生物學(xué)基本技能 課件 ⅩⅢ 離心操作

生物學(xué)基本技能基本技能

ⅩⅢ離心操作目錄Contents實(shí)驗(yàn)?zāi)康某Ｓ秒x心機(jī)類(lèi)型常用離心管類(lèi)型離心原理和技術(shù)參數(shù)離心機(jī)操作技術(shù)離心機(jī)的日常維護(hù)、常見(jiàn)故障及排除實(shí)驗(yàn)操作實(shí)訓(xùn)1.了解離心機(jī)的類(lèi)型、結(jié)構(gòu)原理及使用注意事項(xiàng)。2.掌握各種離心機(jī)的操作技術(shù)和技能。3.掌握離心機(jī)的一般維護(hù)和維修技能。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩⒊Ｓ秒x心機(jī)類(lèi)型分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)具體類(lèi)型特點(diǎn)按離心機(jī)的轉(zhuǎn)速低速離心機(jī)一般離心最大轉(zhuǎn)速為3000～10000rpm，用于收集易沉降的大顆粒物質(zhì)，如紅細(xì)胞、酵母菌等，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、免疫學(xué)等領(lǐng)域，是實(shí)驗(yàn)室中離心沉淀的常用儀器高速離心機(jī)一般離心最大轉(zhuǎn)速為10000～30000rpm，通常用于微生物菌體、細(xì)胞碎片、大細(xì)胞器、免疫沉淀物等的分離純化，廣泛應(yīng)用于生物與化學(xué)等科研、教學(xué)和生產(chǎn)部門(mén)超速離心機(jī)一般離心最大轉(zhuǎn)速為30000～80000rpm，能使在電子顯微鏡下觀察到的亞細(xì)胞分離分級(jí)，還可分離病毒、核酸、蛋白質(zhì)和多糖等按離心機(jī)的結(jié)構(gòu)臺(tái)式離心機(jī)又稱(chēng)為臥式離心機(jī)，主要用于懸浮液的固液分離，或?qū)⑷闈嵋褐袃煞N密度不同又互不相溶的液體分開(kāi)落地式離心機(jī)又稱(chēng)為立式離心機(jī)，具有體積小、容量大等特點(diǎn)，其性能穩(wěn)定、速度可調(diào)并能自動(dòng)調(diào)節(jié)平衡，使用效率高，適用性廣按離心機(jī)的分離方式過(guò)濾離心機(jī)工作原理主要是通過(guò)離心力，將混合液甩向轉(zhuǎn)鼓壁，液體通過(guò)轉(zhuǎn)鼓壁上的小孔及內(nèi)部的濾網(wǎng)流出，而固體由于顆粒較大，被濾網(wǎng)截留沉降離心機(jī)通過(guò)固液體（或液液體）不同的比重差來(lái)進(jìn)行分離。主要用于少量樣品的分離按離心機(jī)的溫度控制范圍常溫離心機(jī)常溫低速離心機(jī)，在實(shí)驗(yàn)室常溫下使用，轉(zhuǎn)速可以達(dá)到5000rpm。常溫高速離心機(jī)，在實(shí)驗(yàn)室常溫下使用，轉(zhuǎn)速可以達(dá)到12000rpm冷凍離心機(jī)分為低速冷凍離心機(jī)和高速冷凍離心機(jī)。前者轉(zhuǎn)速一般不超過(guò)4000rpm；后者轉(zhuǎn)速可達(dá)20000rpm以上，多用于收集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大的細(xì)胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等（一）按離心管材質(zhì)分類(lèi)1）塑料離心管。塑料離心管常用的材料有聚乙烯（PE）、聚碳酸酯（PC）、聚丙烯（PP）等，其中聚丙烯管性能相對(duì)較好。塑料離心管的優(yōu)點(diǎn)是硬度小，可用穿刺法取出樣本；缺點(diǎn)是易變形、抗有機(jī)溶劑腐蝕性差、使用壽命短。2）玻璃離心管。使用玻璃離心管時(shí)離心力不宜過(guò)大，需要墊橡膠墊，防止管子破碎。高速離心機(jī)一般不選用玻璃離心管。玻璃離心管蓋封閉性不夠好，液體不能加滿(針對(duì)高速離心機(jī)且使用角轉(zhuǎn)子)，否則會(huì)使液體外溢，失去平衡。外溢后果是液體污染轉(zhuǎn)子和離心腔，影響感應(yīng)器正常工作。超速離心時(shí)，液體一定要加滿離心管，因?yàn)槌匐x心需要抽高真空，只有加滿才能避免離心管變形。3）金屬離心管。金屬離心管一般采用不銹鋼材質(zhì)。