醫(yī)院感染監(jiān)測技術(shù)

醫(yī)院感染監(jiān)測技術(shù)及具體要求一、醫(yī)院環(huán)境監(jiān)測

環(huán)境監(jiān)測采樣原則：采樣應(yīng)具有一定數(shù)量和代表性，采樣應(yīng)必須盡快對樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測，送檢時間不得超過6小時，若樣品保存于0-4℃條件時，送檢時間不得超過24小時。（一）空氣監(jiān)測與質(zhì)控1、采樣時間：選擇消毒處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動之前采樣。

2、采樣高度：離地面垂直高度80-150cm。

3、布點方法：室內(nèi)面積≤30m2，設(shè)一條對角線上取3點（避開門），即中心一點，兩端各距墻1m各取一點，室內(nèi)面積＞30m2，設(shè)東、西、南、北、中5點（離門遠(yuǎn)點），其中東、西、南、北各點均距墻1m。4、采樣方法：一般采用自然菌沉降法：采用直徑9cm普通營養(yǎng)瓊脂平皿，在各采樣點暴露5分鐘（或15分鐘）后送檢培養(yǎng)計數(shù)（37℃培養(yǎng)24-48小時）。5、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：見表1（二）醫(yī)護(hù)人員手部監(jiān)測與質(zhì)控1、采樣時間：在清潔或消毒手部后，接觸病人和從事醫(yī)療活動前進(jìn)行采樣。2、采樣面積及方法：被檢人員五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積約30cm2），并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子放入裝有10ml采樣液的試管內(nèi)送檢。

△若采手術(shù)室消毒液刷洗后的手時，則須用含相應(yīng)中和劑的采樣液進(jìn)行采樣。3、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：見表1（三）物體表面監(jiān)測

與質(zhì)控1、采樣時間：選擇消毒處理后4小時內(nèi)進(jìn)行采樣。

2、采樣面積：被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。3、采樣方法：用5×5cm2的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子一支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，連續(xù)采樣4個規(guī)格板面積，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有10ml采樣液的試管中送檢。

△注意：如門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體的方法采樣。4、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：見表1

表1：各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

致病性微生物:不得檢出乙型溶血性鏈球菌，金黃色葡萄球菌及其他致病性微生物。在可疑污染情況下進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒及兒科病房的物體表面和醫(yī)護(hù)人員手上，不得檢出沙門氏菌。

二、消毒藥械的效能

監(jiān)測與質(zhì)控（一）使用中消毒劑與無菌器械保存液監(jiān)測與質(zhì)控1、采樣時間：采取更換前使用中的消毒劑與無菌器械保存液。2、采樣量及方法：在無菌條件下，用無菌吸管吸取1ml被檢樣液，加入9ml稀釋液中混勻，對于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可；對于含氯消毒劑、含碘消毒劑、過氧化物消毒劑需在肉湯中加入0.1%硫代硫酸鈉；對于季胺鹽類消毒劑，需在肉湯中加入3%吐溫80和0.3%卵磷脂；對于醛類消毒劑，需在肉湯中加入0.3%甘氨酸；對于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入3%吐溫80，以中和被檢樣液的殘效作用。3、結(jié)果分析：平皿上有菌生長，證明被檢液有殘存活菌，若每個平板菌落數(shù)在10cfu以下，仍可用于消毒處理（但不能用于滅菌），若每個平板菌落數(shù)超過10cfu，說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100個，即不宜再用。4、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：①使用中消毒液細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml；不得檢出致病微生物。②無菌器械保存液必須無菌生長。（二）醫(yī)療用品監(jiān)測與質(zhì)控1、采樣時間：在消毒或滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。2、常規(guī)監(jiān)測：采樣方法：用無菌方法將擬檢縫合針、針頭、手術(shù)刀片等小件醫(yī)療器械各5支，分別投入5ml的無菌生理鹽水中；注射器則取5副在5ml無菌肉湯中分別抽吸5次，對手術(shù)鉗、鑷子等大的醫(yī)療器械在無菌操作下取2份以上用沾有無菌生理鹽水的棉拭子反復(fù)涂擦，并將棉拭子投入5ml無菌生理鹽水中；對一些特殊醫(yī)療用品，可用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂擦采樣，被采表面＜100cm2，取全部表面，被采表面≥100cm2，取100cm2，采樣后馬上送檢。

3、注意事項：若消毒因子為化學(xué)消毒劑時，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。4、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：①進(jìn)入人體無菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品必須無菌生長。②接觸粘膜的醫(yī)療用品細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g或100cm2，不得檢出致病微生物。③接觸皮膚的醫(yī)療用品細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤200cfu/g或100cm2，不得檢出致病微生物。（三）紫外線消毒效果監(jiān)測1、紫外線燈管輻照度值的測定：

