《碳酸氫鈉注射液的藥學(xué)探究》12000字（論文）

IV1緒論1.1研究目的及意義碳酸氫鈉注射液是一種治療代謝性酸中毒的藥物，它可以提高血液中的碳酸氫根，中和氫氣，改善酸中毒的癥狀；碳酸氫鈉注射液能增加尿液pH，能讓尿液中的尿酸、血紅蛋白等成分不容易沉淀，減少腎毒性；同時(shí)，還可治療急性腫瘤溶解綜合癥(ATLS)，ATLS是指在腫瘤治療過程中，由于腫瘤負(fù)荷過重或?qū)熯^于敏感，大量腫瘤細(xì)胞死亡后釋放的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)所引起高血鉀癥、高尿酸血癥、高磷血癥以及低鈣血癥。該品種為臨床必需品種。《國家藥品安全“十二五”規(guī)劃》中規(guī)定，一致性評(píng)價(jià)要求仿制藥品應(yīng)與原研藥品質(zhì)量和療效一致。目前，國內(nèi)碳酸氫鈉注射液上市藥品濃度主要為5%，美國和日本碳酸氫鈉注射液上市藥品濃度主要為8.4%、7.5%。國內(nèi)尚無8.4%濃度碳酸氫鈉注射液品種上市銷售。8.4%碳酸氫鈉注射液中碳酸氫根濃度為1mol/L，便于醫(yī)護(hù)人員在治療時(shí)計(jì)算補(bǔ)液體積。故本項(xiàng)目將采取以日本大冢為原研產(chǎn)品，對(duì)8.4%的碳酸氫鈉注射液進(jìn)行相關(guān)藥學(xué)研究。1.2包裝材料8.4%碳酸氫鈉注射液質(zhì)量與包材密切相關(guān)，故包材的選擇非常重要?！吨袊幍洹?020年版收錄的碳酸氫鈉注射液規(guī)格有100ml、250ml、500ml，濃度為5%。美國和日本均上市了8.4%濃度，規(guī)格分別為10ml、20ml、50ml、100ml和250ml。對(duì)于本品種注射液的包材：美國主要為用玻璃容器，日本大多選擇雙層包裝，內(nèi)層為非PVC共擠輸液袋，外層為阻氣外袋，中間充有二氧化碳?xì)怏w，以維持藥液酸堿平衡，使藥液pH穩(wěn)定。1.2.1玻璃包裝材料注射用玻璃包材料主要有：中性硼硅玻璃、高硼硅玻璃、鈉鈣玻璃、低硼硅玻璃等。其中，耐水性的硼硅玻璃、耐化學(xué)腐蝕性和熱穩(wěn)定性較好。因此，在國外，大多數(shù)采用的是硼硅玻璃。由于碳酸氫鈉會(huì)侵蝕玻璃瓶的內(nèi)壁，使其外層的保護(hù)層受到侵蝕，長期侵蝕會(huì)使保護(hù)層受損，從而使藥瓶中的硅酸鹽、游離堿沉淀而形成玻屑狀的脫落或霧狀的白色斑點(diǎn)，從而影響到注射劑的質(zhì)量。若輸液瓶內(nèi)壁發(fā)生脫片，較大的顆粒進(jìn)入體循環(huán)后會(huì)引起微循環(huán)或局部循環(huán)障礙，進(jìn)而引發(fā)血管堵塞，組織缺氧后導(dǎo)致血管炎癥。碳酸氫鈉注射液與普通鹵化丁基膠塞的相容性較差，在儲(chǔ)存過程中膠塞表面的低分子材料容易滲進(jìn)藥液中，造成可見異物如小白點(diǎn)、小白塊等增加，因此生產(chǎn)過程中通常使用丁基覆膜膠塞。玻璃瓶針劑的制備要經(jīng)過洗瓶、干燥、灌裝、塞入橡膠塞子等工序，工序繁瑣，易產(chǎn)生二次污染。在運(yùn)輸過程中，玻璃瓶可能因碰撞產(chǎn)生隱性裂縫，造成污染。使用玻璃瓶注射液時(shí)需要先插入空氣針，建立空氣通路，因此微生物和微?？赡苓M(jìn)入輸液系統(tǒng)中。尤其當(dāng)患者存在免疫功能缺陷時(shí)，易引發(fā)致命性的感染疾病。此外，生產(chǎn)玻璃類容器時(shí)能源消耗大，環(huán)境污染重。因此從輸液安全性和環(huán)保的角度考慮，本品不適宜使用玻璃輸液瓶裝。1.2.2聚丙烯(PP)或聚乙烯(PE)材料聚丙烯和聚乙烯具有輕便、不易破損和便于運(yùn)輸?shù)奶攸c(diǎn)，而被廣泛用于注射液藥品的包裝材料，PP、PE等可從根本上解決玻璃瓶易破碎、易脫片、易形成玻片等問題。同時(shí)，PP和PE是一次性的，不會(huì)產(chǎn)生重復(fù)使用后的交叉污染問題。和玻璃瓶子一樣，當(dāng)使用PP或PE材質(zhì)的注射器時(shí)，為了平衡瓶內(nèi)和外界氣壓，外界空氣會(huì)進(jìn)入注射液管路中，因此也存在安全風(fēng)險(xiǎn)。此外，PP材質(zhì)的耐受性較差，低溫下的瓶身抗脆性較差，在低溫環(huán)境中運(yùn)輸和使用中容易發(fā)生斷裂；PE材質(zhì)耐高溫，耐高壓蒸氣消毒。PP和PE材料生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)自動(dòng)化程度高，易進(jìn)行質(zhì)量控制。針對(duì)不同需求可添加不同的添加劑提高注射液瓶的性能，如添加抗氧劑提高抗氧化性；加入成核劑或者增塑劑可調(diào)節(jié)材料的硬度；加入透明劑提高透明度等，這大大提高了注射液產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性。1.2.3聚氯乙烯(PVC)軟袋PVC軟袋因其高純度、高質(zhì)量的特點(diǎn)，曾經(jīng)是大容量針劑包材的主力產(chǎn)品。