薄層色譜法完整版本

7.薄層色譜法(Thinlayerchromatography,TLC)11/2/202417.1概述1.1938年俄國(guó)人首先實(shí)現(xiàn)了在氧化鋁薄層上分離一種天然藥物。1965年德國(guó)化學(xué)家出版了“薄層色譜法”一書，推動(dòng)了這一技術(shù)的發(fā)展。2.因TLC法設(shè)備簡(jiǎn)單，分析速度快，分離效率高，結(jié)果直觀，很快被用作定性和半定量的方法。3.70年代中后期發(fā)展了高效薄層色譜。80年代以后發(fā)展了薄層色譜光密度掃描儀，和各步操作的儀器化，并實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)化。11/2/202424.薄層色譜與高效液相色譜的差別（特點(diǎn)）固定相和流動(dòng)相TLC——流動(dòng)相流動(dòng)靠毛細(xì)作用力，流動(dòng)相選擇較少受限制，固定相不用再生。而

HPLC是在封閉的系統(tǒng)內(nèi)，流動(dòng)相流量靠泵控制，溶劑選擇受檢測(cè)器限制，固定相需再生。樣品處理TLC要求沒(méi)有HPLC嚴(yán)格。11/2/20243色譜分離

TLC可同時(shí)分離多個(gè)樣品，并可采用相同或不同溶劑進(jìn)行同向或雙相多次展開(kāi)，通常采用正相色譜，色譜后衍生化方便。

HPLC一次只能分離一個(gè)樣品，通常采用反相色譜，色譜后衍生化受限制。對(duì)污染物抗受力強(qiáng)TLC——顆粒物質(zhì)、腐蝕性物質(zhì)、不可逆吸附物質(zhì)均無(wú)影響。

HPLC——顆粒物質(zhì)、腐蝕性物質(zhì)、不可逆吸附物質(zhì)均有大的影響。11/2/202447.2薄層色譜法的基本原理1.保留參數(shù)（Rf值）用來(lái)表征斑點(diǎn)位置的基本參數(shù)是保留因子，通常稱作比移值，用Rf表示。Rf=Ls/L。，原點(diǎn)SRWLsL。Lr原點(diǎn)參比樣品前沿11/2/20245注意：a.同一物質(zhì)在不同展開(kāi)方式中得到的比移值是不相同的。b.在同樣溶劑的重復(fù)n次的多次展開(kāi)后的比移值(Rf)n=1-(1-Rf)n

。相對(duì)比移值（Rx）Rf測(cè)量中一個(gè)重要的誤差來(lái)源是難以確定溶劑前沿的位置，因此，引入相對(duì)比移值（Rx）。

Rx=Ls/Lr11/2/202462.分離效能參數(shù)理論塔板數(shù)

n=16[Ls/W]2

，考慮靜態(tài)擴(kuò)散引起的起始斑點(diǎn)半峰寬的影響引入真實(shí)塔板數(shù)（n真實(shí)）n真實(shí)

=5.54[Ls/（b0.5-b0）]2b0.5為樣品斑點(diǎn)半峰寬，b0樣品起始斑點(diǎn)半峰寬。塔板高度h真實(shí)=Ls/n真實(shí)

11/2/20247

3.容量因子（K’）容量因子:分配達(dá)到平衡后，組分在固定相的量（WS)與流動(dòng)相中的量（Wm)之比。

K’=WS/Wm=(cS/cm)（Vs/Vm）

=K（Vs/Vm）其中K=cS/cm

，表示分配系數(shù)，即分離達(dá)到平衡時(shí)，組分在固定相和流動(dòng)相的濃度之比。4.分離度11/2/20248另有n=16[Ls/W]211/2/20249

