三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進展

ChineseBulletinofLifeSciences(廈門大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，國家傳染病診斷試抗原結(jié)合位點的創(chuàng)新療法。與單克隆抗體和雙特異性抗體相比，三特異性抗體可增加結(jié)合特異性，降低脫靶毒性，在腫瘤免疫治療領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。本文主要介紹了三特異性抗體的發(fā)展進程、主要構(gòu)建形式及其作用機制，總結(jié)了不同靶點組合的代表性藥物的最新研究進展，并討論了其存在的挑戰(zhàn)和未來發(fā)ResearchprogressoftrispecificantibodiXULin,NINGWen-Jing,LIUXue,LUOWen-Xin*(NationalInstituteofDiagnosticsandVaccineDevelopmentinInfectionsDiseases,SchoolofPublicHeAbstract:Trispecificantumorcellsorimmuneeffectorcellssimultaneously.Comparedwithmonoclonalantibodiesandbispecificinthefieldoftumorimmunotherapy.Inthispaper,weintroducethedevelopmentprocessandmechanismofactionofTsAbs.Furthermore,wesummarizethelatestresearchprogressonrepresentativedrugswithdifferenttargetcombinations.Finally,wediscusaimingtoprovidenewideasforthedevelopmentoftrispecificantibodydrugs.Keywords:trispecificantibodies;cancerimmunotherapy;CD3因其特異性強、靶向性高和毒副作用小等特點，被廣泛應(yīng)用于治療各類重大疾病，包括腫瘤、感染性疾病、自身性免疫疾病等，成為藥物研發(fā)市場的主力軍。在腫瘤治療領(lǐng)域，由于免疫抑制性微環(huán)境及腫瘤免疫逃逸機制的復(fù)雜性，這種針對單一靶點的藥物往往難以達到理想的治療效果，臨床上表現(xiàn)為響應(yīng)率不高，獲益群體比較有限。因此，雙特異性抗體(bispecificantibodies,BsAbs)藥物應(yīng)運而生，為治療提供了新途徑。與單克隆抗體相比，雙特異性抗體具有雙重功能和高度特異性，被視為抗體工程領(lǐng)域的“二代抗體”[1]。雙特異性抗體能與兩種抗原表位特異性結(jié)合或橋接并激活免疫細胞[2]，達到兩藥聯(lián)合治療的效果。其中研究較多的是T細共有8款T細胞接合器被FDA批準(zhǔn)上市。盡管單克隆抗體和雙特異性抗體在臨床治療上都發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，但對于惡性腫瘤的治療療效仍然有限[1]，因而開發(fā)一種新的治療策略對增強反應(yīng)活性基金項目：國家自然科學(xué)基金項目(32070940)；博士434生命科學(xué)和緩解耐藥性都具有一定的臨床價值。隨著抗體藥物的發(fā)展，同時靶向三個特異性抗原結(jié)合位點的三特異性抗體(trispecificantibodies,TsAbs)在腫瘤治療領(lǐng)域展現(xiàn)了非凡的應(yīng)用前景。TsAbs是一種潛在也可通過招募免疫細胞進行腫瘤重定向，從而增強抗腫瘤免疫。與雙特異性抗體相比，三特異性抗體還能夠與腫瘤細胞或免疫細胞表面的另一個靶點相結(jié)合，或橋接免疫細胞并阻斷雙信號通路等作用，更有利于將藥物或免疫細胞重定向至腫瘤部位，增強結(jié)合特異性，提高靶向性，降低脫靶毒性[3]，從而提升抗腫瘤能力(表1)。本文將介紹三特異性抗體的發(fā)展進程，總結(jié)不同靶點組合的代表性藥物的最新研究進展，以期為下一代三特異性抗體藥物的1991年，德國慕尼黑大學(xué)首次提出靶向TAA是T細胞接合器TCE的早期概念設(shè)計。1999年，RobertF.Graziano開發(fā)了一種三特異并在細胞水平上進行了功能驗證[5]，但此時三特異性抗體的具體生物學(xué)功能尚未得到深入研究。