1998年WHO建議，大容量針劑的包裝必須采用軟袋子包裝。由于軟袋的縮口性和彈性好，因此在輸液過程中，藥液流出的過程中軟袋也同步收縮，不需要進(jìn)入外界空氣輸液管路平衡氣壓，降低了藥液污染的可能性。PVC材料中添加的部分化學(xué)成分危害人體健康，比如作為增塑劑使用的鄰苯二甲酸二辛酯，以及作為粘合劑使用的環(huán)己酮和異丙基苯，對(duì)人體都具有致癌性。在藥物相容性方面，普通醫(yī)用PVC和非鄰苯增塑PVC與強(qiáng)極性藥物相容性差。PVC材質(zhì)水氣透過性高，從而影響大容量注射液的存儲(chǔ)效期。綜上所述，自2000年9月起國家食品藥品監(jiān)督管理局（CFDA）停止審批PVC軟袋包裝的注射液生產(chǎn)線。并于2010年出臺(tái)規(guī)定，禁止注射液包材中含有PVC成分。至此，PVC軟袋注射液包材退出歷史舞臺(tái)。1.2.4非PVC多層共擠膜軟袋非PVC多層共擠膜軟袋是最新的全密閉靜脈注射液產(chǎn)品包材。由于軟袋具有密封性強(qiáng)，輸液過程中與外界隔絕的優(yōu)勢，非PVC材質(zhì)注射液軟袋逐漸成為大容量注射液包材的主流。在美國市場該包材市場占有率為99.5%、歐洲98%、韓國96.2%、日本60%，相比之下，在國內(nèi)非PVC包材還未成為大容量注射液包材的主流。因此，非PVC多層共擠膜軟袋在國內(nèi)具有很大的市場潛力。非PVC多層共擠膜軟袋是由三層或五層復(fù)合共擠膜軟包裝而成，三層共擠膜分別為提高共擠膜機(jī)械強(qiáng)度的聚酯(PET)外層，能夠阻隔水氣的聚丙烯(PP)或聚酰胺(PT)致密膜中層，和聚丙烯(PP)或聚乙烯(PE)內(nèi)層。五層共擠出輸液用袋子是由酯共聚物/乙烯-丙烯酸樹脂（EMMA)/聚乙烯/PE/改性聚乙烯-丙烯-聚合物五層共擠輸液用薄膜。非聚氯乙烯多層共擠膜的內(nèi)層是一種完全無毒性的、不溶于水的。而中層和外層所用的高分子材料可以起到阻隔水氣、提高柔韌性和增強(qiáng)機(jī)械強(qiáng)度的作用。此外，在共擠薄膜制造過程中，三種物料的熔點(diǎn)由內(nèi)向外逐步提高。在熱熔工藝中，從內(nèi)部到外部的最里面的物料進(jìn)行熱熔。而PVC材料是從外部到內(nèi)部進(jìn)行焊接的，因此，與PVC薄膜相比，無PVC薄膜具有更緊密、更堅(jiān)固、更好的熱封性。藥液滲漏率低。這改善了PVC膜水氣透過率高的缺點(diǎn)，對(duì)保持藥液的穩(wěn)定性和藥效期間的品質(zhì)具有重要的意義。非聚氯乙烯多層共擠膜具有良好的耐熱穩(wěn)定性，因此可以進(jìn)行高溫殺菌。非聚氯乙烯多層共擠膜與大部分藥液具有良好的相容性，且不會(huì)產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，對(duì)藥物的吸附能力較弱，膜材成分向藥液的遷移能力較差。另外，無聚氯乙烯多層共擠膜不含有任何增塑劑，使用后易處理且污染少。由于包裝材料的創(chuàng)新，使非PVC共擠膜軟袋成為大容量注射液包材的更佳選擇。由于非PVC材料柔韌性好，若在各腔室之間虛焊，該連接處可在一定壓力下開通，能夠?qū)崿F(xiàn)各腔室之間液液或固液的混合。粉-液雙腔袋、液-液雙腔袋、液-液三腔袋是繼單腔軟囊后又發(fā)展起來的。這一包裝方式的革新，可以杜絕在配液過程中的交叉污染，減少用藥成本和勞動(dòng)強(qiáng)度。綜上，8.4%碳酸氫鈉注射液選擇非PVC共擠輸液袋作為內(nèi)袋。由于非PVC共擠膜軟袋對(duì)CO2的透過率高，在長期儲(chǔ)存的過程中，碳酸氫鈉分解后產(chǎn)生的CO2可透過共擠膜擴(kuò)散到空氣中，使藥液pH值上升。因此，在共擠膜包裝外還需一層阻氣外袋，非PVC共擠膜軟袋作為內(nèi)袋，向內(nèi)外袋中間充入二氧化碳?xì)怏w為穩(wěn)定注射液的pH值，提高產(chǎn)品穩(wěn)定性。1.38.4%碳酸氫鈉注射液工藝控制重點(diǎn)因?yàn)镠2CO3、CO32-和HCO3-的在不同的pH條件下，不同濃度的碳酸鈉溶液中HCO3-的濃度與pH值有很大的關(guān)系。H2CO3,CO32-,HCO3-在不同pH下的分布，如圖1-1所示。圖1-1不同pH條件下H2CO3、CO32-和HCO3-分布圖由圖1-1可知，當(dāng)pH值為8.3時(shí)，HCO3-是溶液中的主要形式。CO32-含量在pH>8.3時(shí)增加，H2CO3的含量降低；pH低于8.3，CO32-含量減小，H2CO3含量增大。因此，為保證產(chǎn)品質(zhì)量，應(yīng)嚴(yán)格控制產(chǎn)品pH值。對(duì)于溶液中碳酸氫根含量的另一影響因素是溫度。碳酸氫鈉遇熱不穩(wěn)定，易分解為碳酸鈉，水和二氧化碳，導(dǎo)致溶液pH上升。反應(yīng)方程式如圖1-2。2NaHC圖1-2碳酸氫鈉受熱分解的化學(xué)方程式配液溶解和滅菌過程中，外界環(huán)境溫度波動(dòng)較大，這會(huì)影響溶液中碳酸氫鈉的含量。