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文檔簡介

腸致瀉性大腸埃希氏菌實驗室活動風險評估報告一、生物學特性(一)種類和細菌分型大腸埃希菌是人和動物腸道中的正常菌群,一般對人體無害。本菌為革蘭陰性的短桿菌,其抗原結構有3種,即菌體抗原(O抗原),包膜抗原(K抗原)和鞭毛抗原(H抗原)。O抗原是血清分型的基礎,目前已發(fā)現(xiàn)170多種,其中一些特殊的血清型具有病原性,能引起人類腹瀉,故稱為腸致瀉性大腸埃希菌。根據(jù)發(fā)病機制、臨床特征,流行病學特征,抗原血清型及細菌的毒力測定可將腸致瀉性大腸埃希菌分為5類:腸致病性大腸埃希菌(Enteropathogenic,E.Coli,EPEC)、腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌(EnterotoxigenicE.Coli,ETEC)、腸侵襲性大腸埃希菌(EnteroinvasiveE.Coli,EIEC)、腸出血性大腸埃希菌(EnterohemorrhagicE.Coli,EHEC)和腸集聚黏附性大腸埃希菌(EnteroaggregativeE.Coli,EAggEC)。(二)來源大腸埃希菌屬包括多種細菌,臨床上以大腸埃希菌最為常見.大腸埃希氏菌(E.Coli)通稱大腸桿菌,是所有哺乳動物中的正常寄生菌,一方面能結合維生素B及維生素K供機體吸收利用,另一方面能抑制腐敗菌及病原菌和真菌的過度增殖,但當它們離開腸道的寄生部位,進入機體的其他部位時,能感染發(fā)病。有些菌型有致病性,引起腸道或尿路感染性疾患。腸致病性大腸埃希菌是指能使人、動物(尤其是嬰兒和幼齡動物)感染及人食物中毒的一群大腸埃希菌。在自然界中,本菌分布廣泛,主要的寄生場所是人和其他恒溫動物的腸道中,是一類條件性致病菌。(三)傳染性大腸埃希菌所引起的食源性疾病主要由食入被污染的食物和水而引起,可以導致腸道外感染,如泌尿系感染、菌血癥、膽囊炎、肺炎及新生兒腦膜炎等,也會造成輕微腹瀉到霍亂樣嚴重腹瀉,乃致引起致死性的并發(fā)癥。腸侵襲性大腸桿菌由人—人傳染而致病,推測為糞—口途徑感染。(四)傳播途徑腸道內感染以糞—口途徑為主,可通過食用污染的食物、水而傳播,引起食源性細菌性腹瀉。人與動物的密切接觸也可傳播。蒼蠅,蟑螂等昆蟲因其生活習性特殊,在一些細菌性腹瀉的傳播中發(fā)揮了重要作用。通過醫(yī)務人員的手或污染公共物品可造成醫(yī)院內感染從而引起醫(yī)院內腹瀉傳播。多數(shù)大腸埃希菌在腸道內不致病,但如移位至腸道外的組織,則可引起感染,及腸道外感染(五)易感性人群普遍易感,沒有交叉免疫。兒童,老年人,有免疫抑制或慢性疾病者為高危人群,并且容易發(fā)生嚴重并發(fā)癥。一些正使用抗生素的患者是抗生素相關性腹瀉的高危人群。另外,旅游者易發(fā)生細菌性腹瀉,稱為旅游者腹瀉?;疾『罂色@得免疫力,但持續(xù)時間較短。(六)潛伏期不同的腸致瀉性大腸埃希菌引起的中毒,癥狀各不相同,潛伏期也各有長短,腸出血性大腸埃希菌引起的中毒潛伏期較長,一般可達3-10d,腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌、腸侵襲性大腸埃希菌、腸致病性大腸埃希菌、腸集聚黏附性大腸埃希菌引起的中毒潛伏期一般為1-4d,短者為數(shù)小時,長者可達7d。(七)劑量-效應關系關于是否發(fā)生腸致瀉性大腸埃希菌食物中毒,不同腸致瀉性大腸埃希菌的感染劑量各不相同,不同個體也存在差異。腸致瀉性大腸埃希菌食物中毒的感染及程度主要與致病機制和感染劑量密切相關。(八)致病性腸致瀉性大腸埃希菌具有病源性,能引起人類腹瀉。部分大腸埃希菌菌株與嬰兒腹瀉相關,并可引起成人腹瀉或食物中毒的暴發(fā)。ETEC的主要毒力因子為熱不穩(wěn)定毒素,熱穩(wěn)定毒素及與致病性相關的定居因子:EPEC的主要毒力因子有菌毛、志賀楊毒素(Shiga-liketoxins,SLTs)和LEE毒力島;EIEC在毒力因子和致病機制上與志賀菌基本一致;EHEC的主要毒力因子有志賀樣毒素(SLTs)、溶血素、LEE毒力島及其他未知的毒力因素;EAggEC是一類新發(fā)現(xiàn)的致瀉性大腸桿菌,目前已知的毒力因子有菌毛和熱穩(wěn)定腸毒素。(九)變異性濫用抗生素使得大腸埃希菌存在著基因突變,導致耐藥菌株的產(chǎn)生。(十)環(huán)境中的穩(wěn)定性因無芽孢,對理化因素抵抗力不強,在60℃中30min即死亡。(十一)藥物敏感性腸致瀉性大腸埃希氏菌對磺胺類、鏈霉素、氯霉素等敏感。對于抗生素治療,首選氯霉素、多粘菌素、慶大霉素、卡那霉素。但是對于腸出血性大腸埃希氏菌感染者,應慎用抗生素,因抗生素非但不能縮短病程,反而會增加發(fā)生溶血性尿毒綜合征的機會。腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌易產(chǎn)生耐藥性。(十二)消毒劑敏感性腸致瀉性大腸埃希氏菌易被一般化學消毒劑殺滅,常用氯進行飲水消毒。膽鹽、煌綠等染料對非致病性腸桿菌科細菌有抑制作用。(十三)物理滅活在55℃中60min或60℃加熱15min仍有部分細菌存活。EHEC可在7~50℃的溫度中生長,其最佳生長溫度為37℃.有些甚至可在pH值達到4.4和最低水活度為0.95的食物中生長。烹飪食物時,必須使食物的所有部分至少達到70℃以上時才可認為該菌被消滅。(十四)在宿主體外存活腸致瀉性大腸埃希氏菌體外抵抗力較強,在自然界中的水和土壤中能存活數(shù)周至數(shù)月,在溫度較低的糞便中存活更久,在陰涼處的室內塵埃中可存活1個月。(十五)與其他生物和環(huán)境的交互作用凡是體內有腸致瀉性大腸埃希氏菌感染的病人、帶菌者和家畜、家禽等都可傳播本病。一些動物可成為儲存宿主,較常見的可傳播本病的動物有牛、雞、羊、狗、豬等,其中以牛的帶菌率最高,患病或帶菌動物往往是動物來源食品污染的根源。帶菌動物在其活動范圍內也可通過排泄的糞便污染當?shù)氐氖澄铩⒉輬?、水源或其他水體及場所,造成交叉污染和感染,危害極大。(十六)預防和治療方案1.預防措施預防接種目前尚沒有成熟的、可供大范圍使用的疫苗。但在ETEC的免疫預防研究中,發(fā)現(xiàn)其菌毛抗原在自然感染和人工主動免疫中是關鍵抗原之一。預防原則應以改善公共衛(wèi)生條件、切斷傳播途徑為主,同時加強對傳染源的管理,采取綜合性預防措施,對重點人群、集體單位應特別注意預防暴發(fā)和流行。不吃生的或加熱不徹底的牛奶、肉等動物性食品。不吃不干凈的水果、蔬菜。剩余飯菜食用前要徹底加熱。防止食品生熟交叉而發(fā)生污染。養(yǎng)成良好的個人衛(wèi)生習慣,飯前便后洗手。食品加工、生產(chǎn)企業(yè)特別是餐飲業(yè)應嚴格保證食品加工、運輸及銷售的安全性。2.治療方案排除毒物,必要時進行催吐、洗胃和導瀉;對癥治療;抗生素治療,首選氯霉素、多粘菌素、慶大霉素和卡那霉素。二、實驗室相關活動風險評估與控制(一)實驗室感染性因子的種類、來源和危害1.感染性因子的種類腸致瀉性大腸埃希氏菌產(chǎn)生多種毒力因子。根據(jù)其生物學特性和本中心實驗室檢測的能力范圍,本實驗室可能的感染性因子為腸致瀉性大腸埃希氏菌病原體本身。2.感染性因子的來源(1)食物中毒事件中采集的食物、糞便等可疑標本,日常檢測的食品、水等樣品。(2)樣品采集和檢測過程中涉及的所有實驗場所。(3)實驗室檢驗操作過程中可能產(chǎn)生的含病原體的氣溶膠。3.感染性因子可能造成的危害(1)被污染的實驗器材、器皿等對實驗室環(huán)境造成污染。(2)實驗室廢棄物對環(huán)境造成污染。(3)實驗人員暴露后污染。(4)實驗室含病原菌的氣溶膠對實驗室環(huán)境造成的污染。由于腸致瀉性大腸埃希氏菌主要通過腸道內感染,糞-口途徑可通過食用污染的食物、水而傳播,引起食源性細菌性腹瀉。通過醫(yī)務人員的手或污染公共物品可造成醫(yī)院內感染從而引起醫(yī)院內腹瀉傳播。雖然引起食物中毒的感染劑量要達到一定劑量才可引發(fā)疾病,但仍然存在感染的風險。(二)實驗室常規(guī)活動過程中的風險評估與控制1.實驗方法(1)主要風險點識別未采用國家標準、行業(yè)標準進行檢測;使用新的或變更過的國家標準或行業(yè)標準前,未經(jīng)技術確認,可能存在安全風險。(2)風險控制措施盡量采用國家標準、行業(yè)標準進行檢測,在使用新的或變更過的國家標準或行業(yè)標準前,必須經(jīng)過嚴格的技術確認。2.樣品采集(1)食品和水樣等樣品采集①主要實驗設備和器材采樣剪刀或鑷子、密閉盛樣容器等。②主要風險點識別食品和水樣等樣品中可能存在感染性病原體,采樣人員采樣不規(guī)范、盛樣容器密合不嚴、意外破損等,可導致樣品濺灑、溢出、滲漏而污染環(huán)境;同時,銳器使用不當,存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風險。③風險控制措施采集容器必須防水、防漏,容器外面要包裹足量的吸收性材料,以便容器被打破或泄露時,能吸收溢出的所有液體。在使用剪子、鑷子、玻璃容器等銳器時必須規(guī)范操作,做好防護,防止刺傷或劃傷。(2)食物中毒事件中糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物、剩余食物等采集①主要實驗設備和器材PV螺旋蓋采便盒(管)、玻璃試管或培養(yǎng)皿、采樣棉簽、食物盛器等。②主要風險點識別疑似食物中毒糞便、嘔吐物、剩余食物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣品中可能存在大量感染性病原體,采集過程存在樣本濺出從而形成顆粒氣溶膠;工作人員采樣不規(guī)范、個人防護不到位,導致環(huán)境污染和人員感染。③風險控制措施采樣人員應戴手套、口罩,采樣時動作輕柔,采樣容器盡量使用外螺旋蓋塑料管;發(fā)生污染時,應立即進行消毒處理。(3)血樣的采集①主要實驗設備和器材一次性采血針、真空采血管、消毒棉簽及一次性利器盒。②主要風險點識別血液樣品可能存在不明感染性病原體,真空采血管密封蓋意外脫落或采血針內殘留血滴落,造成血樣濺灑從而污染人員或環(huán)境;采血針頭存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風險。③風險控制措施使用一次性采血針和真空采血管,采樣人員經(jīng)過正規(guī)采血培訓,并熟練掌握采血技巧。采血前做好個人防護(防護服、乳膠手套、口罩);認真、仔細、謹慎操作,抽血后的針頭直接放入利器盒內,禁止用手直接接觸使用后的針頭或將使用后的針頭重新套上針頭套;采好血后直立于試管架中,防止倒翻;消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專用袋中,統(tǒng)一進行消毒處理。3.樣品的包裝和運送(1)主要實驗設備和器材真空密封采血管、外螺旋蓋玻璃瓶、PV螺旋蓋采樣罐(管)主容器、95千帕樣品運輸罐、B類標本運輸箱(UN2814冷藏箱)、運送車輛。(2)主要風險點識別盛樣容器不堅固、密合不嚴,有可能存在樣品濺灑、溢出、滲漏;樣本運輸包裝不符合生物安全要求,可能導致樣品的側翻、滲漏而造成污染擴散。(3)風險控制措施盛裝樣品容器必須堅固,不易破碎,盡可能選用塑料制品,采樣后必須檢查容器的密合性。樣品嚴格按照B類要求包裝和運送。4.樣品接收和前處理(1)主要實驗設備和器材剪刀、鑷子、振蕩器、均質器、均質袋、離心機、生物安全柜、潔凈工作臺等。(2)主要風險點識別樣品管理員未按實驗室樣品管理程序要求接收樣品;樣品前處理時打開感染性樣本包裝的動作過猛,會造成樣品側翻;對食品等固形物樣品進行剪切時,操作不慎發(fā)生手剪傷;均質器均質樣本時發(fā)生均質袋破裂,離心操作時離心管破裂等意外情況。(3)風險控制措施①樣品接收必須在專用的區(qū)域進行,合同評審人員和收樣人員嚴格按照《樣品管理程序》(XJK/CX32)要求交接樣品,不得擅自打開樣品包裝,收樣后及時洗手。②開始檢測前,對盛裝感染性材料樣品的容器,必須在生物安全柜中緩慢打開,食品和水樣必須在潔凈工作室內打開,開啟容器時管口不能對著操作者。③對食品等固體物樣品取樣,要小心使用剪刀和鑷子,進盡可能鑒取食物可食部分,以防止樣品均質時堅硬物質刺破均質袋,造成樣液濺灑。對含有感染性的樣品進行離心振蕩時,必須將離心蓋密封嚴實,并關上離心機蓋。④實驗室應配備應急藥箱,發(fā)生手剪傷等意外事件時應立即進行消毒包扎處理。⑤當發(fā)生離心管或均質袋意外破裂、濺出時,及時對所有涉及污染的部位進行消毒處理,同時,按《二級生物安全實驗室建設與管理》“實驗室意外事故的處置”章節(jié)處置。5.樣本檢測過程(1)主要實驗設備和器材培養(yǎng)箱、水浴箱、細菌鑒定和藥敏測試儀(ATB儀)、全自動快速致病菌檢測儀(miniVIDAS)、定量熒光PCR儀、核酸提取儀、凝膠成像儀、生物安全柜、金屬浴、振蕩器、離心機及離心管、吸管和試管、移液器及吸頭、接種環(huán)、培養(yǎng)皿等。(2)主要風險點識別①對食品、水樣、糞便、嘔吐物、剩余食物等樣品進行的腸致瀉性大腸埃希氏菌分離鑒定、生化試驗、藥敏試驗等實驗活動均涉及活菌操作,在檢測過程中移液、混勻震蕩、劃線分離、涂片染色、離心等操作都可產(chǎn)生氣溶膠。雖然腸致瀉性大腸埃希氏菌不通過呼吸道感染,但由于樣品可能含有其他未知的病原體,因此也不應忽視。②實驗過程中玻璃器材意外碎裂或滲漏、離心操作時離心管意外破裂等事故,可造成液體濺出污染設備表面或工作臺面等環(huán)境,從而間接污染操作者皮膚、黏膜。通過糞—口途徑食入一定量的腸致瀉性大腸埃希氏菌導致食物中毒。③提取核酸時使用的無水乙醇屬易燃易爆物質,溴化乙啶具有強烈的致癌性。(3)風險控制措施①檢測人員在實驗前應按照二級生物安全防護要求做好自身防護措施(穿防護服、戴手套、口罩,穿不露腳趾和覆蓋腳背、防滑、防滲漏的工作鞋),進行水樣等樣品抽濾、濃縮等操作,必須在潔凈實驗室內進行且動作要輕緩。下呼吸道分泌物等病理標本、涉及感染性活菌的實驗操作必須在生物安全柜內進行。實驗結束后對桌面、臺面及時進行消毒處理。②必須使用移液器或吸球移取樣液,旋蓋和移液操作的動作要輕緩,所有吸管應用棉塞,移液頭盡可能使用帶濾芯的。以減少對移液器或吸球的污染。③使用直徑2~3mm且完全封閉、手柄的長度小于6cm的接種環(huán)分離細菌,盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán),避免在酒精燈的明火上加熱從而避免感染性物質的爆濺。④盡可能以塑料器代替玻璃器皿,若必須使用玻璃器皿,則只能用實驗室級玻璃(硼硅酸鹽),且任何破碎或有裂紋的器皿都應丟棄。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片、玻璃碎片等銳器。嚴禁用帶有注射針頭的注射器吸液,更不可當吸管用。用過的銳器應直接放入利器盒,經(jīng)消毒后廢棄。⑤分子生物學檢測實驗中使用的無水乙醇屬易燃易爆物質,應放置在通風柜遠離熱源;溴化乙啶屬有毒物質需專人專管。⑥在任何可能導致潛在的傳染性物質濺出的操作過程中,應保護好面部、眼睛和嘴。6.菌株使用、保存和運輸(1)主要實驗設備和器材接種針(環(huán))、菌株保存管、生物安全柜、95千帕樣品運輸罐、B類標本運輸箱(UN2814冷藏箱)、運送車輛。(2)主要風險點識別①保菌操作不規(guī)范、個人防護不到位、保菌磁珠管等保菌容器意外破損、磁珠掉落等會導致病原菌污染實驗室環(huán)境和實驗人員。②腸致瀉性大腸埃希氏菌的使用和保存未按照《菌(毒)種管理規(guī)程》(XJK/CX37)要求實施管理,存在菌株被惡意使用及污染環(huán)境等生物安全隱患。③運送包裝不符合生物安全要求,或運輸工具無安全保障,則易造成污染擴散,甚至樣本丟棄。(3)風險控制措施①腸致瀉性大腸埃希氏菌的分離純化及保菌操作應在生物安全柜內進行。若發(fā)生保菌磁珠管等破損、磁珠掉落時,應及時對所有涉及污染的部位進行消毒處理。②腸致泄性大腸埃希氏菌標準株的使用、保存嚴格按照《菌(毒)種管理規(guī)程》(XJK/CX37)要求進行操作,嚴格實行雙人雙鎖保管,嚴防菌株被惡意使用而造成生物危害。③腸致泄性大腸埃希氏菌陽性菌株的上送應嚴格執(zhí)行B類運輸包裝(同樣品采集),攜帶“可感染人類的高致病性病原微生物菌(毒)種或樣本運輸許可證”,由專車運送,并由專業(yè)人員全程護送。7.實驗室的清潔和消毒(1)主要實驗設備和器材70%~75%的酒精、施康清洗消毒液I。(2)主要風險點識別工作完畢后,若不及時對工作臺面、生物安全柜進行消毒,則有可能會對下次的操作人員造成污染或感染。(3)風險控制措施工作完畢后,及時對檢測所涉及的工作臺面、地面和生物安全柜進行消毒,使用稀釋100倍的施康清洗消毒液I擦拭,用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%~75%的酒精擦拭消毒。待實驗和消毒完畢,先脫去手套,再脫去防護服,并正確用肥皂和流水洗手。8.廢棄物處置(1)主要實驗設備和器材醫(yī)療廢棄物專用袋、硬質耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。(2)主要風險點識別①樣品采集和試驗檢測過程產(chǎn)生的感染性廢棄物主要有食品、水樣、糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣本,血液血清標本,病原菌的培養(yǎng)基,標本和陽性菌種及所有試驗過程涉及的用品,稀釋前未按照規(guī)范要求處理,導致感染或致病因子外泄而污染環(huán)境。②樣品采集和試驗檢測過程產(chǎn)生的未被污染的損傷性廢棄物,如一次性使用采血用具、載玻片、玻璃試管、玻璃安培、培養(yǎng)皿等,未按照要求規(guī)范處理,存在意外刺傷或劃傷工作人員的隱患。(3)風險控制措施實驗室廢棄物處理應遵循《醫(yī)療廢物管理條例》《醫(yī)療衛(wèi)生機構醫(yī)療廢物管理辦法》《醫(yī)療廢物專用包裝物、容器標準和警示標識規(guī)定》等相關法規(guī)要求,分類收集,規(guī)范處置。所有損傷性廢棄物必須放置于有警示標識的硬質、防漏、防銳器刺破的專用利器盒中;所有感染性廢棄物必須放置于有警示標識的醫(yī)療廢物專用包裝袋中;使用高效消毒液浸泡或高溫高壓滅菌后集中處理,集中存放至中心制定的醫(yī)療廢棄室,由有資質的醫(yī)療廢棄物處理單位上門收集,集中處置。同時,做好廢棄物處置交接記錄,所有相關記錄應定期整理歸檔。(三)實驗室常規(guī)活動中其他風險評估與預防控制措施1.電力(1)主要風險點識別斷電或電壓不穩(wěn),存在引發(fā)電器設備故障的隱患。斷電可使運行中的生物安全柜、潔凈室高效過濾器等生物安全防護設備突然停止工作,致使實驗活動被迫中斷,存在感染性物質外溢,從而污染操作人員和環(huán)境的風險。(2)預防控制措施實驗室由雙路市電供電,并為關鍵儀器設備配備應急電源(UPS),避免實驗室由于斷電可能引發(fā)的生物安全風險,確保檢測工作順利進行。2.電氣操作(1)主要風險點識別實驗室活動涉及的電氣操作,包括實驗室工作區(qū)內電器設備的啟動、關閉、安全和維修;設備層內UPS、空調機組等電氣設備的啟動、關閉和維修等。這些電氣操作的過程可能發(fā)生觸電、電擊、造成電氣故障等事故。(2)預防控制措施①電器設備的設計及制造符合相關安全標準要求。實驗室工作區(qū)內若有380V電源插座,需明確標識,并由有資質的專業(yè)人員進行操作。②新的、改裝過的或修理過的電器設備在未經(jīng)專業(yè)人員(如有資質的電工)完成電氣安全測試和設備符合安全要求之前,不允許使用。③電器設備使用人員接受正確操作的培訓,操作方式不降低電氣安全性。電器設備使用人員要定期檢查設備中可能引起電氣故障的破損。只有專業(yè)人員可從事電器設備和電路工作。禁止未經(jīng)授權的工作。④采取措施對設備去污染,以降低維護人員被病原菌感染的風險。3.實驗室給排水設施設備(1)主要風險點識別實驗室含有給排水的設施設備,包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。當水管道意外破裂、排水管道阻塞時,可能導致感染性材料溢出,有污染實驗人員和環(huán)境的風險。(2)預防控制措施實驗室產(chǎn)生的所有染菌物及器具,必須先經(jīng)高壓滅菌或氯消毒劑浸泡消毒后洗滌,洗消產(chǎn)生的污水集中排入中心污水池進行消毒處理,嚴禁直接排放。按照GB18466要求,監(jiān)測總余氯、糞大腸菌群及其他致病菌。4.實驗室設施設備管道(1)主要風險點識別實驗室設施設備管道穿越圍護結構的部位可能造成密封不嚴的問題,當感染性材料溢出時,有污染環(huán)境的風險。