步入學(xué)研究所構(gòu)建了一種名為CEA(cancerembryonic活T細胞殺死癌細胞外，TsAbs還被設(shè)計用于橋接NK細胞和腫瘤細胞，增強NK細胞的抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)功能，從而更有效地殺死腫瘤細胞。同時期，許多靶向CD16的TsAbs已經(jīng)開始被報道，如CD16/CD123/CD33、CD16/CD19/CD22[7]。越來越多的學(xué)者開始深入研究不同靶點組合、結(jié)構(gòu)形式、作用機制下三特異性抗體如何殺傷腫瘤細胞而發(fā)揮藥物療效，2015年后TsAbs目前，全球尚無三特異性抗體藥物獲批上市，不過已有多家生物醫(yī)藥企業(yè)布局三特異性抗體，并國內(nèi)成都恩沐生物、博銳生物、嘉和生物等企業(yè)亦走在前沿的是輝瑞公司開發(fā)的一款A(yù)nti-IL-13/IL-4/TSLP(PF-07275315)，屬于三功能融合蛋白，針對特應(yīng)性皮炎(atopicdermatitis,AD)，目前已進入臨床2期。2020年，哈普恩治療公司(Harpoon328)的三特異性抗體，針對小細胞肺癌(SCLC)的賽諾菲公司(Sanofi)開發(fā)了一款A(yù)nti-CD3/CD38/CD28(SAR442257)的三特異性抗體，其介導(dǎo)了強烈的腫瘤細胞殺傷作用，與抗CD38單抗相比，SAR442257在體外對CD38高表達和CD38低表達的多發(fā)性骨髓瘤細胞(multiplemyeloma,MM)均表現(xiàn)出高3~4個數(shù)量級的殺傷效力[1]。該藥物針對復(fù)發(fā)難治性MM和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma,NHL)的臨床研究，目前處于臨床1期(NCT04401020)。2021年，賽諾菲與Innate公司合NK細胞接合器(SAR443579)，目前處于臨床1/2期(NCT05086315)，有可能成為血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者的新選擇。此外，賽諾菲還布局了Anti-CD3/CD28/HER2(SAR443216)和Anti-NKp46/Numab公司(NumabTherapeutics)研發(fā)的靶向PD-L1/4-1BB/HSA(PD-L1：programmedcelldeath1serumalbumin，人血清白蛋白)的三特異性抗體NM21-1480正在實體瘤中進行臨床1/2期驗證(NCT04442126)。普米斯生物技術(shù)公司(Biotheus)研發(fā)的靶向PD-L1/TGF-β/VEGF的三特異性抗體PM8003也在晚期實體瘤中開展臨床1/2期研究2三特異性抗體的構(gòu)建形式及作用機制三特異性抗體按照作用機制的不同主要分為：T細胞接合器、免疫檢查點抑制劑、NK細胞接合TAA)、延長半衰期的TCE以及三功能融合蛋白等。T細胞接合器(TCE)是腫瘤免疫治療中用得比較多的構(gòu)建形式，TCE通常基于抗體或抗體片段，能夠?qū)Ⅲw內(nèi)的T細胞與表達TAA的腫瘤細胞或表達特定標(biāo)志物的其他免疫細胞橋接起來。T細胞激活需要至少兩個信號，其中第一信號是由T細胞受的靶向CD19和CD3的Blinatum同一靶抗原上的不同結(jié)構(gòu)域等多種情況PF-07275315，臨床2期，靶向IL-13/IL注：ADCC：抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒作用；ADCP：抗體依賴的細胞吞噬作用；CDC：補體依賴的細胞毒性；EGFR：表皮生長因子受體；BCMA：B細胞成熟抗原；第第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進展435436生命科學(xué)presentingcell,APC)或腫瘤細胞表面上的組織相CD28分子與APC上的共刺激分子(如B7家族分子CD80和CD86)的相互作用[8-9]。共刺激分子或共抑制分子及其配體參與了T細胞的活化、增殖，的是B7/CD28家族和腫瘤壞死因子受體超家族的LAG-3等[10]，通過結(jié)合這些調(diào)節(jié)分子可調(diào)節(jié)T細胞的功能變化。三特異性T細胞接合器可以分為三成都恩沐生物科技有限公司的CMG1A46(BR110)藥物為靶向CD3/CD19/CD20的三特異性抗體，其適應(yīng)證為急性淋巴細胞白血病(ALL)、NHL、血液腫瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B淋巴瘤，現(xiàn)已進行到臨床1/2期(NCT05348889)。