隨著溫度上升，溶液中HCO3-分解，反應(yīng)得到的CO2氣體易從溶液中揮出且反應(yīng)產(chǎn)物CO32-堿性強(qiáng)于底物HCO3-，故溶液pH值上升。一般藥品的配液過程中，溶媒溫度以15-20℃為宜，而8.4%的NaHCO3注射液中的碳酸氫鈉的含量已經(jīng)接近20℃時(shí)碳酸氫鈉的溶解度，NaHCO3溶解度見表1。因此為提高生產(chǎn)效率，通常會(huì)加熱注射用水以加速原料溶解，表1-1NaHCO3溶解度表溫度(℃)01020304050溶解度(g/100ml)6.98.159.611.112.714.45故在實(shí)際配液過程中，為加速溶解同時(shí)盡可能減少HCO3-受熱分解，應(yīng)控制配液溫度。采用不同的過濾方式也會(huì)導(dǎo)致溶液pH值變化，采用減壓過濾或加壓過濾來加快過濾速度會(huì)使CO2損失過多。因此，使用高位靜壓過濾有利于藥液pH值穩(wěn)定。為了控制pH值的穩(wěn)定性，還可以考慮在配液后向溶液中通入無菌CO2氣體。同時(shí)，日本大冢制藥有限公司生產(chǎn)的8.4%碳酸氫鈉注射液在內(nèi)外袋之間貼有指示劑試紙，若外袋發(fā)生破損使CO2泄露，則可通過指示劑貼紙的顏色變化判斷產(chǎn)品的pH是否合格。1.4主要研究內(nèi)容本課題目前已確定8.4%碳酸氫鈉注射液的處方和工藝，還需對(duì)原料藥進(jìn)行檢查，并將自研制劑與原研制劑進(jìn)行質(zhì)量對(duì)比研究，評(píng)價(jià)自研制劑的質(zhì)量是否與原研制劑保持一致。本文選擇日本大冢制藥有限公司生產(chǎn)的メイロン靜注8.4%作為原研制劑，參照《中國藥典》2020版和原研制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)自研制劑進(jìn)行原料藥的檢查，建立碳酸氫根的含量檢查方法，進(jìn)行自研制劑與原研制劑的對(duì)比研究。對(duì)比研究包括：性狀、鑒別、pH的測定、含量測定、重金屬和砷鹽限度的控制。此外，為考察自研制劑在低溫下的穩(wěn)定性，進(jìn)行凍-融試驗(yàn)。2原料藥檢查2.1儀器與試藥2.1.1儀器超純水制造機(jī)（四川優(yōu)普超純科技有限公司）；萬用電爐（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；萬分之一天平（ACCULABALC-110.4）2.1.2試藥藥用碳酸氫鈉（原產(chǎn)地：泰國）；注射用水（自制）；酚酞（上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站試劑廠）；氫氧化鈣（成都市科龍化工試劑廠）。2.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.2.1性狀《中國藥典》2020年版中規(guī)定，碳酸鈉原料藥是一種無味的白色晶體狀粉末，溶于水，不溶于酒精。該批原料檢測結(jié)果：為白色結(jié)晶、無臭；在水中溶解，在乙醇中不溶。2.2.2鑒別參考《中國藥典》2020年版中規(guī)定，原料藥應(yīng)顯鈉鹽和碳酸氫鹽的鑒別反應(yīng)。鈉鹽：將鉑絲浸入鹽酸，沾上原料藥，于無色火焰中點(diǎn)燃，呈亮黃色。碳酸氫鹽：碳酸氫鹽：取原料藥1.0g溶于20ml水后，加入稀鹽酸，有大量氣泡生成即暴沸，將二氧化碳?xì)怏w導(dǎo)入氫氧化鈣溶液中，有白色沉淀生成。該批原料進(jìn)行了鑒別：鈉鹽和碳酸氫鹽均呈正反應(yīng)。2.2.3檢查碳酸根：按日本藥典2016年版(JP17)中方法，在不超過15℃的環(huán)境下，將1.0g碳酸氫鈉原料藥溶解于20ml新鮮煮沸并冷卻的水中，輕輕攪拌溶解后。加入2.0ml0.1mol/L的鹽酸和2滴酚酞指示劑。沒有立即出現(xiàn)紅色，即符合標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)檢驗(yàn)，該批原料沒有立即出現(xiàn)紅色。堿度：按《中國藥典》2020年版中方法，取本品0.20g，加水20ml使溶解，按通則0631測定，pH值不得過超過8.6。經(jīng)檢驗(yàn)，該批原料pH值為過8.1，符合要求。2.3本章小結(jié)自研制劑所用原料藥經(jīng)過性狀、鑒別、檢查后，符合《中國藥典》2020年版和JP17的規(guī)定，可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)以及工業(yè)生產(chǎn)中。38.4%碳酸氫鈉注射液的處方與制備3.1儀器與試藥3.1.1儀器超純水制造機(jī)(四川優(yōu)普超純科技有限公司);恒溫水浴鍋(W201D型，上海申順生物科技有限公司);萬分之一天平(ACCULABALC-110.4).3.1.2試藥藥用碳酸氫鈉(原產(chǎn)地:泰國);注射用水(自制);鹽酸(四川西隴科學(xué)有限公司)3.28.4%碳酸氫鈉注射液的處方實(shí)驗(yàn)室已確定8.4%碳酸氫鈉注射液的處方，如表3-1所示。