微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 33-0綜合技能訓(xùn)練：實(shí)驗(yàn)室生物安全與質(zhì)量控制

綜合技能訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)室生物安全與質(zhì)量控制學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)程與實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)。2．熟悉實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和儀器使用規(guī)程、實(shí)驗(yàn)室意外事件或事故處理方法。3．了解廢棄物處理原則。4．能按照目前臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的工作內(nèi)容，合理運(yùn)用質(zhì)量衡量方法。5．能對微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行正確的室內(nèi)質(zhì)量控制和室間總量控制。綜合技能訓(xùn)練

實(shí)驗(yàn)室生物安全與質(zhì)量控制綜合技能訓(xùn)練

實(shí)驗(yàn)室生物安全與質(zhì)量控制一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理綜合技能訓(xùn)練

實(shí)驗(yàn)室生物安全與質(zhì)量控制一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理概述

新的感染性病原體的不斷涌現(xiàn)，抗生素的耐藥性問題日益嚴(yán)重，新的診斷和治療技術(shù)的應(yīng)用，以及生物恐怖的潛在危險，提高實(shí)驗(yàn)室的生物安全再一次成為人們的關(guān)注點(diǎn)。生物安全防護(hù)包括安全設(shè)備、個體防護(hù)裝置和措施，實(shí)驗(yàn)室的特殊設(shè)計(jì)和建筑要求，嚴(yán)格的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序及規(guī)程。其中，規(guī)范的微生物學(xué)操作技術(shù)是實(shí)驗(yàn)室生物安全的基礎(chǔ)，專門的實(shí)驗(yàn)設(shè)備僅僅是一種補(bǔ)充，絕不能替代正確的操作規(guī)范。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)程

1.進(jìn)入規(guī)定（1）在實(shí)驗(yàn)室入口處貼生物危害警告標(biāo)志，注明生物安全水平、負(fù)責(zé)人，電話等信息。（2）未經(jīng)許可，非工作人員不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。外來合作者、進(jìn)修和學(xué)習(xí)人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前必須經(jīng)過部門負(fù)責(zé)人的批準(zhǔn)。（3）實(shí)驗(yàn)室總門應(yīng)保持關(guān)閉狀態(tài)。（4）與實(shí)驗(yàn)室工作無關(guān)的動物不得帶入實(shí)驗(yàn)室。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)程

2.個人防護(hù)（1）工作服：在實(shí)驗(yàn)室工作時，必須穿著工作服。（2）手套：在進(jìn)行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料的操作時，應(yīng)戴上合適的手套。脫手套后必須洗手。用過的一次性手套應(yīng)丟入感染性廢物袋內(nèi)（貼有生物危險Ⅱ級標(biāo)志的黃色垃圾袋）。（3）洗手：在處理完感染性材料后，以及在離開實(shí)驗(yàn)室前，都必須洗手。實(shí)驗(yàn)人員按六步洗手法洗手或用免洗手消毒液進(jìn)行手衛(wèi)生消毒。至少40秒鐘，紙巾擦干。（4）其他防護(hù)：當(dāng)有可能受到噴濺物污染、碰撞或人工紫外線輻射的傷害時，必須戴合適的安全眼鏡。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)程

2.個人防護(hù)（5）不得穿著實(shí)驗(yàn)室工作服離開實(shí)驗(yàn)室。（6）不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾的鞋子。（7）禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。（8）禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域內(nèi)儲存食品和飲料。（9）在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用過的工作服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)程

3.實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)（1）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔整齊，嚴(yán)禁擺放和實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品。（2）每天工作結(jié)束之后，必須用愛爾施牌消毒片(成分：三氯異氰尿酸，每片含有效氯500mg，按每片1000ml水比例進(jìn)行溶解)消毒工作臺面。用75%酒精消毒生物安全柜臺面。活性物質(zhì)濺出后要隨時消毒，消毒劑為愛爾施（1片/1000ml），嚴(yán)重污染時(血液等標(biāo)本的污染)，將6片愛爾施溶于1000ml水（3000ppm）用以消毒。（3）所有受到污染的材料、標(biāo)本和培養(yǎng)物應(yīng)廢棄于感染性廢物袋內(nèi)，而生活垃圾應(yīng)棄于黑色垃圾袋，不能混淆。需要清潔再利用的材料，必須先經(jīng)高壓滅菌處理。（4）需要帶出實(shí)驗(yàn)室的手寫文件必須保證在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)沒有受到污染。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（二）實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)

