革蘭氏陰性球菌課件

第七章革蘭陰性球菌

李向陽(yáng)

革蘭氏陰性球菌奈瑟菌屬（Neisseria）

布蘭漢菌屬（Branhamella）革蘭氏陰性球菌概述“伯杰鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)”第9版將奈瑟菌屬和布蘭漢菌屬歸于群4，將奈瑟菌屬、莫拉菌屬、金氏菌屬和不動(dòng)桿菌屬都?xì)w于奈瑟菌科奈瑟菌屬中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌屬中的卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。目前對(duì)卡他莫拉菌是歸屬尚未定論革蘭氏陰性球菌一、分類淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌對(duì)人致病寄生在人體內(nèi)鼻咽腔的腐生菌解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黃奈瑟菌、粘液奈瑟菌、淺黃奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延長(zhǎng)奈瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌第一節(jié)奈瑟菌屬革蘭氏陰性球菌二、腦膜炎奈瑟菌臨床意義寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通過(guò)呼吸道分泌物或空氣微滴核而傳播。流行性腦脊髓膜炎冬末春初，多為學(xué)齡兒童、青少年感染后多為隱性感染，少數(shù)可發(fā)展為菌血癥或敗血癥，進(jìn)而累及腦、脊髓膜，形成化膿性腦膜炎可出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀如發(fā)熱、頭痛、腦膜刺激癥陽(yáng)性、甚至休克和DIC等；菌血癥和細(xì)菌的損傷作用使約半數(shù)患者出現(xiàn)皮下瘀斑革蘭氏陰性球菌腦膜炎奈瑟菌臨床意義盡管可以在鼻咽部形成帶菌狀態(tài)，但侵襲性的腦膜炎奈瑟菌感染多為新近感染，急性發(fā)病，發(fā)病時(shí)機(jī)體內(nèi)缺乏殺菌抗體。主要致病物質(zhì)是脂多糖依據(jù)莢膜多糖的抗原成分可分為：A、B、C、……等13個(gè)血清群，我國(guó)A群占95.8%，其余為B、C等群。革蘭氏陰性球菌淋病奈瑟菌臨床意義淋病的病原菌主要通過(guò)性接觸直接感染在分娩時(shí)通過(guò)產(chǎn)道感染新生兒臨床表現(xiàn)為：?jiǎn)渭冃粤懿∨枨谎卓谘什亢透亻T直腸淋病淋菌性結(jié)膜炎播散性淋病致病物質(zhì)包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多糖和鐵調(diào)節(jié)蛋白革蘭氏陰性球菌1．形態(tài)革蘭陰性雙球菌直徑0.6~1.5μm形似雙腎或咖啡豆樣，凹面相對(duì)無(wú)動(dòng)力，無(wú)芽胞，某些菌種形成莢膜三、生物學(xué)特性革蘭氏陰性球菌2．培養(yǎng)特性需在培養(yǎng)基中添加羊血、兔血或血清，對(duì)脂肪酸敏感，在培養(yǎng)基中需加入可溶性淀粉。需氧生長(zhǎng)，初次分離需5%~7%CO2和高濕度最適生長(zhǎng)溫度為35~37℃，低于30℃不生長(zhǎng)血瓊脂平板或巧克力瓊脂平板上呈光滑、濕潤(rùn)、透明或半透明、直徑1~2mm的不溶血、圓形、灰蘭色菌落卵黃瓊脂平板上為無(wú)色、光滑、濕潤(rùn)奶油狀菌落在液體培養(yǎng)基中呈輕度或中度混濁生長(zhǎng)，無(wú)菌膜腦膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培養(yǎng)基上發(fā)生自溶革蘭氏陰性球菌3．生化特性氧化酶陽(yáng)性，觸酶陽(yáng)性（除延長(zhǎng)奈瑟菌外）對(duì)糖分解能力、硝酸鹽還原能力和DNA合成酶不同，常作為菌種間的鑒別依據(jù)奈瑟菌屬DNA中G+Cmol%為46~54革蘭氏陰性球菌4．抵抗力對(duì)寒冷、干燥和熱的抵抗力弱，對(duì)化學(xué)消毒劑敏感對(duì)青霉素敏感但近年來(lái)由質(zhì)粒介導(dǎo)的β內(nèi)酰胺酶所致的耐藥在淋病奈瑟菌中產(chǎn)生較多革蘭氏陰性球菌四、微生物檢驗(yàn)革蘭氏陰性球菌腦膜炎奈瑟菌標(biāo)本采集無(wú)菌方法抽取腦脊液、關(guān)節(jié)液、血液、瘀點(diǎn)穿刺液等標(biāo)本采集后立即送往實(shí)驗(yàn)室用血平板進(jìn)行床邊接種后置35℃孵育血液標(biāo)本接種在血液培養(yǎng)瓶中置35℃孵育標(biāo)本運(yùn)送時(shí)需要35℃保溫革蘭氏陰性球菌標(biāo)本直接檢查直接涂片檢查腦脊液直接或經(jīng)離心后取沉淀涂片皮膚瘀點(diǎn)滲出液涂片革蘭染色后顯微鏡下見(jiàn)白細(xì)胞內(nèi)外的革蘭陰性雙球菌，可報(bào)告“檢出革蘭陰性雙球菌，疑似腦膜炎奈瑟菌”。有助于流行性腦脊髓膜炎早期診斷抗原檢查通常用膠乳凝集試驗(yàn)和其他凝集試驗(yàn)包括A、C、Y、W125血清型的多價(jià)抗體和血清型B抗體檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合涂片和培養(yǎng)結(jié)果，抗原檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果可作出快速、推測(cè)性診斷革蘭氏陰性球菌分離培養(yǎng)鑒定

