從菠菜中提取葉綠素實(shí)驗(yàn)報(bào)告三篇

Word1/1從菠菜中提取葉綠素實(shí)驗(yàn)報(bào)告三篇從菠菜中提取葉綠素試驗(yàn)報(bào)告二

綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素（綠）、胡蘿卜素（橙）和葉黃素（黃）等多種自然?色素。

葉綠素存在兩種結(jié)構(gòu)相像的形式即葉綠素a(C55H72O5N4Mg)和葉綠素b(C55H70O6N4Mg))，差別僅是a中一個(gè)甲基被b中的甲?；〈Ｋ鼈兌际沁量┭苌锱c金屬鎂的絡(luò)合物，是植物進(jìn)行光合作用所必需的催化劑，也是食用的綠色色素，可用于糕點(diǎn)、飲料水等中，添加于膠姆糖中還可消退口臭。植物中a的含量通常是b的3倍。盡管葉綠素分子中含有一些極性基團(tuán)，但大的烴基結(jié)構(gòu)使它易溶于石油醚等一些非極性溶劑。

胡蘿卜素（C40H56）是具有長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu)的共軛多烯。它有三種異構(gòu)體α—，β—,和γ—胡蘿卜素，其中β—異構(gòu)體含量最多，也最重要。生長(zhǎng)期較長(zhǎng)的綠色植物中，異構(gòu)體中β—的含量多達(dá)90％。β—具有維生素A的生理活性，其結(jié)構(gòu)是兩分子維生素A在鏈端失去兩分子水結(jié)合而成。生物體內(nèi)，β—體受酶催化氧化即形成維生素A。目前，β—體可作為維生素A使用，也可作為食品工業(yè)的色素，β一胡蘿卜素還有防癌功能。

葉黃素（C40H56O2）是胡蘿卜素的羥基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用。在綠葉中通常是胡蘿卜素的兩倍。較易溶于醇而在石油醚中溶解度較小。由此可見(jiàn)，葉綠素等自然?色素有廣泛的用途，對(duì)于色素的提取與分別就顯得很重要了．本試驗(yàn)就提取和分別做了相關(guān)的討論。

1試驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

儀器：研缽、分液漏斗、顯微載玻片、毛細(xì)管、層析柱(20×10cm)、UV-240

紫外分光光度計(jì)

試劑：石油醚、乙醇(95%)、菠菜葉、丙酮(化學(xué)純)、乙酸乙酯(化學(xué)純)、無(wú)

水硫酸鈉、硅膠G、中性氧化鋁(150目～160目)

1.2提取與分別

1.2.1浸泡法提取色素

在研缽中放入20g新奇的菠菜葉，加入20mL3：2(體積比)石油醚—乙醇混合液，適當(dāng)研磨(不要研成糊狀，否則會(huì)給分別造成困難)，用傾析法將提取液轉(zhuǎn)

移到分液漏斗中，每次用10ml水洗滌兩次,以除去萃取液中的乙醇。洗滌時(shí)要輕輕旋蕩，以防乳化。棄去水乙醇層，石油醚層用無(wú)水硫酸鈉干燥，干燥后濾入小圓底燒瓶，在水浴上蒸發(fā)濃縮至大約lmL。

1.2.2薄層層析

取四塊顯微載玻片，硅膠G經(jīng)0.5％羧甲基纖維素鈉調(diào)制后制板，在室溫下晾干后在110°C活化1h。選取效果最好的一塊進(jìn)行點(diǎn)樣。

綻開(kāi)劑：（1）石油醚—丙酮=8:2（體積比）

（2）石油醚—乙酸乙酯=6:4（體積比）

取活化后的層析板，點(diǎn)樣，放入預(yù)先選定綻開(kāi)劑的廣口瓶。瓶的內(nèi)壁貼一張高5cm，繞周長(zhǎng)4／5的濾紙，下部浸入綻開(kāi)劑中，蓋上瓶蓋。待綻開(kāi)劑上升至規(guī)定高度時(shí)，取出層析板，晾干，做出標(biāo)記。

分別用兩種綻開(kāi)劑綻開(kāi)，比較不同綻開(kāi)劑的綻開(kāi)效果。觀看斑點(diǎn)在板上的位置并排列出胡蘿卜素、葉綠素和葉黃素的Rf值的大小。留意更換綻開(kāi)劑時(shí)，需干燥層析瓶，不允許前一種綻開(kāi)劑帶入后一系統(tǒng)。

1.2.3柱層析

取少量脫脂棉在小燒杯中用石油醚浸潤(rùn)后，擠壓除去氣泡，放在層析柱底部。在層析柱中加15cm石油醚。加入中性氧化鋁8克，打開(kāi)柱下活塞，保持石油醚高度不變，氧化鋁在柱子中積累。裝完后，打開(kāi)下端活塞，放出溶劑，直到氧化鋁表面剩下1—2mm高為止（不能使氧化鋁表面露出液面）。

將濃縮液用滴管加到柱頂部，打開(kāi)下端活塞，讓液面下降到柱面以下1mm,關(guān)閉活塞，加數(shù)滴石油醚，打開(kāi)活塞，使液面下降，幾次反復(fù)，使色素全部進(jìn)入柱體。

在柱頂加1.5cm洗脫劑——9：1（體積比）石油醚—丙酮。打開(kāi)活塞，用錐形瓶收集。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)有色成分即將滴出時(shí)，取另一錐形瓶收集，得橙黃色溶液，即胡蘿卜素。

2.結(jié)果與爭(zhēng)論

2.1提取

由于甲醇與乙醇的極性相近，但是乙醇易得、無(wú)毒，所以用3：2的石油醚一乙醇通過(guò)浸泡的方法提取菠菜色素，而不是用石油醚—甲醇。

2.2分別

薄層層析

薄層層析又叫薄層色譜，是色譜法中的一種，是快速分別和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的試驗(yàn)技術(shù)，屬固—液吸附色譜，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，可以用于少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分別。試驗(yàn)中涉及的菠菜色素的比移值(Rf)（薄層色譜法中原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離與原點(diǎn)到溶劑前沿的距離的比值）列表如下：

在肯定的色譜條件下，特定化合物的Rf值是一個(gè)常數(shù)，因此有可能依據(jù)化合物的Rf值鑒定化合物。

菠菜色素中各種色素的比移值Rf大小為：胡蘿b素葉黃素葉綠素，按此挨次它們的非極性依次減弱。物質(zhì)極性的推斷為柱層析中洗脫劑的選擇供應(yīng)了參考價(jià)值。

柱層析

胡蘿卜素極性最小，因此胡蘿卜素的洗脫劑用極性較小的9：l的石油醚-丙酮溶劑效果較好。但要收集其他幾種色素得換用其他的洗脫劑，由于色素的極性各不相同，且有肯定差別。如用7：3石油醚-丙酮分別葉黃素．分別出胡蘿卜素和葉

黃素后，可加大溶劑極性以較快速度洗脫葉綠素．用3：1：1的丁醇-乙醇-水洗

脫劑洗脫葉綠素。

3.結(jié)論

采納浸泡法提取色素比抽濾法更好。在薄層層析時(shí)，用石油醚-丙酮=8:2時(shí)，能更明顯的看到分層。在柱色譜洗脫劑的選擇上，基于薄層分析的極性推斷選擇了石油醚-丙酮=9:1的溶劑作為洗脫劑，取得了特別好的效果。通過(guò)試驗(yàn)，進(jìn)一步熟悉到洗脫劑在柱層析中的重要性。

從菠菜中提取葉綠素試驗(yàn)報(bào)告三

【試驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

1、通過(guò)綠色植物色素的提取和分別，了解自然?物質(zhì)的分別提純與方法。

2、通過(guò)薄層色譜分別操作，加深了解微量有機(jī)物色譜分別鑒定的原理。

【試驗(yàn)原理】

葉綠色存在兩種結(jié)構(gòu)相像的形式即葉綠素A(C55H77O5N4Mg)和葉綠素B（C55H70O6N4Mg）胡蘿卜素是具有長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu)的共軛多烯，有三種異構(gòu)體；

葉黃素（C40H56O2）是胡蘿卜素的羥基衍生物。是胡蘿卜素的羥基衍生物。當(dāng)提取時(shí)，從上到下顏色依次為：黃綠色，藍(lán)綠色，黃色和橙色。

【試驗(yàn)儀器】

研缽，色譜柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化鋁，菠菜葉，燒杯，漏斗，玻璃棒，濾紙，剪刀，脫脂棉，紗布。

【試驗(yàn)步驟】

1、稱取30g洗凈后用濾紙喜感的新奇菠菜葉，用剪刀剪碎，放入研缽中研磨，研磨時(shí)放入少量碳酸鈣，防止研磨過(guò)猛破壞葉綠素結(jié)構(gòu)，研磨至爛。

2、將研磨碎的菠菜葉轉(zhuǎn)入小燒杯中，加入30mL配好的乙醇乙醚溶液，蓋上表面皿，防止有機(jī)溶劑蒸發(fā)。按小組成員分別浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分鐘。

3、浸泡期間，填充色譜柱，在最下面墊入脫脂棉，再蓋上一個(gè)小濾紙片，裝入氧化鋁至4/5處，再蓋上一層濾紙片。

4、將燒杯中的菠菜葉連帶著有機(jī)溶劑用紗布擠入漏斗中，轉(zhuǎn)入分液漏斗，加入10mL水洗滌，除去水層（下層），再用10mL水洗滌一次。

5、將分頁(yè)漏斗中的溶液漸漸倒入色譜柱中，加幾滴丙酮既可以看到顏色變化。

6、洗凈儀器，整理試驗(yàn)室，打掃衛(wèi)生。

【留意事項(xiàng)】

1.過(guò)濾時(shí)不能用濾