0.10.30.50.70.9RfR1.000.750.50.250Rf=0.3,R最高Rf在0.2-0.5,R變化不大Rf﹤0.1或﹥0.7,R下降

11/2/2024107.3薄層色譜系統(tǒng)及其操作技術(shù)一.薄層色譜系統(tǒng)組成1.薄層板(1)未改性固定相硅膠—為使用最廣泛的薄層材料氧化鋁—有堿性、中性、酸性硅藻土—為化學(xué)中性吸附劑纖維素—天然多糖類聚酰胺—為特殊類型有機(jī)薄層材料，對(duì)能形成氫鍵的物質(zhì)有特別的選擇性。11/2/202411(2)表面改性固定相疏水改性硅膠——化學(xué)鍵合烷基親水改性硅膠——引入氨基、氰基、二羥基等，薄層板極性介于極性吸附劑和疏水改性劑之間（極性次序：硅膠﹥氨基﹥氰基﹥二羥基﹥反相）。表面改性纖維素——乙?；w維素(3)藥典收載的固定相有：硅膠類、硅藻土類、氧化鋁類、微晶纖維素類等。顆粒直徑一般要求10–40um。11/2/2024122.載板——玻璃板，放在飽和碳酸鈉溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干凈，干燥，置干燥器中備用。要求光滑、平整、洗凈后不附水珠。3.黏結(jié)劑(1)無(wú)機(jī)黏結(jié)劑——石膏（硫酸鈣），添加石膏的吸附劑以字母“G”表示。沒(méi)有黏結(jié)劑的吸附劑以字母“H”表示。無(wú)機(jī)黏結(jié)劑的優(yōu)點(diǎn)是：耐高溫，耐酸堿，但涂鋪薄板動(dòng)作要快，否則勻漿易凝固。薄層強(qiáng)度差。11/2/202413(2)有機(jī)黏結(jié)劑——羧甲基纖維素鈉（CMC）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特點(diǎn)是薄層強(qiáng)度高、使用方便，但不能用濃硫酸作顯色劑。

(3)熒光黏結(jié)劑——在吸附劑中添加某種熒光指示劑，常用的熒光指示劑在254nm紫外光下發(fā)藍(lán)色熒光的有鈉熒光素、硫化鎘、陰極綠等。在366nm有熒光的指示劑如彩藍(lán)等。含有熒光指示劑的商品吸附劑以“F”表示，并以下標(biāo)注明其激發(fā)光波長(zhǎng)。例硅膠HF254

11/2/2024144.薄層板涂鋪要求：均勻、平整、無(wú)氣泡引起的凹坑和龜裂。例：硅膠板（粒度10～40um）硅膠G—將硅膠置研缽中，加入少量水，研磨均勻，至無(wú)結(jié)塊和氣泡，再加入比例量的水(一般為1份固定相與3份水)，迅速研磨均勻，立即涂鋪。硅膠或硅膠G——以CMC為黏合劑。配制0.2%～0.7%CMC水溶液,放置過(guò)夜,使懸浮的纖維沉降,取上層用來(lái)配制吸附劑勻漿。11/2/202415反相薄層板制備——以不同鏈長(zhǎng)的正構(gòu)烷烴為固定液,配制成適當(dāng)濃度的溶液(如5%硅酮油乙醚溶液),浸漬硅膠板。5.薄層板活化涂布后的薄層先在室溫下陰干，在使用前置適當(dāng)溫度烘烤一定時(shí)間進(jìn)行活化，然后置干燥器中備用。不同薄層活化條件略有不同，如：硅膠110℃1h氧化鋁110℃30min11/2/2024166.點(diǎn)樣要求配制樣品的溶劑高度揮發(fā)性和盡可能非極性，否則易使斑點(diǎn)擴(kuò)展。采用多次點(diǎn)加法，第二次點(diǎn)加時(shí)應(yīng)待前一次點(diǎn)加的溶劑揮發(fā)后再進(jìn)行。點(diǎn)樣量應(yīng)適中，過(guò)載會(huì)引起斑點(diǎn)拖尾，分離度變差，以最小檢測(cè)量的幾倍～幾十倍為宜。手工點(diǎn)樣工具：定容玻璃毛細(xì)管（1–5ul），微量注射器。11/2/202417自動(dòng)點(diǎn)樣LimomatIV噴樣儀——樣品溶液通過(guò)氣流成霧狀噴向薄層，移動(dòng)板臺(tái)，使在薄層上流下樣品條帶。特點(diǎn)：適合于大量稀樣品溶液的噴加；條帶寬度不超過(guò)2mm，有利于改善分辨率；便于狹縫式光密度計(jì)掃描；要求薄層板強(qiáng)度高。自動(dòng)薄層色譜點(diǎn)樣儀——由計(jì)算機(jī)控制。藥典規(guī)定：點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm,樣點(diǎn)直徑2-4mm,點(diǎn)間距離約為1.5-2.0cm。11/2/2024187.展開(kāi)方式多數(shù)采用直線形上行展開(kāi)，薄層板水平角度以75

