雞新城疫抗體水平測定賽項規(guī)程

2022年全省高職院校技能大賽高職組雞新城疫抗體水平測定賽項競賽規(guī)程一、賽項名稱賽項名稱：雞新城疫抗體水平測定賽項組別：高職組二、競賽目的本賽項考核的核心技能是雞的采血方法，1%雞紅細(xì)胞懸液配制，血凝試驗操作，四單位病毒配制，血凝抑制試驗操作，抗體滴度報告，檢測結(jié)果分析等技能。本賽項考核的核心知識是《動物微生物與免疫學(xué)》、《動物傳染病》等專業(yè)課程理論知識。賽項由學(xué)校、行業(yè)共設(shè)，通過技能競賽，能有效促進全國高職院校畜牧獸醫(yī)類專業(yè)之間的交流，引領(lǐng)專業(yè)建設(shè)與課程改革；能進一步深化學(xué)校與企業(yè)之間的合作交流，加大行業(yè)人才隊伍建設(shè)力度，提升行業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展水平。同時，通過本賽項的資源轉(zhuǎn)化，可以向社會展示畜牧獸醫(yī)類專業(yè)的師生風(fēng)采和建設(shè)成果，提高專業(yè)的教學(xué)水平，提升人才培養(yǎng)質(zhì)量。三、競賽時間、地點3月26-27日甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院四、競賽內(nèi)容賽項分別設(shè)置理論考核和技能考核2個考評點。理論考核占總成績的30%，競賽時長2小時，本賽項考核的核心知識是《動物微生物與免疫學(xué)》、《動物傳染病》等專業(yè)課程理論知識。選手根據(jù)賽項提供的理論試卷（填空題、單項選擇題、多項選擇題、判斷題、簡答題、分析題）作答，主要考參賽選手的知識應(yīng)用能力、分析問題和解決問題能力。技能考核占總成績的70%，為雞新城疫抗體水平測定，測定方法按《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2020）標(biāo)準(zhǔn)，競賽時長3小時，主要考核選手臨床采血技術(shù)、實驗規(guī)范操作能力、結(jié)果的判斷能力及操作的執(zhí)行能力等。賽項技能考核為雞新城疫抗體水平測定（微量法），測定方法按《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2020）標(biāo)準(zhǔn)，競賽時間為3小時。具體步驟及其分值如下：（一）試驗器材準(zhǔn)備（占總成績的8%）按照操作規(guī)程進行器材準(zhǔn)備，要求器材選擇正確，擺放有序，物品標(biāo)識合理，桌面整潔等。（二）配制1%雞紅細(xì)胞懸液（占總成績的13%）按照操作規(guī)程進行采血、離心、洗滌、配制1%雞紅細(xì)胞懸液，要求采血規(guī)范、熟練、采血量適量、離心機使用規(guī)范、洗滌次數(shù)及洗滌時間適宜、配制過程規(guī)范、1%雞紅細(xì)胞量適宜等。（三）血凝試驗（占總成績的20%）按照操作規(guī)程，用微量移液器在96孔V型血凝反應(yīng)板1-12孔滴加稀釋液、新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原，充分混勻，倍比稀釋后，再次滴加稀釋液，再添加1%雞紅細(xì)胞懸液，充分振蕩混勻，靜置感作適當(dāng)時間后，正確判定抗原的血凝效價。要求微量移液器使用規(guī)范、倍比稀釋操作規(guī)范、結(jié)果判定正確等。（四）配制四單位病毒（占總成績的10%）根據(jù)血凝試驗結(jié)果，按照操作規(guī)程配制四單位病毒。要求稀釋倍數(shù)計算正確，稀釋液體積加入得當(dāng)，四單位病毒配制量適宜等。（五）血凝抑制試驗（占總成績的20%）按照操作規(guī)程，對20個被檢血清進行血凝抑制試驗操作，并設(shè)新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽性血清對照、陰性血清對照；正確讀取標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清及被檢血清的結(jié)果，確定抗體滴度，完成報告。要求移液器使用規(guī)范、反應(yīng)板各孔的稀釋正確、感作時間得當(dāng)、對照成立、結(jié)果判斷正確等。（六）抗體滴度報告（占總成績的24%）按照操作規(guī)程，正確判定抗體滴度，完成報告。要求抗體滴度判讀正確、報告方式正確、結(jié)果誤差符合要求及場地整潔等。（七）結(jié)果分析（占總成績的5%）對檢測結(jié)果進行分析。