免疫組織化學(xué)傅琦博免疫組織化學(xué)

集團(tuán)文件發(fā)布號(hào)：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-19882）集團(tuán)文件發(fā)布號(hào)：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-19882）免疫組織化學(xué)傅琦博免疫組織化學(xué)免疫組織化學(xué)傅琦博引言酶工程是生物工程的重要組成部分，近幾十年來，隨著研究手段的更新和技術(shù)水平的提高，產(chǎn)生了一門以研究酶在細(xì)胞內(nèi)的存在及其動(dòng)態(tài)，以闡明組織細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能為主要內(nèi)容的科學(xué)——酶組織化學(xué)。酶組織化學(xué)是利用酶化學(xué)反應(yīng)的產(chǎn)物可在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下被識(shí)別的特性，借以從形態(tài)學(xué)角度判定酶在組織細(xì)胞內(nèi)的存在的部位的一門技術(shù)，其基礎(chǔ)是組織化學(xué)。它具有將形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和生理學(xué)聯(lián)系起來的特點(diǎn)，在生物學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)生物領(lǐng)域內(nèi)日益發(fā)揮著重要的作用。研究組織細(xì)胞內(nèi)特定酶分布的酶組織化學(xué)方法大致分為：（1）利用酶的活性反映的方法；（2）利用抗原抗體反應(yīng)（免疫應(yīng)答）證實(shí)酶的存在部位的方法。后者也被稱之為免疫組織化學(xué)。免疫組織化學(xué)概述免疫組織化學(xué)簡(jiǎn)稱免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理，對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些化學(xué)成分，進(jìn)行原位的定性、定位或定量的研究。這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)。免疫組化是利用抗體與抗原的結(jié)合具有高度特異性的特點(diǎn)，采用一直的抗體檢測(cè)組織或細(xì)胞的抗原物質(zhì)，以期確定組織或細(xì)胞是否存在未知抗原，并進(jìn)行定性、定位或定量的研究?？乖c抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物是無(wú)色的，故必須借助組織化學(xué)方法，將抗體抗原反應(yīng)部位顯示出來。它的主要研究方法是免疫組織染色法（簡(jiǎn)稱免疫染色法），食用該方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)，必須具備兩個(gè)條件：①作為檢測(cè)對(duì)象的物質(zhì)須具有抗原性，能制作出與之相應(yīng)的特異、高效價(jià)的抗體；②在免疫反應(yīng)發(fā)生之前，目標(biāo)物質(zhì)要保持抗原性，同時(shí)還要保持在組織細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定狀態(tài)。要檢測(cè)抗原，就要用與之相應(yīng)的抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)，同時(shí)要用可視的標(biāo)記標(biāo)出抗原或抗體，采用這種方法的免疫染色法稱為標(biāo)識(shí)抗體法或標(biāo)識(shí)抗原法，常用的表示抗體法有直接法、間接法、補(bǔ)體結(jié)合法以及多重染色法等。直接法是標(biāo)識(shí)要檢出的抗原的抗體，然后進(jìn)行反應(yīng)的方法，其特異性高，但檢出的敏感度不如間接法，標(biāo)識(shí)抗體的食用范圍手局限。