為最佳。展開(kāi)距離一般為10-15cm。多次展開(kāi)——一次展開(kāi)未達(dá)滿意分離時(shí)，可將薄層板干燥后再次用同一種溶劑展開(kāi)，可重復(fù)多次，直到混合物分離為止。分步展開(kāi)——混合物性質(zhì)差別較大時(shí)，一種流動(dòng)相不能有效分離時(shí)，可采用不同溶劑依次展開(kāi)不同距離。11/2/202419連續(xù)展開(kāi)——使到達(dá)薄層上緣的溶劑不斷蒸發(fā)，連續(xù)展開(kāi)以增加展開(kāi)距離。因無(wú)溶劑前沿，需要有個(gè)參照物同時(shí)展開(kāi)，以計(jì)算相對(duì)保留值。二維展開(kāi)——在兩個(gè)垂直的方向上進(jìn)行展開(kāi)。將樣品點(diǎn)在薄層板的一個(gè)角上，展開(kāi)適當(dāng)距離后，揮干溶劑，再將薄層板以與原展開(kāi)方向成90

的方向進(jìn)行展開(kāi)。原點(diǎn)1211/2/202420離心展開(kāi)——薄層板以適當(dāng)轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)時(shí)，流動(dòng)相以適當(dāng)速率轉(zhuǎn)移到薄層上。該技術(shù)主要用于制備色譜。鍥尖技術(shù)——圓形離心展開(kāi)具有分辨率高的優(yōu)點(diǎn)，但需要有一定的儀器裝置。采用鍥尖技術(shù)可以在一般的展開(kāi)室中進(jìn)行類似展開(kāi)。薄層被刮掉部分溶劑前沿

11/2/2024218.檢測(cè)物理方法——紫外光下顯示熒光或熒光淬滅化學(xué)方法——加化學(xué)試劑顯色，要求顯色穩(wěn)定、持久、專屬、靈敏、線性良好。斑點(diǎn)定位方法碘蒸氣法——靈敏、簡(jiǎn)便，為通用顯色法。將碘結(jié)晶放在密封的展開(kāi)缸中，碘的升華，使缸內(nèi)充滿紫色的碘蒸氣。將展開(kāi)后的板揮干溶劑置碘缸中至薄層色譜上出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)。放置時(shí)間不宜太長(zhǎng)，否則背景吸附劑也吸附碘，使信噪比降低。用針頭將斑點(diǎn)標(biāo)記下來(lái)，放在通風(fēng)處使碘揮發(fā)。11/2/2024227.3.4流動(dòng)相與展開(kāi)體系1.液-固吸附——在該色譜中，溶質(zhì)的保留和分離選擇性決定于三個(gè)因素：溶解能力流動(dòng)相溶質(zhì)吸附劑相互作用競(jìng)爭(zhēng)一.展開(kāi)體系:11/2/2024232.液-液分配基于組分在互不相溶的兩相間的溶解度不同而實(shí)現(xiàn)分離的一種展開(kāi)系統(tǒng)?？稍谡归_(kāi)前，將薄層板浸入某種液體固定相。實(shí)際上在TLC中，分配與吸附是并存的（大氣中水分也是一種固定相）。3.此外還有：化學(xué)鍵合相反相展開(kāi)、化學(xué)鍵合相正相展開(kāi)、離子交換、離子對(duì)色譜、凝膠、膠束、手性展開(kāi)。11/2/202424二.溶劑強(qiáng)度參數(shù)和選擇性1.溶劑的強(qiáng)度參數(shù)定義：溶劑強(qiáng)度參數(shù)用

表示。流動(dòng)相強(qiáng)度越高，表示它與吸附劑相互作用力強(qiáng)。溶質(zhì)的Rf值就越大,但選擇性越小。為得到滿意的分離，選用的流動(dòng)相使溶質(zhì)的Rf值在0.25–0.75之間為宜。溶劑強(qiáng)度也可用其在水中的溶解度參數(shù)