不銹鋼離心管具有強(qiáng)度大、不變形、抗熱、抗凍、抗化學(xué)腐蝕等優(yōu)點(diǎn)。其主要用于工業(yè)生產(chǎn)，但同時(shí)要注意避免接觸如強(qiáng)酸等腐蝕性的化學(xué)物質(zhì)。三、常用離心管類(lèi)型（二）按離心管底部形狀分類(lèi)1）錐形離心管。也稱(chēng)為尖底離心管，底部為錐形。當(dāng)樣品量少而需收集沉淀時(shí)，用錐形離心管更容易分離，上層液更容易用吸管吸取，是使用最多的離心管。2）平底離心管。用途和錐形離心管相同，但平底離心管可以立放，實(shí)驗(yàn)中更方便放取。3）圓底離心管。當(dāng)進(jìn)行密度梯度離心時(shí)，最佳選擇是圓底離心管，圓底底面積大，較錐形底能承受更大的離心力。三、常用離心管類(lèi)型三、常用離心管類(lèi)型（三）按離心管容量分類(lèi)1）微量離心管。微量離心管是一種小型的離心管，又稱(chēng)EP（eppendorf）管，常與微型離心機(jī)配套使用，用于微量試劑的分離。其常見(jiàn)容量規(guī)格有0.2mL、0.65mL、1.5mL、2mL。2）普通離心管。普通離心管是實(shí)驗(yàn)室最常見(jiàn)的離心管，常見(jiàn)的容量規(guī)格為15mL、30mL、50mL。3）大容量離心管。大容量離心管又稱(chēng)為離心瓶或離心杯，是大容量細(xì)胞收獲、切粒和蛋白純化的離心選擇，常用于工業(yè)化生產(chǎn)。其常見(jiàn)的容量規(guī)格為250mL、500mL、600mL。三、常用離心管類(lèi)型（四）按離心管蓋閉合方式分類(lèi)1）壓蓋離心管。以按壓方式密封的離心管，常見(jiàn)于微型離心管，都屬于壓蓋離心管。2）螺旋蓋離心管。容量50mL以上的離心管以螺旋蓋離心管為主。螺旋蓋離心管又可分為平蓋（蓋子頂部是平的）和塞蓋（蓋子頂部有塞子形狀）。三、常用離心管類(lèi)型（一）基本概念1）離心力（centrifugalforce,Fc）。離心力是指由于物體旋轉(zhuǎn)而產(chǎn)生脫離旋轉(zhuǎn)中心的力，也指物體做圓周運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的向心力的反作用力。當(dāng)物體所受外力小于運(yùn)動(dòng)所需要的向心力時(shí)，物體將向遠(yuǎn)離圓心的方向運(yùn)動(dòng)，這種運(yùn)動(dòng)稱(chēng)為離心運(yùn)動(dòng)，也叫離心現(xiàn)象。離心運(yùn)動(dòng)是由向心力消失或不足導(dǎo)致的。在一定角速度下做圓周運(yùn)動(dòng)的任何物體都受到一個(gè)向外的離心力，離心作用是根據(jù)這一原理進(jìn)行的。離心力（Fc）的大小等于離心加速度w2r與顆粒質(zhì)量m的乘積。2）相對(duì)離心力（relativecentrifugalforce,RCF）。通常顆粒在離心過(guò)程中的離心力是相對(duì)于顆粒本身所受的重力而言，因此把這種離心力稱(chēng)為相對(duì)離心力，其單位是重力加速度“g”。由于各種離心機(jī)轉(zhuǎn)子的半徑或離心管至旋轉(zhuǎn)軸中心的距離不同，離心力也不同。四、離心原理和技術(shù)參數(shù)（一）基本概念3）沉降速度（sedimentationvelocity)。沉降速度是指在強(qiáng)大離心力作用下，單位時(shí)間內(nèi)物質(zhì)運(yùn)動(dòng)的距離。4）沉降時(shí)間。在實(shí)際工作中，常常遇到在已有的離心機(jī)上把某一種溶質(zhì)從溶液中全部沉降分離出來(lái)需要多大轉(zhuǎn)速與多長(zhǎng)時(shí)間的問(wèn)題。如果轉(zhuǎn)速已知，則需確定分離某粒子所需要的時(shí)間，即沉降時(shí)間。5）K系數(shù)。用來(lái)描述在一個(gè)轉(zhuǎn)子中將粒子沉降下來(lái)的效率。K系數(shù)與離心轉(zhuǎn)速及粒子沉降的路徑有關(guān)，所以K系數(shù)是一個(gè)變數(shù)。6）沉降系數(shù)。沉降系數(shù)是指顆粒在單位離心場(chǎng)作用下的沉降速度，其單位為秒。各種生物樣品的沉降系數(shù)差別很大，利用沉降系數(shù)的差異，可以應(yīng)用離心技術(shù)來(lái)定性和定量地分析及分離制備。