抗原抗體反應(yīng)的類型之金免疫技術(shù)（免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)課件）

膠體金和免疫金的制備金免疫技術(shù)金免疫技術(shù)：是固相膜免疫分析技術(shù)的一種，是以膠體金作為標(biāo)記物，標(biāo)記已知抗原或抗體，用于檢測未知抗體或抗原的一種檢測方法。特點(diǎn)：簡便、快速、安全、應(yīng)用廣泛、適合急診；本法靈敏度不及酶標(biāo)法，不能準(zhǔn)確定量，只能作為定性或半定量試驗(yàn)。膠體金和免疫金的制備膠體金和免疫金的制備膠體金1、又稱金溶膠，為金鹽還原后的金顆粒懸液。2、膠體金結(jié)構(gòu)：一個基礎(chǔ)金核（原子金Au）及包圍在外的雙離子層構(gòu)成，內(nèi)層負(fù)電荷（AuCL2-），外層正電荷（H+）。膠體金和免疫金的制備膠體金3、膠體金顆粒大小為1-100nm，大小不同呈色不同。（2-5nm為橙黃色、10-20nm為酒紅色、30-80nm為紫紅色）4、對電解質(zhì)敏感，某些蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)有保護(hù)膠體金、加強(qiáng)其穩(wěn)定性的作用。5、引起膠體聚沉的主要因素包括電解質(zhì)、溫度和濃度等。提問生活中的金子有哪些顏色？下圖中的膠體金是紫紅色的，你知道它是多少nm大小的顆粒嗎？1）2-5nm膠體金顆?！赛S色2）10-20nm膠體金顆?！萍t色3）30-80nm膠體金顆?！霞t色膠體金和免疫金的制備提問為什么蛋白質(zhì)分子能增加膠體金的穩(wěn)定性？蛋白質(zhì)分子是膠體，帶電，可抵抗一定的電解質(zhì)作用。膠體金和免疫金的制備膠體金和免疫金的制備膠體金

制備1、制備原理：膠體金是氯金酸在還原劑（如檸檬酸鈉、鞣酸等）作用下聚合成的一定大小的金屬顆粒，進(jìn)而形成帶負(fù)電荷的疏水膠溶液。依據(jù)還原劑的類型和作用的強(qiáng)弱，可制備0.8-150nm大小不等的膠體金。2、制備方法：目前最常用的方法是使用檸檬酸三鈉做還原劑的制備方法。膠體金和免疫金的制備膠體金

制備1、注意事項(xiàng)：氯金酸干燥避光保存；使用氯金酸時避免接觸金屬器具；制備膠體金時使用高質(zhì)量去離子水；玻璃容器使用硅化玻璃；膠體金制備20天內(nèi)進(jìn)行標(biāo)記。2、鑒定：指標(biāo)包括粒徑大小、均一程度、有無顆粒凝集等。良好的膠體金清亮透明。金顆粒優(yōu)質(zhì)金顆粒劣質(zhì)金顆粒膠體金和免疫金的制備膠體金和免疫金的制備免疫金