（1）檢測方法：開燈5分鐘后，將測定波長為253.7nm的紫外線強(qiáng)度測定儀（標(biāo)定有效期內(nèi)）探頭置被檢紫外線燈下垂直距離1m的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。紫外線燈管輻照度值的測定方法

（2）結(jié)果判斷：普通30W直管型紫外線燈，新燈輻照強(qiáng)度≥100uw/cm2為格；使用中紫外線燈輻照強(qiáng)度70uw/cm2為合格；30W高強(qiáng)度紫外線新燈的輻照強(qiáng)度≥200uw/cm2為合格。2、化學(xué)指示卡法：必須使用衛(wèi)生部批準(zhǔn)生產(chǎn)的產(chǎn)品，產(chǎn)品生產(chǎn)批號明確，且在有效期內(nèi)使用。

3、注意事項：（1）應(yīng)保持紫外線燈表面的清潔，每2周用95%乙醇棉球擦拭1次。（2）紫外線燈對眼睛有刺激，不可直視燈管以防引起結(jié)膜炎。（3）不得使紫外線光源直接照射到人，以免引起損傷。（4）紫外線可放出臭氧，臭氧過多可使人中毒，在有人工作的環(huán)境中，臭氧濃度不得超過0.2mg/m3。（四）壓力蒸氣滅菌效能監(jiān)測與質(zhì)控1、工藝監(jiān)測：又稱程序監(jiān)測

（1）下排氣式壓力蒸氣滅菌：其滅菌物品包體積不得超過30×30×25cm3，重量不超過5kg，待滅菌物品填裝量不得超過滅菌柜室容積的80%，市售無孔鋁飯盒與頂蓋必須無裂縫和變形；無排氣軟管或軟管銹蝕的手提式壓力蒸氣滅菌器不得使用；臥式壓力蒸氣滅菌器輸入蒸氣的壓力不宜過高，夾層的溫度不能高于滅菌室的溫度；裝放時，將難于滅菌的大包放上層，較易滅菌的小包放在下層。

（2）預(yù)真空壓力蒸氣滅菌：其滅菌包體積不得超過30×30×40cm3，用于脈動真空壓力蒸氣滅菌的物品包，體積不得超過30×40×60cm3，待滅菌物品裝填量不得超過柜室容積的90%，同時預(yù)真空和脈動真空壓力蒸氣滅菌器的裝填量又分別不得小于柜室容積的10%和5%，以防止“小裝量效應(yīng)”。2、化學(xué)指示監(jiān)測法：需使用衛(wèi)生部批準(zhǔn)的化學(xué)指示劑。如物品包外用化學(xué)指示膠帶，標(biāo)示物品是否經(jīng)過滅菌處理；物品包內(nèi)中心部位用化學(xué)指示劑（卡），標(biāo)示物品是否滅菌，預(yù)真空蒸氣滅菌器則每周進(jìn)行1次B-D試驗，脈動真空壓力滅菌器每晨空鍋做1次B-D試驗，以檢測滅菌器空氣排除效果。3、生物學(xué)監(jiān)測：使用嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC7953、12980）菌片或指示劑。每個滅菌試驗包中心部位，分別放置2片（每片用無菌小紙袋裝好），將標(biāo)準(zhǔn)試驗包分別置滅菌柜室內(nèi)上，中層中央和排氣口處；手提式壓力蒸氣滅菌器用通氣貯物盒（22cm×13cm×6cm）代替標(biāo)準(zhǔn)試驗包。盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位兩只滅菌試管內(nèi)（試管口用滅菌牛皮紙包封），將盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。經(jīng)一個滅菌周期后，在無菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗包或通氣貯物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，56℃培養(yǎng)48小時，觀察培養(yǎng)基顏色變化。若2管菌片培養(yǎng)基全部不變色，判為滅菌合格。若其中之一管培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色時，判定為滅菌不合格。

標(biāo)準(zhǔn)試驗包組成：3件平紋長袖術(shù)衣，4塊小手術(shù)巾、2塊中手術(shù)巾、1塊大手術(shù)巾、30塊10cm×10cm、8層紗布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小。