四、離心原理和技術(shù)參數(shù)（二）離心技術(shù)原理離心技術(shù)是指利用旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或懸浮密度的差異進(jìn)行分離、濃縮和提純生物樣品的一種方法。1）差速離心技術(shù)原理。差速離心技術(shù)又稱(chēng)為分步離心技術(shù)，是利用不同顆粒在離心場(chǎng)中沉降系數(shù)的差異，在同一離心條件下，通過(guò)不斷增加相對(duì)離心力，使不同沉降系數(shù)的粒子分離的離心方法。四、離心原理和技術(shù)參數(shù)（二）離心技術(shù)原理2）速率區(qū)帶離心技術(shù)原理。速率區(qū)帶離心技術(shù)是根據(jù)分離粒子的沉降系數(shù)不同，在某一離心力的作用下，使具有不同沉降速度的粒子在梯度液中處于不同的密度梯度層內(nèi)，形成幾條分開(kāi)的樣品區(qū)帶，達(dá)到彼此分離的技術(shù)。四、離心原理和技術(shù)參數(shù)（二）離心技術(shù)原理3）等密度區(qū)帶離心技術(shù)。采用等密度區(qū)帶離心技術(shù)離心時(shí)，需要在離心前預(yù)先制備密度梯度液，包括被分離樣品中所有粒子的密度。待分離的樣品與梯度液先混合，離心開(kāi)始后，梯度液由于離心力的作用逐漸形成一個(gè)從離心管底部到液面密度逐漸遞減的連續(xù)密度梯度，與此同時(shí)原來(lái)分布均勻的粒子也重新分布。當(dāng)管底介質(zhì)的密度大于粒子的密度，粒子上??；當(dāng)液面處粒子密度大于介質(zhì)密度時(shí)，粒子沉降，最后粒子進(jìn)入一個(gè)它本身的密度位置，即粒子密度等于介質(zhì)密度，粒子形成純組分區(qū)帶。其特點(diǎn)是：形成的區(qū)帶與樣品粒子的密度有關(guān)，而與粒子的大小及其他參數(shù)無(wú)關(guān)，只要轉(zhuǎn)速、溫度不變，即使延長(zhǎng)離心時(shí)間也不能改變這些粒子的成帶位置。四、離心原理和技術(shù)參數(shù)（三）技術(shù)參數(shù)1）離心機(jī)的主要技術(shù)參數(shù)（1）最大轉(zhuǎn)速：最大轉(zhuǎn)速指離心機(jī)轉(zhuǎn)頭可達(dá)到的最大轉(zhuǎn)速，單位是rpm或r/min。（2）最大離心力：最大離心力指離心機(jī)可產(chǎn)生的最大相對(duì)離心力，單位是g。（3）最大容量：最大容量指離心機(jī)一次可分離樣品的最大體積，通常表示為m×n，m為一次可容納的最多離心管數(shù)，n為一個(gè)離心管可容納分離樣品的最大體積，單位是mL或L。（4）調(diào)速范圍（轉(zhuǎn)速設(shè)置范圍）：調(diào)速范圍指離心機(jī)轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速可調(diào)整的范圍。（5）溫度控制范圍：溫度控制范圍指離心機(jī)工作時(shí)可控制的樣品溫度范圍。（6）工作電壓：工作電壓一般指離心機(jī)電機(jī)工作所需要的電壓。（7）電源功率：電源功率通常指離心機(jī)電機(jī)的額定功率。四、離心原理和技術(shù)參數(shù)（三）技術(shù)參數(shù)2）離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的主要技術(shù)參數(shù)轉(zhuǎn)頭（rotor）是離心機(jī)分離樣品的核心部件，它的轉(zhuǎn)速與轉(zhuǎn)子的材料及強(qiáng)度有關(guān)。低速離心機(jī)一般采用超硬鋁合金；超速離心機(jī)采用鈦合金。一般來(lái)說(shuō)，同一類(lèi)型離心機(jī)，重量輕、容量小的轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速要高；反之，轉(zhuǎn)速要低。離心機(jī)常有多種不同形狀的轉(zhuǎn)頭，其各自所反映的離心力場(chǎng)的大小和沉降距離也不一樣，在實(shí)際工作中應(yīng)根據(jù)分離要求正確選擇使用。四、離心原理和技術(shù)參數(shù)（三）技術(shù)參數(shù)2）離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的主要技術(shù)參數(shù)離心機(jī)各類(lèi)轉(zhuǎn)頭的名稱(chēng)與應(yīng)用見(jiàn)右表。

