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22TechnicalcodeofpracticeonisolationandpurificationofcommonpathogenicbacteriaofintestinalbacteriaforfreshwaterfishI本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件主要起草人:張東鳴、陳玉珂、王秋舉、郭志欣、藺麗麗、劉洪健、趙云龍、吳振1淡水魚腸道常見致病菌分離與純化技術(shù)規(guī)程GB4789.28食品微生物學檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量SN/T2632—2010微生物菌種常注:淡水魚腸道中常見的致病菌有:金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas和溫和氣單胞菌(Aeromonassobria)等。24789.28的規(guī)定。序號1胰蛋白胨2酵母提取物3氯化鈉4瓊脂5蒸餾水菌20min。將LB培養(yǎng)基置于錐形瓶中經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121℃滅菌20min)后放置于提前滅菌的無菌操作3制備懸液(見7.3)接種(見7.4)培養(yǎng)(見7.5)純化(見7.6)檢驗純度(見7.7)保種(見7.8)記錄(見8)后,打開腹腔,再用75%酒精棉球7.3.1用約2倍腸道內(nèi)容物體積的無菌生理鹽水將腸7.3.2將7.3.1的細菌懸液在無菌條件下涂布在倍數(shù)的稀釋菌液。建議稀釋倍數(shù)為:10-3、10-4培養(yǎng)基上,至液體全部被培養(yǎng)基吸收,每個濃度的菌液做4在培養(yǎng)皿上蓋表面標注樣品名稱、日期和采樣地等信息。置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃~37℃倒置培養(yǎng)24h。表面進行連續(xù)劃線分離。在培養(yǎng)皿上蓋表面做好標注,置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃~37℃培養(yǎng)24h。重復(fù)7.6.1操作2~3次。待培養(yǎng)基上均勻的長出顏色和形態(tài)相同的單個菌落時便可以進行細品名稱、日期和采樣地等信息,然后將試管置于恒溫振蕩器中,在溫度28℃~37℃,轉(zhuǎn)速每分鐘120轉(zhuǎn)的條件下,培養(yǎng)16h~18h。培養(yǎng)結(jié)束后按照7.4和7.5的方法再進行分離培養(yǎng),若新平板中長出
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