腸致瀉性大腸埃希氏菌實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告

腸致瀉性大腸埃希氏菌實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告一、生物學(xué)特性（一）種類(lèi)和細(xì)菌分型大腸埃希菌是人和動(dòng)物腸道中的正常菌群，一般對(duì)人體無(wú)害。本菌為革蘭陰性的短桿菌，其抗原結(jié)構(gòu)有3種，即菌體抗原（O抗原），包膜抗原（K抗原）和鞭毛抗原（H抗原）。O抗原是血清分型的基礎(chǔ)，目前已發(fā)現(xiàn)170多種，其中一些特殊的血清型具有病原性，能引起人類(lèi)腹瀉，故稱(chēng)為腸致瀉性大腸埃希菌。根據(jù)發(fā)病機(jī)制、臨床特征，流行病學(xué)特征，抗原血清型及細(xì)菌的毒力測(cè)定可將腸致瀉性大腸埃希菌分為5類(lèi)：腸致病性大腸埃希菌（Enteropathogenic,E.Coli，EPEC）、腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌（EnterotoxigenicE.Coli，ETEC）、腸侵襲性大腸埃希菌（EnteroinvasiveE.Coli，EIEC）、腸出血性大腸埃希菌（EnterohemorrhagicE.Coli，EHEC）和腸集聚黏附性大腸埃希菌（EnteroaggregativeE.Coli，EAggEC）。（二）來(lái)源大腸埃希菌屬包括多種細(xì)菌，臨床上以大腸埃希菌最為常見(jiàn).大腸埃希氏菌（E.Coli）通稱(chēng)大腸桿菌，是所有哺乳動(dòng)物中的正常寄生菌，一方面能結(jié)合維生素B及維生素K供機(jī)體吸收利用，另一方面能抑制腐敗菌及病原菌和真菌的過(guò)度增殖，但當(dāng)它們離開(kāi)腸道的寄生部位，進(jìn)入機(jī)體的其他部位時(shí)，能感染發(fā)病。有些菌型有致病性，引起腸道或尿路感染性疾患。腸致病性大腸埃希菌是指能使人、動(dòng)物（尤其是嬰兒和幼齡動(dòng)物）感染及人食物中毒的一群大腸埃希菌。在自然界中，本菌分布廣泛，主要的寄生場(chǎng)所是人和其他恒溫動(dòng)物的腸道中，是一類(lèi)條件性致病菌。（三）傳染性大腸埃希菌所引起的食源性疾病主要由食入被污染的食物和水而引起，可以導(dǎo)致腸道外感染，如泌尿系感染、菌血癥、膽囊炎、肺炎及新生兒腦膜炎等，也會(huì)造成輕微腹瀉到霍亂樣嚴(yán)重腹瀉，乃致引起致死性的并發(fā)癥。腸侵襲性大腸桿菌由人—人傳染而致病，推測(cè)為糞—口途徑感染。（四）傳播途徑腸道內(nèi)感染以糞—口途徑為主，可通過(guò)食用污染的食物、水而傳播，引起食源性細(xì)菌性腹瀉。人與動(dòng)物的密切接觸也可傳播。蒼蠅，蟑螂等昆蟲(chóng)因其生活習(xí)性特殊，在一些細(xì)菌性腹瀉的傳播中發(fā)揮了重要作用。通過(guò)醫(yī)務(wù)人員的手或污染公共物品可造成醫(yī)院內(nèi)感染從而引起醫(yī)院內(nèi)腹瀉傳播。多數(shù)大腸埃希菌在腸道內(nèi)不致病，但如移位至腸道外的組織，則可引起感染，及腸道外感染（五）易感性人群普遍易感，沒(méi)有交叉免疫。兒童，老年人，有免疫抑制或慢性疾病者為高危人群，并且容易發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥。一些正使用抗生素的患者是抗生素相關(guān)性腹瀉的高危人群。另外，旅游者易發(fā)生細(xì)菌性腹瀉，稱(chēng)為旅游者腹瀉?；疾『罂色@得免疫力，但持續(xù)時(shí)間較短。（六）潛伏期不同的腸致瀉性大腸埃希菌引起的中毒，癥狀各不相同，潛伏期也各有長(zhǎng)短，腸出血性大腸埃希菌引起的中毒潛伏期較長(zhǎng)，一般可達(dá)3-10d，腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌、腸侵襲性大腸埃希菌、腸致病性大腸埃希菌、腸集聚黏附性大腸埃希菌引起的中毒潛伏期一般為1-4d，短者為數(shù)小時(shí)，長(zhǎng)者可達(dá)7d。（七）劑量-效應(yīng)關(guān)系關(guān)于是否發(fā)生腸致瀉性大腸埃希菌食物中毒，不同腸致瀉性大腸埃希菌的感染劑量各不相同，不同個(gè)體也存在差異。腸致瀉性大腸埃希菌食物中毒的感染及程度主要與致病機(jī)制和感染劑量密切相關(guān)。（八）致病性腸致瀉性大腸埃希菌具有病源性，能引起人類(lèi)腹瀉。部分大腸埃希菌菌株與嬰兒腹瀉相關(guān)，并可引起成人腹瀉或食物中毒的暴發(fā)。ETEC的主要毒力因子為熱不穩(wěn)定毒素，熱穩(wěn)定毒素及與致病性相關(guān)的定居因子：EPEC的主要毒力因子有菌毛、志賀楊毒素（Shiga-liketoxins,SLTs）和LEE毒力島；EIEC在毒力因子和致病機(jī)制上與志賀菌基本一致；EHEC的主要毒力因子有志賀樣毒素（SLTs）、溶血素、LEE毒力島及其他未知的毒力因素；EAggEC是一類(lèi)新發(fā)現(xiàn)的致瀉性大腸桿菌，目前已知的毒力因子有菌毛和熱穩(wěn)定腸毒素。（九）變異性濫用抗生素使得大腸埃希菌存在著基因突變，導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生。（十）環(huán)境中的穩(wěn)定性因無(wú)芽孢，對(duì)理化因素抵抗力不強(qiáng)，在60℃中30min即死亡。（十一）藥物敏感性腸致瀉性大腸埃希氏菌對(duì)磺胺類(lèi)、鏈霉素、氯霉素等敏感。對(duì)于抗生素治療，首選氯霉素、多粘菌素、慶大霉素、卡那霉素。但是對(duì)于腸出血性大腸埃希氏菌感染者，應(yīng)慎用抗生素，因抗生素非但不能縮短病程，反而會(huì)增加發(fā)生溶血性尿毒綜合征的機(jī)會(huì)。腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌易產(chǎn)生耐藥性。（十二）消毒劑敏感性腸致瀉性大腸埃希氏菌易被一般化學(xué)消毒劑殺滅，常用氯進(jìn)行飲水消毒。膽鹽、煌綠等染料對(duì)非致病性腸桿菌科細(xì)菌有抑制作用。（十三）物理滅活在55℃中60min或60℃加熱15min仍有部分細(xì)菌存活。EHEC可在7～50℃的溫度中生長(zhǎng)，其最佳生長(zhǎng)溫度為37℃.有些甚至可在pH值達(dá)到4.4和最低水活度為0.95的食物中生長(zhǎng)。烹飪食物時(shí)，必須使食物的所有部分至少達(dá)到70℃以上時(shí)才可認(rèn)為該菌被消滅。（十四）在宿主體外存活腸致瀉性大腸埃希氏菌體外抵抗力較強(qiáng)，在自然界中的水和土壤中能存活數(shù)周至數(shù)月，在溫度較低的糞便中存活更久，在陰涼處的室內(nèi)塵埃中可存活1個(gè)月。（十五）與其他生物和環(huán)境的交互作用凡是體內(nèi)有腸致瀉性大腸埃希氏菌感染的病人、帶菌者和家畜、家禽等都可傳播本病。一些動(dòng)物可成為儲(chǔ)存宿主，較常見(jiàn)的可傳播本病的動(dòng)物有牛、雞、羊、狗、豬等，其中以牛的帶菌率最高，患病或帶菌動(dòng)物往往是動(dòng)物來(lái)源食品污染的根源。帶菌動(dòng)物在其活動(dòng)范圍內(nèi)也可通過(guò)排泄的糞便污染當(dāng)?shù)氐氖澄?、草?chǎng)、水源或其他水體及場(chǎng)所，造成交叉污染和感染，危害極大。（十六）預(yù)防和治療方案1.預(yù)防措施預(yù)防接種目前尚沒(méi)有成熟的、可供大范圍使用的疫苗。但在ETEC的免疫預(yù)防研究中，發(fā)現(xiàn)其菌毛抗原在自然感染和人工主動(dòng)免疫中是關(guān)鍵抗原之一。預(yù)防原則應(yīng)以改善公共衛(wèi)生條件、切斷傳播途徑為主，同時(shí)加強(qiáng)對(duì)傳染源的管理，采取綜合性預(yù)防措施，對(duì)重點(diǎn)人群、集體單位應(yīng)特別注意預(yù)防暴發(fā)和流行。不吃生的或加熱不徹底的牛奶、肉等動(dòng)物性食品。不吃不干凈的水果、蔬菜。剩余飯菜食用前要徹底加熱。防止食品生熟交叉而發(fā)生污染。養(yǎng)成良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，飯前便后洗手。食品加工、生產(chǎn)企業(yè)特別是餐飲業(yè)應(yīng)嚴(yán)格保證食品加工、運(yùn)輸及銷(xiāo)售的安全性。2.治療方案排除毒物，必要時(shí)進(jìn)行催吐、洗胃和導(dǎo)瀉；對(duì)癥治療；抗生素治療，首選氯霉素、多粘菌素、慶大霉素和卡那霉素。二、實(shí)驗(yàn)室相關(guān)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制（一）實(shí)驗(yàn)室感染性因子的種類(lèi)、來(lái)源和危害1.感染性因子的種類(lèi)腸致瀉性大腸埃希氏菌產(chǎn)生多種毒力因子。根據(jù)其生物學(xué)特性和本中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的能力范圍，本實(shí)驗(yàn)室可能的感染性因子為腸致瀉性大腸埃希氏菌病原體本身。2.感染性因子的來(lái)源（1）食物中毒事件中采集的食物、糞便等可疑標(biāo)本，日常檢測(cè)的食品、水等樣品。（2）樣品采集和檢測(cè)過(guò)程中涉及的所有實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所。（3）實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)操作過(guò)程中可能產(chǎn)生的含病原體的氣溶膠。3.感染性因子可能造成的危害（1）被污染的實(shí)驗(yàn)器材、器皿等對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境造成污染。（2）實(shí)驗(yàn)室廢棄物對(duì)環(huán)境造成污染。（3）實(shí)驗(yàn)人員暴露后污染。（4）實(shí)驗(yàn)室含病原菌的氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境造成的污染。由于腸致瀉性大腸埃希氏菌主要通過(guò)腸道內(nèi)感染，糞-口途徑可通過(guò)食用污染的食物、水而傳播，引起食源性細(xì)菌性腹瀉。通過(guò)醫(yī)務(wù)人員的手或污染公共物品可造成醫(yī)院內(nèi)感染從而引起醫(yī)院內(nèi)腹瀉傳播。雖然引起食物中毒的感染劑量要達(dá)到一定劑量才可引發(fā)疾病，但仍然存在感染的風(fēng)險(xiǎn)。（二）實(shí)驗(yàn)室常規(guī)活動(dòng)過(guò)程中的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制1.實(shí)驗(yàn)方法（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別未采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)；使用新的或變更過(guò)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)前，未經(jīng)技術(shù)確認(rèn)，可能存在安全風(fēng)險(xiǎn)。（2）風(fēng)險(xiǎn)控制措施盡量采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，在使用新的或變更過(guò)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)前，必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的技術(shù)確認(rèn)。2.樣品采集（1）食品和水樣等樣品采集①主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材采樣剪刀或鑷子、密閉盛樣容器等。②主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別食品和水樣等樣品中可能存在感染性病原體，采樣人員采樣不規(guī)范、盛樣容器密合不嚴(yán)、意外破損等，可導(dǎo)致樣品濺灑、溢出、滲漏而污染環(huán)境；同時(shí)，銳器使用不當(dāng)，存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風(fēng)險(xiǎn)。③風(fēng)險(xiǎn)控制措施采集容器必須防水、防漏，容器外面要包裹足量的吸收性材料，以便容器被打破或泄露時(shí)，能吸收溢出的所有液體。在使用剪子、鑷子、玻璃容器等銳器時(shí)必須規(guī)范操作，做好防護(hù)，防止刺傷或劃傷。（2）食物中毒事件中糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物、剩余食物等采集①主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材PV螺旋蓋采便盒（管）、玻璃試管或培養(yǎng)皿、采樣棉簽、食物盛器等。②主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別疑似食物中毒糞便、嘔吐物、剩余食物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣品中可能存在大量感染性病原體，采集過(guò)程存在樣本濺出從而形成顆粒氣溶膠；工作人員采樣不規(guī)范、個(gè)人防護(hù)不到位，導(dǎo)致環(huán)境污染和人員感染。③風(fēng)險(xiǎn)控制措施采樣人員應(yīng)戴手套、口罩，采樣時(shí)動(dòng)作輕柔，采樣容器盡量使用外螺旋蓋塑料管；發(fā)生污染時(shí)，應(yīng)立即進(jìn)行消毒處理。（3）血樣的采集①主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材一次性采血針、真空采血管、消毒棉簽及一次性利器盒。②主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別血液樣品可能存在不明感染性病原體，真空采血管密封蓋意外脫落或采血針內(nèi)殘留血滴落，造成血樣濺灑從而污染人員或環(huán)境；采血針頭存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風(fēng)險(xiǎn)。③風(fēng)險(xiǎn)控制措施使用一次性采血針和真空采血管，采樣人員經(jīng)過(guò)正規(guī)采血培訓(xùn)，并熟練掌握采血技巧。采血前做好個(gè)人防護(hù)（防護(hù)服、乳膠手套、口罩）；認(rèn)真、仔細(xì)、謹(jǐn)慎操作，抽血后的針頭直接放入利器盒內(nèi)，禁止用手直接接觸使用后的針頭或?qū)⑹褂煤蟮尼橆^重新套上針頭套；采好血后直立于試管架中，防止倒翻；消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專(zhuān)用袋中，統(tǒng)一進(jìn)行消毒處理。3.樣品的包裝和運(yùn)送（1）主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材真空密封采血管、外螺旋蓋玻璃瓶、PV螺旋蓋采樣罐（管）主容器、95千帕樣品運(yùn)輸罐、B類(lèi)標(biāo)本運(yùn)輸箱（UN2814冷藏箱）、運(yùn)送車(chē)輛。（2）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別盛樣容器不堅(jiān)固、密合不嚴(yán)，有可能存在樣品濺灑、溢出、滲漏；樣本運(yùn)輸包裝不符合生物安全要求，可能導(dǎo)致樣品的側(cè)翻、滲漏而造成污染擴(kuò)散。（3）風(fēng)險(xiǎn)控制措施盛裝樣品容器必須堅(jiān)固，不易破碎，盡可能選用塑料制品，采樣后必須檢查容器的密合性。樣品嚴(yán)格按照B類(lèi)要求包裝和運(yùn)送。4.樣品接收和前處理（1）主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材剪刀、鑷子、振蕩器、均質(zhì)器、均質(zhì)袋、離心機(jī)、生物安全柜、潔凈工作臺(tái)等。（2）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別樣品管理員未按實(shí)驗(yàn)室樣品管理程序要求接收樣品；樣品前處理時(shí)打開(kāi)感染性樣本包裝的動(dòng)作過(guò)猛，會(huì)造成樣品側(cè)翻；對(duì)食品等固形物樣品進(jìn)行剪切時(shí)，操作不慎發(fā)生手剪傷；均質(zhì)器均質(zhì)樣本時(shí)發(fā)生均質(zhì)袋破裂，離心操作時(shí)離心管破裂等意外情況。（3）風(fēng)險(xiǎn)控制措施①樣品接收必須在專(zhuān)用的區(qū)域進(jìn)行，合同評(píng)審人員和收樣人員嚴(yán)格按照《樣品管理程序》（XJK/CX32）要求交接樣品，不得擅自打開(kāi)樣品包裝，收樣后及時(shí)洗手。②開(kāi)始檢測(cè)前，對(duì)盛裝感染性材料樣品的容器，必須在生物安全柜中緩慢打開(kāi)，食品和水樣必須在潔凈工作室內(nèi)打開(kāi)，開(kāi)啟容器時(shí)管口不能對(duì)著操作者。③對(duì)食品等固體物樣品取樣，要小心使用剪刀和鑷子，進(jìn)盡可能鑒取食物可食部分，以防止樣品均質(zhì)時(shí)堅(jiān)硬物質(zhì)刺破均質(zhì)袋，造成樣液濺灑。對(duì)含有感染性的樣品進(jìn)行離心振蕩時(shí)，必須將離心蓋密封嚴(yán)實(shí)，并關(guān)上離心機(jī)蓋。④實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備應(yīng)急藥箱，發(fā)生手剪傷等意外事件時(shí)應(yīng)立即進(jìn)行消毒包扎處理。⑤當(dāng)發(fā)生離心管或均質(zhì)袋意外破裂、濺出時(shí)，及時(shí)對(duì)所有涉及污染的部位進(jìn)行消毒處理，同時(shí)，按《二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與管理》“實(shí)驗(yàn)室意外事故的處置”章節(jié)處置。