四、離心原理和技術(shù)參數(shù)（一）低速離心機(jī)（low

speedcentrifuge）1）結(jié)構(gòu)低速離心機(jī)的結(jié)構(gòu)較為簡(jiǎn)單，由電動(dòng)機(jī)、離心轉(zhuǎn)盤(pán)（轉(zhuǎn)頭）、調(diào)速裝置、定時(shí)器、離心套管與底座等主要部件構(gòu)成。電動(dòng)機(jī)是離心機(jī)的主要工作部件，一般多為串激式電動(dòng)機(jī)，包括定子和轉(zhuǎn)子兩部分。離心轉(zhuǎn)盤(pán)（轉(zhuǎn)頭）常用鑄鋁制成，是平頂錐形。電動(dòng)機(jī)的調(diào)速裝置有多種，如多抽頭變阻器、瓷盤(pán)可變電阻器等形式。離心套管主要用塑料或不銹鋼材料制成。五、離心機(jī)操作技術(shù)（一）低速離心機(jī)（low

speedcentrifuge）2）適用范圍主要用于分離細(xì)胞、細(xì)胞碎片及培養(yǎng)基殘?jiān)阮w粒物，臨床上主要用于血漿、血清的分離及腦脊液、胸腹水、尿液等有效成分的分離。3）操作步驟（1）離心前準(zhǔn)備①將離心機(jī)放置在堅(jiān)實(shí)的水平臺(tái)面上，離心機(jī)調(diào)水平。②打開(kāi)機(jī)蓋。③根據(jù)需要規(guī)格安裝好轉(zhuǎn)子。④離心樣品配平。將裝有樣品的離心管裝入離心套管內(nèi)放在天平上稱(chēng)量配平，將配平好的兩組裝有樣品的離心套管對(duì)稱(chēng)放置于離心機(jī)轉(zhuǎn)子的孔內(nèi)。單份樣品可取一支空離心管加水與之配平，并對(duì)稱(chēng)放置。五、離心機(jī)操作技術(shù)（一）低速離心機(jī)（low

speedcentrifuge）3）操作步驟（2）運(yùn)轉(zhuǎn)前檢查①檢查設(shè)備清潔合格并在有效期內(nèi)，且未被再次污染，有“設(shè)備完好”標(biāo)識(shí)。②檢查設(shè)備完整性及轉(zhuǎn)子的正常，確保轉(zhuǎn)頭安裝到位，轉(zhuǎn)動(dòng)靈活，金屬元件無(wú)腐蝕的痕跡，同時(shí)檢查固定轉(zhuǎn)頭的鎖母是否旋緊。③檢查電源供電正常。④確保待分離樣品與離心管、轉(zhuǎn)頭的化學(xué)相容性，確保離心管適用性及裝液量符合要求。⑤確保樣品等量配平，對(duì)稱(chēng)放置，嚴(yán)禁在未經(jīng)配平的狀態(tài)下運(yùn)轉(zhuǎn)。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（一）低速離心機(jī)（low

speedcentrifuge）3）操作步驟（3）離心操作①定時(shí)器旋鈕、速度旋鈕均置于“0”位置，開(kāi)啟電源開(kāi)關(guān)，指示燈發(fā)亮，電源即接通。②將定時(shí)器旋鈕旋至所需離心時(shí)間的位置，若所需時(shí)間少于5min，應(yīng)先旋轉(zhuǎn)超過(guò)5min，再旋轉(zhuǎn)回到所需定時(shí)位置。③緩慢調(diào)節(jié)速度旋鈕至所需要的速度值。調(diào)節(jié)速度不要太快，以免電流突然增加過(guò)快而燒壞電機(jī)。④離心結(jié)束，等待轉(zhuǎn)子停止轉(zhuǎn)動(dòng)后方可打開(kāi)離心機(jī)上門(mén)，輕輕取出離心管樣品。⑤關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)，離心機(jī)斷電。五、離心機(jī)操作技術(shù)（一）低速離心機(jī)（low

speedcentrifuge）4）操作注意事項(xiàng)①離心管內(nèi)所放樣品的液面不許超過(guò)最大使用容量的刻度線，防止飛液。②安放離心機(jī)的臺(tái)面應(yīng)堅(jiān)實(shí)、平整，所有離心機(jī)腳均應(yīng)與臺(tái)面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動(dòng)。③離心樣品必須配平并對(duì)稱(chēng)放置。④離心機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)過(guò)程中嚴(yán)禁移動(dòng)離心機(jī)，嚴(yán)禁打開(kāi)離心機(jī)上門(mén)。⑤調(diào)節(jié)速度時(shí)不要太快，以免電流突然增加過(guò)快而燒壞電機(jī)。⑥若離心過(guò)程中出現(xiàn)離心機(jī)較大振動(dòng)，立即停機(jī)處理。⑦電源必須接地線。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（二）高速離心機(jī)（high

