DB22T 2972-2019 羊泰勒蟲病病原檢測(cè) PCR法　　

DB22DB22/T2972—2019羊泰勒蟲病病原檢測(cè)PCR法PCRassayfordetectionoftheileriaovis2019-05-27發(fā)布2019-06-17實(shí)施吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布I1GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)過人工合成的特異性寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段互補(bǔ)序列結(jié)合，形成部分雙鏈，再利用反應(yīng)4.1.3dNTP（dATP、dCTP、dGTP、dTTP濃度2.5mmol/24.2.3Eppendorf管（14.4儀器設(shè)備4.4.3PCR擴(kuò)增儀，溫度范圍為4℃~100℃。4.4.6微波爐或恒溫水浴鍋，室溫～在PCR反應(yīng)管（4.2.4）中依次加入反應(yīng)試劑，PCR擴(kuò)增體系為25μL，見表2?；靹蚝笾肞CR擴(kuò)增儀3分別與5μL的待檢綿羊血液基因組DNA樣品、陰性對(duì)照（4.1.9）、陽性對(duì)照（4.1.10）和空白對(duì)照（4.1.11）的PCR產(chǎn)物混勻后，按編號(hào)加入到1%瓊脂糖凝膠板的加樣孔中，凝膠的邊孔中加標(biāo)準(zhǔn)陽性對(duì)照出現(xiàn)671bp的DNA擴(kuò)增條帶，標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照和空白對(duì)照無此擴(kuò)增條帶，反應(yīng)結(jié)果成在陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和空白對(duì)照成立條件下，若待檢樣品出現(xiàn)671bp的DNA擴(kuò)增條帶，判為陽4A.1.2TAE緩沖液（50×)的配制見表A.2。表A.2TAE緩沖液（50×)配制5A.3.2將三角瓶（4.2.5）放在沸水浴或微波爐（4.4.5）中加熱至瓊脂糖充分溶解（注意用微波爐加），6MTGATGAGTTGATGTATTGTGGCTTATTTCGGATGATACTTGTATTATCCGGATGATTACTTTGAGAAAATTAGAGTGCTCAAAGCAGGCTTTTGCCTTGAATAGTTTAGCATGGAATAATAAAGTAGGACTTTGGTTCTATTTTGTTGGTTTTAGGTACCAAAGTAATGGTTAATAGGAACAGTTGGGGGCATTCGTATTTAACTGTCAGAGGTGAAATTCTTAGATTTGTTAAAGACGAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAAGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGGATCAGATACCGTCGTAGTCCTAACCATAAACTATGCCGACTAGAGATTGGAGGTCGTCAGTTTTTACGACTCCTTCAGCACCTTGAGAGAAATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGCGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACAAAGGAAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCTTGATTCTTTGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGTTAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGGATGCGGG