微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 33-3綜合技能訓(xùn)練：痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)

綜合技能實(shí)訓(xùn)三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握痰液標(biāo)本的正確采集、運(yùn)送和微生物檢驗(yàn)程序。2．熟悉下呼吸道感染的常見(jiàn)致病菌。3．了解痰液標(biāo)本中常見(jiàn)致病菌的臨床意義。4．具有正確采集痰液標(biāo)本和進(jìn)行痰培養(yǎng)操作的能力。5．能正確選擇試驗(yàn)項(xiàng)目對(duì)痰培養(yǎng)標(biāo)本進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，能正確判斷和分析試驗(yàn)結(jié)果并發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)思維導(dǎo)圖綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)一、痰液標(biāo)本常見(jiàn)病原菌綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、球菌革蘭陽(yáng)性：金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、腸球菌、厭氧球菌革蘭陰性：腦膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、桿菌革蘭陽(yáng)性：白喉棒狀桿菌、類(lèi)白喉棒狀桿菌、結(jié)核分枝桿菌、炭疽芽胞桿菌革蘭陰性：?jiǎn)伟⒋竽c埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、百日咳桿菌、軍團(tuán)菌

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)3、其他白念珠菌、隱球菌、曲霉菌、毛霉菌支原體、衣原體

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)二、檢驗(yàn)方法與程序綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)痰液標(biāo)本的檢驗(yàn)操作程序見(jiàn)下圖痰液初步報(bào)告肉眼觀察及涂片革蘭染色鏡檢合格標(biāo)本培養(yǎng)前處理不合格標(biāo)本拒收及建議重新采集合格標(biāo)本血平板（5%CO2環(huán)境）巧克力平板（5%CO2環(huán)境）麥康凱/中國(guó)藍(lán)平板（需氧環(huán)境）CHROMagar（需氧環(huán)境）菌落觀察涂片革蘭染色鏡檢結(jié)合涂片結(jié)果和培養(yǎng)結(jié)果綜合分析挑取可疑菌落純培養(yǎng)細(xì)菌鑒定、藥敏試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、痰液標(biāo)本的采集1）自然咳痰法2）小兒取痰法3）特殊器械采集法

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、痰液標(biāo)本的運(yùn)送痰液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，室溫保存不能超過(guò)2h，可選用運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送和保存標(biāo)本，但也不應(yīng)超過(guò)48h

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)3、對(duì)不合格痰液標(biāo)本的處理對(duì)下列不合格的痰液標(biāo)本應(yīng)拒收：痰液標(biāo)本呈水樣或唾液樣；痰涂片白細(xì)胞<10個(gè)/LP，上皮細(xì)胞>25個(gè)/LP；標(biāo)本放置時(shí)間超過(guò)2h；未用指定的無(wú)菌容器留取痰液。

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)三、培養(yǎng)及鑒定綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片檢查痰涂片進(jìn)行革蘭染色后，在低倍鏡下檢測(cè)20～40個(gè)視野，觀察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)量的多少來(lái)初步判定標(biāo)本是否合格