CD19是B細胞表達的一種CD分子，屬于從細胞性或正常B細胞上表達，促進其增殖和激活[12]。CD20是一種多程跨膜蛋白[13]，是研究最廣泛的B細胞抗原之一，有50%左右的B前體ALL患者的B細胞表達CD20。根據(jù)博銳生物公司官網(wǎng)，CMG1A46同時靶向T細胞表面的CD3以及B細胞上的兩個抗原表位CD20和CD19，通過募集CD3+T細胞增強T細胞功能，介導(dǎo)B細胞耗竭并最終殺死表達CD19和(或)CD20的B細胞。選擇CD19和CD20作為靶抗原具有一定的優(yōu)勢：首先，CD19和CD20能夠在絕大多數(shù)惡性B細胞上表達[14]；其次，兩種抗原同時丟失的可能性很第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進展437擴大細胞識別能力的同時，不易產(chǎn)生腫瘤外毒性增加的副作用[16]。此外，CD3/CD19/CD20靶點聯(lián)合治療的藥物在體外腫瘤細胞系和原代血液樣品中表現(xiàn)出高度的選擇性效力，具有活化、增殖T細胞和產(chǎn)生細胞因子的能力，且有望降低細胞因子釋放綜在人外周血單個核細胞(PBMC)移植的非肥胖糖尿病(nonobesediabetes,NOD)小鼠模型中，注射CMG1A46藥物可誘導(dǎo)(CD19+/CD20+)Jeko-1淋巴瘤和(CD19+/CD20-)A20-hCD19腫瘤的快速消退并同時展示出了強大的抑瘤活性。在食蟹猴的藥代劑量提高到原先的10倍毒性也未明顯增加，未出現(xiàn)顯著不良反應(yīng)。因此，CMG1A46的效力高、毒性可控且在血清中具有天然IgG樣半衰期，具有良此CD28可抑制T細胞死亡從而提高T細胞殺傷腫瘤細胞的持久性[20-21]。賽諾菲公司的SAR-442257藥物為靶向CD3/CD28/CD38的三特異性抗體，其適應(yīng)證為MM、NHL，現(xiàn)已進行到臨床1期(NCT04401020)。賽諾菲的兩種三特異性抗體藥(Anti-CD3/CD28/HER2)[6]讓科學(xué)家們重新關(guān)注到Anti-CD3/CD28/CD38能夠提供兩種信號，以充分和持久地激活T淋巴細胞，并將其聚集到腫瘤細胞周圍殺傷腫瘤[22]。合理設(shè)計出更緊密的免疫突觸，可以進一步增強對腫瘤的殺傷能力。因此，相比于勢在于能更徹底、更持久地激活T細胞，瘤活性。不過激活T細胞不可避免地會導(dǎo)致CRS，小鼠模型中進行藥物測試，結(jié)果顯示SAR-442257人靈長類動物(nonhumanprimate,NHP)的記憶/效原代CD8+T細胞重建的NSG小鼠，接種素酶報告基因的NCI-H929人多發(fā)性骨髓瘤細胞，通過熒光成像技術(shù)監(jiān)測抗體治療后的生長情況，發(fā)現(xiàn)CD38三特異性抗體的效果顯著，劑量低至1μg/kg即可明顯抑制腫瘤的生長[22]。因此進一步證明，共刺激信號可以阻止T細胞凋亡。通過給猴子靜脈注射SAR-442257，發(fā)現(xiàn)并未有明顯的CRS。導(dǎo)的T細胞活化，增加CRS的風(fēng)險[25]。不過藥物對正常細胞的數(shù)量影響不大，在接受抗體治療的猴免疫檢查點是一類抑制人體免疫應(yīng)答的免疫抑制性分子，包括其配體和受體及之間的信號通路，正常細胞通過表達免疫檢查點配體，與免疫檢查點分子結(jié)合傳遞抑制信號，來抑制細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxicTcell,CTL)的激活，從而避免正常細胞受到免疫攻擊，但同時癌細胞會利用該機制形成疫逃逸，從而抑制對腫瘤的免疫作用，導(dǎo)致腫瘤發(fā) 免疫檢查點抑制劑共抑制免疫應(yīng)答的配體和受體結(jié)合及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而進一步激活免疫細胞，恢復(fù)宿主免疫系統(tǒng)的攻擊能力以抵御腫瘤細胞。在臨床上，ICB能改善患者療效，緩解化學(xué)治療、放射治療等帶來的副作用，有效延長患者的生存期。若單獨使用免疫檢查點抑制劑，其抗腫瘤效果僅在部分患者中響應(yīng)并且易產(chǎn)生耐藥性[26]。因此，免疫檢查點抑制劑更多地被應(yīng)用于聯(lián)合療法或開發(fā)成雙/多特異性抗體，通過與免疫激活受體結(jié)合激活免疫細胞，或兩個免疫檢查點抑制劑進行組合來常見的免疫檢查點包括PD-1/PD-L1及CTLA-4，均在不同類型的實體瘤臨床治療中有所成效。