制備1、制備原理：免疫金是抗原或抗體與膠體金的結(jié)合物質(zhì)。目前認(rèn)為，這種結(jié)合是蛋白質(zhì)表面攜帶的正電荷與膠體金顆粒表面的負(fù)電荷借靜電吸附而形成的牢固結(jié)合。2、制備過程：蛋白溶液逐滴加入膠體金溶液中，同時用磁力攪拌，數(shù)分鐘后加入穩(wěn)定劑。3、保存：免疫金溶液使用稀釋液調(diào)制成工作濃度后保存。金標(biāo)抗體的制備1、堿性溶液中金顆粒帶負(fù)電。2、金顆粒上的負(fù)電與抗體上的正電荷結(jié)合（靜電結(jié)合）形成金標(biāo)抗體。膠體金和免疫金的制備膠體金免疫層析技術(shù)提問膠體金免疫層析技術(shù)ELISA中用于檢測抗原的雙抗體夾心法和競爭法的原理模式圖怎樣繪制？左圖：雙抗體夾心法右圖：競爭法膠體金免疫層析技術(shù)金免疫層析試驗(yàn)（以雙抗體夾心法檢測尿液中的HCG為例）1、標(biāo)本：待測尿液2、試劑盒組成：試紙條帶微視頻：尿HCG檢測膠體金免疫層析技術(shù)金免疫層析試驗(yàn)（以雙抗體夾心法檢測尿液中的HCG為例）3、操作步驟：將試紙條插入尿液中2～5s。（不超過“最大線”）4、結(jié)果觀察：上方出現(xiàn)一條紅色線條為陰性；出現(xiàn)兩條紅色線條為陽性；上方不出現(xiàn)線條，不論下方是否出現(xiàn)線條為失效。（在試劑盒規(guī)定時間內(nèi)）膠體金免疫層析技術(shù)金免疫層析試驗(yàn)結(jié)果分析膠體金免疫層析技術(shù)金免疫層析試驗(yàn)原理將各種反應(yīng)試劑分點(diǎn)固定在試紙條上，檢測標(biāo)本滴加在試紙條的一端，通過層析作用使樣品在層析材料上泳動，樣品中的待測物與試紙條上的試劑發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，形成的復(fù)合物被富集或固定在層析條上的特定區(qū)域（檢測線），無關(guān)物則越過該區(qū)域而被分離，通過膠體金的呈色條帶判讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。膠體金免疫層析技術(shù)金免疫層析試驗(yàn)原理AGTCBA、B兩端：吸水材料；G處：膠體金結(jié)合物；T處：已知的抗體；C處：抗免疫金抗體，T、C點(diǎn)物質(zhì)常以直線的形式包被在膜上。動畫：免疫層析試驗(yàn)雙抗體夾心法測尿HCG的原理膠體金免疫層析技術(shù)金免疫層析試驗(yàn)原理微視頻：丙型肝炎病毒抗體檢測（膠體金法）膠體金免疫層析技術(shù)金免疫層析試驗(yàn)類型（1）雙抗體夾心法測抗原（2）競爭法測抗原膠體金免疫滲濾技術(shù)提問膠體金免疫滲濾技術(shù)ELISA中最常用于檢測抗原和抗體的類型分別是哪一種？如果將標(biāo)記物換成膠體金，原理模式圖該怎樣繪制呢？左圖：雙抗體夾心法右圖：間接法膠體金免疫滲濾技術(shù)金免疫滲濾試驗(yàn)（以間接法檢測血清中抗核抗體（ANA）為例）1、標(biāo)本：待測血清2、試劑盒組成：膠體金反應(yīng)板、膠體金標(biāo)記抗體、洗滌液微視頻：抗核抗體（ANA）IgG檢測（膠體金法）膠體金免疫滲濾技術(shù)金免疫滲濾試驗(yàn)（以間接法檢測血清中抗核抗體（ANA）為例）3、操作步驟：1）小孔內(nèi)滴加待測血清1-2d，待完全滲入；2）小孔內(nèi)滴加金標(biāo)抗體1-2d，待完全滲入；3）小孔內(nèi)滴加洗滌液2-3d，待完全滲入。4、結(jié)果觀察：出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)為陽性（+），不出現(xiàn)為陰性（-）。膠體金免疫滲濾技術(shù)金免疫滲濾試驗(yàn)（以間接法檢測血清中抗核抗體（ANA）為例）待測抗核抗體（ANA）：陰性膠體金免疫滲濾技術(shù)金免疫滲濾試驗(yàn)原理將Ag或Ab點(diǎn)加在NC上，依次滴加標(biāo)本、金標(biāo)記物和洗滌液，液體很快被吸水墊料吸收，在液體下滲的過程中，抗原、抗體被膜上的抗體或抗原捕獲，起到親和濃縮的作用，操作簡單、快速。膠體金