間接法是以未標(biāo)識(shí)的第一抗體進(jìn)行反應(yīng)，接著標(biāo)識(shí)以第一抗體為抗原所制作的抗體（即第二抗體）進(jìn)行重疊反應(yīng)，間接的證明抗原，這種方法的缺點(diǎn)是容易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，但敏感度較高，標(biāo)識(shí)抗體的用途也廣；補(bǔ)體結(jié)合法是將間接法中的第二抗體作為標(biāo)識(shí)抗補(bǔ)體抗體食用；多重染色法則是在同一標(biāo)本上檢出多種抗原物質(zhì)的方法，可以用反復(fù)進(jìn)行的重復(fù)標(biāo)記的直接法，也可以用酶標(biāo)記的重復(fù)進(jìn)行的間接法。此外，還有后標(biāo)識(shí)抗體的免疫染色法，此法先采用未標(biāo)識(shí)的抗體進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，通過免疫化學(xué)反應(yīng)或其他化學(xué)反應(yīng)，用適當(dāng)?shù)臉?biāo)記物質(zhì)來識(shí)別已與組織細(xì)胞內(nèi)抗原發(fā)生結(jié)合的抗體。免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展免疫組織化學(xué)技術(shù)是形態(tài)學(xué)研究領(lǐng)域一門新興方法學(xué)。自它問世以來發(fā)展迅猛,用“日新月異”一詞形容它毫不過分。酶標(biāo)免疫組織化學(xué)技術(shù)是由Nakane等人于60年代末期創(chuàng)立的最早的免疫酶組織化學(xué)技術(shù),之后Sternberger等人于70年代初期便在此基礎(chǔ)上建立了非標(biāo)記抗體酶法(又稱間接法)和PAP法(過氧化酶抗過氧化酶法)。80年代初期美籍華人Hsu又建立了卵白素生物素復(fù)合物法(ABC法),自此之后,免疫金銀染色法、免疫電鏡等技術(shù)相繼問世。80年代末期人們又發(fā)現(xiàn)鏈霉菌抗生物素蛋白(或譯成鏈霉菌親合素,Streptavidin)與生物素結(jié)合力極強(qiáng),遂用它標(biāo)記過氧化酶建立起了SP法,或稱LSAB法(鏈霉菌親合素生物素過氧化酶法)。由于鏈霉菌親合素不與人組織中的內(nèi)源性生物素起非特異性結(jié)合反應(yīng),故背景染色更加清晰,且敏感性比ABC法高4～8倍,比PAP法高8～16倍。進(jìn)入90年代,免疫組織化學(xué)又向基因水平深入發(fā)展,與分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合日益緊密。如原位雜交后信號(hào)的放大與顯示便是采用了免疫組織化學(xué)顯色技術(shù),因而又可稱之為原位雜交免疫組織化學(xué)技術(shù)。而圖象分析、流式細(xì)胞儀的運(yùn)用，是免疫細(xì)胞化學(xué)定量分析技術(shù)提高到更精確的水平。現(xiàn)就該技術(shù)的發(fā)展及其應(yīng)用作一概述。1利用免疫熒光標(biāo)記技術(shù)可以分辨出標(biāo)記抗原抗體所在的位置及其性質(zhì),并可利用熒光定量技術(shù)計(jì)算抗原(或抗體)的含量,以達(dá)到對(duì)定性、定位、定量測(cè)定的目的[2]。如黃祥瑞等人(1999)利用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)研究西藏環(huán)狀病毒細(xì)胞生物學(xué)特性和敏感細(xì)胞范圍(CPE),成功地觀察到該病毒的細(xì)胞病變效應(yīng)特異熒光發(fā)生的部位、細(xì)胞數(shù)量和病毒的形態(tài)發(fā)生。辛德畢斯熱是由辛德畢斯病毒SindbisVirus(SiN)引起的人獸共患蟲媒病毒病,1974年南非發(fā)生辛德畢斯熱大流行。1991年梁國(guó)棟等通過免疫熒光技術(shù)首次從新疆分離到SiN病毒。1999年陳振光等利用間接免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)到福建寧化林區(qū)人群、野兔、狐貍、狗存在SiN感染,抗體陽(yáng)性率分別為12.86%、5.88%、14.29%、6.45%。因而判定福建寧化林區(qū)可能存在辛德畢斯熱自然疫源地。