來(lái)表示。11/2/202425一些常用溶劑的溶劑強(qiáng)度與溶解度參數(shù)溶劑

溶劑

正己烷0.017.3環(huán)己烷0.048.2苯0.329.2乙醚0.387.4二氯甲烷0.429.6正丙醇0.8210.2正丁醇0.70/四氫呋喃0.579.1乙酸乙酯0.588.6氯仿0.409.1甲乙酮0.51/二氧六環(huán)0.569.8吡啶0.7110.4丙酮0.509.4乙醇0.88/乙酸1.0012.4二甲亞砜0.7512.8甲醇0.9512.9乙二醇1.1114.7甲酰胺/17.911/2/2024262.溶劑優(yōu)化規(guī)則：增加溶劑強(qiáng)度，使Rf值增大，但也可能降低分離能力。流動(dòng)相中較強(qiáng)組分的體積比小于5%或大于50%，選擇性最大，此時(shí)最有利于溶質(zhì)與流動(dòng)相組分的選擇性相互作用。用乙醚或甲醇代替流動(dòng)相中的一種較強(qiáng)組分，由于形成氫鍵可改善選擇性。若出現(xiàn)斑點(diǎn)拖尾，可向流動(dòng)相中加少量水，或降低薄層活性，有利于改善分離。也可采用兩種強(qiáng)溶劑與一種弱溶劑組成的三元混合流動(dòng)相，此時(shí)，溶劑強(qiáng)度由弱溶劑控制，而溶劑選擇性則由兩強(qiáng)溶劑控制。11/2/2024273.斑點(diǎn)的擴(kuò)散與形狀在TLC中斑點(diǎn)的移動(dòng)與擴(kuò)散是二維的，因?yàn)榘唿c(diǎn)在展開(kāi)方向和與之垂直方向上的擴(kuò)散速度是不相等的，展開(kāi)劑的移動(dòng)速度也是不等的，在單位體積或單位質(zhì)量薄層內(nèi)所含的溶劑量越接近溶劑前沿減少得越明顯，直至溶劑前沿時(shí)為零，這一現(xiàn)象稱為“溶劑的體積梯度”，在各種展開(kāi)形式中均存在。當(dāng)然，對(duì)于這一問(wèn)題實(shí)際上只是在定量斑點(diǎn)濃度時(shí)才需要考慮。11/2/202428同時(shí)一種成分的色譜行為會(huì)受到混合物中其他成分的影響，這種影響的大小取決于混合成分的種類、濃度、以及斑點(diǎn)間的距離等。這種影響一般使分配系數(shù)變小。如兩個(gè)相鄰斑點(diǎn)中后面的一個(gè)展開(kāi)速度較其單獨(dú)展開(kāi)時(shí)為大。11/2/2024294.固定相的活度及其調(diào)節(jié)在其他因素一定時(shí)，固定相活度增加，Rf值減少，反之亦然?？赏ㄟ^(guò)預(yù)吸附溶劑分子，調(diào)節(jié)其表面活性。例如可將活化薄層板放在相對(duì)濕度恒定的空間里來(lái)達(dá)到調(diào)節(jié)活度的目的。實(shí)際工作中常常使固定相預(yù)吸附一定量單一或混合溶劑蒸氣，預(yù)吸附量越大，溶劑前沿運(yùn)動(dòng)速度越快，物質(zhì)斑點(diǎn)的Rf值越小。預(yù)吸附還可能影響Rf在0.6-1.0之間的斑點(diǎn)的分離。11/2/202430在層析過(guò)程中發(fā)生的邊緣效應(yīng)就是由于這種因素引起的。尤其是使用混合溶劑時(shí)，極性較弱和沸點(diǎn)較低的溶劑，在薄層邊緣容易揮發(fā)，使邊緣部分的展開(kāi)劑中極性溶劑的比例增大，Rf相對(duì)增大。同一物質(zhì)在同一薄層板上出現(xiàn)中間部分的Rf值比邊緣的Rf值小，即邊緣效應(yīng)，若在展開(kāi)前先將展開(kāi)槽與薄層板用展開(kāi)劑蒸氣飽和后再展開(kāi)，邊緣效應(yīng)可消失。采用雙槽層析缸尤為有利。11/2/202431預(yù)吸附中展開(kāi)中展開(kāi)過(guò)程中用不同于展開(kāi)劑的溶劑調(diào)節(jié)槽內(nèi)氣氛11/2/2024327.4薄層色譜法定性、定量方法一.定性方法利用保留值測(cè)定Rf值測(cè)定相對(duì)Rf值，即Rx值。利用二維色譜（改變色譜條件，比較Rf值是否一致）sb1b2b2sb1sb1b2點(diǎn)樣第一次展開(kāi)第二次展開(kāi)11/2/202433通過(guò)板上光譜圖定性直接測(cè)定薄層板上斑點(diǎn)的紫外或可見(jiàn)吸收光譜圖，與平行點(diǎn)加的標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)的圖譜對(duì)照。