(2)預防控制措施所有管道穿越圍護結構的部位英嚴格密封,定期進行檢查檢測,避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境。5.主要檢測儀器設備(1)離心機①主要風險點識別未正確配備密閉蓋離心機、密封頭的真空采血管、耐壓螺旋蓋離心管,高速離心時可產(chǎn)生氣溶膠擴散;離心血樣時沒有做好平衡,可能會發(fā)生離心管破裂、離心管蓋脫落,存在血樣污染離心轉子和離心腔的風險。②風險控制措施實驗室配備密閉蓋離心機、密封頭的真空采血管、耐壓螺旋蓋離心管;離心前做好平衡,選擇正確的離心速度和離心力;規(guī)范正確操作;每次使用后做好清潔消毒和使用維護記錄,定期進行功能檢查,確保離心機性能正常。(2)細菌鑒定和藥敏測試儀(ATB儀)、PCR儀、全自動快速致病菌檢測儀(miniVIDAS)、核算提取儀、凝膠成像儀等設備。①主要風險點識別對疑似腸致瀉性大腸埃希氏菌鑒定時,要使用ATB儀、mini-VIDAS、核酸提取儀、PCR儀等儀器。如果使用時不按操作規(guī)程進行操作,則存在病原體濺出、滲漏而污染實驗環(huán)境和人的隱患。②風險控制措施嚴格按ATB儀、mini-VIDAS、核酸提取儀、PCR儀等設備操作規(guī)程規(guī)范操作和維護,每次使用完畢后對設備箱體及可能污染的實驗環(huán)境進行消毒。6.生物安全設施設備(1)生物安全柜①主要風險點識別沒有按照設備操作規(guī)程或使用說明書進行操作、維護,使生物安全柜的氣溶膠防護效果明顯降低,甚至消失,失去安全防護效果。設備長時間使用未及時更換HEPA過濾膜,可出現(xiàn)工作窗口氣流速度降低或流向紊亂等功能失常狀況。生物安全柜使用后未徹底消毒處理,對清潔、維護人員將會產(chǎn)生污染。設備長期關停,將會使部分電器元件老化從而失去正常功能。沒有及時對設備移位、碰撞受損等進行性能檢測等。②預防控制措施使用人員接受相關操作、維護培訓,做到規(guī)范使用和維護。每月進行空氣沉降菌檢測,每年請有資質的服務機構對生物安全柜風速、氣流、塵埃粒子數(shù)、紫外線強度等主要性能指標進行檢測,確保其功能正常。一旦生物安全柜使用造成污染,應及時進行消毒。(2)高壓滅菌器①主要風險點識別沒有正確配備高壓滅菌器,存在氣溶膠污染環(huán)境的隱患;沒有按照設備操作規(guī)程,甚至沒有使用說明書進行操作、維護,可能使高壓滅菌器效果明顯降低或失效,失去去污染與無害化的作用;壓力鍋長時間使用又不定期檢測滅菌效果,對壓力容器的滅菌效果無從考證,存在滅菌不徹底從而引發(fā)污染的隱患。壓力鍋長時間關停期間,如果不及時排干鍋體水分,將會使內部器件老化從而失去正常功能。②預防控制措施選擇下排式高壓滅菌器,防止氣溶膠污染,正確規(guī)范操作,定期維護,確保高壓滅菌器性能正常,做好使用記錄。壓力滅菌器使用時每次監(jiān)測化學指示物,監(jiān)控記錄溫度、壓力、時間等滅菌參數(shù),每周進行生物監(jiān)測,以保證滅菌質量。(3)個人防護用品①主要風險點識別實驗室不提供足夠數(shù)量的、符合質量要求的防護服、防護眼罩、一次性乳膠手套、口罩和覆蓋足背的防滑鞋等,使用大小不合適的個人防護用品,個人防護用品穿戴、脫卸的程序、方法不符合要求,均可能造成人員感染或污染環(huán)境。②風險控制措施選擇正規(guī)、符合質量要求的防護用品,按照規(guī)定的程序正確使用、脫卸。(4)應急救治設施和用品①主要風險點識別實驗室若沒有配備洗眼器、應急藥箱等必要的應急設施和物品,或配備的急救用品種類不全、不合適或過期,則導致急用時無法發(fā)揮作用。②預防控制措施在實驗室內正確配備洗眼器,確保功能正常。配備的75%乙醇、碘伏或其他消毒劑、創(chuàng)口貼等急救物品與實驗活動相適應并在有效期內使用,由專人負責管理,定期維護、清理和更新。(5)消毒滅菌劑①主要風險點識別消毒劑產(chǎn)品無生產(chǎn)許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理,將會導致消毒效果降低、生物滅活能力降低或對物品腐蝕性増加、對皮膚造成刺激等問題。②預防控制措施選擇符合國家標準的正規(guī)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品,選擇合適的消毒劑,按照規(guī)定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度(劑量)進行消毒,避免使用過期產(chǎn)品;消毒過程中消毒人員應做好必要的個體防護,防止發(fā)生意外。中心實驗室選用70%~75%酒精和稀釋10~25倍、50~100倍、200倍的施康消毒劑Ⅰ(主要成分為次氯酸鈉)作為實驗室常用消毒劑。7.管理體系的風險(1)主要風險點識別管理體系(包括應急預案)是否健全和完善,是否符合實際管理要求,程序文件、作業(yè)指導書和操作規(guī)程是否科學和具有可操作性,是確保生物安全的主要因素。如果組織結構不健全、設置不合理,體系文件與實際工作不匹配,以及部門職責不清或銜接不當?shù)?,則都可能帶來安全風險。