speedcentrifuge）1）結(jié)構(gòu)高速離心機(jī)通常有轉(zhuǎn)動(dòng)裝置、速度控制系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、離心室、離心轉(zhuǎn)頭及安全保護(hù)裝置等。以下主要介紹轉(zhuǎn)動(dòng)裝置、速度控制系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)及安全保護(hù)裝置。（1）轉(zhuǎn)動(dòng)裝置：轉(zhuǎn)動(dòng)裝置主要由電動(dòng)機(jī)、轉(zhuǎn)頭軸以及它們之間的連接部分構(gòu)成。（2）速度控制系統(tǒng)：速度控制系統(tǒng)由標(biāo)準(zhǔn)電壓、速度調(diào)節(jié)器、電流調(diào)節(jié)器、功率放大器、電動(dòng)機(jī)及速度傳感器等部分構(gòu)成。（3）真空系統(tǒng)：當(dāng)轉(zhuǎn)速超過(guò)40000rpm時(shí)，空氣的摩擦生熱就會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重后果。因此，高速離心機(jī)一般配有真空系統(tǒng)，將離心腔密封并抽成真空，以克服空氣的摩擦生熱，保證離心機(jī)達(dá)到所需要的轉(zhuǎn)速。（4）溫度控制系統(tǒng)：溫度控制系統(tǒng)由壓縮機(jī)、冷凝器、毛細(xì)管和蒸發(fā)器四個(gè)部分組成，采用全封閉式制冷壓縮機(jī)。（5）安全保護(hù)裝置：安全保護(hù)裝置包括電源過(guò)電流保護(hù)裝置、驅(qū)動(dòng)回路超速保護(hù)、冷凍機(jī)超負(fù)荷保護(hù)和操作安全保護(hù)四個(gè)部分。五、離心機(jī)操作技術(shù)（二）高速離心機(jī)（high

speedcentrifuge）2）適用范圍主要用于細(xì)菌的蛋白沉淀、核酸提取，細(xì)胞或亞細(xì)胞組分分離，動(dòng)、植物病毒分離，血液血清提取及溶液中大小顆粒不同組分的分離等。3）操作步驟（1）離心前準(zhǔn)備①將儀器安裝在堅(jiān)實(shí)水平的地面上，距墻壁的距離大于10cm，以確保制冷系統(tǒng)散熱良好。②離心樣品配平。將裝有樣品的離心管裝入離心套管內(nèi)，放在天平上稱(chēng)量配平，將配平好的兩組裝有樣品的離心套管對(duì)稱(chēng)放置于離心機(jī)轉(zhuǎn)子的孔內(nèi)。單份樣品可取一支空離心管加水與之配平，并對(duì)稱(chēng)放置。③根據(jù)需要規(guī)格安裝好轉(zhuǎn)子。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（二）高速離心機(jī)（high

speedcentrifuge）（2）運(yùn)轉(zhuǎn)前檢查①檢查設(shè)備清潔合格并在有效期內(nèi)，且未被再次污染，有“設(shè)備完好”標(biāo)識(shí)。②檢查設(shè)備完整性及轉(zhuǎn)子的正常，確保轉(zhuǎn)頭安裝到位，轉(zhuǎn)動(dòng)靈活，金屬元件無(wú)腐蝕的痕跡，同時(shí)檢查固定轉(zhuǎn)頭的鎖母是否旋緊。③檢查電源供電正常。④確保待分離樣品與離心管、轉(zhuǎn)頭的化學(xué)相容性，確保離心管適用性及裝液量符合要求。⑤確保樣品等量配平，對(duì)稱(chēng)放置，嚴(yán)禁在不平衡的狀態(tài)下運(yùn)轉(zhuǎn)。⑥室內(nèi)應(yīng)干燥，通風(fēng)良好，相對(duì)濕度保持在85%以下，室內(nèi)溫度最好在25～35℃之間。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（二）高速離心機(jī)（high

speedcentrifuge）（3）離心操作①樣品放置好后，關(guān)上門(mén)蓋，使門(mén)蓋鎖緊。②開(kāi)啟電源開(kāi)關(guān)，指示燈發(fā)亮，電源即接通。③設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)。在停止?fàn)顟B(tài)下時(shí)，設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)、轉(zhuǎn)速、溫度、時(shí)間，按設(shè)置鍵（SET鍵），此時(shí)離心機(jī)處于設(shè)置狀態(tài)。停止燈亮，運(yùn)行燈閃爍，當(dāng)轉(zhuǎn)子數(shù)碼管右下角的小數(shù)點(diǎn)燈亮?xí)r，即進(jìn)入轉(zhuǎn)子號(hào)設(shè)置，再按“▲”或“▼”鍵選擇離心機(jī)本次工作所用的轉(zhuǎn)子號(hào)。④設(shè)置轉(zhuǎn)速。按設(shè)置鍵（SET鍵），當(dāng)轉(zhuǎn)速最后一個(gè)數(shù)碼管右下角的小數(shù)燈亮?xí)r，即進(jìn)入轉(zhuǎn)速設(shè)置，再按“▲”或“▼”鍵選擇離心機(jī)本次工作所用的轉(zhuǎn)速。⑤設(shè)置溫度。按設(shè)置鍵（SET鍵），當(dāng)溫度最后一個(gè)數(shù)碼管右下角的小數(shù)燈亮?xí)r，即進(jìn)入溫度設(shè)置，再按“▲”或“▼”鍵確定離心機(jī)本次工作所用的溫度。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（二）高速離心機(jī)（high