PD-1是免疫細胞上表達的一種跨膜蛋白，與PD-或PD-1/PD-L2信號通路使腫瘤細胞逃逸細胞毒性故PD-1可作為免疫檢查點阻斷療法的潛在靶點。另一種常見的免疫檢查點PD-L1，在腫瘤細胞上高表達，其表達與免疫細胞的浸潤程度成正比[27]。通過PD-1/PD-L1及CTLA-4免疫檢查點抑制劑可438生命科學(xué)解除腫瘤細胞對免疫系統(tǒng)的抑制，激活免疫細胞再識別、監(jiān)視腫瘤細胞，發(fā)生免疫介導(dǎo)的腫瘤應(yīng)答，Numab公司在研的ND-021藥物是靶向4屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員，主要表達于活化的T細胞，是T細胞協(xié)同刺激分子，其配體為公司進行了多項多特異性藥物的研發(fā)。ND-021即是下一代多特異性癌癥治療藥物，可同時靶向腫瘤免疫抑制性PD-1/PD-L1通路和腫瘤免疫刺激性的協(xié)同效應(yīng)。同時，ND-021的結(jié)構(gòu)域通過結(jié)合的分子設(shè)計旨在高效，同時僅局部激活腫瘤定向的Numab公司于2018年在美國癌癥研究協(xié)會(AmericanAssociationforCancerResearch,AACR)性優(yōu)于PD-1/PD-L1阻斷劑及其與針對共刺激受體的抗體的結(jié)合。在2022AACR年會上，Numab公布了部分臨床前數(shù)據(jù)：在兩種不同異種移植模型的人源化小鼠中，ND021注射后不僅增強了瘤內(nèi)CD8+T細胞的增殖性，而且與αPD-L1和α4-1BBPD-L1/4-1BB/HSA三特異性抗體的耐受性更佳。而食蟹猴中的藥代動力學(xué)/藥效學(xué)研究也進一步證實了該抗體的穩(wěn)定性、藥理活性、耐受性和半衰高劑量ND021會維持對4-1BB的刺激，且刺激作用呈劑量依賴性持續(xù)增加，直至達到最高藥物劑量NK細胞接合器的結(jié)構(gòu)與TCE類似，一只手臂靶向癌細胞，另一只手臂靶向NK細胞，外加一個增強NK殺傷功能的靶點，如細胞因子或NK激活受體，也可以是另一個TAA。NK細胞的活性受多種激活和抑制受體的分子調(diào)控，在細胞因子方面主要是IL-15，用以激活NK細胞和記憶性CD8+T細目前設(shè)計的NK細胞激活劑主要是用于治療血液AML)中高表達而在正常造血干細胞中表達相對較高表達與高殘留病灶呈正相關(guān)，提示預(yù)后不良。CD16屬于Ig超家族成員，參與抗體依賴性的細胞毒性作用，同時是NK細胞的核心標(biāo)記之一。NK細胞可通過細胞表面抗原CD16與腫瘤特異性IgG抗體結(jié)合，識別并殺傷與IgG抗體特異性結(jié)合的腫瘤細胞。NKp46是一種在哺乳動物中高度保守的活常在靜止和活化的NK細胞上表達，可介導(dǎo)NK細第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進展439賽諾菲與Innate公司合作，利用Innate公司專有的多特異性抗體平臺ANKET開發(fā)了一款基于NKp46/CD16的NK細胞接合器S同時，AML患者在診斷時，NK細胞中的NKp46CD64的表達能使其對抗CD123抗體產(chǎn)生耐藥性，而SAR443579通過與CD16a和NKp46的結(jié)合協(xié)同激活NK細胞，將NK細胞重定向到癌癥靶點，可以規(guī)避這種耐藥性[33]，同時利用NK功能對抗癌細胞的優(yōu)勢，誘導(dǎo)腫瘤細胞裂解，因此SAR443579的首次人體臨床試驗結(jié)果顯示，劑量高達3mg/kg每周一次時耐受良好，并觀察到CDE官網(wǎng)顯示，注射用SAR443579已獲批臨床，(FCGR3B)兩種蛋白，CD16a是NK細胞表達的最有效的激活受體[34]，且CD16a是唯一可以自行激活NK細胞的受體，無須通過其他受體進行額外激。NKG2D是一種Ⅱ型跨膜受體，存在于所有小鼠和人的NK細胞中。HER2是一種位于細胞膜癌患者中高表達，因此可作為乳腺癌的潛在免疫治達，因而許多HER2低表達實體瘤患者也可能受益通過CD16a/HER2/NKG2D靶點聯(lián)合治療的在研三特異性抗體主要有DragonflyTherapeutics公司的DF-1001藥物，借助該公司的TriNKET?平臺開發(fā)，這是目前在研TriNKET?產(chǎn)品線中最先進的候選藥物，適應(yīng)證為實體瘤，現(xiàn)已進行到臨床ADCC作用，NKG2D可以充當(dāng)共刺激受體，其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)能增強T細胞功能和TCR活化[39]。