(2)預防控制措施定期開展對管理體系的評審,要特別關注風險評估程序、應急預案、檢測標準操作規(guī)范(SOP)等,發(fā)現(xiàn)問題及時修訂、完善,以確保生物安全管理體系持續(xù)有效運行。(四)工作人員的風險評估與預防控制措施1.人員數(shù)量和素質(1)人員數(shù)量①主要風險點識別人員過少會因缺少相互提示監(jiān)督或因工作量增大而導致操作過程中工作失誤增加,風險增加。②預防控制措施采樣和檢測人員的數(shù)量應與工作量相匹配,盡量有2名工作人員同時進行采樣和檢測工作。(2)人員結構①主要風險點識別實驗室檢測人員的職稱分布不合理,新進人員沒有高資歷人員帶教操作,不能很好應對意外事件,風險增加。②預防控制措施實驗室檢測人員的年齡和資歷結構應配備合理,新進人員應由高資歷人員帶教或監(jiān)督操作。(3)職業(yè)操守①主要風險點識別腸致瀉性大腸埃希氏菌檢測存在一定的生物安全風險,若政治思想素質不高、責任心不強的人員參與該項工作,則產(chǎn)生生物危害而危及人員安全、環(huán)境安全與社會安定的可能性較大。②預防控制措施加強職業(yè)道德教育,培養(yǎng)工作責任心。2.健康管理(1)主要風險點識別健康狀況主要包括生理、心理素質與免疫狀態(tài)。當實驗室檢測相關人員出現(xiàn)呼吸道感染癥狀、機體免疫力低下,或其他不適合工作的狀況時,職業(yè)暴露風險增加。(2)預防控制措施建立健康申請制度,遇有呼吸道感染及其他不適工作的情況,及時向科室負責人報告并暫停工作;若接觸物的傳染性大,應戴雙層手套等加強防護。3.人員資質(1)主要風險點識別檢測人員不具備衛(wèi)生檢測相關學歷教育背景,不熟悉腸致泄性大腸埃希氏菌檢測方法及操作規(guī)范,未獲得上崗證,無法保證工作質量和安全。(2)預防控制措施檢測人員必須是檢驗或相關專業(yè)畢業(yè),經(jīng)過上崗培訓和在崗持續(xù)培訓,持證上崗。4.生物安全培訓要求(1)主要風險點識別檢測人員、輔助人員、后勤保障人員、進修實習人員上崗前沒有接受嚴格的生物安全,以及相關生物安全設備操作的技術培訓,易造成生物安全事故的發(fā)生。(2)預防控制措施檢測人員、輔助人員、后勤保障人員每年參加本中心組織的生物安全知識或生物安全操作技術培訓、考核。上崗前熟練掌握操作生物安全儀器設備、設施操作技術,具備相關的安全防護能力。進修實習人員參與試驗活動前必須進行生物安全知識的培訓,在帶教老師的監(jiān)督下工作。5.應急事件處理能力(1)主要風險點識別實驗人員上崗前沒有接受實驗室意外事故處理、職業(yè)暴露后預防等突發(fā)事件處理的培訓。一旦發(fā)現(xiàn)意外事件,就不能有效地進行早期處理和控制生物安全事件。(2)預防控制措施實驗室工作人員必須嚴格按照《實驗室意外事故和職業(yè)性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應急處置技術方案》中規(guī)定的要求進行應急事件的處理,強化職業(yè)暴露的應急處理能力。(五)實驗室非常規(guī)活動中的風險評估與預防控制措施1.主要的實驗室非常規(guī)活動(1)實驗室外專業(yè)人員對實驗室設施設備的維護、維修、檢定/校準、檢測驗證(如主要設施設備的檢測驗證)和更新(如高效過濾器等的更換)等。(2)實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環(huán)境的保潔、實驗器材的清洗消毒。(3)實驗室外人員參觀實驗室和上級部門對實驗室的檢查。(4)任何其他人員需要進入實驗室從事實驗活動外的行為。2.主要風險點識別(1)上述人員進入實驗室從事相關活動,特別是不慎打翻、打破標本管或損壞儀器零部件等情況,可能會引起實驗室感染。(2)實驗室運行過程中某些人員需要進入實驗室參觀,存在影響實驗活動正常運行或者導致相關或不相關的設施設備損壞的風險。3.預防控制措施(1)實行人員準入、登記制度。進修實習人員進入實驗室從事檢測活動前,必須先進行生物安全和實驗室規(guī)章制度的培訓。若中心實驗室外專業(yè)人員和實驗室后勤保障人員確需進入實驗室進行相關活動,或上級部門需要進入實驗室進行檢查,應有檢測人員陪同。進入人員必須遵守實驗室的各項管理規(guī)定,以確保人員和環(huán)境安全。(2)進入人員未經(jīng)許可絕對不能私自動用實驗室內有標志的危險品,絕不能將未經(jīng)消毒處理的物品拿出實驗區(qū)。(3)按專業(yè)技術要求進行設施、設備的維護維修時,不能私自動用其他設施設備,若導致相關或不相關的設施設備損壞時,應及時報告。(4)當需要更換HEPA過濾膜或高效過濾器時,應先對高效過濾器、HEPA過濾膜等作原位消毒后,專業(yè)人員才能進行更換。(5)為確保自己和他人的安全,禁止未穿防護服的人員隨意進出實驗室的防護區(qū)域,同時也禁止穿防護服的人員走出實驗室的防護區(qū)域。(6)對實驗室的設施、設備進行維修工作時,動作輕柔,避免產(chǎn)生氣溶膠。(7)離開實驗室前,必須洗手。(六)被誤用和惡意使用的風險與預防控制措施1.主要風險點識別陽性標本未明確標識,未嚴格實行雙人雙鎖管理,實驗室活動結束后不及時對操作場所進行消毒,工作人員在不知情的情況下可能誤用標本、實驗器材和設施設備等,導致人員感染和實驗室環(huán)境污染,發(fā)生人員受傷或設施設備損壞等事故。