河北省職業(yè)院校技能大賽生物技術賽項（GZ023）樣題模塊二 生物活性物質的提取與鑒定考核

（該模塊占45%，考試時間100分鐘）一、利用磁珠法提取血液基因組DNA進行生物活性物質提取與鑒定（共1題，計100分）1．考核題目取100μl雞全血血液，利用磁珠法分離純化高質量DNA，并通過超微量分光光度計對其進行DNA濃度與純度測定（完成3次平行實驗），計算平均值和相對標準差，并進行實驗記錄和數(shù)據(jù)分析，完成結果報告。DNA濃度與純度檢測結果計算公式：（1） DNA濃度計算按OD260為1相當于50μg/mL雙鏈DNA、40μg/mL單鏈DNA，進行計算。（2） DNA純度檢測OD260/OD280比值應為1.7至1.9。（3） 相對標準差計算公式根據(jù)三個樣品DNA含量測定值，計算出RSD。式中：x——三次DNA含量測定值的平均值，單位為毫克每千克（μg/mL）；n——平行樣品個數(shù)，為3；xi——每個樣品的測定值。2.考核內(nèi)容考核實驗前準備、基因組DNA提取的實驗操作、上機檢測進行DNA濃度和純度測定，實驗記錄、數(shù)據(jù)分析與結果報告、清潔與整理等五方面。3.考核要求實驗前，需要穿戴實驗工作服（帽子、口罩、衣服、鞋套）、手套，做好實驗前儀器材料準備和檢查工作，確認工作環(huán)境情況。實驗操作全程熟練掌握移液器使用。使用磁珠法提取雞血DNA，安全、穩(wěn)定完成裂解、結合、洗滌、洗脫等各步驟操作。熟練使用渦旋儀、磁力架、水浴鍋、超微量分光光度計等儀器設備。準確記錄儀器測定數(shù)據(jù)，計算相對標準差（使用賽場提供的計算器），完成實驗報告等。還原比賽工位，清潔與整理。二、操作要求1、確認漂洗液和緩沖液中加入無水乙醇，加入體積請參照試劑盒瓶上的標簽。2、取雞全血樣品100μl于離心管中，加入20μlProteinaseK溶液3、加入300μl裂解液GHL，振蕩混勻。4、將離心管置于恒溫混勻器，適宜溫度（65-70℃）孵育約15min，期間顛倒混勻3回，每回3-5次。5、室溫放置5min。6、加入350μl異丙醇，震蕩混勻10s。7、加入20μl磁珠懸浮液，振蕩混勻1min，共靜置9min，每3min振蕩混勻1min（為了確保磁珠徹底重懸，請在使用前振蕩混勻）。8、將離心管放置于磁力架上靜置30sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液體。9、將離心管從磁力架取下，加入700μl緩沖液GDA（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），振蕩混勻5min。10、將離心管放置于磁力架上靜置30sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液體。注：可選做重復步驟9和10。11、將離心管從磁力架上取下，加入700μl漂洗液PWD，振蕩混勻2min。12、將離心管放置于磁力架上靜置30sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液體。13、重復步驟11，12一次。14、將離心管于磁力架上，室溫晾干。15、將離心管從磁力架上取下，加入洗脫緩沖液100μlTB，振蕩混勻，置于56℃，孵育5-10min，期間顛倒混勻3回，每回3-5次。16、將離心管放置于磁力架上靜置2min，磁珠完全吸附后，小心將DNA溶液轉移至一個新離心管中，并于適當條件保存。17、用超微量核酸蛋白分析儀檢測DNA含量和純度。河北省職業(yè)院校技能大賽生物技術賽項（GZ023）樣題模塊二生物活性物質的提取與鑒定考核河北省職業(yè)院校技能大賽生物技術賽項