5.樣本檢測(cè)過(guò)程（1）主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材培養(yǎng)箱、水浴箱、細(xì)菌鑒定和藥敏測(cè)試儀（ATB儀）、全自動(dòng)快速致病菌檢測(cè)儀（miniVIDAS）、定量熒光PCR儀、核酸提取儀、凝膠成像儀、生物安全柜、金屬浴、振蕩器、離心機(jī)及離心管、吸管和試管、移液器及吸頭、接種環(huán)、培養(yǎng)皿等。（2）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別①對(duì)食品、水樣、糞便、嘔吐物、剩余食物等樣品進(jìn)行的腸致瀉性大腸埃希氏菌分離鑒定、生化試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)活動(dòng)均涉及活菌操作，在檢測(cè)過(guò)程中移液、混勻震蕩、劃線(xiàn)分離、涂片染色、離心等操作都可產(chǎn)生氣溶膠。雖然腸致瀉性大腸埃希氏菌不通過(guò)呼吸道感染，但由于樣品可能含有其他未知的病原體，因此也不應(yīng)忽視。②實(shí)驗(yàn)過(guò)程中玻璃器材意外碎裂或滲漏、離心操作時(shí)離心管意外破裂等事故，可造成液體濺出污染設(shè)備表面或工作臺(tái)面等環(huán)境，從而間接污染操作者皮膚、黏膜。通過(guò)糞—口途徑食入一定量的腸致瀉性大腸埃希氏菌導(dǎo)致食物中毒。③提取核酸時(shí)使用的無(wú)水乙醇屬易燃易爆物質(zhì)，溴化乙啶具有強(qiáng)烈的致癌性。（3）風(fēng)險(xiǎn)控制措施①檢測(cè)人員在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)按照二級(jí)生物安全防護(hù)要求做好自身防護(hù)措施（穿防護(hù)服、戴手套、口罩，穿不露腳趾和覆蓋腳背、防滑、防滲漏的工作鞋），進(jìn)行水樣等樣品抽濾、濃縮等操作，必須在潔凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行且動(dòng)作要輕緩。下呼吸道分泌物等病理標(biāo)本、涉及感染性活菌的實(shí)驗(yàn)操作必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)桌面、臺(tái)面及時(shí)進(jìn)行消毒處理。②必須使用移液器或吸球移取樣液，旋蓋和移液操作的動(dòng)作要輕緩，所有吸管應(yīng)用棉塞，移液頭盡可能使用帶濾芯的。以減少對(duì)移液器或吸球的污染。③使用直徑2~3mm且完全封閉、手柄的長(zhǎng)度小于6cm的接種環(huán)分離細(xì)菌，盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，避免在酒精燈的明火上加熱從而避免感染性物質(zhì)的爆濺。④盡可能以塑料器代替玻璃器皿，若必須使用玻璃器皿，則只能用實(shí)驗(yàn)室級(jí)玻璃（硼硅酸鹽），且任何破碎或有裂紋的器皿都應(yīng)丟棄。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片、玻璃碎片等銳器。嚴(yán)禁用帶有注射針頭的注射器吸液，更不可當(dāng)吸管用。用過(guò)的銳器應(yīng)直接放入利器盒，經(jīng)消毒后廢棄。⑤分子生物學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中使用的無(wú)水乙醇屬易燃易爆物質(zhì)，應(yīng)放置在通風(fēng)柜遠(yuǎn)離熱源；溴化乙啶屬有毒物質(zhì)需專(zhuān)人專(zhuān)管。⑥在任何可能導(dǎo)致潛在的傳染性物質(zhì)濺出的操作過(guò)程中，應(yīng)保護(hù)好面部、眼睛和嘴。6.菌株使用、保存和運(yùn)輸（1）主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材接種針（環(huán)）、菌株保存管、生物安全柜、95千帕樣品運(yùn)輸罐、B類(lèi)標(biāo)本運(yùn)輸箱（UN2814冷藏箱）、運(yùn)送車(chē)輛。（2）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別①保菌操作不規(guī)范、個(gè)人防護(hù)不到位、保菌磁珠管等保菌容器意外破損、磁珠掉落等會(huì)導(dǎo)致病原菌污染實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和實(shí)驗(yàn)人員。②腸致瀉性大腸埃希氏菌的使用和保存未按照《菌（毒）種管理規(guī)程》（XJK/CX37）要求實(shí)施管理，存在菌株被惡意使用及污染環(huán)境等生物安全隱患。③運(yùn)送包裝不符合生物安全要求，或運(yùn)輸工具無(wú)安全保障，則易造成污染擴(kuò)散，甚至樣本丟棄。（3）風(fēng)險(xiǎn)控制措施①腸致瀉性大腸埃希氏菌的分離純化及保菌操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。若發(fā)生保菌磁珠管等破損、磁珠掉落時(shí)，應(yīng)及時(shí)對(duì)所有涉及污染的部位進(jìn)行消毒處理。②腸致泄性大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)株的使用、保存嚴(yán)格按照《菌（毒）種管理規(guī)程》（XJK/CX37）要求進(jìn)行操作，嚴(yán)格實(shí)行雙人雙鎖保管，嚴(yán)防菌株被惡意使用而造成生物危害。③腸致泄性大腸埃希氏菌陽(yáng)性菌株的上送應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行B類(lèi)運(yùn)輸包裝（同樣品采集），攜帶“可感染人類(lèi)的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸許可證”，由專(zhuān)車(chē)運(yùn)送，并由專(zhuān)業(yè)人員全程護(hù)送。7.實(shí)驗(yàn)室的清潔和消毒（1）主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材70%~75%的酒精、施康清洗消毒液I。（2）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別工作完畢后，若不及時(shí)對(duì)工作臺(tái)面、生物安全柜進(jìn)行消毒，則有可能會(huì)對(duì)下次的操作人員造成污染或感染。（3）風(fēng)險(xiǎn)控制措施工作完畢后，及時(shí)對(duì)檢測(cè)所涉及的工作臺(tái)面、地面和生物安全柜進(jìn)行消毒，使用稀釋100倍的施康清洗消毒液I擦拭，用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%~75%的酒精擦拭消毒。待實(shí)驗(yàn)和消毒完畢，先脫去手套，再脫去防護(hù)服，并正確用肥皂和流水洗手。8.廢棄物處置（1）主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材醫(yī)療廢棄物專(zhuān)用袋、硬質(zhì)耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。（2）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別①樣品采集和試驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程產(chǎn)生的感染性廢棄物主要有食品、水樣、糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣本，血液血清標(biāo)本，病原菌的培養(yǎng)基，標(biāo)本和陽(yáng)性菌種及所有試驗(yàn)過(guò)程涉及的用品，稀釋前未按照規(guī)范要求處理，導(dǎo)致感染或致病因子外泄而污染環(huán)境。②樣品采集和試驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程產(chǎn)生的未被污染的損傷性廢棄物，如一次性使用采血用具、載玻片、玻璃試管、玻璃安培、培養(yǎng)皿等，未按照要求規(guī)范處理，存在意外刺傷或劃傷工作人員的隱患。（3）風(fēng)險(xiǎn)控制措施實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理應(yīng)遵循《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》《醫(yī)療廢物專(zhuān)用包裝物、容器標(biāo)準(zhǔn)和警示標(biāo)識(shí)規(guī)定》等相關(guān)法規(guī)要求，分類(lèi)收集，規(guī)范處置。所有損傷性廢棄物必須放置于有警示標(biāo)識(shí)的硬質(zhì)、防漏、防銳器刺破的專(zhuān)用利器盒中；所有感染性廢棄物必須放置于有警示標(biāo)識(shí)的醫(yī)療廢物專(zhuān)用包裝袋中；使用高效消毒液浸泡或高溫高壓滅菌后集中處理，集中存放至中心制定的醫(yī)療廢棄室，由有資質(zhì)的醫(yī)療廢棄物處理單位上門(mén)收集，集中處置。同時(shí)，做好廢棄物處置交接記錄，所有相關(guān)記錄應(yīng)定期整理歸檔。（三）實(shí)驗(yàn)室常規(guī)活動(dòng)中其他風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與預(yù)防控制措施1.電力（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別斷電或電壓不穩(wěn)，存在引發(fā)電器設(shè)備故障的隱患。斷電可使運(yùn)行中的生物安全柜、潔凈室高效過(guò)濾器等生物安全防護(hù)設(shè)備突然停止工作，致使實(shí)驗(yàn)活動(dòng)被迫中斷，存在感染性物質(zhì)外溢，從而污染操作人員和環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)。（2）預(yù)防控制措施實(shí)驗(yàn)室由雙路市電供電，并為關(guān)鍵儀器設(shè)備配備應(yīng)急電源（UPS），避免實(shí)驗(yàn)室由于斷電可能引發(fā)的生物安全風(fēng)險(xiǎn)，確保檢測(cè)工作順利進(jìn)行。2.電氣操作（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)涉及的電氣操作，包括實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)內(nèi)電器設(shè)備的啟動(dòng)、關(guān)閉、安全和維修；設(shè)備層內(nèi)UPS、空調(diào)機(jī)組等電氣設(shè)備的啟動(dòng)、關(guān)閉和維修等。這些電氣操作的過(guò)程可能發(fā)生觸電、電擊、造成電氣故障等事故。（2）預(yù)防控制措施①電器設(shè)備的設(shè)計(jì)及制造符合相關(guān)安全標(biāo)準(zhǔn)要求。實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)內(nèi)若有380V電源插座，需明確標(biāo)識(shí)，并由有資質(zhì)的專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行操作。②新的、改裝過(guò)的或修理過(guò)的電器設(shè)備在未經(jīng)專(zhuān)業(yè)人員（如有資質(zhì)的電工）完成電氣安全測(cè)試和設(shè)備符合安全要求之前，不允許使用。③電器設(shè)備使用人員接受正確操作的培訓(xùn)，操作方式不降低電氣安全性。電器設(shè)備使用人員要定期檢查設(shè)備中可能引起電氣故障的破損。只有專(zhuān)業(yè)人員可從事電器設(shè)備和電路工作。禁止未經(jīng)授權(quán)的工作。④采取措施對(duì)設(shè)備去污染，以降低維護(hù)人員被病原菌感染的風(fēng)險(xiǎn)。3.實(shí)驗(yàn)室給排水設(shè)施設(shè)備（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室含有給排水的設(shè)施設(shè)備，包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。當(dāng)水管道意外破裂、排水管道阻塞時(shí)，可能導(dǎo)致感染性材料溢出，有污染實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)。（2）預(yù)防控制措施實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的所有染菌物及器具，必須先經(jīng)高壓滅菌或氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，洗消產(chǎn)生的污水集中排入中心污水池進(jìn)行消毒處理，嚴(yán)禁直接排放。按照GB18466要求，監(jiān)測(cè)總余氯、糞大腸菌群及其他致病菌。4.實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備管道（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備管道穿越圍護(hù)結(jié)構(gòu)的部位可能造成密封不嚴(yán)的問(wèn)題，當(dāng)感染性材料溢出時(shí)，有污染環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)。（2）預(yù)防控制措施所有管道穿越圍護(hù)結(jié)構(gòu)的部位英嚴(yán)格密封，定期進(jìn)行檢查檢測(cè)，避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境。5.主要檢測(cè)儀器設(shè)備（1）離心機(jī)①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別未正確配備密閉蓋離心機(jī)、密封頭的真空采血管、耐壓螺旋蓋離心管，高速離心時(shí)可產(chǎn)生氣溶膠擴(kuò)散；離心血樣時(shí)沒(méi)有做好平衡，可能會(huì)發(fā)生離心管破裂、離心管蓋脫落，存在血樣污染離心轉(zhuǎn)子和離心腔的風(fēng)險(xiǎn)。②風(fēng)險(xiǎn)控制措施實(shí)驗(yàn)室配備密閉蓋離心機(jī)、密封頭的真空采血管、耐壓螺旋蓋離心管；離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力；規(guī)范正確操作；每次使用后做好清潔消毒和使用維護(hù)記錄，定期進(jìn)行功能檢查，確保離心機(jī)性能正常。（2）細(xì)菌鑒定和藥敏測(cè)試儀（ATB儀）、PCR儀、全自動(dòng)快速致病菌檢測(cè)儀（miniVIDAS）、核算提取儀、凝膠成像儀等設(shè)備。①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別對(duì)疑似腸致瀉性大腸埃希氏菌鑒定時(shí)，要使用ATB儀、mini-VIDAS、核酸提取儀、PCR儀等儀器。如果使用時(shí)不按操作規(guī)程進(jìn)行操作，則存在病原體濺出、滲漏而污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境和人的隱患。②風(fēng)險(xiǎn)控制措施嚴(yán)格按ATB儀、mini-VIDAS、核酸提取儀、PCR儀等設(shè)備操作規(guī)程規(guī)范操作和維護(hù)，每次使用完畢后對(duì)設(shè)備箱體及可能污染的實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行消毒。6.生物安全設(shè)施設(shè)備（1）生物安全柜①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別沒(méi)有按照設(shè)備操作規(guī)程或使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作、維護(hù)，使生物安全柜的氣溶膠防護(hù)效果明顯降低，甚至消失，失去安全防護(hù)效果。設(shè)備長(zhǎng)時(shí)間使用未及時(shí)更換HEPA過(guò)濾膜，可出現(xiàn)工作窗口氣流速度降低或流向紊亂等功能失常狀況。生物安全柜使用后未徹底消毒處理，對(duì)清潔、維護(hù)人員將會(huì)產(chǎn)生污染。設(shè)備長(zhǎng)期關(guān)停，將會(huì)使部分電器元件老化從而失去正常功能。沒(méi)有及時(shí)對(duì)設(shè)備移位、碰撞受損等進(jìn)行性能檢測(cè)等。②預(yù)防控制措施使用人員接受相關(guān)操作、維護(hù)培訓(xùn)，做到規(guī)范使用和維護(hù)。每月進(jìn)行空氣沉降菌檢測(cè)，每年請(qǐng)有資質(zhì)的服務(wù)機(jī)構(gòu)對(duì)生物安全柜風(fēng)速、氣流、塵埃粒子數(shù)、紫外線(xiàn)強(qiáng)度等主要性能指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，確保其功能正常。一旦生物安全柜使用造成污染，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行消毒。（2）高壓滅菌器①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別沒(méi)有正確配備高壓滅菌器，存在氣溶膠污染環(huán)境的隱患；沒(méi)有按照設(shè)備操作規(guī)程，甚至沒(méi)有使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作、維護(hù)，可能使高壓滅菌器效果明顯降低或失效，失去去污染與無(wú)害化的作用；壓力鍋長(zhǎng)時(shí)間使用又不定期檢測(cè)滅菌效果，對(duì)壓力容器的滅菌效果無(wú)從考證，存在滅菌不徹底從而引發(fā)污染的隱患。