speedcentrifuge）（3）離心操作⑥設(shè)置時(shí)間。按設(shè)置鍵（SET鍵），當(dāng)時(shí)間最后一個(gè)數(shù)碼管右下角的小數(shù)燈亮?xí)r，即進(jìn)入時(shí)間設(shè)置，再按“▲”或“▼”鍵選擇離心機(jī)本次工作所用的時(shí)間，時(shí)間為倒計(jì)時(shí)。⑦在運(yùn)行過(guò)程中，如果要看離心力，按下“RCF”鍵，即顯示當(dāng)時(shí)轉(zhuǎn)速下的離心力，3s后自動(dòng)返回到運(yùn)行狀態(tài)。⑧離心機(jī)時(shí)間倒計(jì)時(shí)到“0”時(shí)，電機(jī)斷電，5s后開(kāi)始剎車(chē)，離心機(jī)將自動(dòng)停止。當(dāng)轉(zhuǎn)速顯示為“0rpm”時(shí)，轉(zhuǎn)子停止轉(zhuǎn)動(dòng)后方可打開(kāi)離心機(jī)上門(mén)，輕輕取出離心管樣品即可。⑨關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)，離心機(jī)斷電。五、離心機(jī)操作技術(shù)（二）高速離心機(jī)（high

speedcentrifuge）4）操作注意事項(xiàng)①離心機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)過(guò)程中嚴(yán)禁移動(dòng)離心機(jī)，嚴(yán)禁打開(kāi)離心機(jī)機(jī)蓋。②安放離心機(jī)的地面應(yīng)堅(jiān)實(shí)、平整，所有離心機(jī)腳均應(yīng)與地面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動(dòng)。③離心樣品必須配平并對(duì)稱(chēng)放置。④每次停機(jī)后再開(kāi)機(jī)的時(shí)間間隔不得少于5min，以免壓縮機(jī)堵轉(zhuǎn)而損壞。⑤每次離心完成后，必須取出轉(zhuǎn)子。⑥若離心過(guò)程中出現(xiàn)離心機(jī)較大振動(dòng)，立即停機(jī)處理。⑦電源必須連接地線。⑧所有轉(zhuǎn)子不能超過(guò)其最高轉(zhuǎn)速使用。五、離心機(jī)操作技術(shù)（三）超速離心機(jī)（ultracentrifuge）1）結(jié)構(gòu)超速離心機(jī)主要由驅(qū)動(dòng)裝置、速度控制系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)（由安裝在轉(zhuǎn)頭下面的紅外線測(cè)量感受器直接并連續(xù)檢測(cè)離心腔的溫度，以保證更準(zhǔn)確更靈敏的溫度調(diào)控）、真空系統(tǒng)、轉(zhuǎn)頭及安全保護(hù)裝置組成。五、離心機(jī)操作技術(shù)（三）超速離心機(jī)（ultracentrifuge）2）適用范圍超速離心機(jī)按用途分為制備型、分析型及分析制備型三種。制備型超速離心機(jī)主要用于生物大分子、細(xì)胞器和病毒的分離純化，能使亞細(xì)胞分級(jí)分離，并可用于測(cè)定蛋白質(zhì)及核酸的分子量。分析型超速離心機(jī)裝有光學(xué)系統(tǒng)，可拍照、測(cè)量、數(shù)字輸出，有自動(dòng)打印系統(tǒng)等，可通過(guò)光學(xué)系統(tǒng)對(duì)測(cè)試樣品的沉降過(guò)程及純度進(jìn)行觀察。分析制備型超速離心機(jī)將分析型和制備型超速離心機(jī)的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合在一起，使得設(shè)備更完美。3）操作步驟（1）打開(kāi)電源：若離心機(jī)門(mén)未開(kāi)啟，需推把手開(kāi)啟離心機(jī)蓋，不可強(qiáng)行開(kāi)啟。（2）樣品平衡：將樣品倒入離心管后連同掛籃和蓋子一起使用天平稱(chēng)重，在0.02g的誤差范圍內(nèi)才能放入轉(zhuǎn)頭的對(duì)應(yīng)孔內(nèi)。6個(gè)掛籃必須同時(shí)使用，若樣品管為奇數(shù)管可用蒸餾水作平衡管。具體轉(zhuǎn)頭信息和對(duì)應(yīng)離心管信息應(yīng)查閱相應(yīng)說(shuō)明書(shū)，并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求操作。五、離心機(jī)操作技術(shù)（三）超速離心機(jī)（ultracentrifuge）3）操作步驟（3）放置轉(zhuǎn)頭：6個(gè)掛籃放入轉(zhuǎn)頭對(duì)應(yīng)的孔內(nèi)，然后將轉(zhuǎn)頭置入離心槽，此時(shí)一定注意轉(zhuǎn)頭中心內(nèi)孔應(yīng)該卡定在離心機(jī)轉(zhuǎn)子的正確位置上。輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)頭，顯示屏轉(zhuǎn)速欄有讀數(shù)，說(shuō)明速度檢測(cè)裝置正常，否則說(shuō)明儀器異常，立刻聯(lián)系儀器負(fù)責(zé)人（一定要鎖緊掛籃蓋子和裝好掛籃，否則在超速離心過(guò)程中轉(zhuǎn)頭容易脫離轉(zhuǎn)子而產(chǎn)生極大的安全隱患）。