新一代無創(chuàng)產(chǎn)前篩查技術NIPT2.0臨床應用策略專家共識

【摘要】新一代無創(chuàng)產(chǎn)前篩查技術(NIPT2.0)是近年來基于高通量測序成功實現(xiàn)的對胎兒染色體非整倍體、微缺失/微重復綜合征和顯性單基因遺傳病進行遺傳病、對部分染色體異常(尤其是13三體、性染色體異常和部分微缺失/微重復綜合征)檢測不夠準確、陽性預測值較低的缺陷。如何合理、規(guī)范地應用NIPT2.0,最大限度地發(fā)揮出生缺陷是影響我國人口質量的重要因素.有研究顯示，3%~5%的活產(chǎn)兒存在出生缺陷[1],15%~25%的出生缺陷是由遺傳性疾病所致[2],其中染色體異常和單基因遺傳病為最主要基于母體外周血游離DNA(cellfreeDNA,cfDNA)的無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(nonGinvasiveprenataltesting,NIPT)技術已在全球得到了廣泛的應用，成為染色體非整倍體產(chǎn)前篩查的重要手段。2023年美國醫(yī)學遺傳學與基因組學學會(AmericanCollegeofMedicalGeneticsandGenomics,ACMG)強烈建議對所有單胎和雙胎妊娠孕婦進行胎兒21三體、18三體NIPT篩查[3]。近年來，擴展性無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(NIPTPlus)將NIPT技術擴展到了染色體微缺(9)醫(yī)師認為明顯影響結果準確性的其他情形。除外上述不適用情形，在孕婦或其家屬充分知情同意的前提下，可選擇NIPT2.0。1.4目標疾病NIPT2.0應優(yōu)先考慮發(fā)病率高、后果嚴重、基因型與表型關聯(lián)明確的疾病進行檢測。對這些疾病進行篩查，能夠提供重要的生育決策信息，同時有助于改善圍產(chǎn)期的管理與治療，從而改善患者的生活質量。1.4.1染色體非整倍體優(yōu)先考慮的常染色體非整倍體至少應包含21、18、13三體(T21、T18和T13)。其他的常染色體非整倍體、性染色體異常(表1)等，除45,X外，基于現(xiàn)有的證據(jù)不建議常規(guī)進行報告，但鑒于其可以提示一些妊娠并發(fā)癥，建議作為意外發(fā)現(xiàn)進行報告，以收集相關疾病更多的證據(jù)。作為意外發(fā)現(xiàn)報告的性染色體異常，不建議報告具體的異常核型，而是僅報告為“性染表1建議NIPT2.0可報告的染色體非整倍體序號疾病名稱區(qū)域報告類別115三體綜合征意外發(fā)現(xiàn)報告216三體綜合征意外發(fā)現(xiàn)報告322三體綜合征意外發(fā)現(xiàn)報告445,X綜合征可常規(guī)報告547,XXX綜合征意外發(fā)現(xiàn)報告647,XXY綜合征意外發(fā)現(xiàn)報告747,XYY綜合征意外發(fā)現(xiàn)報告1.4.2染色體微缺失/微重復綜合征根據(jù)現(xiàn)有報道，表2所列舉的11種常見微缺失綜合征相對發(fā)病率高、后果嚴重，基因型與表型的關聯(lián)較為明確[21]。對于探針覆蓋區(qū)域意外發(fā)現(xiàn)的評級為致病性(P)或疑似致病性表2建議納入NIPT2.0篩查范圍的常見染色體微缺失綜合征關鍵區(qū)域(GRCh38)2Chr22:18924718-21111383(GeneRe1p36缺失綜合征Chrl:10001-12780116(DEC3Chr4:1567470-2108509(DEC4Chr5:10001-12533192(DEC567Chr15:22677345-28193120(DECIPHER)&.Chr15:23374765-28193120(DEC8Chr15:22677345-28193120(DECIPHER)&.Chr15:23374765-28193120(DEC9Chr17:16869758-20318836(DEC1.4.3顯性單基因遺傳病疾病選擇的一般原則包括發(fā)病率較高(如≥1/100000)、表型2檢測前咨詢以及知情同意胎兒患病的可能性，孕婦須按時進行后續(xù)的常規(guī)產(chǎn)前檢查；(3)應告知影響檢測結果的可能因素。這些因素在本文第6部分有詳細闡述；表3建議納入NIPT2.0篩查范圍的基因及其所致的顯性遺傳性單基因遺傳病123456789努南樣綜合征結節(jié)性硬化1型結節(jié)性硬化2型曲骨發(fā)育不全FGFR3SOS1RAF1RIT1SOS2CBLRAD21HDAC8MECP2NSD1FGFR2FGFR2FGFR2眼淚管-耳-齒-指(趾)綜合征33X連鎖顯性點狀軟骨發(fā)育不良EBP35軟骨成長不全Ⅱ型或軟骨發(fā)育36Stickler綜合征1型COL2A138神經(jīng)纖維瘤1型NF139神經(jīng)纖維瘤2型NF23臨床應用路徑3.1樣本采集、運輸和存儲按照無菌操作要求，用游離DNA保存管(遠距離運輸時)或EDTA抗凝管(院內實驗室檢測)3.2血漿游離DNA提取、文庫構建、雜交捕獲、上機測序和數(shù)據(jù)分析本條目僅適用于基于靶向捕獲高深度測序技術進行染色體異常和顯性單基因遺傳病的對于單基因遺傳病，捕獲探針應覆蓋目標基因的全部外顯子以及外域，如+10/-10個堿基。3.3變異解讀CNV進行定期(如每6個月)回顧分析。如發(fā)現(xiàn)臨床意義不明的變異(variantofunc3.4報告撰寫3.5樣本與資料信息的保存標本、信息和資料的保存期限應不少于3年.3.6妊娠結局隨訪和數(shù)據(jù)總結采血機構應當對孕婦的妊娠結局進行追蹤，建議隨訪至分娩后1年。