生物堿類藥物的分析課件學習教案

會計學1生物堿類藥物的分析典型藥物的結構

第1頁/共127頁第2頁/共127頁第3頁/共127頁第4頁/共127頁第5頁/共127頁第6頁/共127頁第7頁/共127頁第8頁/共127頁第9頁/共127頁二、生物堿類藥物的通性

1.堿性季銨堿＞脂肪胺、脂環(huán)胺＞芳胺、N—芳雜環(huán)＞酰胺小檗堿＞麻黃堿、阿托品＞罌粟堿＞咖啡因嗎啡具酸堿兩性

第10頁/共127頁2.溶解性游離生物堿不溶或難溶于水，能溶或易溶于有機溶劑，在稀酸中成鹽而溶解生物堿鹽類易溶于水，不溶于有機溶劑

第11頁/共127頁3.旋光性一般多為左旋體有效。

第12頁/共127頁第二節(jié)鑒別試驗

一、特征鑒別反應（一）雙縮脲反應

側鏈具有氨基醇結構第13頁/共127頁（二）Vitali反應托烷生物堿

第14頁/共127頁（三）綠奎寧反應

硫酸奎寧、硫酸奎尼?。ㄋ模㎝arquis反應嗎啡生物堿

第15頁/共127頁（五）Frohde反應嗎啡生物堿

第16頁/共127頁（六）官能團反應吲哚生物堿

1.利血平+新制香草醛→玫瑰紅色2.第17頁/共127頁（七）紫脲酸胺反應黃嘌啉類生物堿

第18頁/共127頁（八）還原反應嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反應第19頁/共127頁二、一般鑒別反應（一）熔點測定法（二）沉淀反應

第20頁/共127頁常用的生物堿沉淀試劑為：

1.重金屬鹽類，如K2HgI4、KBiI4、I2—KI、二氯化汞等；

2.大分子酸類，如磷鉬酸、硅鎢酸等。第21頁/共127頁（三）顯色反應常用的顯色試劑：濃硫酸、濃硝酸、鉬硫酸、釩硫酸、硒硫酸、甲醛硫酸等第22頁/共127頁（四）UV（五）IR（六）色譜法

1.HPLC2.TLC第23頁/共127頁

硅膠為吸附劑：游離生物堿能順利遷移，生物堿鹽類吸附太牢，造成嚴重拖尾。解決方法：（1）在展開劑中加少量的堿性試劑，如氨、二乙胺、有機脂烴胺類；（2）硅膠板用堿處理第24頁/共127頁第三節(jié)特殊雜質檢查

特殊雜質檢查主要根據(jù)藥物與雜質的理化性質差異來進行。第25頁/共127頁

利用藥物和雜質在顏色、溶解行為、旋光性質、對光吸收選擇性等物理性質上的差異，檢查雜質是否符合限量規(guī)定一、物理法第26頁/共127頁

利用藥物與雜質在揮發(fā)性、臭味等方面的差異進行檢查。（一）臭味及揮發(fā)性的差異ChP（2000）麻醉乙醚中異臭的檢查取本品10ml，置瓷蒸發(fā)皿中，使自然揮發(fā)，揮散完畢后，不得有異臭。第27頁/共127頁（二）顏色的差異ChP（2000）鹽酸阿撲嗎啡[檢查]分解產(chǎn)物

取本品0.10g，加無水氧化物的乙醚5ml，振搖后，乙醚液只許顯極淡的紅色。第28頁/共127頁（三）溶解行為的差異

利用藥物與雜質在溶解性方面的差異進行檢查。如葡萄糖中糊精的檢查。第29頁/共127頁（四）旋光性質的差異ChP（2000）硫酸阿托品[檢查]莨菪堿

取本品，按干燥品計算，加水制成每1ml中含50mg的溶液，依法測定（附錄ⅥE），旋光度不得過–0.40°。第30頁/共127頁（五）對光吸收性質的差異——分光光度法第31頁/共127頁

利用藥物與雜質在紫外吸收光譜方面的差異進行檢查。1.紫外分光光度法第32頁/共127頁例1.中國藥典（2000年版）規(guī)定腎上腺素中檢查腎上腺素酮的方法為：取本品，加鹽酸溶液（9→2000）制成每1ml中含2.0mg的溶液，于310nm波長處測定，吸收度不得超過0.05，已知腎上腺素酮在310nm波長處的為453，腎上腺素在該波長處無吸收。請計算腎上腺素酮的限量應為（D）A.0.1％B.0.5％C.0.04％D.0.06%E.0.0002％第33頁/共127頁第34頁/共127頁2.IR