腦脊液標(biāo)本接種在巧克力瓊脂或羊血瓊脂平板咽拭子或鼻咽拭子接種在選擇性培養(yǎng)基上如改良的Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、NewYorkCity(NCY)等培養(yǎng)基血液標(biāo)本經(jīng)增菌培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)后，移種至巧克力瓊脂或羊血瓊脂平板上置5%~7%CO235℃孵育，每隔24h觀察平板革蘭氏陰性球菌鑒定初步確定為奈瑟菌屬直徑1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落涂片革蘭染色見(jiàn)陰性雙球菌氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性進(jìn)一步進(jìn)行葡萄糖和麥芽糖發(fā)酵試驗(yàn)陽(yáng)性、其他糖類發(fā)酵陰性可確定為腦膜炎奈瑟菌用分型血清確定血清型別平板上沒(méi)有發(fā)現(xiàn)菌落需繼續(xù)觀察72h后無(wú)菌生長(zhǎng)可報(bào)告為陰性革蘭氏陰性球菌（二）淋病奈瑟菌1．檢驗(yàn)程序革蘭氏陰性球菌2．標(biāo)本采集

陰道和宮頸分泌物用無(wú)菌塑料棒滌綸拭子，伸入陰道后穹隆或?qū)m頸內(nèi)1cm處停留10~15秒時(shí)間，蘸取采集尿道分泌物棄去前段膿性分泌物，留取后段作為標(biāo)本尿液直腸肛拭標(biāo)本廢棄第一根污染棉簽，用第二根棉簽醮取的分泌物新生兒結(jié)膜炎時(shí)應(yīng)采取眼結(jié)膜表面分泌物革蘭氏陰性球菌3．標(biāo)本直接檢查標(biāo)本采集后應(yīng)立即涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查男性尿道分泌物標(biāo)本中可見(jiàn)中性多形核細(xì)胞內(nèi)、外較多革蘭陰性雙球菌，有助于男性淋病早期診斷女性宮頸或直腸拭子標(biāo)本涂片中可見(jiàn)胞內(nèi)、胞外大量革蘭陰性雙球菌，由于女性陰道和直腸有許多正常菌群寄居，故對(duì)涂片所見(jiàn)結(jié)果必須由培養(yǎng)結(jié)果得以證實(shí)方可報(bào)告新生兒結(jié)膜分泌物可見(jiàn)胞內(nèi)、胞外大量革蘭陰性雙球菌可初步診斷為淋球菌性結(jié)膜炎革蘭氏陰性球菌4．分離培養(yǎng)與鑒定選擇培養(yǎng)基如MTM，Martin-Lewis（ML），或NYC置于5%CO2氣體條件下35~37℃孵育每隔24h觀察平板革蘭氏陰性球菌（1）形態(tài)和生化學(xué)鑒定可疑菌落直徑0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴狀凸起的菌落確認(rèn)將菌落涂片，革蘭染色見(jiàn)革蘭陰性雙球菌氧化酶和觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)陽(yáng)性，其它糖類陰性培養(yǎng)需觀察72h后無(wú)菌生長(zhǎng)可報(bào)告為陰性。革蘭氏陰性球菌（2）免疫學(xué)鑒定直接熒光染色凝集試驗(yàn)或免疫滲濾技術(shù)革蘭氏陰性球菌（3）分子生物學(xué)鑒定檢測(cè)靶片段的基因隱蔽性質(zhì)粒、染色體基因探針、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA探針、rRNA基因探針和porA假基因?；蛱结橂s交、核酸擴(kuò)增革蘭氏陰性球菌第二節(jié)卡他莫拉菌卡他莫拉菌（M.catarrhalis）又稱為卡他布蘭漢菌（Branhamaceae

catarrhalis）可存在于健康人群的上呼吸道近十年來(lái)報(bào)道導(dǎo)致中耳炎、鼻竇炎、慢性阻塞性肺炎在免疫抑制和ICU的患者可導(dǎo)致菌血癥是社區(qū)呼吸道感染的主要病原體之一。

革蘭氏陰性球菌臨床分離從中耳炎或鼻竇炎患者穿刺抽取標(biāo)本呼吸道感染患者應(yīng)采取合格痰標(biāo)本或支氣管灌洗液口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液標(biāo)本痰液標(biāo)本直接涂片革蘭染色如出現(xiàn)多個(gè)中性粒細(xì)胞、柱狀上皮細(xì)胞以及大量的直徑為0.5~1.5μm革蘭陰性雙球菌可懷疑卡他莫拉菌感染

革蘭氏陰性球菌卡他莫拉菌培養(yǎng)及鑒定在血液瓊脂或巧克力瓊脂平板上生長(zhǎng)良好35℃24h孵育后菌落直徑1~3m