分級(jí)白細(xì)胞（個(gè)）/LP上皮細(xì)胞（個(gè)）/LPA>25<10B>2510～25C>25>25C10～25>25E<10>25痰標(biāo)本鏡下分類(lèi)注：A、B標(biāo)本適合培養(yǎng)，C、D、E為不合格標(biāo)本，應(yīng)重新留取標(biāo)本綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片檢查一般細(xì)菌涂片檢查：取痰液的膿性或帶血部分制成均勻薄片，進(jìn)行革蘭染色鏡檢，根據(jù)染色性、形態(tài)及排列初步報(bào)告。結(jié)核桿菌檢查：取干酪樣或膿性部分的痰液制成厚涂片，抗酸染色后鏡檢，根據(jù)所見(jiàn)結(jié)果報(bào)告找到抗酸桿菌或未找到抗酸桿菌。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片檢查放線菌及諾卡菌檢查：將痰液用生理鹽水反復(fù)洗滌數(shù)次，如含血液則加蒸餾水溶解紅細(xì)胞，挑取黃色顆粒（硫磺樣顆粒）或不透明的著色斑點(diǎn)，覆以蓋玻片并輕輕壓之，高倍鏡下觀察其結(jié)構(gòu)，若查見(jiàn)革蘭陽(yáng)性的分枝菌絲、中間部分的菌絲為革蘭陽(yáng)性、四周放射的末端為革蘭陰性，可報(bào)告疑似放線菌；如若見(jiàn)形態(tài)與放線菌相似，但菌絲末端不膨大，加做抗酸染色，呈弱陽(yáng)性，可報(bào)告疑似諾卡菌。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定痰培養(yǎng)的前處理痰液的洗凈：將痰加入15～20ml無(wú)菌生理鹽水的試管中，振蕩5～10s后靜置，用接種環(huán)將沉淀于管底的膿痰片沾出，放入另一試管內(nèi)，以同樣的方法反復(fù)洗滌3次，將洗滌后痰片接種在培養(yǎng)基上，主要是洗去痰中的正常菌群痰液的均質(zhì)化：向痰液內(nèi)加入等量pH7.6的1％胰酶溶液，置37℃水浴90min，即可使痰液均質(zhì)化而對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)無(wú)影響，此外還可以選用玻璃研磨。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定普通細(xì)菌培養(yǎng)：將處理后的痰接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、中國(guó)藍(lán)/麥康凱瓊脂平板上，分別放入普通和CO2環(huán)境，35℃培養(yǎng)18～24h后觀察菌落特征。若平板上有細(xì)菌生長(zhǎng)，辨別是病原菌還是條件致病菌，是一種菌還是多種菌。若平板上僅有正常菌群生長(zhǎng)，則繼續(xù)培養(yǎng)24h再觀察，必要時(shí)培養(yǎng)至72h。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定嗜肺軍團(tuán)菌培養(yǎng)：將均質(zhì)化的標(biāo)本接種于血瓊脂、巧克力瓊脂和BCYE瓊脂平板上，置35℃，5％～10％CO2環(huán)境中培養(yǎng)。若在上述培養(yǎng)基中24h內(nèi)有細(xì)菌生長(zhǎng)，則此菌不是軍團(tuán)菌。如在BCYE平板上48h后生長(zhǎng)，而血瓊脂平板和巧克力平板上不生長(zhǎng)，此菌可能是軍團(tuán)菌，應(yīng)進(jìn)一步鑒定。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定白喉棒狀桿菌培養(yǎng)：將處理好的痰液或假膜接種于呂氏血清斜面、血瓊脂平板和亞碲酸鉀瓊脂平板上，經(jīng)35℃培養(yǎng)16～48h后，分別觀察各種培養(yǎng)基上的菌落特征，如見(jiàn)到典型菌落，經(jīng)形態(tài)學(xué)檢查和生化試驗(yàn)、毒力試驗(yàn)證實(shí)后報(bào)告。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)四、結(jié)果報(bào)告綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片鏡檢報(bào)告革蘭染色：如見(jiàn)到排列成葡萄狀的革蘭陽(yáng)性球菌，可報(bào)告“找到革蘭陽(yáng)性球菌，形似葡萄球菌”；如見(jiàn)到瓜子仁或矛頭狀、尖端相背成雙排列、有明顯莢膜的革蘭陽(yáng)性球菌，可報(bào)告“找到革蘭陽(yáng)性雙球菌，形似肺炎鏈球菌”；如見(jiàn)到許多雙球狀、單個(gè)排列的革蘭陰性球菌，可報(bào)告為“找到革蘭陰性球菌，形似卡他莫拉菌”；如見(jiàn)到革蘭陰性桿菌短肥形且有明顯莢膜，可報(bào)告“找到革蘭陰性桿菌，形似肺炎克雷伯菌”；如見(jiàn)到不易識(shí)別的細(xì)菌，則報(bào)告“找到革蘭×性球（桿）菌”?？顾崛旧阂?jiàn)到抗酸陽(yáng)性桿菌，報(bào)告“找到抗酸桿菌”，而不能報(bào)告“找到結(jié)核分枝桿菌”。

綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片鏡檢報(bào)告如見(jiàn)到中央部分菌絲為革蘭陽(yáng)性，而四周放射的末梢菌絲為革蘭陰性，抗酸染色為陰性，可報(bào)告“找到革蘭陽(yáng)性桿菌、疑似放線菌”；如革蘭染色反應(yīng)與放線菌相同，抗酸染色為弱陽(yáng)性，可報(bào)告“找到革蘭陽(yáng)性桿菌、疑似諾卡菌”。對(duì)臨床有特殊要求的標(biāo)本，根據(jù)要求做相應(yīng)染色，根據(jù)鏡下所見(jiàn)報(bào)告結(jié)果。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、鑒定與藥敏分離培養(yǎng)得到致病菌后，挑取可疑菌落，選擇合適的鑒定卡片，制成適合的麥?zhǔn)暇簼舛?，立即進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥物敏感性試驗(yàn)。查見(jiàn)病原菌或條件致病菌報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果，并記錄細(xì)菌數(shù)量，半定量計(jì)數(shù)見(jiàn)下表。區(qū)別定植菌或病原菌，應(yīng)結(jié)合患者臨床狀況及診斷進(jìn)行分析。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、鑒定與藥敏

分級(jí)劃線區(qū)菌落數(shù)量第1區(qū)第2區(qū)第3區(qū)少見(jiàn)（+）<10少量（++）>10<5中等（+++）>10>5<5多量（++++）>10>5>5痰標(biāo)本在平板上的菌落量化指標(biāo)綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)五、臨床意義綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)上呼吸道感染是最常見(jiàn)的呼吸道感染癥，金黃色葡萄球菌、A群鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌以及某些革蘭陰性桿菌等是最常見(jiàn)的病原體。急性細(xì)菌性鼻炎、鼻前庭炎、鼻腔膿腫、鼻中隔膿腫等多由金黃色葡萄球菌、A群鏈球菌和銅綠假單胞菌常引起；慢性鼻竇炎多為需氧菌和厭氧菌混合感染；猩紅熱、風(fēng)濕熱及急性咽炎患者咽拭子?？蓹z出A群鏈球菌。綜合技能訓(xùn)練三痰液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)下呼吸道感染最常見(jiàn)的疾病是細(xì)菌性肺炎。肺炎鏈球菌是主要病原菌，由流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、革蘭陰性桿菌及軍團(tuán)菌所致肺炎也應(yīng)引起人們的重視。醫(yī)院獲得性肺炎的病原體50%以上是革蘭陰性桿菌，一些條件致病菌和