用于藥物中無效或低效晶型的檢查。利用藥物與雜質有特征峰差異進行檢查。如甲苯咪唑中A晶型的檢查、無味氯霉素混懸劑中A晶型的檢查。X—射線粉末衍射法第35頁/共127頁3.原子吸收分光光度法

主要用于金屬元素的檢查，具有靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點。如肝素鈉中鉀鹽的檢查。第36頁/共127頁（六）吸附或分配性質的差異—色譜法

1.TLC

（1）雜質對照品法

（2）高低濃度對比法

第37頁/共127頁（3）參比雜質對照品法選用可能存在的某種物質作為雜質對照品。（4）選用質量符合規(guī)定的與供試品相同的藥物作為雜質對照品。第38頁/共127頁2．紙色譜

用于極性較大藥物中雜質的檢查或放射性藥物注射液（或溶液）中放射化學雜質的檢查。如地高辛中洋地黃毒苷的檢查。

缺點：展開時間長，斑點擴散，不能用強酸等腐蝕性顯色劑

第39頁/共127頁3．HPLC

（1）內標法加校正因子測定供試品中某個雜質的含量

準確測定雜質含量

方法

內標物+雜質對照品→對照溶液，進樣，測定，計算校正因子

第40頁/共127頁

供試品+內標→供試品溶液，進樣，測定雜質和內標峰面積或峰高，計算雜質含量第41頁/共127頁

（2）外標法測定供試品中某個雜質的含量供試品→供試品溶液

雜質對照品→對照品溶液進樣，測定，計算雜質的含量

第42頁/共127頁

缺點：不易準確控制進樣量，宜用定量環(huán)進樣

第43頁/共127頁（3）加校正因子的主成分自身對照法方法

待測成分對照品+雜質對照品→溶液，進樣，記錄色譜圖，計算雜質的校正因子第44頁/共127頁

分別進樣，供試品溶液的記錄時間除另有規(guī)定外，應為主成分保留時間的若干倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質的峰面積，分別乘以相應的校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較，依法計算各雜質含量。第45頁/共127頁（4）不加校正因子的主成分自身對照法

無雜質對照品，且雜質峰面積與主成分峰面積相差懸殊時應用。

方法第46頁/共127頁

分別進樣，測定供試品溶液中各雜質峰面積及其總和，與對照溶液主成分峰面積比較，控制供試品中雜質的量。

第47頁/共127頁

缺點：檢測波長處，各雜質和藥物的吸收強度可能有差異，準確度差

優(yōu)點：不需雜質對照品，可同時控制各個雜質及其總量限度

第48頁/共127頁（5）面積歸一化法

取一定量供試品溶液進樣，測定各雜質及藥物的峰面積，計算各雜質峰面積及其總和占總峰面積的百分率，不能超過限量。注意溶劑峰不應計算在總峰面積內。第49頁/共127頁

優(yōu)點：不需雜質對照品，簡便易行。

缺點：檢測波長處，各雜質和藥物的吸收強度可能有差異，控制雜質峰面積百分率不一定就是雜質限量，準確度差。

第50頁/共127頁4．GC用于藥物中揮發(fā)性雜質的檢查。如藥物中有機溶劑殘留量測定。檢查方法同HPLC。

第51頁/共127頁二、化學法

利用藥物與雜質在化學性質上的差異進行檢查。如阿司匹林中水楊酸的檢查。第52頁/共127頁98：77．乙醇中檢查雜醇油是利用（C）A.顏色的差異B.旋光的差異C.臭味及揮發(fā)性的差異D.對光選擇吸收的差異E.溶解行為的差異第53頁/共127頁例.藥物中特殊雜質的檢查方法有（ABCDE）A．沉淀法與顏色法B．滴定法C．旋光法D．分光光度法E．色譜法第54頁/共127頁例.HPLC檢查藥物中雜質的具體方法有（ABCDE）A．峰面積歸一化法B．主成分自身對照法C．內標法D．外標法E．內標法加校正因第55頁/共127頁例.最常用于藥物中特殊雜質檢查的方法是(A)A.TLCB.IRC.UVD.MSE.NMR第56頁/共127頁例.紅外分光光度法在雜質檢查中主要用于（A）A.藥物中無效或低效晶型的檢查B.雜質特征峰的確定C.雜質相關峰的確定D.雜質官能團的確定E.藥物和雜質的鑒別第57頁/共127頁一、非水溶液滴定法（非水堿量法）