可建立標(biāo)準(zhǔn)條件下的化合物的光譜圖庫(kù)，用計(jì)算機(jī)檢索定性。與其他技術(shù)連用TLC-付里葉變換IR聯(lián)用TLC-MS聯(lián)用11/2/202434二.定量方法1.間接定量——將薄層分離后物質(zhì)斑點(diǎn)定量地洗脫下來(lái)，再對(duì)洗脫液定量。分光光度法、HPLC法、GC法、質(zhì)譜法2.直接定量斑點(diǎn)面積測(cè)量——用透明紙覆蓋在薄層表面，描出斑點(diǎn)界限，然后測(cè)量其面積。目測(cè)法——比較系列標(biāo)準(zhǔn)與樣品的斑點(diǎn)面積大小、顏色深淺，得到樣品的含量范圍。3.薄層儀掃描定量11/2/202435定量計(jì)算外標(biāo)法：此法是薄層定量最常用的方法。定量時(shí)，點(diǎn)樣量必須準(zhǔn)確，樣品與對(duì)照品應(yīng)點(diǎn)在同一塊薄層板上。用已知含量的對(duì)照品得出樣品含量的一種方法。內(nèi)標(biāo)法:選一個(gè)純度高、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、在薄層上能與對(duì)照品分開(kāi)的物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，并準(zhǔn)確稱取加到被測(cè)物中，根據(jù)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量算出被測(cè)物的含量。11/2/202436精密度重復(fù)性——當(dāng)待測(cè)組分的含量達(dá)0.5ug/斑點(diǎn)時(shí),方法的重復(fù)性(RSD)應(yīng)在3.0%以內(nèi)。中間精密度——多數(shù)情況下，RSD應(yīng)在5.0%以內(nèi)。再現(xiàn)性——RSD一般應(yīng)在10%以內(nèi)。方法認(rèn)證選擇性——以分離度表示，待測(cè)組分的Rf值在0.3–0.7之間穩(wěn)定性——考察在采樣、樣品預(yù)處理、貯存、展開(kāi)，展開(kāi)后處理等過(guò)程中的樣品穩(wěn)定性。線性與范圍——相應(yīng)于待測(cè)組分檢出量的20%-120%范圍。靈敏度——通常以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率表示。11/2/202437三.薄層掃描1.薄層定量方法:直接法——測(cè)定光照射色譜后，因被測(cè)物斑點(diǎn)的存在引起的透射光和反射光的變化。并通過(guò)隨行標(biāo)準(zhǔn)比較待測(cè)斑點(diǎn)的量。間接法——將部分照射光的能量轉(zhuǎn)換成較長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光，即熒光測(cè)量。薄層色譜定量測(cè)定的光學(xué)方法是基于測(cè)量斑點(diǎn)和薄層空白處光學(xué)響應(yīng)信號(hào)的差值。11/2/202438透射光法測(cè)定組分對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收度來(lái)確定含量。將薄層板從左至右移動(dòng)，對(duì)斑點(diǎn)掃描，單色光透過(guò)薄層板后被記錄下來(lái)，將測(cè)得的吸收度對(duì)Rf值繪制掃描曲線，得薄層色譜圖光源單色器11/2/202439反射光法一定波長(zhǎng)的光照射薄層，穿進(jìn)薄層內(nèi)的光部分被薄層吸收，部分經(jīng)過(guò)漫反射又折回表面成為反射光。當(dāng)對(duì)薄層進(jìn)行掃描時(shí)，測(cè)量其反射吸收度，可得到反射光譜。反射吸收度與物質(zhì)含量有確定關(guān)系，可進(jìn)行定量。光源單色器11/2/202440掃描方式直線式掃描——照射在薄層板上的光束與薄層板作直線相對(duì)運(yùn)動(dòng)。光束固定，掃描板臺(tái)運(yùn)動(dòng)。光束落在薄層上的截面為一長(zhǎng)方形帶。鋸齒式掃描——照射在薄層板上的光束與薄層板的相對(duì)運(yùn)動(dòng)軌跡呈鋸齒形或矩形。直線掃描鋸齒掃描輪廓曲線積分曲線11/2/202441斑點(diǎn)斑點(diǎn)A