五、競賽方式1.本賽項為團體賽，每組參賽隊隊員為2名，理論競賽部分，選手單獨完成；技能競賽部分由2名選手配合完成，參賽選手均為高職院校在籍學(xué)生。2.比賽由2022年全省職業(yè)院校技能大賽組委會統(tǒng)一組織。全省有關(guān)高職院校根據(jù)2022年全省職業(yè)院校技能大賽組委會要求推薦1-3支隊伍參賽。3.理論競賽安排在26日，技能競賽安排在27日。技能競賽場工位號由選手抽簽決定，競賽用設(shè)備、材料及實驗動物與工位號對應(yīng)。六、競賽環(huán)境1.理論競賽場：標(biāo)準(zhǔn)筆試考場。2.技能競賽場：照明、控溫良好；賽場內(nèi)設(shè)有相對獨立的長實驗臺并標(biāo)明編號，選手根據(jù)抽簽結(jié)果在相應(yīng)的實驗臺完成比賽；賽場內(nèi)設(shè)置攝像頭，可將實時賽況直播到觀摩室。七、技術(shù)規(guī)范本賽項以教育部頒布的職業(yè)院校相關(guān)專業(yè)教學(xué)指導(dǎo)方案和國家職業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《動物疫病防治員》（三級）規(guī)定的知識和技能要求為基礎(chǔ)，依據(jù)《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2020）標(biāo)準(zhǔn)，確定比賽內(nèi)容及方式。八、技術(shù)平臺儀器設(shè)備按《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2020）標(biāo)準(zhǔn)要求配備。本賽項所用的儀器、設(shè)備與材料見表1。表1項目競賽用儀器、設(shè)備與材料序號器材或設(shè)備名稱數(shù)量規(guī)格1托盤天平1臺500g2離心機1臺L6003微型振蕩器1臺4微量移液器1支0.005～0.05mL5微量移液器1支0.1～1mL6微量移液器1支2～10mL7微量移液器吸頭150個0.005～0.05mL20個0.1～1mL10個2～10mL8微量移液器吸頭盒2個0.005～0.05mL1個0.1～1mL1個2～10mL9板式微量移液器架1個1096孔V型血凝反應(yīng)板5塊11燒杯5個50mL2個500mL12禽用采血器2支5mL2支10mL13具蓋塑料離心管6支15mL14指型離心管6支1.5mL15試管架1個16指型離心管架1個17細(xì)記號筆1支18實驗白大褂2件190.9%生理鹽水500mL203.8%枸櫞酸鈉溶液20mL21雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原1份22被檢血清樣本20個23雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽性血清1份24雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)陰性血清1份2575%酒精棉球若干26干棉球若干27非免疫公雞1只28乳膠手套4副29醫(yī)用防護口罩2只 30實驗報告單1張31標(biāo)簽紙若干33A4紙2張34簽字筆2支九、評分方法成績評定按照公平、公正、客觀的原則進行。（一）評分方法競賽現(xiàn)場裁判對選手技能操作根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)真評分，并簽名確認(rèn)；賽項裁判長對所有裁判員的打分成績進行審核，并簽名。結(jié)果評定采用百分制，理論成績占30%，技能操作占70%計算總成績。（二）成績審核為保障成績評判的準(zhǔn)確性，監(jiān)督組將對賽項總成績排名前30%的所有參賽隊伍（選手）的成績進行復(fù)核；對其余成績進行抽檢復(fù)核，抽檢覆蓋率不得低于15%。如發(fā)現(xiàn)成績錯誤以書面方式及時告知裁判長，由裁判長更正成績并簽字確認(rèn)。復(fù)核、抽檢錯誤率超過5%的，裁判組將對所有成績進行復(fù)核。（三）成績公布記分員將解密后的各參賽隊成績匯總成最終成績單，經(jīng)裁判長、監(jiān)督組簽字后，在指定地點、以紙質(zhì)形式進行公示，公示時間為2小時。成績公示無異議后，由仲裁長、監(jiān)督組長在成績單上簽字，并在閉幕式上公布競賽成績。項目技能競賽評分標(biāo)準(zhǔn)見表2。