表3-18.4%碳酸氫鈉注射液的處方名稱處方量作用碳酸氫鈉（NaHCO3）84.00g主藥注射用水加至1000ml溶劑3.3制備工藝按處方量將碳酸氫鈉投入約處方量80%的加熱至40±5℃注射用水中，攪拌使碳酸氫鈉全部溶解后，再加入注射用水至處方量。藥液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，灌裝。121℃，12min熱壓滅菌。3.4本章小結(jié)日本大冢制藥有限公司生產(chǎn)的メイロン靜注8.4%含有碳酸氫鈉、注射用水；pH值范圍7.0~8.5?！吨袊幍洹?020年版中規(guī)定，5%碳酸氫鈉注射液pH值應(yīng)為7.5-8.5（通則0631）。綜合日本原研的制劑標(biāo)準(zhǔn)和《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，確定本品中控pH值范圍為7.7-8.3。日本的主要包裝形式為共擠輸液袋+外側(cè)阻隔袋，可以避免溶液中碳酸氫鈉分解產(chǎn)生的二氧化碳?xì)怏w釋放，保持注射液碳酸氫鈉pH的穩(wěn)定。因此，本品中無需加入穩(wěn)定劑，安全性有了一定的提高。部分國產(chǎn)碳酸氫鈉注射液會(huì)加入乳酸以穩(wěn)定pH值，但由于加入乳酸之后會(huì)影響碳酸氫鈉注射液的澄明度，且經(jīng)過測試，在內(nèi)外袋之間充入二氧化碳后可以起到穩(wěn)定pH值的作用，無需再加入pH穩(wěn)定劑。48.4%碳酸氫鈉注射液的分析方法研究4.1儀器與試藥4.1.1儀器超純水制造機(jī)(四川優(yōu)普超純科技有限公司);萬用電爐(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司);恒溫水浴鍋(W201D型，上海申順生物科技有限公司);萬分之一天平(ACCULABALC-1104)4.1.2試藥藥用碳酸氫鈉(原產(chǎn)地:泰國);無水碳酸鈉AR(廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心);鹽酸AR(四川西隴科學(xué)有限公司);溴甲酚綠(成都科隆化學(xué)品有限公司);甲基紅(天津市福晨化學(xué)試劑廠)4.2試液的配制甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑：用0.1%的甲基紅乙醇20ml，加0.2%的溴甲酚綠乙醇30毫升，并將其搖勻。溴甲酚綠-甲基紅指示器的顏色變化是：pH5.2以上時(shí)，藍(lán)綠色；pH5.0時(shí)，淡紫灰到淡藍(lán)色；pH4.8時(shí)，帶淡藍(lán)色的淡粉紅色；pH4.6時(shí)，淡粉紅。鹽酸滴定液（0.5摩爾/升）：取90毫升的鹽酸，加入適量的水，攪拌均勻。將干燥的恒重碳酸鈉約0.5克，精密稱量，加入50ml水，加入10滴甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑，用本液滴定，直到溶液從綠色變成紫紅色，再用此液體滴定2分鐘，直到液體從綠色變成深紫色，然后再滴定，直到溶液從綠色變成深紫色為止。滴定結(jié)果見表4-1。由表4-1可知，鹽酸滴定液的濃度為0.5592mol/L。表4-1鹽酸滴定液的標(biāo)定結(jié)果序號(hào)123無水碳酸鈉用量(g)0.50050.50050.5001滴定液消耗體積(ml)16.9016.9016.85本液濃度(mol/L)0.55880.55880.5600平均值0.5592RSD(%)0.1%4.3專屬性驗(yàn)證專屬性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特征。根據(jù)本品處方，本品除了碳酸氫鈉和注射用水外，不含其他輔料。精密量取空白純化水6ml于錐形瓶中，加水至50毫升，加入10滴甲基紅-溴甲酚綠，用0.5592摩爾/升的鹽酸滴定液，沸騰2分鐘，冷卻到室溫，然后再滴定，直至液體從綠色變成深紫色，連續(xù)三次，滴定的結(jié)果如表4所示?？瞻讟悠匪棼}酸滴定液體積極少，證明該方法對(duì)碳酸氫根含量測定無干擾，說明此方法專屬性良好。表4-2專屬性驗(yàn)證結(jié)果序號(hào)滴定液消耗體積(ml)平均值(ml)10.070.0620.0530.054.4線性和范圍將0.25克，0.34克，0.42克，0.50克，0.59克精密稱量，溶解在50毫升的去離子水中。用0.5592摩爾/升的鹽酸滴定液，加入甲基紅-溴甲酚綠的指示劑10滴，使其從綠色變成紫紅色，再煮沸2分鐘，冷卻到室溫，然后繼續(xù)滴定直至溶液從綠色變成深紫色。滴定結(jié)果見表5。表4-3碳酸氫根含量測定線性考察結(jié)果NaHCO3取樣量（g）00.25330.33690.42020.50410.5879HCO3-質(zhì)量（g）00.18390.24460.30510.36600.4269滴定液消耗體積（ml）0.075.407.259.0510.7512.55回歸方程y=89.2600x+0.0644r=0.9999圖4-1碳酸氫根標(biāo)準(zhǔn)曲線用HCO3作為橫坐標(biāo)，用鹽酸滴定液的消耗量作為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得到了Y=89.2600×0.0644、r=0.9999的回歸公式。