B

CABCCAB對(duì)于不規(guī)則斑點(diǎn)，兩種掃描結(jié)果不一樣。同一斑點(diǎn)從A、B、C三個(gè)不同方向掃描，鋸齒掃描所得積分值變動(dòng)小，而直線掃描所得積分值變動(dòng)大。11/2/2024422.光學(xué)系統(tǒng)單光束單波長(zhǎng)——受光源穩(wěn)定性和薄層質(zhì)量影響嚴(yán)重。單光束雙波長(zhǎng)——對(duì)背景不均勻引起的干擾有補(bǔ)償作用，選擇的兩個(gè)波長(zhǎng)應(yīng)接近些。雙光束單波長(zhǎng)——可補(bǔ)償光源不穩(wěn)引起的誤差，但對(duì)板層不均勻無(wú)作用。光單色器檢測(cè)器光波長(zhǎng)1波長(zhǎng)2檢測(cè)器斬波器光單色器分光鏡檢測(cè)器檢測(cè)器11/2/202443測(cè)量方式吸光度測(cè)量——測(cè)定的是漫反射光。適合于本身有顏色或有紫外吸收的物質(zhì)。I0IR檢測(cè)器11/2/202444熒光測(cè)量——靈敏度較吸光度測(cè)量高，板層不吸收發(fā)射光，測(cè)量噪音小，基線穩(wěn)定。為消除激發(fā)光的影響，在板層和檢測(cè)器之間必須加一塊濾光片，以截去反射激發(fā)光，只讓發(fā)射的熒光抵達(dá)檢測(cè)器。濾光片熒光檢測(cè)器11/2/202445熒光淬滅測(cè)量——吸附劑有熒光，樣品斑點(diǎn)無(wú)熒光，在紫外光照射下，被測(cè)物在熒光背景上顯示出暗灰斑點(diǎn)。本法適合于本身無(wú)顏色，又無(wú)特征紫外吸收或熒光的物質(zhì)。該測(cè)量技術(shù)有三種形式：測(cè)熒光測(cè)紫外光測(cè)紫外和熒光11/2/202446掃描定量中的標(biāo)準(zhǔn)曲線校正薄層板上由于光被吸附劑散射，不能得到象通常溶液測(cè)定時(shí)的吸光度和濃度之間的簡(jiǎn)單直線關(guān)系。即物質(zhì)濃度越大，薄層試樣板上測(cè)定的反射吸光度比直線關(guān)系所示值越低。掃描儀系統(tǒng)設(shè)計(jì)時(shí)考慮到這一問(wèn)題，采用微機(jī)處理使標(biāo)準(zhǔn)曲線直線化。在理論曲線上選擇吸光度0–1之間的7個(gè)點(diǎn)，將各吸光度值轉(zhuǎn)換為直線上的值，得到一條通過(guò)原點(diǎn)的直線。11/2/202447吸光度1.00物質(zhì)量經(jīng)變換后的直線理論曲線直線化方法示意圖校正過(guò)度校正適當(dāng)校正不足未校正試樣量積分值校正情況判斷11/2/202448使用直線化功能時(shí)的注意事項(xiàng)發(fā)色試樣的測(cè)定——對(duì)于沒(méi)有吸收的試樣進(jìn)行發(fā)色測(cè)定時(shí)，一般不使用直線化功能就可以得到近似的直線關(guān)系。試樣變質(zhì)時(shí)——試樣展開(kāi)后，應(yīng)馬上進(jìn)行測(cè)定，如果放置一星期后再測(cè)定。即使近似地呈直線狀也往往不能通過(guò)原點(diǎn)，認(rèn)為是試樣變質(zhì)所引起的。展開(kāi)距離——同一試樣等量點(diǎn)樣，同樣展開(kāi)，展開(kāi)距離不同將引起誤差。