作為一種多功能受體，NKG2D可與靶細胞表面多種配體分子直接結(jié)合[40]，但NKG2D配體在正常細胞表面安全性，其次是治療療效。針對36例晚期和(或)難治性實體瘤患者進行劑量遞增治療，有79%的患者報告了治療相關(guān)不良事件，但大多是低級別；其中22例患者病情穩(wěn)定(stabledisease,SD)，臨床在2023年舉辦的ASCO年會上首次發(fā)表了DF1001劑量升級的1期結(jié)果，在Dragonfly公司對該藥物進行的1/2期臨床試驗中，用單藥DF1001治療了106例患者，療效安全且耐受性良好。在患者開始顯示出腫瘤組織NK細胞和(或)CD8+T細胞浸潤2.4.1GB263T(Anti-EGFR/以嘉和生物藥業(yè)有限公司的三特異性抗體EGFR和兩種不同的cMET表位[43]，目前處于1/2期臨床研究(CTR20221422)。GB263T可顯著增強其EGFR靶點結(jié)合兩個Fab，在EGFR的Fc片段引入了Fc效應(yīng)功能增強突變體，增強其ADCC功能；同時，兩種Fab靶向c-Met的兩個不同表位，與強生2021年獲FDA批準(zhǔn)的EGFR/c-Met雙特異性抗體Amivantamab(JNJ-37GB263T可顯著降低EGFR和c-Met的表達水平，抑制下游信號通路，并在多種腫瘤模型的體內(nèi)藥效實驗中顯示出顯著的抗腫瘤活性[1]。在EGFR突變患者中進行的首次人體1/2期研究通過藥物的初步劑量遞增，評價藥物的耐受性和安全性，并評估其初步療效、藥代動力學(xué)和免疫原性。結(jié)果顯示，6例患者中有5例出現(xiàn)治療相關(guān)不良反應(yīng)，但均為輕血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種高度特異性促進血管內(nèi)皮細胞遷移增殖等作用。VEGF及其受440生命科學(xué)體(VEGFR)組成的VEGF/VEGFR2通路是開發(fā)抗血管生成藥物的主要靶標(biāo)，且VEGF在腫瘤微環(huán)境(tumormicroenvironment,TME)中的過表達具有抑拓維創(chuàng)新生物科技有限公司在研的TAVO-412創(chuàng)生物專有的平臺設(shè)計和改造而成，其適應(yīng)證為實TNBC)、肺癌、胰腺癌、胃癌，現(xiàn)已進行到臨床1期(NCT05548634)。TAVO-412是一種人源化多特異性抗體，具有兩個不同的抗EGFR納米抗體結(jié)構(gòu)域、一個抗cMetFab臂和一個抗VEGFScFv結(jié)構(gòu)。VEGF具有促進黏附分子和趨化因子表達的能力，誘導(dǎo)腫瘤血管結(jié)構(gòu)異常，可阻止免疫細胞浸潤。因此，TAVO-412在阻斷EGFR和cMET信號通路的同時，可以阻斷腫瘤內(nèi)的血管生成，通過多靶點的協(xié)同效應(yīng)提高了在TME中的抗腫瘤療效。在臨床前異種移植模型中，TAVO-412顯示出對如，對不同EGFR和cMet受體密度水平的TNBCBT20)展開體內(nèi)測試研究，結(jié)果在多個TNBC細胞系成瘤動物模型中發(fā)現(xiàn)了強烈的腫瘤生長抑制效中的TGI達62%[47]。此外，在一項食蟹GLP毒理學(xué)研究中，TAVO412也顯示出良好的耐納米抗體又稱VHH抗體，是只包含一個重鏈可變區(qū)的單域抗體，分子量僅為普通抗體的1/10，體會被腎小球濾過而清除出體內(nèi)，導(dǎo)致半衰期短，而與HSA結(jié)合則可以顯著增強抗體的血清半衰期。靶向HSA延長抗體在體內(nèi)半衰期的優(yōu)勢如下：患者醫(yī)療負擔(dān)的同時，提高抗體藥物自身的療效；提高患者安全性和抗實體腫瘤活性，具有高度特異性和有效的重定向裂解，從而在HSA存在時表現(xiàn)2.5.1HPN-328(Anti-CD3/DLL3/al可與不同的Notch受體結(jié)合。根據(jù)不同的腫瘤類型和細胞生長環(huán)境，DLL3可發(fā)揮出促癌或抑癌的雙向作用。DLL3主要分布在神經(jīng)內(nèi)分泌類腫瘤的細胞膜上，因此是治療神經(jīng)內(nèi)分泌類腫瘤的有力免疫新型抗體衍生平臺開發(fā)的HPN-328為靶向CD3/蛋白三個抗體衍生的結(jié)合域，其適應(yīng)證有SCLC，現(xiàn)已進行到臨床1/2期(NCT04471727)[53]。HPN-328在神經(jīng)內(nèi)分泌類腫瘤中的I/IIa期研究中也顯示出初步療效[54]。