從回歸公式可以看出，在0.2533克至0.5879克的碳酸鈉樣品中，即碳酸氫根取樣量在0.1839g~0.4269g的范圍內(nèi)，樣品中碳酸氫根的量與所消耗鹽酸滴定液的體積線性關(guān)系良好4.5精密度4.5.1重復(fù)性試驗(yàn)分別精密量取自研制劑6份各6ml，加入水讓其達(dá)到50毫升，加入10滴甲基紅-溴甲酚綠的指示劑，用0.5592摩爾/升的鹽酸滴定液，加熱2分鐘，待冷卻到室溫后，再滴定，直到溶液從綠色變成深紫色。于一天內(nèi)滴定，考察方法的重復(fù)性。滴定結(jié)果見表5。被測成分含量水平在100%時(shí)，重復(fù)性RSD限度為1%。從表6可以看出，在連續(xù)6次的連續(xù)分析中，所得到的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%，這表明本方法的重現(xiàn)性達(dá)到了要求。表4-4碳酸氫根重復(fù)性試驗(yàn)測定結(jié)果序號(hào)自研制劑體積（ml）消耗滴定液體積v（ml）HCO3-含量（mol/L）RSD(%)16ml10.851.0110.3%210.901.016310.851.011410.871.013510.801.007610.801.0074.5.2中間精密度精密量取原研制劑6ml，在不同日期由不同分析人員，以鹽酸滴定液（0.5592mol/L）測定碳酸氫根的含量，考察方法的精密度，測定結(jié)果見表6。被測成分含量水平在100%時(shí)，中間精密度RSD限度為1%。由表4-5可知，中間精密度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%，說明該方法的中間精密度符合要求。表4-5碳酸氫根中間精密度測定結(jié)果序號(hào)試驗(yàn)人員樣品體積（ml）消耗滴定液體積（ml）HCO3-含量（mol/L）RSD(%)1A6ml11.001.0250.3%2A11.051.0303A11.001.0254B11.001.0255B10.951.0216B11.001.0254.6準(zhǔn)確度分別精密量取樣品9份各3ml，置錐形瓶中，分別加入碳酸氫鈉0.15g、0.26g、0.41g各3份，加水使成50ml，加甲基紅－溴甲酚綠混合指示液10滴，用鹽酸滴定液(0.5592mol/L)滴定至溶液由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色，煮沸2分鐘，冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液由綠色變?yōu)榘底仙５味ńY(jié)果見表4-6。碳酸氫根準(zhǔn)確度計(jì)算公式：加樣回收率（%）表4-6碳酸氫根準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果組別消耗滴定液體積（ml）測得HCO3-量（g）樣品中HCO3量（g）加入NaHCO3量（g）加入HCO3-量（g）回收率(%)均值(%)RSD(%)18.730.2990.1850.15330.1113100.8%100.1%0.6%28.750.2990.15290.1110101.3%38.700.2970.15350.1115100.2%410.850.37010.25560.185699.7%510.820.36910.25490.185199.5%610.850.37010.25570.185799.7%714.120.48170.40870.296899.9%814.110.48130.40770.2960100.1%914.100.48100.40800.296399.9%按《中國藥典》2020年版，測定的組分含量為100%，回收率為98-101%，精確度試驗(yàn)的回收率為98%~101%（RSD≤2%）。結(jié)果表明：低、中、高三組的平均回收率分別為100.1%和0.6%；結(jié)果表明，該試驗(yàn)方法的精確性達(dá)到了設(shè)計(jì)要求。4.7本章小結(jié)本文用方法學(xué)檢驗(yàn)了8.4%碳酸鈉注射液的質(zhì)量。它的專屬性、線性、范圍、精密度和精度都滿足要求，可用該含量分析方法對(duì)自研制劑與原研制劑進(jìn)行碳酸氫根的含量測定。5自研制劑與原研制劑的質(zhì)量對(duì)比研究實(shí)驗(yàn)室前期初步建立了8.4%碳酸氫鈉注射液的制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，還需將自研制劑和原研制劑進(jìn)一步進(jìn)行對(duì)比研究。對(duì)比自研制劑和原研制劑的pH值、重金屬檢查、砷鹽檢查和含量測定，研究自研制劑與原研制劑質(zhì)量的異同。