表2項目技能競賽評分標(biāo)準(zhǔn)序號考核內(nèi)容考核要點分值評分標(biāo)準(zhǔn)一試驗器材準(zhǔn)備（8分）儀器與材料準(zhǔn)備2儀器正確準(zhǔn)備，1分；材料準(zhǔn)備到位，1分。參考評分要點：未檢查清點儀器材料，儀器使用不正確，材料準(zhǔn)備不到位，口罩、滅菌橡膠外科手套穿戴不規(guī)范，酌情扣分。物品標(biāo)識4標(biāo)識合理，2分；標(biāo)識清晰，2分。參考評分要點：使用的燒杯、離心管（包括管蓋）和血凝反應(yīng)板均要標(biāo)記；標(biāo)識遺漏或標(biāo)識不清，酌情扣分，不標(biāo)識不得分。桌面整潔度2擺放合理，2分；參考評分要點：試驗器材無序擺放，不得分。二配制1%雞紅細(xì)胞懸液（13分）采血方法和采血量5抗凝劑適量，1分；采血方法規(guī)范、熟練，2分；采血量控制在2～4mL之間，2分。參考評分要點：雞正確保定；血液與抗凝劑比例4:1；采血時，雞放置于雞籠上保定；采血部位宜首選翅靜脈；采血部位合理消毒；采血時一針見血；采血量控制在2~4mL之間用干棉球按壓止血；采血后采血局部未見明顯血腫；采血未成功的，該項不得分。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累計扣完5分為止。離心機使用2離心機使用規(guī)范，2分。參考評分要點：離心前做好平衡，對稱放入離心機中；規(guī)范使用天平，應(yīng)“左物右碼”；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累計扣完2分為止。紅細(xì)胞懸液配制方法6稀釋液倍數(shù)正確，2分；離心機轉(zhuǎn)數(shù)、離心時間正確，2分；紅細(xì)胞洗滌次數(shù)適宜，1分；壓積紅細(xì)胞吸取正確，1分。參考評分要點：紅細(xì)胞洗滌時，用3～4倍體積的滅菌生理鹽水進行稀釋，稀釋后離心管中液體體積最大不可超過12mL；紅細(xì)胞洗滌時滅菌生理鹽水與紅細(xì)胞充分混勻；離心參數(shù)設(shè)定：2000r/min，5～10min/次；紅細(xì)胞洗滌時吸除血漿和白細(xì)胞等雜質(zhì)；紅細(xì)胞洗滌應(yīng)3～5次；最后配置1%紅細(xì)胞懸液為10~20mL；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累計扣完6分為止。三血凝試驗（20分）器材使用4微量移液器使用規(guī)范，2分；吸頭更換操作符合規(guī)范，2分。參考評分要點：更換吸頭時操作規(guī)范，不可用力撞擊吸頭盒；微量移液器量程設(shè)置準(zhǔn)確；微量移液器吸取和打出液體操作規(guī)范，移液器垂直加樣為規(guī)范，傾斜角度不要過大；微量移液器用完后應(yīng)置于移液器架，不得隨意放于桌面；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完4分為止。操作程序6吸取試劑更換吸頭，2分；加樣順序正確，1分；倍比稀釋操作規(guī)范，2分；振蕩及感作時間得當(dāng)，1分。參考評分要點：稀釋液加樣完成后，在吸取待檢樣品前需更換吸頭；1%紅細(xì)胞懸液加之前應(yīng)充分混勻；邊滴加邊震蕩混勻，按由病毒低濃度往高濃度的方向加樣；倍比稀釋時不產(chǎn)生氣泡；倍比稀釋時混勻充分，移液正確；加樣時，吸頭與液面、孔壁不接觸；試劑不滴加到孔外；可以使用振蕩器，以液體不振出來為準(zhǔn)；固、液廢棄物分開放置。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完6分為止。結(jié)果判定準(zhǔn)確10能依據(jù)生理鹽水對照孔的RBC呈明顯鈕扣狀沉到孔底時判定結(jié)果，4分；對照孔結(jié)果正確時，能確定完全凝集的新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原最高稀釋倍數(shù)為病毒的血凝價，4分；能把完全凝集的病毒的最高稀釋倍數(shù)作為1個血凝單位，2分。參考評分要點：判定血凝價時機不正確扣4分（必須是完全凝集）；結(jié)果判定不正確扣4分；對照孔凝集扣4分；HA重復(fù)3排，少做1排扣1分；未作記錄扣2分；讀數(shù)時，結(jié)果有跳孔現(xiàn)象的，每跳1孔扣2分。*以上細(xì)節(jié)累計扣完10分為止。四配制4個血凝單位病毒溶液（10分）器材選擇4器材選擇合理，2分；使用規(guī)范、熟練，2分。