原料藥（一）原理

水溶液中滴定突躍不明顯，在非水介質中，堿性增強，使滴定順利進行第四節(jié)含量測定第58頁/共127頁

1.溶劑酸性溶劑：冰醋酸、冰醋酸+醋酐、醋酐惰性溶劑：苯、氯仿、四氯化碳能影響溶質的解離情況和能影響酸堿強度很大的溶劑：硝基甲烷、丙酮、二氧六環(huán)

第59頁/共127頁2.滴定劑：高氯酸的冰醋酸溶液或高氯酸的二氧六環(huán)溶液3.指示終點的方法電位法：玻璃—甘汞電極系統(tǒng)

指示劑法：結晶紫、喹哪啶紅等第60頁/共127頁

有機堿及其鹽類及有機酸堿金屬鹽類8＜pKb＜10冰醋酸作溶劑10＜pKb＜12冰醋酸+醋酐pKb＞12醋酐（二）適用范圍第61頁/共127頁

一般采用半微量法。中國藥典（2000年版）的測定方法為：取經(jīng)適當方法干燥的供試品適量〔約消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）8ml〕，加冰醋酸10～30ml使溶解。若供試品為氫鹵酸鹽，應再加5％醋酸汞的冰醋酸溶液3～5m1，加各藥品項下規(guī)定的指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定結果用空白試驗校正。（三）一般測定方法第62頁/共127頁

取本品約0.15g，精密稱定，加醋酐—冰醋酸（5∶1）的混合液25ml，微熱使溶解，放冷，加結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液顯黃色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于19.42mg的C8H10N4O2。咖啡因

ChP(2000)第63頁/共127頁（四）生物堿鹽類的滴定

置換滴定：

無機酸在冰醋酸中的酸性次序為：高氯酸＞氫溴酸＞鹽酸＞硫酸＞＞硝酸＞其它弱酸（磷酸、有機酸）第64頁/共127頁

由于有機酸系弱酸，被高氯酸置換出的HA，對滴定無干擾，能準確滴定。

1.有機酸鹽的測定

第65頁/共127頁

取本品約60mg，精密稱定，加冰醋酸20ml溶解后，加結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.05mo1/L）滴定，至溶液顯藍綠色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.05mol/L）相當于

22.07mg的C19H23N3O2·C4H4O4。馬來酸麥角新堿

ChP(2000)第66頁/共127頁

若被置換出的有機酸不溶于冰醋酸，應先將樣品堿化，有機溶劑提取游離堿后，再非水堿量法測定。第67頁/共127頁

一般均預先在溶液中加入Hg(Ac)2的冰醋酸溶液，以消除氫鹵酸對滴定的干擾。

理論量1～3倍

2.氫鹵酸鹽的測定第68頁/共127頁取本品約0.15g，精密稱定，加冰醋酸10ml，加熱溶解后，加醋酸汞試液4ml

與結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定至溶液顯翠綠色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于20.17mg的C10H15NO·HCl。鹽酸麻黃堿

ChP(2000)第69頁/共127頁生物堿的硫酸鹽，在冰醋酸介質中只能被滴定至生物堿的硫酸氫鹽。

（1）直接滴定3.硫酸鹽的測定第70頁/共127頁A.硫酸阿托品

HClO4直接滴定時，反應摩爾比為1∶1第71頁/共127頁B.硫酸奎寧

HClO4直接滴定時，反應摩爾比為1∶3

第72頁/共127頁（2）加入高氯酸鋇消除硫酸的干擾后滴定硫酸奎寧反應摩爾比為1∶2

硫酸阿托品一元堿不能滴定第73頁/共127頁

因HNO3具有氧化性，可使指示劑變色，一般電位法指示終點。如硝酸士的寧、硝酸毛果蕓香堿

4.硝酸鹽的測定第74頁/共127頁

取本品約0.3g，精密稱定，加冰醋酸20ml，振搖使溶解，照電位滴定法（附錄ⅦA），用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于39.74mg的C21H22N2O2·HNO3。硝酸士的寧

