第5章-分子生物學基本研究方法4-研究DNA-蛋白質互作的方法_第1頁
第5章-分子生物學基本研究方法4-研究DNA-蛋白質互作的方法_第2頁
第5章-分子生物學基本研究方法4-研究DNA-蛋白質互作的方法_第3頁
第5章-分子生物學基本研究方法4-研究DNA-蛋白質互作的方法_第4頁
第5章-分子生物學基本研究方法4-研究DNA-蛋白質互作的方法_第5頁
已閱讀5頁,還剩8頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

第五章分子生物學基本技術

——研究DNA與蛋白質相互作用的方法又叫做DNA遷移率變動試驗,是80年代初出現(xiàn)的用于在體外研究DNA與蛋白質相互作用的一種特殊的凝膠電泳技術。簡單、快捷,是當前被選作分離純化特定DNA結合蛋白質的一種典型的實驗方法。1凝膠阻滯試驗原理凝膠阻滯試驗用途特殊細胞提取物中,是否存在可同放射性標記的探針DNA結合的蛋白質分子(比如。。。。。)研究發(fā)生此種結合作用之精確的DNA序列的特異性:其辦法是在DNA一蛋白質結合反應體系中,加入超量的非標記競爭DNA。。。。。。檢測突變對DNA與轉錄因子結合作用的影響2DNasel足跡試驗足跡試驗的優(yōu)點可以形象地展示出一種特殊的蛋白質因子同特定DNA片段之間的結合區(qū)域。使用較大的DNA片段,通過足跡試驗便可確定其中不同的核苷酸序列與不同蛋白質因子之間的結合位點的分布狀況??梢约尤敕菢擞浉偁嶥NA,來消除特定的足跡,據(jù)此確定其核酸序列的特異性。DNasel足跡試驗發(fā)展硫酸二甲脂(DMS)足跡試驗:DMS能夠促進DNA中裸露的G甲基化,而六氫吡啶又會對甲基化的G殘基作特異的化學切割。假如有一種蛋白質同DNA分子中的某一區(qū)段結合,在它的保護下,區(qū)域內(nèi)的G免受六氫吡啶的切割,于是在DNA片段的序列梯中,便不存在具這些G殘基末端的DNA片段,故出現(xiàn)個空白區(qū)域,此即通常所說的足跡。由于DMS足跡試驗中被切割的是G殘基,因此可用來鑒定同轉錄因子蛋白質結合的DNA區(qū)段中的特異堿基。3甲基化干擾試驗檢測靶DNA中特異G殘基的優(yōu)先甲基化對爾后的蛋白質結合作用究竟會有什么效應,從而更加詳細地揭示DNA與蛋白質之間相互作用的模式。甲基化干擾試驗的具體操作先用硫酸二甲脂(DMS)處理靶DNA,控制反應條件,使平均每條DNA分子只有一個G甲基化,而后將這些局部甲基化的DNA群體同含有DNA結合蛋白的適當?shù)募毎崛∥镆坏罍赜?,并作凝膠阻滯試驗。經(jīng)電泳分離之后,從凝膠中切取阻滯條帶和非阻滯條帶,并用六氫吡啶處理之。。。。4體內(nèi)足跡試驗用有限數(shù)量的化學試劑DMS處理完整的游離細胞,并使其滲透到細胞內(nèi)的濃度恰好導致天然染色質DNA中的G殘基發(fā)生甲多化。而后取DNA,加入六氫吡啶作體外消化。結果:缺少了G殘基沒有被切割的相應條帶(圖)。思考題1、研究DNA與蛋白質相互作用的方法有哪些?

2、凝膠阻滯試驗原理是什么?

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論