2.預防控制措施(1)實行嚴格的人員準入和持證上崗制度。(2)實驗所用材料和試劑等必須有明確的標識。(3)陽性標本嚴格實施雙人雙鎖管理,上送的陽性樣本必須經(jīng)中心蓋章批準,采用專用包裝,專業(yè)人員全程護送。(七)相關實驗室已發(fā)生事故分析和從中得到啟示在實驗室開展致病性病原微生物的檢測、研究,就有可能發(fā)生職業(yè)暴露而導致實驗室感染,主要原因是實驗室人員在進行標本采集、前處理、檢驗、廢棄物處置等工作過程中,操作不規(guī)則、個人防護不到位。目前,明確致瀉性大腸埃希菌檢測引起實驗室人員感染的報道較少,但仍然存在隱患。三、實驗室理化因素風險評估及安全防護措施(一)紫外線1.主要風險點識別潔凈實驗室內傳遞窗、生物安全柜、BSL-2實驗室均使用紫外線燈進行物體表面消毒。紫外線波長為250~280nm,主要影響眼睛和皮膚,引起急性角膜炎和結膜炎、慢性白內障等眼部疾病,還可誘發(fā)皮膚癌。紫外線燈開啟時,人員在不知情的情況下進入可受到傷害。2、安全防護措施在實驗室工作應避免紫外線直接照射人體,特別是眼部。生物安全柜表面應張貼紫外線危害的標識,提醒實驗人員小心紫外線危害。在進行紫外線消毒時,實驗人員盡量遠離消毒區(qū)域。故基本可以可以規(guī)避紫外線對人體的危害。(二)輻射1.主要風險點識別輻射源或輻射事故可以間接導致病原微生物屏障系統(tǒng)的破壞,增加實驗人員被病原微生物感應的風險。2.預防控制措施實驗室應遠離輻射源,如果無法避開,則應采取物理隔離措施,防止輻射源對檢測工作和人民健康產(chǎn)生影響。本中心實驗室內部和周邊建筑群均沒有輻射源,所以輻射風險基本不用考慮。(三)施康清洗消毒劑Ⅰ1.主要風險點識別施康清洗劑Ⅰ屬于含氯消毒劑,有效氯的含量為4.55%~5.55%,次氯酸鈉為主要殺菌因子。含氯的消毒液會殘留在空氣中不揮發(fā),長期使用會使人感到頭疼、惡心、刺激黏膜,對于有體質過敏的人,還容易引發(fā)過敏、哮喘疾病等。高濃度的含氯消毒劑對人的呼吸道和皮膚有明顯的刺激作用,可使人流淚、咳嗽,并刺激皮膚和黏膜,嚴重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒者出現(xiàn)躁動、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀,甚至因窒息而死。2.安全防護措施按照使用說明,根據(jù)消毒對象不同而配制不同的稀釋倍數(shù),避免使用不必要的高濃度的消毒液,稀釋和使用時戴好手套,消毒后可及時開窗通風,基本可規(guī)避消毒液對人體的危害。(四)其他1.主要風險點識別實驗室內的照明和聲音(生物安全柜等)有可能因強光和噪聲對人體造成傷害。2.安全防護措施對實驗室的照明和聲音等參數(shù)進行檢測,確保合格,避免強光和噪聲對人員的損害。四、實驗室火災風險評估與預防控制措施1.主要風險識別(1)超負荷用電,電線過長。(2)電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良,例如電纜的絕緣層破舊或破壞。(3)用火不當?shù)纫l(fā)火災。(4)儀器設備在不使用時未關閉電源。(5)使用的儀器不是專為實驗室環(huán)境設計。(6)易燃、易爆品處理、保存不當。(7)不相容化學品沒有正確隔離。(8)在易燃物品和蒸汽附近有能產(chǎn)生火花的設備。(9)通風系統(tǒng)不當或不充分。2.預防控制措施實驗室采取以下預防控制措施避免火災發(fā)生,保證發(fā)生火災后能夠安全撤離實驗室。(1)定期檢查電器插座、電線絕緣層是否完好,保證用電負荷,對易燃、易爆等危險品進行有效區(qū)域隔離。(2)實驗室配備滅火器。放置在易取的地點,擺放部位張貼滅火器標識。該滅火器用于撲滅可控制的火災,幫助人員撤離火場:對滅火器進行定期檢查和維護,確保其有效使用。(3)實驗室需裝設應急燈,所有出口都有黑暗中可見“緊急出口”標識;當出現(xiàn)緊急狀況時,實驗室所有出口的鎖必須處于開啟狀態(tài),出口設計保證不經(jīng)過高危險區(qū)域就能逃脫,所有出口都能通向一個開放空間。(4)走廊、流通區(qū)域不得放置障礙物,不受人員流動和滅火設備移動的影響。(5)在實驗室工作區(qū)顯著位置張貼火警電話標識。實驗室每年對工作人員進行消防知識培訓,包括消防器材的使用、火災發(fā)生時的應急行動等。五、自然災害風險評估與安全防護措施自然災害可能導致的實驗室緊急狀況主要包括水災和地震等(一)水災1.風險識別水災可能導致實驗室維護結構和設施損壞,實驗室內感染性材料隨水外溢。2.安全防護措施(1)在安全手冊中制定《實驗室緊急事件應急預案》,并對所有實驗室人員進行培訓。(2)實驗室一旦發(fā)生水災報警時,應立刻停止工作。首先,考慮實驗室內感染性物質和人員的轉移。實驗室負責人、中心主任根據(jù)條件及時采取對策,第一時間聯(lián)系相關消防人員。消防人員應做好防護措施,并在受過訓練的實驗室工作人員陪同下,進入實驗室完成菌毒中和人員的安全轉移工作。(二)地震1.