mg），基質(zhì)為季銨鹽改性的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，使用前依次用15mL甲醇（3.1）、15mL水活化。4.7固相萃取裝置。5分析步驟5.1標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備分別準(zhǔn)確移取壬二酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.9）適當(dāng)量，用水稀釋配制成濃度分別為3μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。5.2樣品處理5.2.1洗面奶、洗發(fā)水、沐浴露等淋洗類化妝品稱取混合均勻的樣品1.0g（精確到0.0001g）于10mL具塞比色管中，加甲醇（3.1）約8mL，渦旋分散后超聲提取10min，放冷后定容至刻度，準(zhǔn)確量取5mL上清液（必要時(shí)可離心或過濾），置10mL具塞比色管中，用水定容至刻度，搖勻，濾過，即得待測溶液。5.2.2其他類化妝品稱取混合均勻的樣品1.0g（帶有載體的面膜，去除載體后取樣；精確到0.0001g）于10mL具塞比色管中，加甲醇（3.1）2mL，渦旋分散，加水約6mL，加氨溶液（3.5）0.5mL，充分渦旋2min后超聲提取10min，放冷后用水定容至刻度，渦旋混勻。準(zhǔn)確量取0.5~5mL上清液（必要時(shí)可離心或過濾）置已活化好的固相萃取柱（4.6）上，待樣品溶液流盡后，依次用水15mL、甲醇（3.1）15mL淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，再用2%磷酸甲醇溶液（3.6）5mL洗脫，收集洗脫液置10mL比色管中，用水定容至刻度，搖勻，濾過，即得待測溶液。注1：待測原料含量比較大的樣品可通過適當(dāng)稀釋或減少上樣體積以確保待測溶液濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。注2：凝膠類樣品推薦上樣量不超過2mL。5.3參考色譜條件色譜柱：金剛烷基鍵合硅膠色譜柱（5μm，4.6×250mm），或等效色譜柱；流動(dòng)相：A：乙腈（3.4）；B：0.1%磷酸溶液（3.7）；梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序時(shí)間/minV（A）/%V（B）/%017836178382674152674179010流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μL；檢測波長：210nm。5.4測定在“5.3”色譜條件下，取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（5.1）分別進(jìn)樣，進(jìn)行色譜分析，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取“5.2”項(xiàng)下的待測溶液進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間和紫外光譜圖定性，測得峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測溶液中壬二酸的濃度。按“6”計(jì)算樣品中壬二酸的含量。6分析結(jié)果的表述6.1計(jì)算式中：ω（以壬二酸計(jì)）——化妝品中壬二酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；ρ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到壬二酸的質(zhì)量濃度，μg/mL；V——樣品稀釋定容體積，mL；m——樣品取樣量，g；D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。6.2回收率和精密度多家實(shí)驗(yàn)室的回收率在80.7%～110.6%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于9.2%（n=6）。7圖譜圖1壬二酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖1：壬二酸（15.8min）圖2典型樣品色譜圖1：壬二酸（15.8min）注：壬二酸二鉀和壬二酸二鈉在液相色譜、液相色譜-質(zhì)譜上均是以壬二酸形式被檢出。

附錄A（規(guī)范性附錄）壬二酸結(jié)果的確證如液相色譜方法中檢出結(jié)果和化妝品標(biāo)簽成分不一致，需采用液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行確認(rèn)。A.1樣品前處理過程見5.2樣品處理。A.2參考色譜條件色譜柱：C18柱（1.8μm，2.1×100mm），或等效色譜柱；流動(dòng)相：A：乙腈；B：0.05%甲酸溶液。梯度洗脫程序見表A.1；表A.1流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間/minV（A）/%V（B）/%035653356579010890108.1356510.53565流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：2μL。A.3參考質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI）；監(jiān)測模式：負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）；監(jiān)測離子對及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定見表A.2；表A.2監(jiān)測離子對及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定表名稱母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞能(V)壬二酸187.1125.1*-2097.0-24*為推薦定量離子。注：當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。A.4定性用液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行定性。如樣品檢出的特征離子峰的保留時(shí)間與濃度相近的壬二酸標(biāo)準(zhǔn)溶液一致（相對偏差在±2.5%之內(nèi)），且樣品所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的監(jiān)測離子對