2抗生物素—生物素—過氧化酶復(fù)合物技術(shù)(AvidinBiotin2PeroxidaseComplextechnique,簡(jiǎn)稱ABC技術(shù))是Hsu等于1981年創(chuàng)立,其特點(diǎn)是利用抗生物素分別連接生物素標(biāo)記的第二抗體和生物素標(biāo)記的酶。該方法簡(jiǎn)便、節(jié)約時(shí)間,敏感性、特異性高,背景染色淡。由于生物素與抗生物素具有與多種示蹤物結(jié)合的能力,可用于雙重或多重免疫染色。如李月白等采用ABC法研究發(fā)現(xiàn)絨毛層滋養(yǎng)細(xì)胞、絨毛中軸的基質(zhì)細(xì)胞、毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞、毛細(xì)血管腔內(nèi)的淋巴細(xì)胞以及血島細(xì)胞均表現(xiàn)為P物質(zhì)(SP)受體免疫反應(yīng)陽(yáng)性,陽(yáng)性物質(zhì)分布于胞質(zhì)和胞膜上,胞核呈陰性反應(yīng)。該研究為其對(duì)胎盤及胚胎發(fā)育的作用提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。張雅萍在ABC法基礎(chǔ)之上改進(jìn),建立了生物素-抗生物素-過氧化物酶復(fù)合物(sABC)法,探討了IL28在甲狀腺腫瘤組織中的表達(dá)及意義。3葡萄球菌蛋白A(StaphylococalProteinA,SPA或SP)具有免疫特性,發(fā)展成為免疫學(xué)上一種極為有用的工具。其優(yōu)點(diǎn)是不受種屬特異性的限制,染色時(shí)間短、靈敏性高和背景染色淡等。故在目前各種免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中得到廣泛的應(yīng)用。如肖華亮等[9]用此法檢測(cè)、探討骨肉瘤MDM2和p53蛋白定位、表達(dá)水平及相互關(guān)系和其對(duì)骨肉瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的影響。應(yīng)用SPA與膠體金或鐵蛋白相結(jié)合,可在電鏡水平檢查抗原抗體反應(yīng)的定位。自Pomano和Romano(1977)首次報(bào)告用蛋白A-膠體金技術(shù)(ProteinA2Goldtechnique,PGA技術(shù))標(biāo)記細(xì)胞表面抗原、包括淋巴細(xì)胞、血小板、大鼠腎臟細(xì)胞及感染的病毒細(xì)胞獲得成功以來,SP法已得到愈來愈廣泛的應(yīng)用,并發(fā)展成為一種較為理想的免疫電鏡技術(shù)。4堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶方法(簡(jiǎn)稱APAAP法)克服了辣根過氧化酶(HRP)的不足。沈巖等用APAAP法結(jié)合單克隆抗體(mAb)KL21(廣譜抗人細(xì)胞角蛋白,德國(guó))比較分析不同腫瘤細(xì)胞間同種細(xì)胞凝集力、靶器官定植力、細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡現(xiàn)象、癌基因及腫瘤相關(guān)抗原表達(dá)等生物學(xué)特征。進(jìn)一步明確腫瘤細(xì)胞相關(guān)生物學(xué)特性與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力間的關(guān)系。而鏈霉素親和素(Streptavidin,SA)具有高度的親和力,利用生物素結(jié)合的二抗與酶標(biāo)記的SA親和(LSAB法)是免疫組化中非常有用的方法。沈靖南等采用該法,檢測(cè)84例骨肉瘤中p2糖蛋白(p2gp)表達(dá),半定量化計(jì)量p2gp的著色強(qiáng)度及陽(yáng)性率,通過多因素相關(guān)分析和生存分析,探討骨肉瘤預(yù)后的相關(guān)因素和高危因素,研究骨肉瘤多藥耐藥性的表達(dá)與預(yù)后,并證實(shí)p2gp介導(dǎo)骨肉瘤的MDR現(xiàn)象,明確p2gp表達(dá)與肺轉(zhuǎn)移的關(guān)系。5凝集素((Phytoagglutin,PHA)作為一種探針研究細(xì)胞膜上特定的糖基,具有多價(jià)結(jié)合能力。