壓力鍋長(zhǎng)時(shí)間關(guān)停期間，如果不及時(shí)排干鍋體水分，將會(huì)使內(nèi)部器件老化從而失去正常功能。②預(yù)防控制措施選擇下排式高壓滅菌器，防止氣溶膠污染，正確規(guī)范操作，定期維護(hù)，確保高壓滅菌器性能正常，做好使用記錄。壓力滅菌器使用時(shí)每次監(jiān)測(cè)化學(xué)指示物，監(jiān)控記錄溫度、壓力、時(shí)間等滅菌參數(shù)，每周進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)，以保證滅菌質(zhì)量。（3）個(gè)人防護(hù)用品①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室不提供足夠數(shù)量的、符合質(zhì)量要求的防護(hù)服、防護(hù)眼罩、一次性乳膠手套、口罩和覆蓋足背的防滑鞋等，使用大小不合適的個(gè)人防護(hù)用品，個(gè)人防護(hù)用品穿戴、脫卸的程序、方法不符合要求，均可能造成人員感染或污染環(huán)境。②風(fēng)險(xiǎn)控制措施選擇正規(guī)、符合質(zhì)量要求的防護(hù)用品，按照規(guī)定的程序正確使用、脫卸。（4）應(yīng)急救治設(shè)施和用品①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室若沒(méi)有配備洗眼器、應(yīng)急藥箱等必要的應(yīng)急設(shè)施和物品，或配備的急救用品種類(lèi)不全、不合適或過(guò)期，則導(dǎo)致急用時(shí)無(wú)法發(fā)揮作用。②預(yù)防控制措施在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)正確配備洗眼器，確保功能正常。配備的75%乙醇、碘伏或其他消毒劑、創(chuàng)口貼等急救物品與實(shí)驗(yàn)活動(dòng)相適應(yīng)并在有效期內(nèi)使用，由專(zhuān)人負(fù)責(zé)管理，定期維護(hù)、清理和更新。（5）消毒滅菌劑①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別消毒劑產(chǎn)品無(wú)生產(chǎn)許可證、過(guò)期、配制方法或濃度不正確、種類(lèi)選擇不合理，將會(huì)導(dǎo)致消毒效果降低、生物滅活能力降低或?qū)ξ锲犯g性増加、對(duì)皮膚造成刺激等問(wèn)題。②預(yù)防控制措施選擇符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的正規(guī)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，選擇合適的消毒劑，按照規(guī)定的消毒方法、消毒時(shí)間、消毒濃度(劑量)進(jìn)行消毒，避免使用過(guò)期產(chǎn)品；消毒過(guò)程中消毒人員應(yīng)做好必要的個(gè)體防護(hù)，防止發(fā)生意外。中心實(shí)驗(yàn)室選用70%～75%酒精和稀釋10～25倍、50～100倍、200倍的施康消毒劑Ⅰ(主要成分為次氯酸鈉)作為實(shí)驗(yàn)室常用消毒劑。7.管理體系的風(fēng)險(xiǎn)（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別管理體系(包括應(yīng)急預(yù)案)是否健全和完善，是否符合實(shí)際管理要求，程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書(shū)和操作規(guī)程是否科學(xué)和具有可操作性，是確保生物安全的主要因素。如果組織結(jié)構(gòu)不健全、設(shè)置不合理，體系文件與實(shí)際工作不匹配，以及部門(mén)職責(zé)不清或銜接不當(dāng)?shù)?，則都可能帶來(lái)安全風(fēng)險(xiǎn)。

（2）預(yù)防控制措施定期開(kāi)展對(duì)管理體系的評(píng)審，要特別關(guān)注風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估程序、應(yīng)急預(yù)案、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范(SOP)等，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)修訂、完善，以確保生物安全管理體系持續(xù)有效運(yùn)行。(四)工作人員的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與預(yù)防控制措施1.人員數(shù)量和素質(zhì)（1）人員數(shù)量①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別人員過(guò)少會(huì)因缺少相互提示監(jiān)督或因工作量增大而導(dǎo)致操作過(guò)程中工作失誤增加，風(fēng)險(xiǎn)增加。②預(yù)防控制措施采樣和檢測(cè)人員的數(shù)量應(yīng)與工作量相匹配，盡量有2名工作人員同時(shí)進(jìn)行采樣和檢測(cè)工作。（2）人員結(jié)構(gòu)①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的職稱(chēng)分布不合理，新進(jìn)人員沒(méi)有高資歷人員帶教操作，不能很好應(yīng)對(duì)意外事件，風(fēng)險(xiǎn)增加。②預(yù)防控制措施實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的年齡和資歷結(jié)構(gòu)應(yīng)配備合理，新進(jìn)人員應(yīng)由高資歷人員帶教或監(jiān)督操作。（3）職業(yè)操守①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別腸致瀉性大腸埃希氏菌檢測(cè)存在一定的生物安全風(fēng)險(xiǎn)，若政治思想素質(zhì)不高、責(zé)任心不強(qiáng)的人員參與該項(xiàng)工作，則產(chǎn)生生物危害而危及人員安全、環(huán)境安全與社會(huì)安定的可能性較大。②預(yù)防控制措施加強(qiáng)職業(yè)道德教育，培養(yǎng)工作責(zé)任心。2.健康管理（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別健康狀況主要包括生理、心理素質(zhì)與免疫狀態(tài)。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)相關(guān)人員出現(xiàn)呼吸道感染癥狀、機(jī)體免疫力低下，或其他不適合工作的狀況時(shí)，職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)增加。（2）預(yù)防控制措施建立健康申請(qǐng)制度，遇有呼吸道感染及其他不適工作的情況，及時(shí)向科室負(fù)責(zé)人報(bào)告并暫停工作；若接觸物的傳染性大，應(yīng)戴雙層手套等加強(qiáng)防護(hù)。3.人員資質(zhì)（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別檢測(cè)人員不具備衛(wèi)生檢測(cè)相關(guān)學(xué)歷教育背景，不熟悉腸致泄性大腸埃希氏菌檢測(cè)方法及操作規(guī)范，未獲得上崗證，無(wú)法保證工作質(zhì)量和安全。（2）預(yù)防控制措施檢測(cè)人員必須是檢驗(yàn)或相關(guān)專(zhuān)業(yè)畢業(yè)，經(jīng)過(guò)上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)培訓(xùn)，持證上崗。4.生物安全培訓(xùn)要求（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別檢測(cè)人員、輔助人員、后勤保障人員、進(jìn)修實(shí)習(xí)人員上崗前沒(méi)有接受?chē)?yán)格的生物安全，以及相關(guān)生物安全設(shè)備操作的技術(shù)培訓(xùn)，易造成生物安全事故的發(fā)生。（2）預(yù)防控制措施檢測(cè)人員、輔助人員、后勤保障人員每年參加本中心組織的生物安全知識(shí)或生物安全操作技術(shù)培訓(xùn)、考核。上崗前熟練掌握操作生物安全儀器設(shè)備、設(shè)施操作技術(shù)，具備相關(guān)的安全防護(hù)能力。進(jìn)修實(shí)習(xí)人員參與試驗(yàn)活動(dòng)前必須進(jìn)行生物安全知識(shí)的培訓(xùn)，在帶教老師的監(jiān)督下工作。5.