（4）關(guān)閉離心機(jī)蓋：一定要輕輕、緩慢地關(guān)上。（5）設(shè)定離心參數(shù)：離心參數(shù)包括離心轉(zhuǎn)速、時(shí)間、溫度。（6）開(kāi)始離心：按START鍵開(kāi)始離心，并抽真空，當(dāng)真空度達(dá)到200Pa以下，離心機(jī)才能夠提升轉(zhuǎn)速超過(guò)3000rpm，最終離心機(jī)平穩(wěn)運(yùn)行時(shí)的真空度應(yīng)為20Pa。（7）停止離心：時(shí)間一到自動(dòng)停止，遇緊急情況可按STOP隨時(shí)停止。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（三）超速離心機(jī)（ultracentrifuge）3）操作步驟（8）解除真空：按真空按鈕，解除真空。（9）取出轉(zhuǎn)頭：推把手開(kāi)啟離心機(jī)蓋，取出轉(zhuǎn)頭放在對(duì)應(yīng)的底座上。（10）關(guān)閉主機(jī)電源。（11）填寫(xiě)儀器使用及維護(hù)記錄單（簿）。五、離心機(jī)操作技術(shù)（三）超速離心機(jī)（ultracentrifuge）4）操作注意事項(xiàng)（1）對(duì)稱(chēng)放置的離心杯必須經(jīng)過(guò)配平。（2）必須保證離心機(jī)的前后和左右分別水平。（3）嚴(yán)禁使用有裂紋、腐蝕斑點(diǎn)、漏液的離心杯。（4）用完后要即時(shí)除去腔室中的冰霜與濕氣。如需要繼續(xù)使用，應(yīng)及時(shí)關(guān)閉設(shè)備上蓋，減少冰霜的凝結(jié)。（5）離心機(jī)運(yùn)行產(chǎn)生較大振動(dòng)時(shí)，應(yīng)立即停機(jī)檢查。（6）機(jī)器運(yùn)轉(zhuǎn)中如發(fā)現(xiàn)有任何不正常的振動(dòng)、噪聲和氣味應(yīng)立即停機(jī)，切斷電源，然后進(jìn)行檢查。如有解決不了的問(wèn)題，應(yīng)及時(shí)與技術(shù)人員聯(lián)系。（7）本設(shè)備要使用三線或五線電線和插頭接地線。（8）使用前、后檢查離心機(jī)腔體是否有樣品和灰塵的堆積，若有要立即進(jìn)行清理。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（四）管式離心機(jī)（tubularcentrifuge）1）外形結(jié)構(gòu)為了減小離心機(jī)轉(zhuǎn)鼓所承受的應(yīng)力，使物質(zhì)有足夠的沉降時(shí)間，把離心機(jī)的轉(zhuǎn)鼓（相當(dāng)于離心管）直徑變小，長(zhǎng)度加長(zhǎng)，類(lèi)似一根長(zhǎng)管子，故稱(chēng)管式離心機(jī)。結(jié)構(gòu)包括主軸、壓緊輪、電機(jī)、機(jī)身、進(jìn)液部分、轉(zhuǎn)鼓和集液盤(pán)等。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（四）管式離心機(jī)（tubularcentrifuge）管式離心機(jī)的主要技術(shù)參數(shù)見(jiàn)下表。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（四）管式離心機(jī)（tubularcentrifuge）2）適用范圍管式離心機(jī)是利用離心力來(lái)達(dá)到液體與固體顆粒、液體與液體的混合物中各組分分離的機(jī)械設(shè)備。管式分離機(jī)是目前使用離心法進(jìn)行分離的理想設(shè)備，主要用于液-固、液-液或液-液-固三相分離，其最小分離顆粒為1μm。特別是對(duì)一些液固相比重差異小，固體粒徑細(xì)、含量低，介質(zhì)腐蝕性強(qiáng)等物料的提取、濃縮、澄清較為適用。與其他分離機(jī)器相比，可以得到高純度的液相和含濕量較低的固相，而且具有連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)、自動(dòng)控制、操作安全可靠、節(jié)省人力和占地面積小、減輕勞動(dòng)強(qiáng)度和改善勞動(dòng)條件等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)、中藥制劑、保健食品、飲料、化工等行業(yè)。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（四）管式離心機(jī)（tubularcentrifuge）3）操作步驟（1）操作前的準(zhǔn)備（2）開(kāi)機(jī)操作：①啟動(dòng)機(jī)器（電源連接無(wú)誤后）。②待機(jī)器全速運(yùn)轉(zhuǎn)無(wú)誤后，方可打開(kāi)進(jìn)料閥門(mén)，先將閥門(mén)開(kāi)小，待液體從集液盤(pán)流出后，將閥門(mén)開(kāi)啟到預(yù)定的位置。③分離操作中，一般情況下，不要中間停止進(jìn)行加料。（3）停機(jī)：停機(jī)前必須先關(guān)掉進(jìn)料閥門(mén)，等到集液盤(pán)不流出液體時(shí)，方能關(guān)機(jī)。（4）排渣及清洗轉(zhuǎn)鼓（5）轉(zhuǎn)鼓的裝配五、離心機(jī)操作技術(shù)（五）三足離心機(jī)（three