1.標(biāo)本的安全操作（1）標(biāo)本容器：標(biāo)本用防漏的有蓋的塑料容器盛裝，容器上貼標(biāo)簽?；?yàn)單不能卷在容器外面，而是要分開放置；（2）標(biāo)本接收：在實(shí)驗(yàn)室專門的接收窗口接收標(biāo)本；（3）打開包裝：容器要在生物安全柜內(nèi)打開，并準(zhǔn)備好消毒劑。容器有破碎或標(biāo)本泄漏時，根據(jù)標(biāo)本拒收SOP予以拒收，并填寫拒收單。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（二）實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)

2.實(shí)驗(yàn)室的基本安全操作所有標(biāo)本在生物安全柜內(nèi)操作，要盡量減少氣溶膠和微小液滴形成。在工作臺面放置一塊浸有消毒液的紗布，使用后按感染性廢棄物處理。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（二）實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)

2.實(shí)驗(yàn)室的基本安全操作一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（二）實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)

3.實(shí)驗(yàn)室的其他安全操作（1）血清分離1）操作時應(yīng)戴手套及防護(hù)眼鏡。2）血液和血清應(yīng)當(dāng)小心吸取，而不能傾倒。嚴(yán)禁用口吸移液管。3）移液管使用后應(yīng)完全浸入消毒劑中浸泡30min。然后高壓滅菌（121℃1-1.5bar20min）,清洗消毒后備用。4）帶有血凝塊等的廢棄標(biāo)本管，在加蓋后放入感染性廢物袋內(nèi)高壓滅菌。5）備消毒劑清除噴濺和溢出標(biāo)本。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（二）實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)

3.實(shí)驗(yàn)室的其他安全操作（2）裝有凍干感染性物質(zhì)安瓿的開啟1）在生物安全柜內(nèi)操作。2）首先用75％酒精清潔安瓿外表面。3）如果管內(nèi)有棉花或纖維塞，可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡。4）用75％酒精浸泡的紗布將安瓿包起來以保護(hù)雙手，然后手持安瓿從標(biāo)記的銼痕處打開。5）將頂部小心移去，放入銳器盒內(nèi)。6）如果塞子仍然在安瓿上，用消毒鑷子除去，棄于感染性廢物袋內(nèi)。7）緩慢向安瓿中加入營養(yǎng)肉湯以重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（三）實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和儀器

1.生物安全柜（1）操作步驟：開啟電源和內(nèi)外風(fēng)扇，在機(jī)器預(yù)熱時將所有必需的物品置于安全柜內(nèi)。開始工作前及完成工作后，讓安全柜工作5min來完成“凈化”過程。手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調(diào)整完畢才開始對物品進(jìn)行處理。接種環(huán)滅菌時，用電子加熱器，而不應(yīng)使用明火，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，生物安全柜里的所有物品都應(yīng)清除表面污染，標(biāo)本和培養(yǎng)基移出安全柜。每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，用75%酒精擦拭工作臺面、四壁及玻璃的內(nèi)外側(cè)等部位來清除污染。有標(biāo)本溢出等污染時，用愛爾施消毒，然后用水再次進(jìn)行擦拭。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（三）實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和儀器

1.生物安全柜（2）注意事項(xiàng)：每次開始實(shí)驗(yàn)之前將所需物品置于安全柜內(nèi)，以盡可能減少雙臂進(jìn)出次數(shù)。雙臂應(yīng)該垂直地緩慢進(jìn)出前面的開口，盡量減少操作者身后的人員活動，生物安全柜在使用中不能打開玻璃觀察擋板。在生物安全柜內(nèi)操作時，不能進(jìn)行文字工作。Ⅱ級生物安全柜前面的進(jìn)氣格柵不能被紙、儀器設(shè)備或其他物品阻擋，所有物品應(yīng)盡可能地放在靠近工作臺后緣的位置，但不阻擋后部格柵?？僧a(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備（如混勻器、離心機(jī)等）應(yīng)靠近安全柜的后部放置，生物危害性廢棄物袋放在安全柜內(nèi)右側(cè)，袋中放入愛爾施消毒劑。房間中有人時要關(guān)閉紫外燈，以保護(hù)眼睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害，安全柜一直維持運(yùn)行狀態(tài)（8小時工作期間），不能反復(fù)開關(guān)，當(dāng)氣流警報響起時，立刻停止工作，并報告生物安全負(fù)責(zé)人。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（三）實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和儀器