在1mg/kg和10mg/kg量下，在NHP中耐受性良好，無不良的生化變化經(jīng)內(nèi)分泌前列腺癌(neuroendocrineprostatecancer,NEPC)和其他神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者，初步證據(jù)表明HPN-328對這些腫瘤都具有抗腫瘤活性[55]。在≥13例腫瘤病灶減少，客觀緩解率為25%，疾病控制2.5.2HPN-536(Anti-CD3/MSLN/a間皮素(mesothelin,MSLN)在腺癌、卵巢癌和肺腺癌等多種人類癌癥中呈現(xiàn)高表達，而在健康細胞中低表達的特點使得其成為了一通過CD3/MSLN/albumin靶點聯(lián)合治療的在研三特異性抗體主要有Harpoon公司的HPN-536，它是經(jīng)典的TriTAC模式(VHH-VHH-scFv)，三個結(jié)構(gòu)域分別結(jié)合CD3、TAA和HSA，其中結(jié)合CD3表位的抗體為單鏈抗體(scFv)，結(jié)合HSA和TAA的抗體為納米抗體。HPN-536的適應(yīng)證有胰腺癌、卵巢癌、肺癌和間皮瘤，現(xiàn)已進行到臨床1/2期(NCT03872206)。HPN-536在NHP、嚙齒動物模型向靶細胞裂解依賴于TriTAC分子與腫瘤細胞表達藥代動力學(xué)特性。其次，在活性方面，HPN-536與第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進展441似的高生物活性。而半衰期的延長依賴于HPN-536的第三個結(jié)構(gòu)域與血清白蛋白的結(jié)合，從而增加了藥物在癌癥患者免疫治療中的臨床活性，發(fā)揮更加2.5.3CB-307(Anti-4-1BB/PSMA/al4-1BB是一種跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員[57]，多由活化的T細胞和其他克雷桑多生物科技公司(CrescendoBiologics)在研的CB-307為靶向4-1BB/PSMA/albumin的三到臨床1期(NCT05836623)。利用其配體4-1BBL殖并分泌細胞因子，提高機體的免疫應(yīng)答水平[61]。4-1BB雖然在靜息的CD4或CD8T細胞中表達量低，但T細胞在被抗原刺激時，4-1BB表達量會隨代表了一種有吸引力的腫瘤免疫治療靶點[64]。PSMA的表達水平與雄性激素的轉(zhuǎn)移和前列腺癌的中表達水平較低[59]，因而成為了轉(zhuǎn)移性PC免疫治療中有希望的分子靶點[68]。在表達人PSMA的小鼠模型中進行的藥理學(xué)研究顯示，CB-307能顯著抑制腫瘤生長。同時，在食蟹猴中評估CB-307的非臨床毒理學(xué)和藥代動力學(xué)，結(jié)果顯示藥物耐受性此外，使用非免疫球蛋白作為支架來構(gòu)建多特異性抗體也是一種選擇。其中，DARPins是基于自然產(chǎn)生的錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域，該重復(fù)結(jié)構(gòu)域是一個可以產(chǎn)生多特定蛋白的支架，可用于構(gòu)建多特異性2.6.1PF-07275315(Anti-IL-13/IL-4IL-7)細胞因子，主要在肺、皮膚和腸道屏障表面族的重要成員，IL-4和IL-13受體亞基在正常情況下低表達，二者皆是誘導(dǎo)和維持炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵細可通過抑制相應(yīng)的細胞因子產(chǎn)生從而改善疾病的癥狀，例如輝瑞公司的PF-07275315為靶向IL-13/已進行到臨床2期(NCT05995964)。IL-4可以誘導(dǎo)胞的增殖，引導(dǎo)免疫球蛋白類向IgG4和IgE轉(zhuǎn)化，且在過敏性炎癥和哮喘中也起關(guān)鍵作用。IL-13是一種免疫調(diào)節(jié)細胞因子，主要由活化的Th2細胞分TSLP能激活第2型先天淋巴細胞(typeⅡinnatelymphoidcells,ILC2)[75]，從而誘導(dǎo)先天輔助并誘導(dǎo)Th2細胞分化[76]，進一步產(chǎn)生Th2細胞因時TSLP會觸發(fā)絲聚蛋白基因缺陷皮膚中的Th22因此，靶向抑制TSLP及其相關(guān)的細胞因子IL-4、2.6.2PM8003(Anti-PD-L1/TGF-VEGF在TME中的過表達可以抑制免疫效應(yīng)細胞并激活免疫抑制細胞，從而驅(qū)動TME中的免藥物的療效。