直接將標(biāo)記物標(biāo)記在凝集素上,再與切片中的相應(yīng)糖蛋白或糖脂相結(jié)合,該法簡(jiǎn)便,但靈敏性不夠高。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)將凝集素直接與切片中的相應(yīng)糖基結(jié)合,可提高敏感性高5～10倍或更多一些,有人認(rèn)為若將凝集素與特定的糖基作成三明治樣的糖2凝集素2糖的結(jié)合物,特異性、靈敏度將會(huì)更高。而且能與熒光素、生物素、酶、膠體金和鐵蛋白等示蹤物結(jié)合,從而在光鏡與或電鏡水平顯示其結(jié)合部位。Newman等(1979)以熒光素標(biāo)記凝集素PHA實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)在大鼠乳腺上皮的不同分化時(shí)期顯示不同的熒光強(qiáng)度。Kivela和Farkkanen(1987)用凝集素作為細(xì)胞特殊類型的標(biāo)記實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在人視網(wǎng)膜上PHA標(biāo)記視錐細(xì)胞而不標(biāo)記視桿細(xì)胞。在乳腺、乳腺上皮細(xì)胞呈PHA陽(yáng)性反應(yīng),而肌上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞呈PHA陰性反應(yīng)。他以多種凝集素對(duì)小鼠、大鼠和兔的腎組織切片進(jìn)行染色結(jié)果表明,刀豆素A和蓖麻素存在于腎臟的各部,PHA和雙花扁豆凝集素(DBA)主要分布于遠(yuǎn)曲小管和集合小管上皮細(xì)胞,荊豆凝集素(UEA)主要分布在血管內(nèi)皮細(xì)胞,而麥芽素分布在腎小球。Streit和Kreutzberg(1987)發(fā)現(xiàn)GriffoniaSimplicifolia凝集素能特異性標(biāo)記面神經(jīng)節(jié)內(nèi)的小膠質(zhì)細(xì)胞,而其它類型的膠質(zhì)細(xì)胞如星狀膠質(zhì)細(xì)胞(Astro2cyte)等都顯示陰性反應(yīng)。如果在切斷面神經(jīng)后,增殖的小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)GriffoniaSimplicifolia凝集素的反應(yīng)加強(qiáng)。大量研究發(fā)現(xiàn),凝集素可作為腫瘤組織源性的標(biāo)記、腫瘤特異性診斷的標(biāo)志、腫瘤惡性的標(biāo)記和不同腫瘤的分化標(biāo)記。如張華忠等(1987)報(bào)道115例胃癌標(biāo)記PHA陽(yáng)性率高達(dá)90.43%,而正常胃粘膜基本是陰性,故認(rèn)為PHA是胃癌的診斷性標(biāo)志。BSA對(duì)乳腺惡性腫瘤陽(yáng)性率達(dá)79%,而對(duì)良性病變均呈陰性反應(yīng),提示BSA可能為乳腺惡性腫瘤的相關(guān)標(biāo)志。HRP本身雖含有甘露糖,能與刀豆凝集素A、扁豆凝集素和豌豆凝集素結(jié)合。但對(duì)其它的凝集素,需要將糖基化(Glycosylation)過氧化物酶結(jié)合到該凝集素上,且糖基化過氧化物酶品種尚有限,故目前本法在應(yīng)用還有一定困難。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)尚在繼續(xù)改進(jìn)和完善中,除目前國(guó)內(nèi)外已廣泛應(yīng)用的免疫金技術(shù)和免疫金銀技術(shù)外,新的免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)不斷出現(xiàn)。1984年國(guó)外學(xué)者首次將CRNA探針應(yīng)用于原位雜交,核酸探針為單鏈的RNA分子,產(chǎn)生自具有質(zhì)粒逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)的cDNA克隆。在1987年Wolf等建議插入確定長(zhǎng)度的寡核苷酸至載體內(nèi)產(chǎn)生cRNA分子,這種cRNA分子稱為“寡核苷酸核酸探針”(oligoribo－probes),現(xiàn)在已被廣泛的用于原位雜交實(shí)驗(yàn)。