columncentrifuge）1）結(jié)構(gòu)又稱(chēng)為三足式離心機(jī)，因底部支撐為三個(gè)柱腳，以等分三角形的方式排列而得名，是一種固液分離設(shè)備。五、離心機(jī)操作技術(shù)（五）三足離心機(jī)（three

columncentrifuge）2）適用范圍主要分為過(guò)濾式和沉降式兩種分離形式。（1）過(guò)濾式：轉(zhuǎn)鼓開(kāi)孔，附加過(guò)濾介質(zhì)通過(guò)攔截的方式做到固液二相分離的離心機(jī)統(tǒng)稱(chēng)為過(guò)濾式離心機(jī)。過(guò)濾式離心機(jī)適用于物料黏度小、固相顆粒不易變形（如結(jié)晶體）且較大的小批量生產(chǎn)，多用于工業(yè)脫水。（2）沉降式：沉降式離心機(jī)設(shè)備轉(zhuǎn)鼓為密閉桶狀，該設(shè)備工作原理是通過(guò)離心力做到固液二相分離，這種形式的離心機(jī)統(tǒng)稱(chēng)為沉降式離心機(jī)。沉降式離心機(jī)適用物料廣泛，黏度大，固相顆粒小的物料都能通過(guò)提高離心力的方式來(lái)達(dá)到固液二相分離的要求。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（五）三足離心機(jī)（three

columncentrifuge）3）操作步驟（1）填料：物料通過(guò)水平的填料管被填入旋轉(zhuǎn)離心鼓。填料的同時(shí)母液被甩離離心鼓并形成濾餅，通過(guò)填料控制可以進(jìn)行多次填料以達(dá)到最佳濾餅厚度。填料過(guò)程可以在低速條件下進(jìn)行，以保證最初濾餅形成，且減少漏料。（2）初步甩干：一般在填料后需要將母液盡快甩離離心鼓。離心鼓的轉(zhuǎn)速自動(dòng)調(diào)節(jié)至由操作人員設(shè)置的速度（較高速度），這也是初步甩干步驟。（3）洗滌：當(dāng)母液被甩離濾餅后，濾餅通常需要用一種或者多種洗滌液進(jìn)行洗滌。在洗滌過(guò)程中要降低離心機(jī)轉(zhuǎn)速，以增加洗滌液與濾餅的接觸時(shí)間。（4）甩干：洗滌后，將離心鼓轉(zhuǎn)速提到最高，將濾餅甩干。（5）下料：將離心鼓轉(zhuǎn)速調(diào)至下料轉(zhuǎn)速，離心鼓的水平平動(dòng)部分被逐漸推出，濾餅被自動(dòng)卸出離心鼓。下料后表示一個(gè)周期結(jié)束，離心鼓的水平平動(dòng)部分被推回離心鼓，恢復(fù)原始位置，開(kāi)始新的周期。

五、離心機(jī)操作技術(shù)（一）離心機(jī)的