轉(zhuǎn)化生長因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)是一種腫瘤抑制因子，通過阻斷腫瘤細胞周期進程抑制腫瘤增殖，且TGF-相關(guān)基因上調(diào)與腫瘤治療的耐藥性有關(guān)[79]。普米斯生物技術(shù)公司在研的PM-8003藥物是靶向PD-L1/TGF-β/VEGF的三功細胞的數(shù)量，增加效應(yīng)T細胞的活性，從而恢復(fù)對制T細胞浸潤來塑造TME以抑制抗腫瘤免疫[79]。抗TGF-β和抗PD-L1的聯(lián)合應(yīng)用可以促進T細胞滲透到腫瘤中心并增強抗腫瘤免疫力，且TGF-β可442442生命科學(xué)NCTNCT05995964NCT03577028NCT05348889NKCENSCLCNCT04184050NCT04471727NCT03872206ND-021NCT04442126NCT03214666NKCENCT05086315NKCENCT05839626NCT05836623NCT05978284NCT05862012NCT05424822NCTNCT05397496、NCT03705169NCT04401020NCT05013554NCT05548634NSCLC/////NKCE/注：TCE：T細胞接合器；NKCE：NK細胞病；NSCLC：非小細胞肺癌；NHL：非霍奇金淋巴瘤；SCLC第第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進展443444生命科學(xué)重抑制可能具有更強的抗血管生成作用。此外，TGF-β和VEGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的雙重抑制可以協(xié)同減少三特異性抗體是一種具有潛力的多靶點免疫干預(yù)手段。相比單克隆抗體和雙特異性抗體，三特異性抗體可以同時實現(xiàn)多種作用機制，包括在特異性靶向腫瘤細胞的同時阻斷免疫檢查點或激活免疫細并且通過靈活的靶標(biāo)組合可以增強免疫細胞活化或免疫抑制阻斷，確保精確有效地殺傷腫瘤。然而，三特異性抗體的發(fā)展仍面臨一些局限性，值得深入關(guān)注和研究。首先，三特異性抗體高度刺激免疫系抗體，由一種減毒的三特異性T細胞接合器(TCE)與抗白細胞介素6受體(IL-6R)結(jié)合部分融合而兩種抗IL6RscFv融合到TsAb上，TriTECM抗體可以抑制EGFR和IL6R信號通路，并有效觸發(fā)T細胞介導(dǎo)的細胞毒性。此外，TriTECM介瘤T細胞活性減弱，表明TriTECM具有成為細胞因子釋放調(diào)節(jié)劑的潛力[80]。其次，在某些情況下，抗體藥物可能會表現(xiàn)免疫原性，且給藥抗體經(jīng)常誘降低藥物的治療效果或引起嚴重的不良事件。通過糖基化、聚乙二醇化和序列修飾等，可以在一定程雖然在NHP中展現(xiàn)了可接受的安全性[6]，但在臨床應(yīng)用中仍需要探索降低毒性的方法。其中，一種應(yīng)對靶向性與非靶向性細胞毒性的策略是選擇性激的BsAb組成，每個BsAb靶向不同的TAA。腫瘤只有當(dāng)兩個抗體分子同時與同一個腫瘤細胞的雙靶點結(jié)合時，CD3結(jié)合域的兩部分才能結(jié)合并產(chǎn)生功能完備的抗CD3結(jié)合域。在上述方法中，HLE結(jié)構(gòu)域在蛋白水解激活時丟失，若TCE的活性形式從腫瘤中釋放出來，則可以降低全身副作用的風(fēng)措施還包括控制劑量、改變給藥方式、臨床預(yù)防性其中，使用皮下而非靜脈注射的給藥方式，可以減緩抗體暴露的速度，避免注射大量抗體而過度激活T細胞，或按照最低預(yù)期生物效應(yīng)水平劑量來緩解全身毒性，以上舉措有助于降低安全風(fēng)險。最后，多特異性抗體的結(jié)構(gòu)具有一定復(fù)雜性，生產(chǎn)工藝難度會隨著與抗體相關(guān)的特異性靶標(biāo)數(shù)量增加而增加，純化環(huán)節(jié)相較于單抗和雙抗更復(fù)雜。在三特異性抗體生產(chǎn)和純化過程中可能會產(chǎn)生蛋白質(zhì)聚集、生產(chǎn)質(zhì)量不穩(wěn)定、雜質(zhì)較多以及生產(chǎn)收率低等問因此在純化環(huán)節(jié)一般需增加層析步驟以去除雜質(zhì)，但因分子間的相似性使層析分離度降低，若想達到目標(biāo)純度就會影響產(chǎn)量。因此，探索一種簡單通用的三特異性抗體制造方法，開發(fā)有效的純化工藝尤面臨挑戰(zhàn)的同時，三特異性抗體的研究領(lǐng)域也展現(xiàn)出巨大的潛力和應(yīng)用前景。