國(guó)內(nèi)的楊春花等采用免疫組化和cDNA2mRNA原位分子雜交技術(shù)分別檢測(cè)了24例RA,18例骨關(guān)節(jié)炎(OA)和6例正常滑膜組織中uPA,uPAR蛋白和mRNA的分布及表達(dá)情況?？蒲泄ぷ髡吒鶕?jù)免疫組織化學(xué)中材料的特性把同位素、生物素、光敏生物素、酶促生物素、地高辛標(biāo)記cRNA上成功的制成探針。尤其地高辛與放射性標(biāo)記相比,標(biāo)記探針具有非放射性探針的優(yōu)點(diǎn),對(duì)人體無(wú)害,不受半衰期限制,探針可長(zhǎng)期保存;與生物素標(biāo)記探針相比,不受組織、細(xì)胞中內(nèi)源性生物素的干擾,敏感性、分辨率較高,反應(yīng)產(chǎn)物顏色鮮艷,反差好,背景染色低,制備探針可較長(zhǎng)期保存,對(duì)人體無(wú)害等優(yōu)點(diǎn),已日益顯示出它的優(yōu)越性和廣泛的應(yīng)用前景。并且進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)它能根據(jù)需要人工用DNA合成儀合成,其長(zhǎng)度及分子大小比較一致,可控地高辛同位素寡核苷酸探針。另外,放射性同位素、熒光素、生物素也能成功標(biāo)記寡核苷酸作為探針,成功地運(yùn)用于培養(yǎng)細(xì)胞、組織切片和染色體鋪片等的原位雜交中。雖然有些人認(rèn)為其敏感度不如來自質(zhì)粒擴(kuò)增的cRNA或DNA探針,但由于探針制備簡(jiǎn)便再加之于近年非放射性標(biāo)記的成功,寡核苷酸探針在生物基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及臨床學(xué)科領(lǐng)域中得到較為廣泛的應(yīng)用。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)與流式細(xì)胞術(shù)(FCM)結(jié)合進(jìn)行多參數(shù)FCM分析血液淋巴細(xì)胞免疫表型(亞群)方法學(xué)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。當(dāng)血液采集后1h和6h測(cè)定淋巴細(xì)胞免疫表型結(jié)果差異無(wú)顯著。如黃勇華等采用單標(biāo)或雙標(biāo)直接免疫熒光標(biāo)記法標(biāo)記20種細(xì)胞表面分化抗原,經(jīng)流式細(xì)胞儀測(cè)定。后進(jìn)行分析185例白血病患者骨髓或外周血白血病細(xì)胞的免疫分型及CD117的表達(dá)細(xì)胞表面分化抗原(CD)117在各型白血病中的表達(dá)及其意義。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)先進(jìn)儀器和方法結(jié)合已呈現(xiàn)新的趨勢(shì)，如用熒光顯微分光光度計(jì)和圖像分析儀等定量檢測(cè),將結(jié)果客觀打印、報(bào)告,這更適合于臨床診斷和科學(xué)研究。如楊希謙等采用非放射碘標(biāo)記人直腸癌相關(guān)抗原單克隆抗體(McAb)技術(shù)與生物導(dǎo)向CT顯像進(jìn)行腫瘤的免疫組化鑒定與免疫顯像研究。免疫組織化學(xué)技術(shù)在臨床病理診斷中的重要作用100年前發(fā)明的用光學(xué)顯微鏡觀察HE染色切片法仍然是當(dāng)前各級(jí)醫(yī)院病理科中的基本方法。該方法的局限性在于僅能從細(xì)胞水平反映疾病性質(zhì),診斷中觀察者的主觀推測(cè)成份高,常常是同一疾病出現(xiàn)分歧頗大的數(shù)個(gè)不同診斷,多年來成為臨床病理診斷中的突出問題。而免疫組織化學(xué)方法是通過抗原抗體反應(yīng)客觀地反映疾病性質(zhì),在觀察HE切片基礎(chǔ)上,再結(jié)合免疫組織化學(xué)染色結(jié)果可對(duì)某一疾病做出較為客觀公正的評(píng)價(jià),從而可避免主觀因素的影響。自免疫組織化學(xué)技術(shù)應(yīng)用于臨床病理診斷以來,在以下幾類疾病的鑒別診斷中發(fā)揮著重要作用。