5.1儀器和試藥5.1.1儀器四川優(yōu)普超純水制造技術(shù)股份有限公司；恒溫水浴鍋（上海申順生物技術(shù)有限公司W(wǎng)201D)；上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司（DHG-9140A)；pH表（METLERTOLEDO儀器有限公司，F(xiàn)iveEasy)；北京市永光明醫(yī)療器械有限公司萬用電爐。5.1.2試藥8.4%碳酸氫鈉注射液(日本大冢公司)；藥用碳酸氫鈉(原產(chǎn)地:泰國)；無8.4%碳酸氫鈉注射液(日本大冢公司)；藥用碳酸氫鈉(原產(chǎn)地:泰國)；無學(xué)品有限公司);甲基紅(天津市福晨化學(xué)試劑廠)；鹽酸AR(四川西隴科學(xué)有限公司)；95%乙醇(成都市高新區(qū)石羊化學(xué)制劑廠)；酚酞(上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站試劑廠)；醋酸銨(成都市科隆化學(xué)品有限公司)；氨水(成都金山化學(xué)試劑有限公司)；硫代乙酰胺(成都市科隆化學(xué)品有限公司)；丙三醇AR(廣東光華科技股份有限公司)；氫氧化鈉AR(成都市科龍化工試劑廠)。5.2pH值碳酸氫鈉不穩(wěn)定，在生產(chǎn)過程中容易受熱分解產(chǎn)生二氧化碳?xì)怏w，使溶液pH值升高。故對(duì)碳酸氫鈉注射液的pH值進(jìn)行控制是保證產(chǎn)品質(zhì)量和臨床用藥安全的重要環(huán)節(jié)?！吨袊幍洹?020年版規(guī)定5%碳酸氫鈉注射液pH值為7.5-8.5，《日本藥典》2016年版規(guī)定8.4%碳酸氫鈉注射液pH值為7.0-8.5，目前還需對(duì)自研制劑和原研制劑分別進(jìn)行pH測試，確認(rèn)pH值的控制.用pH計(jì)或酸性計(jì)來測量該溶液的pH。pH儀包括作為指示電極的玻璃電極和作為參比電極的飽和甘汞或銀-氯化銀。在測試之前，使用兩種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正儀器，使儀器斜率為95~105%，然后，將pH值在0-30mV或±0.5pH范圍內(nèi)，然后將pH值在兩種修正緩沖劑中，并盡可能靠近試驗(yàn)對(duì)象，其示數(shù)應(yīng)該與檢驗(yàn)緩沖劑的規(guī)定值相差不超過±0.05pH。5.2.1標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的配制本次實(shí)驗(yàn)室使用的pH計(jì)采用了鄰苯二甲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖劑（pH=4.01）和標(biāo)準(zhǔn)硼砂緩沖劑（pH=9.18）。鄰苯二甲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖劑：10.21克鄰苯二甲酸氫鉀，經(jīng)精密稱量，于115~5℃下干燥2~3h，用水溶解，稀釋到1000毫升。硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：用精密稱重3.81克，防止風(fēng)化，加入水后，用水溶解，稀釋到1000毫升。5.2.2pH值測定分別使用鄰苯二甲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(pH=4.01)和硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(pH=9.18對(duì)pH計(jì)進(jìn)行校正后，分別測量自研制劑和原研制劑的pH值，樣品重復(fù)三次。每次更換標(biāo)準(zhǔn)緩沖液或測量供試品液之前，需用純化水充分洗滌電極，再用濾紙將電極表面的水分吸盡。結(jié)果見表5-1。表5-1自研制劑和原研制劑pH值的測定結(jié)果序號(hào)123平均值自研制劑pH8.248.168.288.23原研制劑pH8.408.368.428.39自研制劑pH值為8.23，原研制劑pH值為8.29。原研制劑的規(guī)定pH值范圍為7.0-8.5，均符合規(guī)定。5.3重金屬檢查重金屬檢查法所規(guī)定的重金屬指能與硫代乙酰胺或硫化鈉能發(fā)生顯色反應(yīng)的金屬雜質(zhì)，一般是鉛(Pd)與顯色劑發(fā)生反應(yīng)。碳酸氫鈉易溶于水，故可選用《中國藥典》2020版四部0821第一法硫代乙酰胺法進(jìn)行測定。5.3.1實(shí)驗(yàn)方法將0.1599克的硝酸鉛精確稱出，加入5ml硝酸和50ml的水，使其穩(wěn)定到1000毫升。在使用之前，將10ml的儲(chǔ)備液精確地倒入1000毫升的容量瓶子中，用水稀釋到刻度，然后搖晃，得到標(biāo)準(zhǔn)的鉛液?，F(xiàn)在就可以使用標(biāo)準(zhǔn)的鉛水，不可超過當(dāng)日。取五支25ml的納氏比色管，編號(hào)為甲、乙、丙、丁、戊。