2.低溫超速離心機(jī)按照操作手冊操作離心機(jī)，正確放置十字軸和離心桶，在使用前檢查離心管和盛放離心標(biāo)本的容器是否破損，用于離心的試管和標(biāo)本容器應(yīng)當(dāng)牢固蓋緊，離心桶的裝載、平衡必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，離心桶和十字軸按重量配對，并在裝載離心管后正確平衡，離心管不能裝得過滿，液面距離心管口留出一定空間，否則會導(dǎo)致漏液，空離心管用蒸餾水來平衡，每次使用后，要用75％酒精清除離心桶、轉(zhuǎn)子和離心機(jī)腔的污染，每天檢查離心機(jī)轉(zhuǎn)子部位的腔壁是否被污染或弄臟，離心轉(zhuǎn)子和離心桶是否有腐蝕或細(xì)微裂痕。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（三）實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和儀器

3.組織研磨器戴上手套并用含75％酒精的紗布包住玻璃研磨器，在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行組織研磨器的打開和操作。4.冰箱與冰柜的維護(hù)和使用冰箱和低溫冰箱通常每半年除霜和清潔，如有特殊情況應(yīng)立即除霜和清理，清理出在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品。清理時應(yīng)戴厚橡膠手套并進(jìn)行面部防護(hù)。儲存在冰箱內(nèi)的所有容器清楚地標(biāo)明內(nèi)裝物品的名稱、儲存日期和儲存者的姓名，未標(biāo)明的或廢舊物品應(yīng)高壓滅菌后丟棄。由微生物室負(fù)責(zé)人保存一份凍存物品的清單。冰箱內(nèi)不能放置易燃溶液。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（四）實(shí)驗(yàn)室意外事件或事故處理

1.生物危害物的溢出處理（1）在生物安全柜以外潛在危害性氣溶膠的釋放時，所有人員必須立即撤離相關(guān)區(qū)域，立即報告部門負(fù)責(zé)人，為了使氣溶膠排出和使較大的粒子沉降，在1h內(nèi)嚴(yán)禁人員入內(nèi)，門口張貼“禁止進(jìn)入”的標(biāo)志，過了相應(yīng)時間后，在生物安全負(fù)責(zé)人的指導(dǎo)下來清除污染。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（四）實(shí)驗(yàn)室意外事件或事故處理

生物危害物溢出清除程序：1）戴手套、口罩，穿防護(hù)服，必要時進(jìn)行臉和眼睛防護(hù)。2）用布覆蓋并吸收溢出物。3）向布上傾倒消毒劑，并覆蓋周圍區(qū)域。4）使用消毒劑時，從溢出區(qū)域的外圍開始，朝向中心進(jìn)行處理。5）作用30-60min后，將布以及污染材料清理掉。如果含有碎玻璃或其他銳器，玻璃碎片應(yīng)用鑷子清理，使用簸箕來收集處理過的物品，并將它們置于銳器盒中以待處理。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（四）實(shí)驗(yàn)室意外事件或事故處理

生物危害物溢出清除程序：6）再次用消毒劑擦拭污染區(qū)域（如有必要，重復(fù)第2～5步）。7）污染材料及用于清理的布和抹布放入感染性廢物袋內(nèi)。8）如果用簸箕清理破碎物，應(yīng)當(dāng)將其放在消毒液內(nèi)浸泡。9）如果實(shí)驗(yàn)表格或其他打印或手寫材料被污染，應(yīng)將這些信息復(fù)制，并將原件置于感染性廢物袋內(nèi)。10）在成功消毒后，報告部門負(fù)責(zé)人目前溢出區(qū)域的清除污染工作已經(jīng)完成。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（四）實(shí)驗(yàn)室意外事件或事故處理

1.生物危害物的溢出處理（2）在生物安全柜內(nèi)潛在危害性氣溶膠的釋放時：1）在安全柜處于工作狀態(tài)下立即進(jìn)行清理。2）使用愛爾施消毒劑（1000ml/6片），并在處理過程中盡可能減少氣溶膠的生成，作用30~60min，再用水擦拭干凈。3）所有接觸溢出物品的材料都要用75%酒精消毒或高壓滅菌。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（四）實(shí)驗(yàn)室意外事件或事故處理

