犬糖類抗原125（CA125）ELISA檢測試劑盒使用說明書

第第頁犬糖類抗原125（CA125）ELISA檢測試劑盒使用說明書本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷犬（Canine）糖類抗原125（CA125）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被糖類抗原125（CA125）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并che底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖類抗原125（CA125）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保管方法1.血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避開任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞快速小心地分別。2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。3.細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。5.保管：假如樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于20℃，避開反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1.酶標儀（450nm）2.高精度加樣器及槍頭：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒溫箱操作注意事項1.試劑盒保管在28℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結晶wan全溶解后再使用。2.試驗中不用的板條應立刻放回自封袋中，密封（低溫干燥）保管。3.濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；依照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最結束果乘以5才是樣本實際濃度。4.嚴格依照說明書中標明的時間、加液量及次序進行溫育操作。5.全部液體組分使用前充分搖勻。試劑盒構成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無停止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注：標準品（S0S5）濃度依次為：0、4、8、16、32、64U/ml試劑的準備20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。2.自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；3.樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入停止液50μL，15min內，在450nm波優(yōu)點測定各孔的OD值。結果推斷繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。試劑盒性能1.準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900、2.靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0U/ml。3.特異性：不與其它可溶性結構仿佛物交叉反應。4.重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于15%。5.貯藏：28℃，避光防潮保管。6.有效期：6個月免