納氏比色管應(yīng)該表面光滑、無劃痕、無瑕疵，三支比色管的色澤、內(nèi)徑和刻度線應(yīng)一致。向甲管中加入標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液0.6ml、醋酸鹽緩沖液（pH=3.5）2ml，加入適量蒸餾水使成25ml。向乙管中加入自研產(chǎn)品20ml，并緩緩加入稀鹽酸8ml，邊加邊攪拌，待不再產(chǎn)生明顯氣泡后將溶液煮沸，溶液體積濃縮至約20ml后，停止加熱，冷卻后，加1滴酚酞指示劑，用氨試液調(diào)整pH，直到溶液呈粉色，冷卻后，加入2毫升乙酸鈉緩沖液（pH=3.5)，然后加入適當(dāng)?shù)恼麴s水，直到25毫升。向丙管中加入自研產(chǎn)品20ml，同乙管操作，加入稀鹽酸8ml并將溶液體積濃縮至約20ml，放冷后加1滴酚酞指示液，使用氨試液調(diào)節(jié)pH值，直至溶液顯粉紅色，冷卻至室溫后，添加2毫升pH為3.5的乙酸鹽緩沖液，0.6毫升標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液，加入適當(dāng)?shù)恼麴s水到25毫升。向丁管中加入原研產(chǎn)品20ml，并緩緩加入稀鹽酸8ml，邊加邊攪拌，待不再產(chǎn)生明顯氣泡后將溶液煮沸，溶液體積濃縮至約20ml后，不再加熱，放冷，加1滴酚酞指示液，并滴加氨試液調(diào)節(jié)溶液pH值，直至溶液顯粉紅色，放冷后，加入2ml醋酸鹽緩沖液（pH=3.5），再加入適量蒸餾水使成25ml。向戊管中加入原研產(chǎn)品20ml，同乙管操作，加入稀鹽酸8ml并將溶液體積濃縮至約20ml，放冷后加1滴酚酞指示液，使用氨試液調(diào)節(jié)pH值，直至溶液顯粉紅色，冷卻至室溫后，加入醋酸鹽緩沖液（pH=3.5）2ml、0.6毫升標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液，加入適當(dāng)?shù)恼麴s水到25毫升。同時(shí)將2ml的硫化乙酰胺試液倒入甲、乙、丙、丁、戊管中，并搖勻，放置2分鐘。將三支納氏比色管直立于白紙上，目光自上而下觀察，將五管分為甲、乙、丙和甲、丁、戊兩組，比較兩組內(nèi)三管的顏色深淺。5.3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果將甲、乙、丙和甲、丁、戊分為兩組分別進(jìn)行比較。顏色深淺程度為丙管＞甲管＞乙管；戊管＞甲管＞丁管。本實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液加入量為0.6ml，對(duì)應(yīng)重金屬限度為千萬分之三。結(jié)果表明，自研制劑和原研制劑的重金屬含量均在千萬分之三限度以內(nèi)。5.4砷鹽的檢查砷常在藥物生產(chǎn)過程中由無機(jī)試劑引入。常用的檢查方法有古蔡氏法、二乙基二硫化氨基甲酸銀工藝。本品采用《中國藥典》第2020版08221號(hào)蔡氏方法測定砷的含量。古蔡法檢取砷鹽的方法是：氫氣與藥品中的砷鹽發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，使其與溴化汞試紙片發(fā)生黃褐色的砷斑。5.4.1實(shí)驗(yàn)方法精密稱量0.132g三氧化二砷，用5毫升20%的氫氧化鈉溶液溶解，加少量的稀硫酸，再加入10ml稀釋的硫酸，最后用蒸餾水定容到1000毫升。在使用之前，將10ml的砷儲(chǔ)液精密量，放入1000毫升的容量瓶子中，加10ml稀釋的硫酸，使其體積均勻，搖動(dòng)，得到標(biāo)準(zhǔn)砷的溶液。標(biāo)準(zhǔn)砷點(diǎn)的制作：取大約60mg醋酸鉛棉花，用細(xì)玻璃棒裝入導(dǎo)氣管C中，高度約60-80mm。將可以完全蓋住孔徑，將溴化汞試紙片放置在螺桿D的末端，擰緊螺帽E。將2ml標(biāo)準(zhǔn)砷液精密計(jì)量，放入A瓶，加入鹽酸5毫升，蒸餾水23毫升，加入碘化鉀5毫升，加入5毫升碘化鉀，5毫升酸性氯化亞錫溶液5滴，混合后，在室溫下放置10分鐘。將2g鋅粉加到A瓶中，然后用導(dǎo)管C封住A瓶，然后將A瓶放入40℃的水浴中，45分鐘后，從設(shè)備中取出溴化汞試片。樣品中的砷點(diǎn)的制備：取自研制劑和原研制劑的8.4%碳酸氫鈉注射液25ml于A瓶中，加入5ml的鹽酸，然后按照標(biāo)準(zhǔn)的方法，從“5ml碘化鉀溶液中加入5ml”開始操作。將自研制劑、原研制劑砷斑色與標(biāo)準(zhǔn)砷斑的對(duì)比分析。5.4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果自研制劑砷斑和標(biāo)準(zhǔn)砷斑顏色相比較，標(biāo)準(zhǔn)砷斑顏色更深。原研制劑砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷斑顏色相比較，標(biāo)準(zhǔn)砷斑顏色更深。