1高度未分化腫瘤細(xì)胞起源的鑒別:發(fā)生在胃腸道的這類腫瘤應(yīng)首選CEA與Vimentin兩種抗體鑒別是上皮源性抑或是間葉源性腫瘤。因?yàn)镃EA在消化道上皮源性腫瘤的陽(yáng)性率高,但在鱗癌時(shí)陽(yáng)性率低;而消化道以外部位發(fā)生者,上皮性標(biāo)記物宜選用EMA,該抗體在90%以上上皮源性腫瘤呈陽(yáng)性表達(dá)。2小圓細(xì)胞腫瘤的鑒別:小圓細(xì)胞腫瘤包括小細(xì)胞未分化癌、惡性淋巴瘤、小細(xì)胞軟組織肉瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤以及小細(xì)胞黑色素瘤。這類腫瘤鑒別診斷時(shí)應(yīng)使用EMA或CEA,LCA,Vimentin,NSE,S100和HMB45抗體。3大細(xì)胞型腫瘤鑒別:這類腫瘤可以是大細(xì)胞未分化癌、低分化肉瘤、大細(xì)胞性黑色素瘤和大細(xì)胞性惡性淋巴瘤。在鑒別診斷時(shí)應(yīng)該選用EMA或CEA,Vimentin,S100和LCA抗體。4梭形或多形性軟組織肉瘤的鑒別:此類腫瘤包括平滑肌肉瘤、滑膜肉瘤、梭形細(xì)胞血管肉瘤、梭形細(xì)胞黑色素瘤、多形性橫紋肌肉瘤、多形性惡性纖維組織細(xì)胞瘤以及多形性脂肪肉瘤。以下抗體可用于鑒別診斷:Actin,EMA,FⅧAg,S100,MB45,Myoglobin,Desmin,α12AT以及α12ACT。5惡性淋巴瘤分型:在免疫組織化學(xué)研究領(lǐng)域，當(dāng)前對(duì)惡性淋巴瘤的免疫組織化學(xué)研究最為活躍與細(xì)致。截止目前為止,已有下列亞型可以通過免疫組織化學(xué)染色確立。它們是:B細(xì)胞淋巴瘤,L26陽(yáng)性,LN2陽(yáng)性;T細(xì)胞淋巴瘤,MT1陽(yáng)性,UCHL1陽(yáng)性;NK細(xì)胞淋巴瘤C123C陽(yáng)性;樹突網(wǎng)織細(xì)胞淋巴瘤,Ber2MAC2DRC陽(yáng)性;指狀突網(wǎng)織細(xì)胞淋巴瘤,S100陽(yáng)性;真性組織細(xì)胞淋巴瘤,Mac387陽(yáng)性,Lysozyme陽(yáng)性,α12ACT陽(yáng)性;何杰金病R2S細(xì)胞,LeuM1陽(yáng)性,Ber2H2陽(yáng)性;大細(xì)胞間變型淋巴瘤Ber2H2(或稱Ki21)陽(yáng)性。6神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的確立:90%以上的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤NSE陽(yáng)性。由于NSE與其它腫瘤有交叉反應(yīng),故必要時(shí)可加染ChromograninA或Synaptophysin抗體。當(dāng)需要弄清神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤有否內(nèi)分泌功能時(shí),再加染多肽類激素抗體。7腫瘤預(yù)后的推測(cè):最早用于推測(cè)腫瘤預(yù)后的抗體有抗雌激素受體ER及抗孕激素受體PR,二者陽(yáng)性時(shí)預(yù)后較好。新近又發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)移抑制基因產(chǎn)物nm23呈高表達(dá)時(shí)預(yù)后較好。而下列幾種抗體呈高表達(dá)時(shí)均提示預(yù)后差：C2erbB22,C2myc,P53,EGFR,PCNA,Ki267,BrdU,P120,P105。8感染性疾病病原體的檢測(cè):其中HBsAg及HBcAg抗體常用于肝病研究與診斷。而尖銳濕疣及宮頸癌時(shí)常常可以檢測(cè)到乳頭狀瘤病毒HPV。鼻咽癌、何杰金病時(shí)EB病毒抗體多呈陽(yáng)性。免疫組織化學(xué)技術(shù)由于它自身獨(dú)有的特點(diǎn),使得廣大科研作者在組織細(xì)胞定位、定性、定量研究中經(jīng)常選取的技術(shù),因此隨著科研工具的更新,科研工作者對(duì)免疫組織化學(xué)更廣泛深入的理解、并與其他研究手段深入結(jié)合,優(yōu)化技術(shù)路線地設(shè)計(jì),而推動(dòng)免疫組織化學(xué)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展。