ChP(2000)第75頁/共127頁

按常法測定，如磷酸氯喹、磷酸可待因5.磷酸鹽的測定第76頁/共127頁

簡便、快速、準確、精密、取樣量小，測定的是生理活性部分。如有酸性或堿性成分存在時會影響，選擇性差，不能直接用于制劑分析，只能用于原料藥測定。

（五）特點第77頁/共127頁（1）一般是取一定量樣品在水浴上蒸干，在一定溫度下干燥后按原料藥物項下的方法進行?！魉帉岱€(wěn)定（六）制劑分析1.注射劑第78頁/共127頁

精密量取本品10ml，置水浴上蒸干，在105℃干燥1h，放冷，加冰醋酸10ml，與醋酸汞試液6ml

使溶解，加結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液顯綠色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于37.58mg的C20H21NO4·HCl。鹽酸罌粟堿注射液

ChP（2000）第79頁/共127頁（2）堿化，經(jīng)有機溶劑反復提取完全，蒸去溶劑后，再按原料藥方法進行?！魉帉岵环€(wěn)定二鹽酸奎寧注射液

ChP（2000）

精密量取本品適量（約相當于二鹽酸奎寧0.15g），置分液漏斗中，加水使成20ml，加氨試液使成堿性，用氯仿分次振搖提取，第一次25ml，以后每次各10ml，第80頁/共127頁至奎寧提盡為止，每次得到的氯仿液均用同一份水洗滌2次，每次5ml，洗液用氯仿10ml振搖提取，合并氯仿液，置水浴上蒸去氯仿，加無水乙醇2ml再蒸干，在105℃干燥1h，放冷，加醋酐5ml與冰醋酸10ml，溶解后，加結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液顯藍色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于19.87mg的C20H24N2O2·2HCl。第81頁/共127頁

片劑中許多賦形劑如硬脂酸鹽、苯甲酸鹽、羧甲基纖維素鈉等都消耗高氯酸，因此片劑的測定一般需提取分離并經(jīng)干燥后才可進行。2.片劑：第82頁/共127頁如硫酸奎寧片、硫酸奎尼丁片堿化、有機溶劑提取后，HClO4滴定時，反應摩爾比為1∶4第83頁/共127頁硫酸奎寧片

ChP（2000）

取本品10片，除去糖衣后，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于硫酸奎寧0.3g），置分液漏斗中，加氯化鈉0.5g與0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加氯仿50ml，振搖10min，靜置，分取氯仿液，用干燥濾紙濾過。第84頁/共127頁精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5ml與二甲基黃指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于19.57mg的（C20H24N2O2）2·H2SO4·2H2O。第85頁/共127頁二、提取中和法（提取酸堿滴定法、提取容量法）

（一）原理與方法

第86頁/共127頁1.堿化2.有機溶劑提取第87頁/共127頁3.中和法測定

（1）直接滴定法用于堿性較強的生物堿

第88頁/共127頁（2）剩余滴定法用于堿性較弱的生物堿

第89頁/共127頁（3）酸滴定液返提后剩余滴定法用于對熱不穩(wěn)定的生物堿第90頁/共127頁1.堿化試劑

最常用氨水

2.提取溶劑

（1）提取溶劑選擇的原則（2）常用的提取溶劑最常用氯仿（二）測定條件的選擇第91頁/共127頁（3）提取溶劑的用量及提取次數(shù)

通常應提取4次，第一次用量至少應為水液體積的一半，以后幾次應各為第一次的一半

第92頁/共127頁3.提取終點的確定

用合適的沉淀反應確定4.指示劑的選擇

5.乳化的預防和消除第93頁/共127頁

儀器簡單、試劑常用，但操作繁瑣、費時、精密度差、準確度差，主要用于制劑分析（三）特點第94頁/共127頁阿片粉中嗎啡的含量測定——石灰法

ChP（1995）固相萃取—離子對-反相高效液相色譜法ChP（2000）（四）應用第95頁/共127頁（五）提取重量法第96頁/共127頁（一）基本原理在適當?shù)膒H介質中

三、酸性染料比色法制劑第97頁/共127頁1.水相中反應

離子對BH+·In-被有機溶劑提取，使有機相呈色。剩余的酸性染料留于水相3.比色法測定2.有機溶劑提取第98頁/共127頁（1）定量分離出有機提取液，脫水后，測定A，求出有機堿含量