經(jīng)計(jì)算，自研制劑和原研制劑的砷鹽含量均在億分之八以內(nèi)。5.5含量測定分別精密量取自研制劑和原研制劑6ml（大約等于0.5克碳酸氫鈉），加入水，共計(jì)50毫升，加入10滴甲基紅-溴甲酚綠，用鹽酸滴定液（0.5592摩爾/升），直到溶液從綠色變?yōu)樽霞t色，再加熱2分鐘，冷卻后，繼續(xù)滴定，直至溶液從綠色變?yōu)樯钭仙匝兄苿┖驮兄苿┖繙y定滴定結(jié)果分別見表5-1、5-2。表5-2自研制劑含量測定結(jié)果序號(hào)123滴定液消耗體積體積(ml)10.8510.910.85碳酸氫鈉（g）0.50970.51210.5097含量（%）101.1%101.6%101.1%平均含量%101.27%表5-3原研制劑含量測定結(jié)果序號(hào)123滴定液消耗體積體積(ml)11.1511.1011.05碳酸氫鈉（g）0.52380.52150.5191含量%103.9%103.5%103.0%平均含量%103.47%由表5-2、5-3可知自研制劑的含量為101.27%，原研制劑的含量為103.47%；符合《中國藥典》2020年版規(guī)定的95-105%范圍內(nèi)，符合《日本藥典》2016年版規(guī)定的95.0-105.0%范圍內(nèi)。5.6本章小結(jié)參照相關(guān)指南，結(jié)合藥典標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行自研制劑和原研制劑的pH值、重金屬、砷鹽檢查和含量測定進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)均符合《中國藥典》2020年版或《日本藥典》2016年版標(biāo)準(zhǔn)要求。比較兩者的結(jié)果，表明自研制劑和原研制劑質(zhì)量一致。6穩(wěn)定性考察穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)主要研究藥品在外界條件如溫度、濕度、光照等條件下，藥物的品質(zhì)發(fā)生的變化和變化規(guī)律。通過對(duì)藥物的穩(wěn)定性的研究，可以為藥物的生產(chǎn)工藝、包裝方法、貯存條件和運(yùn)輸途徑提供參考，為藥物的有效期提供科學(xué)的依據(jù)?！吨袊幍洹?020版將穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)劃分為三大類：影響因素實(shí)驗(yàn)、加速實(shí)驗(yàn)和長期實(shí)驗(yàn)。由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間有限，沒有進(jìn)行長時(shí)間的加速和長時(shí)間的實(shí)驗(yàn)，而采用了低溫條件下的凍融法。凍-融試驗(yàn)（熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)）主要針對(duì)難溶性藥物注射劑、凝膠等外用制劑、脂質(zhì)體和納米粒等新劑型進(jìn)行研究。對(duì)于溶解度隨溫度變化的藥物，將其冰凍后的重新置于常溫下，再溶解性能可能會(huì)隨之變化。20℃環(huán)境下，本品中的碳酸氫鈉完全溶解，而10℃及其更低溫度時(shí)，本品中所含碳酸氫鈉已經(jīng)超出了溶解度，溶液中可能有不溶性晶體析出。本實(shí)驗(yàn)以pH值、析出作為測量標(biāo)準(zhǔn)，考察藥液中溶解的碳酸氫鈉在4℃和-20℃從溶液中析出后于在室溫環(huán)境下的再溶解性。6.1實(shí)驗(yàn)方法將自研制劑分為兩組，分別標(biāo)記為A組和B組，A組放于4℃條件下兩天后，在室溫下放置2天，循環(huán)3次，于第2、第4、8、12天取樣，并進(jìn)行pH測定。B組于-20℃下置2天，于2天后于室溫下循環(huán)3次，于第2、4、8、12天取樣、觀測pH。第2天，分別從A組和B組取一個(gè)放置在4℃和-20℃的樣品，放于室溫中觀察是否結(jié)晶或析出固體，若結(jié)晶或析出固體，記錄融化時(shí)間或固體完全溶于藥液的時(shí)間。6.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果將A組和B組分別在4℃和-20℃條件下放置后，取出樣品觀察。4℃的樣品液體澄清透明，無不溶性沉淀；-20℃的樣品呈白色結(jié)晶，在室溫放置35min后完全溶解，無不溶性沉淀，同時(shí)測定恢復(fù)溶解后樣品的pH值，結(jié)果見表6-1。表6-1凍-融實(shí)驗(yàn)結(jié)果D1D2D4D8D12A組pH值8.238.268.078.288.27B組pH值8.238.238.088.278.18在4℃和-20℃條件下，對(duì)自研制劑進(jìn)行考察，將制劑放回室溫后析出晶體均能完全溶解，且在考察時(shí)間內(nèi)，pH值保持穩(wěn)定，且均符合規(guī)定。結(jié)果表明，該制劑的pH值不受低溫和冷凍影響