1.生物危害物的溢出處理（3）未裝可封閉離心桶的離心機(jī)內(nèi)盛有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂時：1）關(guān)閉機(jī)器電源，讓機(jī)器密閉30min使氣溶膠沉積。2）通知生物安全負(fù)責(zé)人。3）戴厚橡膠手套操作。4）破碎的離心管、離心桶、十字軸和轉(zhuǎn)子都放在75%酒精內(nèi)。5）未破損的帶蓋離心管應(yīng)放在另一個有75%酒精的容器中，然后回收。6）離心機(jī)內(nèi)腔用75%酒精擦拭。7）清理時所使用的全部材料都按感染性廢棄物處理，放入感染性廢物袋內(nèi)。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（四）實(shí)驗(yàn)室意外事件或事故處理

2.刺傷、切割傷或擦傷（1）受傷人員用流水清洗雙手和受傷部位。（2）使用碘伏進(jìn)行皮膚消毒，必要時去門急診進(jìn)行相應(yīng)處理。（3）記錄受傷原因和相關(guān)的微生物，并應(yīng)保留完整的醫(yī)療記錄。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（四）實(shí)驗(yàn)室意外事件或事故處理

3.經(jīng)胃腸道攝入潛在感染性物質(zhì)（1）受害人脫下防護(hù)服。（2）去醫(yī)院門急診進(jìn)行相應(yīng)的處理。（3）報告攝入材料的鑒定和事故發(fā)生的細(xì)節(jié)，并保留完整的醫(yī)療記錄。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（五）廢棄物的處理

1.培養(yǎng)基、組織、體液等廢棄物處理（1）放在感染性廢物袋內(nèi)儲存、運(yùn)輸及消毒滅菌。（2）在丟棄之前高壓滅菌消毒。（3）高壓滅菌后由暫存點(diǎn)工作人員回收至醫(yī)院廢物集中儲存點(diǎn)。（4）運(yùn)送前必須檢查醫(yī)療廢物收集袋或容器封口是否嚴(yán)密，是否破損、泄漏，如有破損、泄漏應(yīng)加套防漏感染性廢物袋確保運(yùn)送途中安全。（5）運(yùn)輸推車采用愛爾施擦拭消毒，上、下午工作結(jié)束后各一次。一、微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理（五）廢棄物的處理

2.銳器盒處理（1）銳器盒采用有資質(zhì)的廠家所生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)利器盒。（2）銳器盒盛裝廢物3/4時即封口。（3）由暫存點(diǎn)工作人員回收至廢物集中儲存點(diǎn)。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證綜合技能訓(xùn)練

實(shí)驗(yàn)室生物安全與質(zhì)量控制二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（一）質(zhì)量保證的基本要求

1.質(zhì)量衡量方法按照目前臨床細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室的工作內(nèi)容大致可分為三類,衡量其質(zhì)量的技術(shù)指標(biāo)不完全相同。第一類是檢出細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)，包括標(biāo)本直接涂片檢查和細(xì)菌分離培養(yǎng)。現(xiàn)代醫(yī)院發(fā)生細(xì)菌感染有時一份標(biāo)本中會有兩種以上細(xì)菌存在。無論標(biāo)本直接涂片檢查還是分離培養(yǎng)，檢驗(yàn)結(jié)果必須如實(shí)反映感染病灶中細(xì)菌的真實(shí)情況。這類實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量，應(yīng)該用細(xì)菌檢出率來衡量。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（一）質(zhì)量保證的基本要求