如范少地等運(yùn)用GAP243cDNA探針(生長(zhǎng)相關(guān)蛋白243(Growthassociatedpro2tein43,GAP243)原位雜交技術(shù)來觀察這一變化過程中GAP243mRNA表達(dá)水平,陽(yáng)性細(xì)胞定位及分布的變化。李月白等應(yīng)用免疫組化LSAB法和原位雜交方法,觀察了骨肉瘤患者p21waf1cip1表達(dá)水平與臨床預(yù)后之間的關(guān)系。而倪燦榮等應(yīng)用他們實(shí)驗(yàn)室制備的催化信號(hào)放大(Catalyzedsignalamplifi2cation,CSA)試劑應(yīng)用于IHC檢測(cè)50例10種不同類型的腫瘤切片中40種不同的抗原和ISH檢測(cè)6種不同的RNA成分,并與常規(guī)方法進(jìn)行敏感性比較:CSA2IHC法較傳統(tǒng)的PAP法、ABC法和LSAB法敏感500～1000倍,較EnVision法敏感20～100倍。參考文獻(xiàn)[1]巴德年當(dāng)代免疫學(xué)技術(shù)與應(yīng)用北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1999.1-11.[2]沈關(guān)心,周汝麟現(xiàn)代免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)湖北科學(xué)出版社,1998.1-50.[3]黃翔瑞,陳娟,李曉萸等西藏環(huán)狀病毒細(xì)胞生物學(xué)特性研究軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊,2000,24(3):173-176.[4]PritchardLI,GouldAR.Phylogeneticcomparisonoftheserotype2specificVP2proteinofbluetongueandrelatedorbiviruses[J].VirusRes,1995,39(2-3):207-210.[5]梁國(guó)棟,李其平,何英等我國(guó)首次分離到辛德畢斯病毒病毒學(xué)報(bào)1993,5(1):55-57[6]陳振光,陳娟,黃翔瑞等福建寧化辛德畢斯熱血清學(xué)調(diào)查中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志,2000,11(2):137-139.[7]李月白,秦國(guó)斌,王義生等人骨肉瘤中p21waf1/cip1基因的表達(dá)中華骨科雜志,2000,20(1):30-33.[8]張雅萍,姬秋和,張南雁等甲狀腺腫瘤組織中IL28的表達(dá)及意義第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,21(6):125-128.[9]肖華亮,陳俐,王東MDM2蛋白和P53蛋白在骨肉瘤組織中的表達(dá)及意義第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,22(4):357-359.[10]沈巖,VogelIKalthoffH,于吉人,等.不同轉(zhuǎn)移能力腫瘤細(xì)胞間轉(zhuǎn)移相關(guān)特征的比較研究[J].中華腫瘤雜志,2000,22(3):201-204.[11]沈靖南,王晉,韓士英等骨肉瘤p2糖蛋白表達(dá)水平與肺轉(zhuǎn)移中華骨科雜志,2000,20(1):21-23.[12]蔡文琴,王伯倪實(shí)用免疫細(xì)胞化學(xué)與核酸分子雜交技術(shù)成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社,1994.1-20.[13]NewmanRA.Bindingofpeanutlectintobreastepithe2lium,humancarcinomaandculturedratmammarystemcells:Useofthelectinasamarberofmammarydifferen2tiation[J].JNatlCancerInst,1979,63:1339-1342.[14]KiverlaTandTarkanenA.Alectincytochemicalstudyofglycoconjugatesin