選擇更有效、更具靶向性的抗體靶點是關(guān)鍵。就目前而言，三特異性抗體的設(shè)計主要集中在腫瘤細胞和免疫細胞上，尋找新的靶點以提高三特異性抗體的選擇性及其抗腫瘤活性，在靶點組合、抗體形式和序列修飾方面，仍需繼續(xù)優(yōu)化。此外，還可探索能夠同時靶向四種不同靶標(biāo)的四特異性抗體。例如，Demaria等[84]報道了一種基于四特異性抗體的自然殺傷細胞接合器受體β鏈和TAA結(jié)合，該抗體藥物可以誘導(dǎo)NK細胞在體內(nèi)和體外增殖，控制局部和彌散性腫瘤，同時觸發(fā)NK細胞的細胞毒性以及細胞因子和趨化因子的產(chǎn)生。探索三特異性抗體與其他療法(如放射治療、化療、免疫療法等)的聯(lián)合應(yīng)用，以期在副作用可控的條件下，進一步提高治療效果，也是未來可以發(fā)展的方向。相信在不久的將來，三特異[1]YaoY,HuY,WangF.Trispe[2]LuRM,HwangYC,LiuIJ,etal.Developmentoftherapeuticantibodiesforthetreatmentofdiseases.J[3]MullardA.Trispecificantibodiestaketotheclinic.Nat第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進展445[4]LyuX,ZhaoQ,HuiJ,etal.Thegloballandscapeofapprovedantibodytherapies.AntibT[5]Trispecificsimproveimmune-cellengagement.Cancer[6]SeungE,XingZ,WuL,etal.AtrispecificantibodyviaCD4cells.Nature,2022,chimericantigenreceptorT-celltherapyforchildhoodrefractoryorrelapsedB-cellacutelymphocasingle-arm,phase2study.LancetOncol,2023,24:[8]KhanM,AroojS,WangH.SolubleB7-CD28familyinhibitoryimmunecheckpointproteinsandanti-cancer[9]WielandA,AhmedR.Immu[10]AggarwalV,WorkmanCJ,VignaliDAA.LA[11]PhillipsR.Non-depletinganti-CD19Bcellinhib[12]Tapia-GalisteoA,álvarez-VallinaL,SanzL.Bi-andtrispecificimmunecellengagersforimmunotherapyofhematologicalmalignancies.JHematolOncomplexwiththetherapeuticmonoclonalantibodyCD20,anti-CD19CARTcellsforrelapsedBcellmalignancies:aphase1doseescalationandexpansion[15]DuellJ,LeipoldAM,AppenzellerS,etal.Sequentialantigen-lossandbranchingevolutioninlymphomaafterCD19-andCD20-targetedt-cellredirectingtherapy.CD20CAR-engineeredTcellsinrefractory/relapsed[17]ZhangJ,ZhouZ.Preclinicalstudyofanoveltrianti-CD3/CD19/CD20Tcell-engagingantibodyasapotentiallybettertreatmentforNHL.Blood,2020,136:22[18]DuraiswamyJ,TurriniR,MinasyanA,etal.Myeloidantigen-presentingcellnichessustainantitumorTcellsandlicensePD-1blockadeviaCD28costimulation.TcellCD28deficiencyaresusceptibletoskinpapillomavirusesbutareotherwisehealthy.Cell,2021,184:381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