1.質(zhì)量衡量方法第二類是鑒定細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)，通過一系列生理生化及形態(tài)學(xué)、血清學(xué)的手段來鑒定病原菌。目前，已知與人類感染有關(guān)的細(xì)菌有上千種，常規(guī)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)?？梢苑蛛x到的也有幾十種。能否對分離到的病原菌都做出準(zhǔn)確的鑒定，是反映實(shí)驗(yàn)室工作質(zhì)量的一個重要方面，例如將細(xì)菌鑒定到種的準(zhǔn)確率，作為衡量鑒定工作質(zhì)量的指標(biāo)。第三類是藥敏試驗(yàn)，有稀釋法和紙片法兩種試驗(yàn)。稀釋法藥敏試驗(yàn)是定量的實(shí)驗(yàn)，可以用準(zhǔn)確度和精密度來衡量質(zhì)量。紙片法藥敏試驗(yàn)以敏感或耐藥的形式報告結(jié)果，屬于定性的實(shí)驗(yàn)，但實(shí)驗(yàn)過程中測量抑菌環(huán)直徑是定量的指標(biāo)，應(yīng)該使用準(zhǔn)確度和精密度衡量其質(zhì)量，以保證紙片法藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（一）質(zhì)量保證的基本要求

2.質(zhì)量保證工作的指導(dǎo)思想

質(zhì)量保證工作必須貫穿于實(shí)驗(yàn)室工作的整個過程，包括分析前（標(biāo)本的正確采集、運(yùn)送等）、分析中（培養(yǎng)、分離、鑒定和藥敏試驗(yàn)等）和分析后（結(jié)果報告、解釋、臨床反饋等）的質(zhì)量管理。臨床微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該依據(jù)國家規(guī)定和自身特點(diǎn)建立質(zhì)量管理體系，對實(shí)驗(yàn)室的一切活動進(jìn)行全程監(jiān)控和管理。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系強(qiáng)調(diào)以服務(wù)對象（醫(yī)生和患者等）為焦點(diǎn)，認(rèn)真聽取抱怨，及時收集反饋，及時發(fā)現(xiàn)問題，及時處理和糾正，做到質(zhì)量的持續(xù)改進(jìn)。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（一）質(zhì)量保證的基本要求

3.質(zhì)量保證的智力因素

質(zhì)量意識的深層次含義是觀念和文化，人員素質(zhì)對于實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量起關(guān)健作用。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)充分重視培養(yǎng)工作人員文化修養(yǎng)、服務(wù)意識和敬業(yè)精神，倡導(dǎo)以人為本，樹立質(zhì)量意識和法治意識。臨床微生物工作人員應(yīng)知曉實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的有關(guān)規(guī)定，熟悉質(zhì)量管理流程，并嚴(yán)格遵照執(zhí)行。同時，應(yīng)注重專業(yè)知識更新，使實(shí)驗(yàn)室人員能跟上技術(shù)發(fā)展的步伐，及時了解、掌握和運(yùn)用臨床微生物領(lǐng)域新知識、新技術(shù)，促進(jìn)質(zhì)量的改進(jìn)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定在職人員的繼續(xù)教育計(jì)劃付諸實(shí)施。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

1.質(zhì)控物和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)建立質(zhì)量控制系統(tǒng)，首先涉及質(zhì)控物和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，兩者是質(zhì)量控制的重要組成部分。（1）質(zhì)控物質(zhì)控物一般是指已知的被測樣品。細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)，質(zhì)控物就是特定的細(xì)菌菌株，稱為參考菌株。無論是定性還是定量實(shí)驗(yàn)，質(zhì)量的監(jiān)測點(diǎn)需設(shè)在一個敏感的位置。這個敏感點(diǎn)，對于定性實(shí)驗(yàn)，應(yīng)在較弱陽性的范圍內(nèi)；對于定量實(shí)驗(yàn)，應(yīng)該位于解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果的臨床決定性水平附近。用于質(zhì)量控制的參考菌株見表綜-2。菌種來自美國典型菌種保藏中心（ATCC）或英國國家典型菌種保藏中心（NCTC）。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

菌株NCTCATCC

菌株NCTCATCC培養(yǎng)基用

培養(yǎng)基用

醋酸鈣不動桿菌桿菌784415308

無乳鏈球菌818113813嗜水氣單胞菌78109071

肺炎鏈球菌746510015產(chǎn)氣腸桿菌1000613048

副溶血性弧菌1090317802陰溝腸桿菌1000513047

藥敏試驗(yàn)用

糞腸球菌8213

金黃色葡萄球菌

25923大腸埃希菌900111775

金黃色葡萄球菌

29213肺炎克雷伯菌41815380

大腸埃希菌

25922普通變形桿菌417513315

大腸埃希菌

35218雷極普羅威登斯菌7475

銅綠假單胞菌

27853黏質(zhì)沙雷菌11935

糞腸球菌

29212遲緩愛德華菌11934

淋病奈瑟菌

49226鼠傷寒沙門菌7413311

流感嗜血桿菌

49247金黃色葡萄球菌853212600

肺炎鏈球菌

49619銅綠假單胞菌72447700

肺炎克雷伯菌

700603質(zhì)量控制用參考菌種二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

1.質(zhì)控物和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（2）質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