應(yīng)急事件處理能力（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)人員上崗前沒(méi)有接受實(shí)驗(yàn)室意外事故處理、職業(yè)暴露后預(yù)防等突發(fā)事件處理的培訓(xùn)。一旦發(fā)現(xiàn)意外事件，就不能有效地進(jìn)行早期處理和控制生物安全事件。（2）預(yù)防控制措施實(shí)驗(yàn)室工作人員必須嚴(yán)格按照《實(shí)驗(yàn)室意外事故和職業(yè)性疾病報(bào)告制度》和《病原微生物生物安全應(yīng)急處置技術(shù)方案》中規(guī)定的要求進(jìn)行應(yīng)急事件的處理，強(qiáng)化職業(yè)暴露的應(yīng)急處理能力。（五）實(shí)驗(yàn)室非常規(guī)活動(dòng)中的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與預(yù)防控制措施1.主要的實(shí)驗(yàn)室非常規(guī)活動(dòng)（1）實(shí)驗(yàn)室外專(zhuān)業(yè)人員對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備的維護(hù)、維修、檢定/校準(zhǔn)、檢測(cè)驗(yàn)證（如主要設(shè)施設(shè)備的檢測(cè)驗(yàn)證）和更新（如高效過(guò)濾器等的更換）等。（2）實(shí)驗(yàn)室后勤保障人員對(duì)實(shí)驗(yàn)室及公共環(huán)境的保潔、實(shí)驗(yàn)器材的清洗消毒。（3）實(shí)驗(yàn)室外人員參觀實(shí)驗(yàn)室和上級(jí)部門(mén)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的檢查。（4）任何其他人員需要進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室從事實(shí)驗(yàn)活動(dòng)外的行為。2.主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別（1）上述人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室從事相關(guān)活動(dòng)，特別是不慎打翻、打破標(biāo)本管或損壞儀器零部件等情況，可能會(huì)引起實(shí)驗(yàn)室感染。（2）實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行過(guò)程中某些人員需要進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室參觀，存在影響實(shí)驗(yàn)活動(dòng)正常運(yùn)行或者導(dǎo)致相關(guān)或不相關(guān)的設(shè)施設(shè)備損壞的風(fēng)險(xiǎn)。3.預(yù)防控制措施（1）實(shí)行人員準(zhǔn)入、登記制度。進(jìn)修實(shí)習(xí)人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室從事檢測(cè)活動(dòng)前，必須先進(jìn)行生物安全和實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度的培訓(xùn)。若中心實(shí)驗(yàn)室外專(zhuān)業(yè)人員和實(shí)驗(yàn)室后勤保障人員確需進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相關(guān)活動(dòng)，或上級(jí)部門(mén)需要進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查，應(yīng)有檢測(cè)人員陪同。進(jìn)入人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)管理規(guī)定，以確保人員和環(huán)境安全。（2）進(jìn)入人員未經(jīng)許可絕對(duì)不能私自動(dòng)用實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有標(biāo)志的危險(xiǎn)品，絕不能將未經(jīng)消毒處理的物品拿出實(shí)驗(yàn)區(qū)。（3）按專(zhuān)業(yè)技術(shù)要求進(jìn)行設(shè)施、設(shè)備的維護(hù)維修時(shí)，不能私自動(dòng)用其他設(shè)施設(shè)備，若導(dǎo)致相關(guān)或不相關(guān)的設(shè)施設(shè)備損壞時(shí)，應(yīng)及時(shí)報(bào)告。（4）當(dāng)需要更換HEPA過(guò)濾膜或高效過(guò)濾器時(shí)，應(yīng)先對(duì)高效過(guò)濾器、HEPA過(guò)濾膜等作原位消毒后，專(zhuān)業(yè)人員才能進(jìn)行更換。（5）為確保自己和他人的安全，禁止未穿防護(hù)服的人員隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的防護(hù)區(qū)域，同時(shí)也禁止穿防護(hù)服的人員走出實(shí)驗(yàn)室的防護(hù)區(qū)域。（6）對(duì)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施、設(shè)備進(jìn)行維修工作時(shí)，動(dòng)作輕柔，避免產(chǎn)生氣溶膠。（7）離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前，必須洗手。（六）被誤用和惡意使用的風(fēng)險(xiǎn)與預(yù)防控制措施1.主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別陽(yáng)性標(biāo)本未明確標(biāo)識(shí)，未嚴(yán)格實(shí)行雙人雙鎖管理，實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)結(jié)束后不及時(shí)對(duì)操作場(chǎng)所進(jìn)行消毒，工作人員在不知情的情況下可能誤用標(biāo)本、實(shí)驗(yàn)器材和設(shè)施設(shè)備等，導(dǎo)致人員感染和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，發(fā)生人員受傷或設(shè)施設(shè)備損壞等事故。2.預(yù)防控制措施（1）實(shí)行嚴(yán)格的人員準(zhǔn)入和持證上崗制度。（2）實(shí)驗(yàn)所用材料和試劑等必須有明確的標(biāo)識(shí)。（3）陽(yáng)性標(biāo)本嚴(yán)格實(shí)施雙人雙鎖管理，上送的陽(yáng)性樣本必須經(jīng)中心蓋章批準(zhǔn)，采用專(zhuān)用包裝，專(zhuān)業(yè)人員全程護(hù)送。（七）相關(guān)實(shí)驗(yàn)室已發(fā)生事故分析和從中得到啟示在實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展致病性病原微生物的檢測(cè)、研究，就有可能發(fā)生職業(yè)暴露而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室感染，主要原因是實(shí)驗(yàn)室人員在進(jìn)行標(biāo)本采集、前處理、檢驗(yàn)、廢棄物處置等工作過(guò)程中，操作不規(guī)則、個(gè)人防護(hù)不到位。目前，明確致瀉性大腸埃希菌檢測(cè)引起實(shí)驗(yàn)室人員感染的報(bào)道較少，但仍然存在隱患。三、實(shí)驗(yàn)室理化因素風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及安全防護(hù)措施（一）紫外線(xiàn)1.主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別潔凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傳遞窗、生物安全柜、BSL-2實(shí)驗(yàn)室均使用紫外線(xiàn)燈進(jìn)行物體表面消毒。紫外線(xiàn)波長(zhǎng)為250~280nm，主要影響眼睛和皮膚，引起急性角膜炎和結(jié)膜炎、慢性白內(nèi)障等眼部疾病，還可誘發(fā)皮膚癌。紫外線(xiàn)燈開(kāi)啟時(shí)，人員在不知情的情況下進(jìn)入可受到傷害。2、安全防護(hù)措施在實(shí)驗(yàn)室工作應(yīng)避免紫外線(xiàn)直接照射人體，特別是眼部。生物安全柜表面應(yīng)張貼紫外線(xiàn)危害的標(biāo)識(shí)，提醒實(shí)驗(yàn)人員小心紫外線(xiàn)危害。在進(jìn)行紫外線(xiàn)消毒時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員盡量遠(yuǎn)離消毒區(qū)域。