參考評分要點：加吸頭時操作規(guī)范，不可用力撞擊吸頭盒；選擇合適量程微量移液器移取樣品；微量移液器吸取和打出液體操作規(guī)范；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完4分為止。配制方法4稀釋倍數(shù)計算正確，2分；稀釋液加入得當(dāng)、操作規(guī)范，2分。參考評分要點：計算錯誤扣2分微量移液器選擇適宜，設(shè)置準(zhǔn)確，未規(guī)范操作酌情扣分。配制量適宜2配制量適宜，2分。參考評分要點：配制量10~20mL為適量，每超過10mL扣1分，最多扣2分。五血凝抑制試驗（20分）器材使用4器材使用規(guī)范、熟練，4分。參考評分要點：加吸頭時操作規(guī)范，不可用力撞擊吸頭盒；微量移液器量程設(shè)置準(zhǔn)確；微量移液器吸取和打出液體操作規(guī)范，移液器垂直加樣為規(guī)范，傾斜角度不要過大；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完4分為止。操作程序6加樣順序正確，2分；倍比稀釋操作規(guī)范，2分；感作時間得當(dāng)，1分；吸頭更換正確，1分。參考評分要點：參照國標(biāo)，對照設(shè)立完整，每缺一個對照扣1分；稀釋液加樣完成后，在吸取待檢樣品前需更換吸頭；倍比稀釋時不產(chǎn)生氣泡；加樣時，吸頭與液面不接觸；試劑不滴加到孔外；加1%紅細(xì)胞時邊滴加邊振蕩混勻，加樣順序正確；感作時間正確；固、液廢棄物分開放置。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完6分為止。結(jié)果判定準(zhǔn)確10能在對照孔紅細(xì)胞呈明顯鈕扣狀沉淀到孔底時判定結(jié)果，2分；在對照孔結(jié)果正確情況下，能從背側(cè)觀察RBC有無呈淚珠樣流淌，2分；能把完全不凝集（RBC完全流下）被檢血清的最高稀釋倍數(shù)作為該血清的HI滴度，3分；陰性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對照的HI滴度不大于2log2，陽性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對照的HI滴度與已知滴度相差在1個稀釋度范圍內(nèi)，3分。參考評分要點：陰性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對照的HI滴度大于2log2或/和陽性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對照的HI滴度與已知滴度大于±1扣3分；結(jié)果有跳孔現(xiàn)象的，每跳1孔扣2分。判斷血清HI滴度，做好記錄；判讀不準(zhǔn)扣1分，未作記錄扣2分；*以上細(xì)節(jié)累計扣完10分為止。六抗體滴度報告（24分）抗體滴度報告2抗體滴度報告方式正確，1分；試驗記錄清晰，1分。參考評分要點：抗體滴度用log2表示；試驗記錄和報告書寫整潔，不亂涂改。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范書寫，酌情扣分，累加扣完2分為止。結(jié)果誤差20每個樣本1分，共20個樣本參考評分要點：結(jié)果誤差±1，得1分；誤差超過±1，0分。場地整潔度2場地整潔，2分。參考評分要點：移液槍未調(diào)到最大量程；其他儀器和器皿未復(fù)位；采血器、殘留紅細(xì)胞泥離心管等未放入固廢缸等。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，每錯1項扣1分，累加扣完2分為止。七結(jié)果分析（5分）5總分100十、獎項設(shè)定本賽項設(shè)一、二、三等獎。以賽項實際參賽隊總數(shù)為基數(shù)，一、二、三等獎獲獎比例分別為10%、20%、30%（小數(shù)點后四舍五入）。獲得獎項的參賽隊，授予榮譽證書。獲得一等獎的參賽隊指導(dǎo)教師由大賽組委會頒發(fā)優(yōu)秀指導(dǎo)教師證書。十一、申訴與仲裁1.各參賽隊對不符合賽項規(guī)程規(guī)定的儀器、設(shè)備、工裝、材料、物件、計算機軟硬件、競賽使用工具、用品，競賽執(zhí)裁、賽場管理、競賽成績，以及工作人員的不規(guī)范行為等，可向賽項仲裁組提出申訴，申訴主體為參賽隊領(lǐng)隊。2.申訴啟動時，參賽隊向賽項仲裁組遞交領(lǐng)隊親筆簽字同意的書面報告。書面報告應(yīng)對申訴事件的現(xiàn)象、發(fā)生時間、涉及人員、申訴依據(jù)等進行充分、實事求是的敘述。非書面申訴不