隨訪內容應包括：造成的檢測失敗率控制在不超過5%。4檢測后的遺傳咨詢及干預能性.應強調檢測結果不能作為最終的產(chǎn)前診斷結果，要求孕婦按時進行后續(xù)的常規(guī)產(chǎn)前檢對篩查結果為染色體異常高風險者，可按現(xiàn)有流程選擇適宜的產(chǎn)前amplification,MLPA)和熒光定量PCR等mesequencing,WES)進行產(chǎn)前診斷.對經(jīng)產(chǎn)前診斷確診者(真陽性),在遺傳咨詢時應充分與5.1知情同意原則細說明NIPT2.0的適用范圍和局限性5.2檢測前質量控制5.3檢測中質量控制機測序)區(qū)等5個區(qū)域。有條件者可設置6個分區(qū)，即試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增前區(qū)、5.4檢測后質量控制檢測報告需由具備相關資質的2人核對審核后方可簽發(fā)，審核人應具備副高級或以上相6局限性6.5科學發(fā)展水平的局限性的疾病(如疾病表型不完全外顯或嚴重程度有較強異質性),須在患者對檢測局限性充分知6.6其他局限【推薦意見1】對新發(fā)突變導致的顯性單基因遺傳病進行產(chǎn)前篩查是出生缺陷防控的重要手段。(贊成率100%)【推薦意見2】對胎兒染色體非整倍體、微缺失/微重復綜合征和顯性單基因遺傳病進累其在普通孕婦人群中的檢測數(shù)據(jù)以全面評估其性能。(贊成率100%)【推薦意見3】NIPT2.0適用于孕12+0~22+6周的單胎妊娠孕婦。對于孕周>22+6者，存在產(chǎn)前診斷和臨床決策時間較晚的風險。(贊成率96.55%)【推薦意見4】夫婦一方或雙方具有明確的染色體異常或基因變異、有家族史或不良孕產(chǎn)史、影像學檢查提示胎兒有結構異常等具有產(chǎn)前診斷指征的孕婦，不推薦NIPT2.建議進行產(chǎn)前診斷。(贊成率100%)【推薦意見5】NIPT2.0應優(yōu)先考慮對發(fā)病率高、表型嚴重、基因型與表型關聯(lián)明確的成率100%)[1]MaiCT,IsenburgJL,CanfieldMA,etal.esformajorbirthdefects,2010-[2]BrentRL.Environmentalcausesofhumancongenitalmalformations:tiplicityofenvironmentalandgeneticfactors[J].Pediatrics,2004,113(4Suppl):mics(ACMG)[J].GenetMed,2023,25(2):100336.DOI:10.1016/j.gim.2022.11.004.Erratumin:GenetMed,2023,25(8):100874.DOI:10.1016/j.gim.2023.100874.[4]LiangDS,CramDS,TanH,etal.Clinicalutilityofnoninvasive998-2006.DOI:10.1038/s41436-019-0467-4.[5]ShiPL,WangY,LiangHB,etal.Thepotentialofexpandednoninvasiveprenatalscreeningfordetectionof[6]WangCH,TangJX,TongKT,etal.Expandingtheapplicationofnon-ieprenataltestinginthedetectionoffoetalchromosomalcopynumbervariations[J].BMCMedGenomics,2021,14(1):292.DOI:10.1186/s12920-021-01131-6.[7]ChenYS,LuLKY,Zhangiveprenataltestingforfetalchromosomeapregnancies[J].AmJMedGenetA,2022,188(5):1426-1434.DOI:10.1002/a[8]YangYP,MuznyDM,Xiadforclinicalwhole-exomesequencing[J].JAMA,2014,312(18):1870-1879.DOI:10.diagnosisofMendeliandisorders[J].NEnglJMed,2013,369(16):1502-1511.DOI:[11]JónssonH,SulemP,KehrB,etal.Parentalinfluenceonhumangermlined22.DOI:10.1038/nature24018.[12]MohanP,LemoineJ,TrotterC,etalveprenatalscreeningforsingle-genedisorders[J].Ultr2022,59(1):33-39.DOI:10.1002/uog[13]KovacJR,AddaiJ,SmithRP,etal.Theeffectsof[14]deLaRochebrochardE,Thonneaut,2011,28(2):167-172.DOI:10.1007/s10815-010-9489-1.[16]ChittyLS,KhalilA,BarrettAN,etal.Safe,softhanatophoricdysplasiausinggn,2013,33(5):416-423.DOI:10.1002/pd.4066.NatMed,2019,25(3):439-447.DOI:10.1038/s41591-018-0334-x.[18]XuCM,LiJL,ChenSC,etal.Gcell-freeDNAinmaternalplasmaenascreening[J].CellDiscov,2022