三、細(xì)菌內(nèi)毒素試驗1、定義及適用范圍：本法系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機(jī)理，以判斷供試品中內(nèi)毒素含量是否符合規(guī)定的一種方法，本法僅適用于一次性使用的輸液、輸血器、注射器等。2、試劑要求：（1）細(xì)菌無內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品：用于仲裁鱟試劑靈敏度和試驗中陰性對照。（2）細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品：用于標(biāo)定鱟試劑靈敏度和試驗中陽性對照。（3）鱟試劑：靈敏度為0.5Eu/ml，規(guī)格為0.5ml。（4）無熱原水：內(nèi)毒素含量小于0.05Eu/ml（0.05內(nèi)毒素單位/毫升）。3、試驗前準(zhǔn)備：（1）器具除熱原：與試驗液接觸的所有器具均應(yīng)除熱原，玻璃器具置電熱干燥箱內(nèi)180℃干烤2h或250℃干烤30min；塑料器具30%雙氧水或3%雙氧水或3%鹽酸溶液中浸泡4h，每用無熱原水沖洗后于60℃烘干備用。（2）鱟試劑靈敏度測定：試驗前應(yīng)核對使用批號鱟試劑的靈敏度，應(yīng)符合規(guī)定要求。4、試驗方法：（1）供試品數(shù)量：同一批號至少3個單位供試品（2）浸提介質(zhì)：無熱原水。（3）供試液制備：在無菌條件下，每套輸液器內(nèi)腔注入10ml、注射器內(nèi)腔注入5ml、輸血器內(nèi)腔注入15ml浸提介質(zhì)，反復(fù)蕩洗5次后兩端密封，置37±1℃恒溫箱中保溫2h，取出后將供試液匯集至一無菌無熱原有塞玻璃容器。供試液貯存應(yīng)不超過2h。

（4）試驗步驟：將鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品分別按標(biāo)量加入無熱原水溶解。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品逐次稀釋至0.5Eu/ml，供作陽性對照。取10×75mm試管6支，其中供試品管2支各加入0.1ml供試液，陰性對照管2支各加入0.1ml無熱原水，陽性對照管2支各加入0.1ml內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。每逐一加入0.1ml鱟試劑溶解液。輕輕混均試管內(nèi)容物，封閉管口，垂直放入（37±1）℃水浴中保溫（60±2）min，輕輕取出，觀察結(jié)果。

5、結(jié)果判定：（1）將試管緩慢倒轉(zhuǎn)180℃，管內(nèi)容物呈堅實凝膠者為陽性，記錄為（+），不呈凝膠狀或雖呈凝膠狀但不能保持完整者為陰性、記錄為（—）。

（2）供試品2管均為（—）性時，判定產(chǎn)品符合本法規(guī)定，不再進(jìn)行熱原試驗。

（3）供試品2管勻為（+）或有1管為（+）時，用無熱原水將供試液對倍`稀釋按上述方法重試，供試品操作4管。如4管均為（—），判定產(chǎn)品符合本法規(guī)定，不再進(jìn)行熱原試驗。

（4）重試供試品4管中有1管為（+）時，判定產(chǎn)品不符合本法規(guī)定，應(yīng)進(jìn)行熱原試驗，并根據(jù)試驗結(jié)果判定。

（5）供試品細(xì)菌內(nèi)毒素含量應(yīng)不超過0.5Eu/ml。

（6）陽性對照2管應(yīng)均為（+），陰性對照2管應(yīng)均為（—），否則試驗無效。四、血液透析液的監(jiān)測

透析液因含有適合細(xì)菌生長的電解質(zhì)，在病人進(jìn)行透析時，含氯的代謝廢物從透析器的血液側(cè)不斷地彌散到透析液中，可做為細(xì)菌生長的營養(yǎng)物質(zhì)，為細(xì)菌的生長提供一個很好的培養(yǎng)基。透析液從制備到使用有相當(dāng)長的儲存時間，在透析液循環(huán)管道中有一些停滯不動的死腔，為細(xì)菌生長繁殖提供時間的場所。透析液須加溫至37℃為細(xì)菌生長提供了條件，因此，細(xì)菌可在透析液中大量繁殖，在透析結(jié)束時細(xì)菌數(shù)達(dá)高峰。為了減少病人透析時熱原反應(yīng)和菌血癥的危險性，應(yīng)定期為透析液進(jìn)行監(jiān)測，監(jiān)測方法如下：1、標(biāo)本采集：采樣點為透析用水出口，即自來水經(jīng)過過濾、軟化、活性碳吸附，去離子逆滲透等步驟處理后的出口；透析液出口，即透析結(jié)束時透析液離開透析器的出口。疑有透析液污染或嚴(yán)重感染病例時應(yīng)增加采樣點，如原水口，透析液配比機(jī)、反滲水出口、貯水罐出口、透析液出口等。2、測定時間：每月1次。若檢查結(jié)果超過參考標(biāo)準(zhǔn)，須再復(fù)查。懷疑或確定病人在治療中有熱原反應(yīng)和菌血癥時，應(yīng)隨時檢測。3、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：透析用水細(xì)菌數(shù)不得超過200cfu/ml。透析結(jié)果時，透析液中細(xì)菌不得超過2000cfu/ml，并且無致熱原物質(zhì)存在。五、常用幾種化學(xué)消毒劑的濃度測定方法含氯消毒劑濃度測定方法含氯消毒劑濃度測定方法（2）戊二醛濃度測定方法戊二醛濃度監(jiān)測方法（3）酒精（乙醇）濃度測定方法乙醇濃度測定