1）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制指標(biāo)是定性的，一般以細(xì)菌能否在培養(yǎng)基中生長或能否形成典型菌落來衡量?；A(chǔ)培養(yǎng)基不僅要求細(xì)菌能夠生長，而且必須發(fā)育良好，并能使細(xì)菌充分表現(xiàn)出其典型的特征，如典型菌落形態(tài)、溶血特征等。有些基礎(chǔ)培養(yǎng)基應(yīng)滿足營養(yǎng)要求高的細(xì)菌生長，評定其質(zhì)量須用靈敏的菌種。選擇性培養(yǎng)基必須包括應(yīng)抑制的菌種和應(yīng)被選擇生長的菌種。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

培養(yǎng)基a控制方法菌種結(jié)果生長抑制反應(yīng)疊氮鈉血瓊脂XX

化膿性鏈球菌小菌落

乙型溶血

大腸埃希菌生長抑制血瓊脂X

化膿性鏈球菌小菌落

乙型溶血

肺炎鏈球菌中等菌落腦心浸出液X

金黃色葡萄球菌24h生長巧克力瓊脂X

流感嗜血桿菌24h生長營養(yǎng)瓊脂X

金黃色葡萄球菌生長中國藍(lán)薔薇酸瓊脂

XX大腸埃希菌藍(lán)色菌落

宋內(nèi)志賀菌無色菌落麥康凱瓊脂

XX金黃色葡萄球菌不生長

大腸埃希菌粉紅色菌落

奇異變形桿菌無色菌落SS瓊脂

XX金黃色葡萄球菌不生長

產(chǎn)氣腸桿菌粉紅色菌落

鼠傷寒沙門菌中心黑色

無色菌落常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

生化反應(yīng)NCTC菌株陽性陰性靛基質(zhì)雷極普羅威登斯菌黏質(zhì)沙雷菌M-R雷極普羅威登斯菌陰溝腸桿菌V-P黏質(zhì)沙雷菌雷極普羅威登斯菌枸櫞酸鹽雷極普羅威登斯菌遲緩愛德華菌精氨酸雙水解酶陰溝腸桿菌雷極普羅威登斯菌鳥氨酸脫氫酶黏質(zhì)沙雷菌雷極普羅威登斯菌DNA酶黏質(zhì)沙雷菌雷極普羅威登斯菌葡萄糖鹽酸陰溝腸桿菌雷極普羅威登斯菌H2S（TSI）遲緩愛德華菌雷極普羅威登斯菌ONPG黏質(zhì)沙雷菌雷極普羅威登斯菌苯丙氨酸脫氫酶雷極普羅威登斯菌陰溝腸桿菌尿素酶雷極普羅威登斯菌黏質(zhì)沙雷菌葡萄糖產(chǎn)氣陰溝腸桿菌雷極普羅威登斯菌常用生化反應(yīng)培養(yǎng)基質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

（2）質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

2）藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)瓊脂擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)為直接測定抑菌環(huán)直徑。因?yàn)槠鋵儆诙繙y定，以數(shù)理統(tǒng)計(jì)的方法確定其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。參考菌株分別選擇了金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌，以分別代表臨床上常見的革蘭陽性球菌、腸桿菌和非發(fā)酵菌。參考菌株的抑菌環(huán)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)：藥物對該菌株的抑菌環(huán)直徑平均值±2標(biāo)準(zhǔn)差。為了簡明起見，將這個指標(biāo)換算成抑菌環(huán)直徑質(zhì)量控制允許范圍。常用藥物的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)見相關(guān)章節(jié)。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量監(jiān)測，連續(xù)30次監(jiān)測的結(jié)果只允許最多3次超過質(zhì)量控制范圍，并且這3次失控不應(yīng)該連續(xù)出現(xiàn)。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