故基本可以可以規(guī)避紫外線(xiàn)對(duì)人體的危害。（二）輻射1.主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別輻射源或輻射事故可以間接導(dǎo)致病原微生物屏障系統(tǒng)的破壞，增加實(shí)驗(yàn)人員被病原微生物感應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。2.預(yù)防控制措施實(shí)驗(yàn)室應(yīng)遠(yuǎn)離輻射源，如果無(wú)法避開(kāi)，則應(yīng)采取物理隔離措施，防止輻射源對(duì)檢測(cè)工作和人民健康產(chǎn)生影響。本中心實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部和周邊建筑群均沒(méi)有輻射源，所以輻射風(fēng)險(xiǎn)基本不用考慮。（三）施康清洗消毒劑Ⅰ1.主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別施康清洗劑Ⅰ屬于含氯消毒劑，有效氯的含量為4.55%~5.55%，次氯酸鈉為主要?dú)⒕蜃?。含氯的消毒液?huì)殘留在空氣中不揮發(fā)，長(zhǎng)期使用會(huì)使人感到頭疼、惡心、刺激黏膜，對(duì)于有體質(zhì)過(guò)敏的人，還容易引發(fā)過(guò)敏、哮喘疾病等。高濃度的含氯消毒劑對(duì)人的呼吸道和皮膚有明顯的刺激作用，可使人流淚、咳嗽，并刺激皮膚和黏膜，嚴(yán)重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒者出現(xiàn)躁動(dòng)、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀，甚至因窒息而死。2.安全防護(hù)措施按照使用說(shuō)明，根據(jù)消毒對(duì)象不同而配制不同的稀釋倍數(shù)，避免使用不必要的高濃度的消毒液，稀釋和使用時(shí)戴好手套，消毒后可及時(shí)開(kāi)窗通風(fēng)，基本可規(guī)避消毒液對(duì)人體的危害。（四）其他1.主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的照明和聲音(生物安全柜等)有可能因強(qiáng)光和噪聲對(duì)人體造成傷害。2.安全防護(hù)措施對(duì)實(shí)驗(yàn)室的照明和聲音等參數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，確保合格，避免強(qiáng)光和噪聲對(duì)人員的損害。四、實(shí)驗(yàn)室火災(zāi)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與預(yù)防控制措施1.主要風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別（1）超負(fù)荷用電，電線(xiàn)過(guò)長(zhǎng)。（2）電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良，例如電纜的絕緣層破舊或破壞。（3）用火不當(dāng)?shù)纫l(fā)火災(zāi)。（4）儀器設(shè)備在不使用時(shí)未關(guān)閉電源。（5）使用的儀器不是專(zhuān)為實(shí)驗(yàn)室環(huán)境設(shè)計(jì)。（6）易燃、易爆品處理、保存不當(dāng)。（7）不相容化學(xué)品沒(méi)有正確隔離。（8）在易燃物品和蒸汽附近有能產(chǎn)生火花的設(shè)備。（9）通風(fēng)系統(tǒng)不當(dāng)或不充分。2.預(yù)防控制措施實(shí)驗(yàn)室采取以下預(yù)防控制措施避免火災(zāi)發(fā)生，保證發(fā)生火災(zāi)后能夠安全撤離實(shí)驗(yàn)室。（1）定期檢查電器插座、電線(xiàn)絕緣層是否完好，保證用電負(fù)荷，對(duì)易燃、易爆等危險(xiǎn)品進(jìn)行有效區(qū)域隔離。（2）實(shí)驗(yàn)室配備滅火器。放置在易取的地點(diǎn)，擺放部位張貼滅火器標(biāo)識(shí)。該滅火器用于撲滅可控制的火災(zāi)，幫助人員撤離火場(chǎng)：對(duì)滅火器進(jìn)行定期檢查和維護(hù)，確保其有效使用。（3）實(shí)驗(yàn)室需裝設(shè)應(yīng)急燈，所有出口都有黑暗中可見(jiàn)“緊急出口”標(biāo)識(shí)；當(dāng)出現(xiàn)緊急狀況時(shí)，實(shí)驗(yàn)室所有出口的鎖必須處于開(kāi)啟狀態(tài)，出口設(shè)計(jì)保證不經(jīng)過(guò)高危險(xiǎn)區(qū)域就能逃脫，所有出口都能通向一個(gè)開(kāi)放空間。（4）走廊、流通區(qū)域不得放置障礙物，不受人員流動(dòng)和滅火設(shè)備移動(dòng)的影響。（5）在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)顯著位置張貼火警電話(huà)標(biāo)識(shí)。實(shí)驗(yàn)室每年對(duì)工作人員進(jìn)行消防知識(shí)培訓(xùn)，包括消防器材的使用、火災(zāi)發(fā)生時(shí)的應(yīng)急行動(dòng)等。五、自然災(zāi)害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與安全防護(hù)措施自然災(zāi)害可能導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)室緊急狀況主要包括水災(zāi)和地震等（一）水災(zāi)1.風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別水災(zāi)可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室維護(hù)結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染性材料隨水外溢。2.安全防護(hù)措施（1）在安全手冊(cè)中制定《實(shí)驗(yàn)室緊急事件應(yīng)急預(yù)案》，并對(duì)所有實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行培訓(xùn)。（2）實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)生水災(zāi)報(bào)警時(shí)，應(yīng)立刻停止工作。首先，考慮實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染性物質(zhì)和人員的轉(zhuǎn)移。實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、中心主任根據(jù)條件及時(shí)采取對(duì)策，第一時(shí)間聯(lián)系相關(guān)消防人員。消防人員應(yīng)做好防護(hù)措施，并在受過(guò)訓(xùn)練的實(shí)驗(yàn)室工作人員陪同下，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室完成菌毒中和人員的安全轉(zhuǎn)移工作。（二）地震1.風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別發(fā)生地震等自然災(zāi)害會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室維護(hù)結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，存在人員受傷和實(shí)驗(yàn)室感染性材料外溢的風(fēng)險(xiǎn)。2.安全防護(hù)措施實(shí)驗(yàn)室采取措施降低自然災(zāi)害帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)，保證災(zāi)害發(fā)生后能夠安全撤離實(shí)驗(yàn)室，減少對(duì)人員和環(huán)境的影響。發(fā)生地震后，首先，設(shè)立距實(shí)驗(yàn)室維護(hù)結(jié)構(gòu)20m范圍內(nèi)的封鎖區(qū)。其次，對(duì)封鎖區(qū)進(jìn)行消毒，然后由專(zhuān)業(yè)人員在做好個(gè)人防護(hù)的前提下對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)部環(huán)境邊消毒邊清理，清理到樣品保存地點(diǎn)。如果保藏樣品的容器沒(méi)有被破壞，可把它安全轉(zhuǎn)移到其他安全的實(shí)驗(yàn)室存放。如果保藏樣品的容器已被破壞和發(fā)生外溢，應(yīng)立即用可靠方法進(jìn)行徹底消毒滅菌，處理現(xiàn)場(chǎng)的人需要由生物安全委員會(huì)評(píng)估暴露級(jí)別和暴露源級(jí)別，再?zèng)Q定是否用藥及確定預(yù)防性用藥方案。