風險識別發(fā)生地震等自然災害會導致實驗室維護結構和設施損壞,存在人員受傷和實驗室感染性材料外溢的風險。2.安全防護措施實驗室采取措施降低自然災害帶來的風險,保證災害發(fā)生后能夠安全撤離實驗室,減少對人員和環(huán)境的影響。發(fā)生地震后,首先,設立距實驗室維護結構20m范圍內的封鎖區(qū)。其次,對封鎖區(qū)進行消毒,然后由專業(yè)人員在做好個人防護的前提下對實驗內部環(huán)境邊消毒邊清理,清理到樣品保存地點。如果保藏樣品的容器沒有被破壞,可把它安全轉移到其他安全的實驗室存放。如果保藏樣品的容器已被破壞和發(fā)生外溢,應立即用可靠方法進行徹底消毒滅菌,處理現(xiàn)場的人需要由生物安全委員會評估暴露級別和暴露源級別,再決定是否用藥及確定預防性用藥方案。六、生物安全及其他緊急事件(事故)處理預案(一)實驗室生物安全事件(事故)處理措施(1)當生物安全柜或潔凈實驗室出現(xiàn)持續(xù)正壓時,室內人員應立即停止操作,通知運行保障人員采取措施恢復負壓。如果不能及時恢復和保持負壓,應停止實驗,按規(guī)程退出。發(fā)生此類事故或發(fā)生意外停電,造成具有傳染性物質暴露潛在危險的事故和污染時,工作人員除了采取緊急措施外,立即報告實驗室安全負責人,并組織對實驗室進行終末消毒。(2)離心過程中離心管破裂時,應馬上關閉電源,讓離心機停止工作,并靜止30min。然后緩慢打開離心機蓋,將離心杯平穩(wěn)地拿到生物安全柜中。如果發(fā)生泄漏,則用1%的次氯酸鈉消毒液灌入離心杯腔體中消毒30min,然后棄去消毒液和離心管碎片,將離心杯清洗后擦干。(3)發(fā)生污染物潑濺或溢出時,立即用清潔布或吸水紙覆蓋污染處,并倒上10~25倍稀釋的施康消毒液,作用至少30min,方可清理全部污染物,用消毒劑擦拭污染區(qū)域。所有這些操作過程中都應戴手套。若發(fā)生大范圍污染物擴散事故時,應立即通知實驗室主管領導和安全負責人到達事故現(xiàn)場。待其查清情況,確定消毒方案,并組織對實驗室進行終末消毒。(二)其他緊急事件(事故)處理措施在制訂的應急預案中應包括消防人員和其他緊急救助人員。應事先告知他們哪些實驗室有潛在的感染性物質,讓他們熟悉實驗室的布局和設備。實驗室人員要熟悉緊急撤離的情況及緊急撤離的路線標識。在實驗室發(fā)生不可控制的火災、水災、爆炸或其他危險情況時,為確保工作人員的安全,要進行緊急撤離。所有實驗室人員須了解緊急撤離的行動計劃、撤離路線和緊急撤離的集合地點,每年至少參加一次緊急撤離演習,包括急救設備使用和采取應急措施。(三)生物安全及其他緊急事件(事故)報告和記錄(1)發(fā)生生物安全及其他緊急事件時,在緊急處理的同時必須向中心主管領導和生物安全委員會報告。(2)對于生物安全事件必須進行登記,記錄發(fā)生的時間、地點、詳細經(jīng)過及處理方法等。七、生物安全和生物安全保障風險管理(一)生物安全風險評估依據(jù)標準風險評估所依據(jù)的數(shù)據(jù)及擬采取的風險控制措施、安全操作規(guī)程等均應以國家衛(wèi)生和計劃生育委員會、世界衛(wèi)生組織、國際標準化組織等機構或行業(yè)權威機構發(fā)布的指南、標準等為依據(jù)。(二)危險發(fā)生的概率評估(見表5-9)表5-9腸致瀉性大腸埃希式菌實驗室活動危險發(fā)生的概率評估序號潛在危險因素危險程度發(fā)生概率固有風險措施合理性殘存風險風險可控程度1樣品運輸過程中容器意外側翻、泄露、破裂造成污染中度可能中度合理低風險可控2樣品的接收、開啟及加樣等常規(guī)實驗活動中產(chǎn)生的氣溶膠中度較大可能中度合理低風險可控3離心、加樣等試驗活動中意外事故造成盛裝標本容器破裂、溢出瞬間產(chǎn)生的氣溶膠中度可能中度合理低風險可控4檢測未經(jīng)滅活的樣品對儀器與環(huán)境造成的污染中度較大可能中度合理低風險可控5標本、實驗材料、設施設備等被誤用的風險中度可能中度合理低風險可控6陽性標本被惡意使用的風險高度較小可能高度合理低風險可控7實驗器材未經(jīng)規(guī)范消毒造成污染中度可能中度合理低風險可控8廢棄物處理不當造成病原微生物擴散中度較大可能中度合理低風險可控9滅菌裝置不符合要求,滅菌不徹底造成污染中度較小可能中度合理低風險可控10檢測人員和工勤人員被銳器誤傷造成職業(yè)暴露中度可能中度合理低風險可控11檢測人員個人防護不當造成的病原微生物擴散中度可能中度合理低風險可控12非檢測人員、進修實習等外來人員進入實驗室的不當操作中度可能中度合理低風險可控13水、點、火災及自然災害造成的風險中度較小可能中度合理低風險不可控(三)風險評估人員風險評估由中心主任組織檢驗科、質量管理科及其他熟悉腸致瀉性大腸埃希氏菌檢驗相關風險的專業(yè)人員進行風險評估并形成風險評估報告。形成的風險評估報告經(jīng)中心生物安全委員會審核,請全省熟悉相關病原微生物特征、實驗設施設備、操作規(guī)程及個人防護設備的不同領域的專家進行評估和討論,不斷修訂和完善。(四)風險評估報告風險評估報告應是實驗室采取風險控制措施、建立安全管理體系和制訂安全操作規(guī)程

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