（2）質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

2）藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

稀釋法藥敏試驗(yàn)是定量的測定，質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)是參考菌株的MIC值。選擇適當(dāng)?shù)膮⒖季旰苤匾?，關(guān)系到能否起到質(zhì)量控制作用。有連續(xù)10個梯度藥物濃度的試驗(yàn)，參考菌株的MIC值須位于第3-7個濃度之間。如果實(shí)驗(yàn)僅有3個濃度，必須選兩個參考菌株，一株的MIC位于高濃度，另一株的MIC是位于低濃度。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

（2）質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

3）儀器設(shè)備的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室使用的儀器設(shè)備主要有孵箱、冰箱、冰柜、高壓滅菌器、二氧化碳培養(yǎng)箱、厭氧培養(yǎng)箱等。絕大多數(shù)設(shè)備都是長期運(yùn)轉(zhuǎn)，對質(zhì)量的要求是必須保持在運(yùn)行過程中能維持技術(shù)指標(biāo)的穩(wěn)定，并要求定期維護(hù)?？刂茰囟仍谡麄€細(xì)菌實(shí)驗(yàn)中很重要，控溫設(shè)備在不間斷的工作情況下難免受電壓波動、老化等影響而發(fā)生變化。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

儀器設(shè)備質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備控制標(biāo)準(zhǔn)允許范圍高壓滅菌器121℃≥121℃孵育箱35℃±1℃水溫箱37℃±1℃冰箱4℃±2℃低溫冰箱-20℃±5℃CO2溫箱5%-10%＜10%二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

2.質(zhì)量監(jiān)測室內(nèi)質(zhì)量控制的重要內(nèi)容是對各種實(shí)驗(yàn)條件及實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行監(jiān)測。監(jiān)測對象主要有儀器設(shè)備、培養(yǎng)基及操作全過程。（1）高壓滅菌器：須定期檢查滅菌器的滅菌效果，至少每月1次。測試方法可用留點(diǎn)溫度計(jì)或嗜熱脂肪芽孢桿菌等，并定期維修。（2）溫箱、冰箱：每日工作開始，打開冰箱或溫箱等控溫設(shè)備前，及下午下班前需觀察當(dāng)時設(shè)備的指示溫度并及時記錄。有條件的實(shí)驗(yàn)室最好進(jìn)行24小時溫度監(jiān)控。（3）厭氧設(shè)備：用美藍(lán)或刃天青指示劑作厭氧環(huán)境的指示系統(tǒng)，每次制備厭氧環(huán)境，均須設(shè)指示系統(tǒng)。記錄每次結(jié)果。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

2.質(zhì)量監(jiān)測（4）CO2設(shè)備：使用CO2培養(yǎng)箱時，須在每天打開培養(yǎng)箱前觀察向內(nèi)CO2濃度的指示并及時記錄。（5）培養(yǎng)基：每批新購置或新配制的培養(yǎng)基，用前應(yīng)用質(zhì)量控制的參考菌株測試其效果。干燥培養(yǎng)基用前應(yīng)了解其失效期限及有無潮解。培養(yǎng)基的PH非常重要，新購商品干燥培養(yǎng)基在用前須檢查培養(yǎng)基的PH，并做必要的校正，加以記錄。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（二）室內(nèi)質(zhì)量控制

2.質(zhì)量監(jiān)測（6）試劑：如氧化酶試劑、觸酶試劑，每天用前須以陽性菌株測試。革蘭染色用金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌制備濃菌懸液，經(jīng)高壓滅菌后冰箱保存，此懸液作為革蘭染色的質(zhì)量控制，每次控制與標(biāo)本同步進(jìn)行。診斷血清須定期用已知參考菌株做測試。（7）藥敏試驗(yàn)：現(xiàn)行的質(zhì)量控制方法是在連續(xù)監(jiān)控測定試驗(yàn)達(dá)到穩(wěn)定的狀態(tài)后，每周做1-2次監(jiān)測，并繪制質(zhì)控圖。在連續(xù)的監(jiān)控測試中，每30次中，如果連續(xù)兩次出現(xiàn)超過允許范圍，必須改為每日監(jiān)測，并尋找失控的原因，進(jìn)行必要的糾正。二、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證（三）室間質(zhì)量評價

1.用模擬臨床標(biāo)本做質(zhì)量評價為目前國內(nèi)外廣泛采用的方法，主要評價實(shí)驗(yàn)室在病原菌的分離、鑒定和