（2）定量分離出有機提取液，脫水后，堿化，則水相呈色，測定水相中In-的吸收度，間接求出有機堿的含量

BH+In-+OH-→B+H2O+In-第99頁/共127頁

（3）定量分離出有機提取液，脫水后，酸化，則水相呈色，測定水相中HIn的吸收度，間接求出有機堿的含量BH+In-+H+→BH++HIn第100頁/共127頁

1.水相的最適pH值如果水相pH值過小，酸性染料幾乎仍以分子狀態(tài)存在；如果水相pH值過大，則生物堿幾乎全部以游離堿的形式存在

2.有機溶劑的選擇

CHCl3、CH2Cl2

（二）影響定量分析的因素第101頁/共127頁3.酸性染料的選擇常用溴甲酚綠、溴麝香草酚藍（BTB）等5.有色雜質的排除4.水分的影響嚴防水分的混入有機層可加入無水硫酸鈉等脫水劑或經(jīng)干燥濾紙濾過

6.共存物的影響

第102頁/共127頁3.準確度差，不能用于原料藥的測定，只能用于制劑分析（三）特點1.選擇性高（選用適當pH緩沖液可消除干擾）2.靈敏度高、供試品用量少第103頁/共127頁硫酸阿托品注射液ChP（2000）注射液對照法（四）應用第104頁/共127頁片劑對照法第105頁/共127頁五、色譜法

（一）高效液相色譜法

1．反相HPLC分析生物堿類和有機含氮藥物的特點色譜峰拖尾，保留時間過長，甚至長期地保留在色譜柱上。

四、紫外—可見分光光度法

第106頁/共127頁（1）加掃尾劑法分離依據(jù)物質的極性及溶解性。在流動相中加入掃尾劑，最常用的掃尾劑是三乙胺（2）用硅膠作固定相法離子交換機理：根據(jù)pKa大小進行分離2．解決方法第107頁/共127頁

流動相要選擇適宜的pH值、競爭離子的種類和濃度，同時要加入有機改性劑

適合于藥物與體內代謝物的分析

（3）用金剛烷基硅烷化硅膠作固定相法分離依據(jù)物質溶解性第108頁/共127頁

不論是游離堿還是其鹽類，均是以游離堿出峰（二）氣相色譜法第109頁/共127頁97：83．咖啡因和茶堿的特征鑒別反應是A.雙縮脲反應B.Vitali反應C.Marquis反應D.紫脲酸銨反應E.綠奎寧反應

第110頁/共127頁98：139．鹽酸嗎啡中應檢查的特殊雜質為A.嗎啡B.阿樸嗎啡C.罌粟堿D.莨菪堿E.其它生物堿

第111頁/共127頁96：136．用非水溶液滴定法測定鹽酸嗎啡含量時，應使用的試劑是A.5％醋酸汞冰醋酸液B.鹽酸C.冰醋酸D.二甲基甲酰胺E.高氯酸

第112頁/共127頁97：130．非水溶液滴定法測定硫酸奎寧含量的反應條件為

A．冰醋酸一醋酐為溶劑

B.高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定

C．1mol的高氯酸與?mol的硫酸奎寧反應

D.僅用電位法指示終點

E．溴酚藍為指示劑

第113頁/共127頁99：78.非水溶液滴定法測定硫酸奎寧原料的含量時，可以用高氯酸直接滴定冰醋酸介質中的供試品，1摩爾硫酸奎寧需要消耗高氯酸的摩爾數(shù)為

A.1B.2C.3D.4E.5

第114頁/共127頁99x：[116—120]滴定反應中

A.被測物與HClO4的摩爾比為1∶1

B.被測物與HClO4的摩爾比為1∶3

C.兩者均是

D.兩者均不是99x：116．硫酸奎寧片經(jīng)氯仿提取后用HClO4滴定（D）第115頁/共127頁99x：117．硫酸阿托品在冰醋酸中用HClO4滴定99x：118.硫酸奎寧原料藥用HClO4滴定99x：119.磷酸可待因用HClO4滴定99x：120.硝酸士的寧用HClO4滴定（A）（B）（A）(A)第116頁/共127頁96：129.生物堿類藥物制劑的測定方法

A.直接用有機溶劑提取后，用H2SO4標準液滴定

B.堿化后用有機溶劑提取，再用NaOH水溶液滴定第117頁/共127頁