DB14∕T 1510-2017 玉米鐮孢穗腐病抗性鑒定牙簽接種技術(shù)規(guī)程

DB14山西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 2 2 3 3 3 4 5 7本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張作剛、王建明、李新鳳、高俊明、胡春艷、曹揮、王春偉、王1玉米鐮孢穗腐病抗性鑒定牙簽接種技術(shù)規(guī)程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）2根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別植物寄主對特定病蟲害反應(yīng)程度和抵抗水平的以常規(guī)組織分離法從發(fā)病玉米籽粒中分離穗腐病致病鐮孢菌。分離物經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定確認(rèn)為鐮孢菌(Fusariumsp.)后，進(jìn)行分離4.2致病性測定態(tài)學(xué)方法，必要時結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)確定5.1菌種準(zhǔn)備無菌條件下將病原鐮孢菌接種在直徑9cm培養(yǎng)皿中的PDA平板培養(yǎng)基上5.2麥粒準(zhǔn)備將100g麥粒放300mL三角瓶中，清水浸泡12h~24h，中間沖洗1~2次，水沖洗2~3次，然后篦去三角瓶中的水，蓋上棉將清水洗煮過的牙簽放在鍋中，加清水浸過牙簽，然后每1000m塊和15g~20g葡萄糖制成營養(yǎng)液，一起煮20min~30min。將營養(yǎng)液中煮過的牙簽撈出，趁牙簽表面濕潤時隨即放入加有1%瓊脂粉的小麥面粉中，攪拌使牙簽表面均勻地沾滿面粉。每800~1000根牙簽需用小麥面粉30g~3將牙簽菌袋與準(zhǔn)備的麥粒高壓蒸汽滅菌20min。5.5麥粒拌菌粒中，搖動三角瓶使菌種與麥粒混均，做成帶菌麥粒5.6菌袋接種分粘著到牙簽上以及麥粒均勻分散在牙簽之間的縫隙中。每800~1000根牙簽需用帶菌麥粒30g~50g。5.7培養(yǎng)保存玉米吐絲10～15d，即乳熟期接種。先用直徑3mm金屬錐子或鉆頭在雌穗中下部較粗的左為經(jīng)花絲通道接種后的發(fā)病模擬，圖右為苞葉穿刺接種后的發(fā)病模擬.4135799抗性評價依據(jù)每份鑒定材料的平均病情級別確定其抗病級別，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表2。當(dāng)設(shè)置的感病對照（B73）發(fā)病平均級別≥5.6時，該批次鑒定視為有效。對重復(fù)鑒定結(jié)果，以記載的最高病情級別為最終5A.1.1.1無性態(tài)Nirenberg，OosporaverticillioidesSacc.A.1.1.2有性態(tài)A.1.2形態(tài)特征A.1.2.1無性態(tài)在PSA培養(yǎng)基上氣生菌絲絨狀至粉狀，白色、淡紫色，有時產(chǎn)生橙色分生孢子座；基物A.1.2.2有性態(tài)A.2禾谷鐮孢A.2.1.1無性態(tài)禾谷鐮孢，學(xué)名：FusariumgraminearumClade，異名：FusariumroA.2.1.2有性態(tài)玉蜀黍赤霉，學(xué)名：Gibberellazeae（Schwein.）Petch，異名：Botryosphaeriasaubinetii，Dichomerasaubinetii，Dothideazeae，Gibberasaubisaubinetii，Sphaeriasaubinetii，SphaeriazeA.2.2形態(tài)特征6A.2.2.1無性態(tài)A.2.2.2有性態(tài)子囊殼在禾本科植物基質(zhì)上產(chǎn)生；子囊殼成堆，球形或卵形，表面粗糙，直徑140mm～250mm；子囊棒狀，大小為（60～85）mm×（8～刀狀，兩端鈍圓，3隔，大小為（19～24）mm7表B.1玉米籽粒上常見鐮孢菌種的特鐮孢菌屬Fusariumspp.AACTCCCAAACCCCTGTGAAC禾谷鐮孢復(fù)合種F.graminearumCladeACAGATGACAAGATTCAGGC串珠鐮孢F.verticillioidesAATTGGCCATTGGTATTATATAT禾谷鐮孢復(fù)合種的TEF-1α基因擴(kuò)增引物信息：TEF-F(5'-ATGGGTAAGGARGACAAGAC-3')，TEF-R(5'-GGARGTACCAGTSATCATGTT-3')。正向引物TEF-F位于TEF-1α基因序