六、生物安全及其他緊急事件（事故）處理預(yù)案（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全事件（事故）處理措施（1）當(dāng)生物安全柜或潔凈實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)持續(xù)正壓時(shí)，室內(nèi)人員應(yīng)立即停止操作，通知運(yùn)行保障人員采取措施恢復(fù)負(fù)壓。如果不能及時(shí)恢復(fù)和保持負(fù)壓，應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)，按規(guī)程退出。發(fā)生此類(lèi)事故或發(fā)生意外停電，造成具有傳染性物質(zhì)暴露潛在危險(xiǎn)的事故和污染時(shí)，工作人員除了采取緊急措施外，立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室安全負(fù)責(zé)人，并組織對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行終末消毒。（2）離心過(guò)程中離心管破裂時(shí)，應(yīng)馬上關(guān)閉電源，讓離心機(jī)停止工作，并靜止30min。然后緩慢打開(kāi)離心機(jī)蓋，將離心杯平穩(wěn)地拿到生物安全柜中。如果發(fā)生泄漏，則用1%的次氯酸鈉消毒液灌入離心杯腔體中消毒30min，然后棄去消毒液和離心管碎片，將離心杯清洗后擦干。（3）發(fā)生污染物潑濺或溢出時(shí)，立即用清潔布或吸水紙覆蓋污染處，并倒上10~25倍稀釋的施康消毒液，作用至少30min，方可清理全部污染物，用消毒劑擦拭污染區(qū)域。所有這些操作過(guò)程中都應(yīng)戴手套。若發(fā)生大范圍污染物擴(kuò)散事故時(shí)，應(yīng)立即通知實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負(fù)責(zé)人到達(dá)事故現(xiàn)場(chǎng)。待其查清情況，確定消毒方案，并組織對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行終末消毒。（二）其他緊急事件（事故）處理措施在制訂的應(yīng)急預(yù)案中應(yīng)包括消防人員和其他緊急救助人員。應(yīng)事先告知他們哪些實(shí)驗(yàn)室有潛在的感染性物質(zhì)，讓他們熟悉實(shí)驗(yàn)室的布局和設(shè)備。實(shí)驗(yàn)室人員要熟悉緊急撤離的情況及緊急撤離的路線(xiàn)標(biāo)識(shí)。在實(shí)驗(yàn)室發(fā)生不可控制的火災(zāi)、水災(zāi)、爆炸或其他危險(xiǎn)情況時(shí)，為確保工作人員的安全，要進(jìn)行緊急撤離。所有實(shí)驗(yàn)室人員須了解緊急撤離的行動(dòng)計(jì)劃、撤離路線(xiàn)和緊急撤離的集合地點(diǎn)，每年至少參加一次緊急撤離演習(xí)，包括急救設(shè)備使用和采取應(yīng)急措施。（三）生物安全及其他緊急事件（事故）報(bào)告和記錄（1）發(fā)生生物安全及其他緊急事件時(shí)，在緊急處理的同時(shí)必須向中心主管領(lǐng)導(dǎo)和生物安全委員會(huì)報(bào)告。（2）對(duì)于生物安全事件必須進(jìn)行登記，記錄發(fā)生的時(shí)間、地點(diǎn)、詳細(xì)經(jīng)過(guò)及處理方法等。七、生物安全和生物安全保障風(fēng)險(xiǎn)管理（一）生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估所依據(jù)的數(shù)據(jù)及擬采取的風(fēng)險(xiǎn)控制措施、安全操作規(guī)程等均應(yīng)以國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)、世界衛(wèi)生組織、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織等機(jī)構(gòu)或行業(yè)權(quán)威機(jī)構(gòu)發(fā)布的指南、標(biāo)準(zhǔn)等為依據(jù)。（二）危險(xiǎn)發(fā)生的概率評(píng)估（見(jiàn)表5-9）表5-9腸致瀉性大腸埃希式菌實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)危險(xiǎn)發(fā)生的概率評(píng)估序號(hào)潛在危險(xiǎn)因素危險(xiǎn)程度發(fā)生概率固有風(fēng)險(xiǎn)措施合理性殘存風(fēng)險(xiǎn)風(fēng)險(xiǎn)可控程度1樣品運(yùn)輸過(guò)程中容器意外側(cè)翻、泄露、破裂造成污染中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控2樣品的接收、開(kāi)啟及加樣等常規(guī)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中產(chǎn)生的氣溶膠中度較大可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控3離心、加樣等試驗(yàn)活動(dòng)中意外事故造成盛裝標(biāo)本容器破裂、溢出瞬間產(chǎn)生的氣溶膠中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控4檢測(cè)未經(jīng)滅活的樣品對(duì)儀器與環(huán)境造成的污染中度較大可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控5標(biāo)本、實(shí)驗(yàn)材料、設(shè)施設(shè)備等被誤用的風(fēng)險(xiǎn)中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控6陽(yáng)性標(biāo)本被惡意使用的風(fēng)險(xiǎn)高度較小可能高度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控7實(shí)驗(yàn)器材未經(jīng)規(guī)范消毒造成污染中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控8廢棄物處理不當(dāng)造成病原微生物擴(kuò)散中度較大可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控9滅菌裝置不符合要求，滅菌不徹底造成污染中度較小可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控10檢測(cè)人員和工勤人員被銳器誤傷造成職業(yè)暴露中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控11檢測(cè)人員個(gè)人防護(hù)不當(dāng)造成的病原微生物擴(kuò)散中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控12非檢測(cè)人員、進(jìn)修實(shí)習(xí)等外來(lái)人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的不當(dāng)操作中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控13水、點(diǎn)、火災(zāi)及自然災(zāi)害造成的風(fēng)險(xiǎn)中度較小可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)不可控（三）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估人員風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估由中心主任組織檢驗(yàn)科、質(zhì)量管理科及其他熟悉腸致瀉性大腸埃希氏菌檢驗(yàn)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)的專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并形成風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告。形成的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告經(jīng)中心生物安全委員會(huì)審核，請(qǐng)全省熟悉相關(guān)病原微生物特征、實(shí)驗(yàn)設(shè)施設(shè)備、操作規(guī)程及個(gè)人防護(hù)設(shè)備的不同領(lǐng)域的專(zhuān)家進(jìn)行評(píng)估和討論，不斷修訂和完善。（四）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告應(yīng)是實(shí)驗(yàn)室采取風(fēng)險(xiǎn)控制措施、建立安全管理體系和制訂安全操作規(guī)程