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DB22DB22/T3172.1—2020流感病毒HA和NA基因熒光RT-PCR檢測第1部分：H7N9亞型禽流感病毒Real-timeRT-PCRdetectiononHAandNAgenesofinfluenzavirusPart1：H7N9subtypeavianinfluenzavirus吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布I1Ct值：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到的設(shè)定的閾值時所RT-PCR：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reversetranscription-pTaq酶：Taq脫氧核糖核酸聚合酶（Thermusaquatic根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA基因和NA基因序列設(shè)計特異引物和探針，探針結(jié)合部位在擴增片段內(nèi)部。HA基因和NA基因探針分別在5’端標記發(fā)出的熒光信號被淬滅基團所吸收，儀器檢測不到熒光信號；而反應(yīng)進行到延伸階段時，Taq酶發(fā)揮25’–TGCACAGGGAGAGGGAACTG–3’5’–CAAATTGTTGGTTGGTTTTTGC–3’38.1.2除商品化棉拭子、采樣袋外，上述采樣工具應(yīng)經(jīng)121℃±2℃,15min高壓滅菌并烘干或經(jīng)8.2.1.1根據(jù)動物的種類，可采集咽喉拭子、泄殖腔拭子（禽）或鼻拭子（豬等其他動樣品在震蕩器上充分混合后，將拭子中的液體擠出，3000r/min離心5min，吸取上清液轉(zhuǎn)入無用無菌的剪刀和鑷子剪取待檢樣品2.0g于研缽中充分研磨，再加10.0mLPBS（含有青霉素和鏈4反應(yīng)體系配制見表2與表3，每份檢測樣品的熒光RT-PCR體系為25μL。用旋渦振蕩器進行混勻，RTEnzymeMix5U/μL（6.1RTEnzymeMix5U/μL（6.15Ct值均≤30.0，且HA基因與NA基因同時擴增出特定的擴增曲線，判為陽性，報告樣品中

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