展開(kāi)方法——使用直線化功能定量時(shí)，為避免展開(kāi)距離不同產(chǎn)生的誤差，實(shí)際定量時(shí)，將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品在同一塊板上展開(kāi)是較理想的。11/2/2024497.5薄層色譜法的應(yīng)用藥物鑒別——采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法雜質(zhì)檢查雜質(zhì)對(duì)照品法高低濃度法藥物標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法不允許有雜質(zhì)斑點(diǎn)存在，即以方法靈敏度來(lái)控制雜質(zhì)量。含量測(cè)定——主要用于中藥有效成分的分析11/2/202450一.薄層色譜方法的應(yīng)用及其展望1.藥方面的應(yīng)用2.生物樣品與毒物分析3.環(huán)境有害物質(zhì)的分析4.食品分析5.其他方面的應(yīng)用與展望11/2/202451應(yīng)用薄層掃描即薄層色譜與紫外分光光度或熒光光度分析聯(lián)用，可進(jìn)行各種藥物的定量分析。應(yīng)用硅膠GF色譜板，杜迎翔等分離了合成藥物鉍甲西林片中的阿莫西林甲硝唑，謝蘇婧等分離了尼美舒利膠囊中的尼美舒利，黃勁梅分離了施保利通口服液中的馬卡因、月桂侖中的氮酮，分離后不必洗脫即可直接在薄層掃描儀上用雙波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描，準(zhǔn)確測(cè)定各合成藥物制劑中藥物成分的含量。1.醫(yī)藥方面的應(yīng)用11/2/202452此法更廣泛應(yīng)用于中草藥與中成藥主要有效成分定量分析，如應(yīng)用各種改性硅膠G薄層色譜，馬柏林等分離了杜仲葉中桃葉珊瑚甙，張尊聽(tīng)等分離了葛根、葛根注射液、玉泉丸中的葛根素;李多偉等分離了蘆薈中的蘆薈甙、銀杏外種皮中的白果酸;陳代賢等分離了真?zhèn)瓮淋蜍咧械耐淋蜍?，葛早川等分離了黃連、香連丸、加味左金丸中的小檗堿、巴馬汀和藥根堿，然后用雙波長(zhǎng)反射鋸齒薄層掃描定量分析各有效成分?？导兊扔镁埘０繁由V板分離了槐花米、黃芩復(fù)方蘆丁片、雙黃連口服液中的黃酮類化合物，并直接進(jìn)行薄層掃描定量分析。李素琴應(yīng)用硅膠60色譜板分離了蟾酥中的哇巴因，將哇巴因斑點(diǎn)洗脫液進(jìn)行反向高效液相色譜定量分析。11/2/202453 薄層色譜法分析的生物樣品多為血清、血漿或尿液等，用來(lái)進(jìn)行藥物生物利用度的分析，檢測(cè)臨床用藥的血藥濃度，以利于診斷臨床疾病等。毒物分析的內(nèi)容比較廣泛，包括植物毒素、真菌毒素、興奮劑、藥物中毒、走私毒品、農(nóng)藥以及尸檢、刑偵破案等方面的樣品分析。2.生物樣品與毒物分析11/2/202454在生物樣品分析領(lǐng)域，應(yīng)用高效硅膠G薄層板分析了尿樣中生物樣品氯硝西泮代謝物7一氨基氯硝西泮；Uchikoba等應(yīng)用硅膠GF薄層板分析了血紅素中類胰島素酶；應(yīng)用經(jīng)0.27mol／L、pH=7的EDTA溶液修飾的硅膠G薄層掃描；定量分析了血樣、尿樣中的氟羅沙星和司帕沙星。在毒物分析方面,應(yīng)用硅膠GF薄層板分析了咖啡因、安替比林、嗎啡、安定等50種毒物。11/2/202455

3.環(huán)境有害物質(zhì)的分析

主要包括農(nóng)藥及農(nóng)藥殘留分析、有毒金屬測(cè)定和多環(huán)芳烴測(cè)定等。Nemergut等應(yīng)用單波長(zhǎng)反射薄層掃描定量分析了土壤中多環(huán)芳香烴苯并a芘，殷少元等應(yīng)用硅膠GF薄層色譜與CG—MS聯(lián)用分析了水中殘存農(nóng)藥滅多威，應(yīng)用硅膠GF薄層板定性分析了有機(jī)磷農(nóng)藥甲胺磷，Mahammad應(yīng)用硅膠G+氧化鋁G+微晶纖維素+硅藻土G自制板。

11/2/2024564.食品分析 薄層色譜法還應(yīng)用于分離測(cè)定食品中所含有的碳水化合物、維生素、有機(jī)酸、氨基酸等天然營(yíng)養(yǎng)成分，也用于食品添加劑如色素、防腐劑等，以及某些真菌毒素如黃曲霉毒素的分析。應(yīng)用硅膠GF薄層高效色譜板分析了大豆磷脂酰膽堿(SPC)粗品中的大豆磷脂酰膽堿；劉宇紅等應(yīng)用硅膠GF薄層高效色譜板，分析了食品甜味劑三氯半乳蔗糖(TGS)；應(yīng)用硅膠G薄層色譜單波長(zhǎng)反射鋸齒掃描定量分析了蔗糖酯中的蔗糖單酯與蔗糖多酯；應(yīng)用硅膠G薄層色譜雙波長(zhǎng)反射鋸齒掃描及與HPLC聯(lián)用，定量分析了豬油中的膽固醇；應(yīng)用硅膠高效板，單波長(zhǎng)反射法吸收掃描定量分析了調(diào)味品姜黃中的姜黃素。11/2/202457

5.其他方面的應(yīng)用薄層色譜還適用于無(wú)機(jī)及金屬有機(jī)化合物分析、染料及化妝品分析、石油和煤分析、手性化合物分離和化工及高分子材料分析。使用硅膠G薄層色譜與IR、NMR聯(lián)用分析了溴敵隆乳油，并用紫外分光光度定量；使用硅膠G薄層色譜分析了23種氨基酸，確定了各自的相對(duì)展距；應(yīng)用硅膠GF薄層色譜、單波長(zhǎng)反射鋸齒掃描定量分析了鹵代萘與叔己酮碳負(fù)離子的親核取代反應(yīng)產(chǎn)物萘基叔己酮。應(yīng)用纖維素苯甲酸酯類衍生物三(苯甲酰基)纖維素(CTB)、三(4·甲基苯甲?；?纖維素(CTMB)、三(4．硝基苯甲酰基)纖維素(CTPNB)和微晶纖維素，混合水和乙醇制備手性固定相薄層板，分析了6對(duì)含氮手性藥物(普洛萘爾，異丙嗪，氯喹，氧氟沙星，D51，D66)，確定了各藥物的R值.

11/2/202458一.雙波長(zhǎng)薄層色譜掃描法測(cè)定甲基紅含量

11/2/202459

學(xué)習(xí)利用島津CS-9301型薄層色譜掃描儀測(cè)定甲基紅含量的原理與方法，初步了解CS-9301型薄層色譜掃描儀的結(jié)構(gòu)與使用。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1/2/202460二、實(shí)驗(yàn)原理用于定量的薄層色譜儀稱為薄層色譜掃描儀或薄層色譜光密度計(jì)，用此種儀器對(duì)薄層上被分離的物質(zhì)進(jìn)行直接定量分析的方法稱為薄層色譜掃描法。分析的基本原理是用一束長(zhǎng)寬可以調(diào)節(jié)的一定波長(zhǎng)、一定強(qiáng)度的光照射到薄層斑點(diǎn)上，對(duì)整個(gè)斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，用儀器測(cè)