紫外可見分光光度法的原理及應(yīng)用-

紫外-可見分光光度法的原理及應(yīng)用

(Ultraviolet-VisibleSpectrophotometry)

紫外-可見分光光度法的原理

物質(zhì)對光的選擇吸收

當(dāng)一束光照射到某種物質(zhì)的固態(tài)物或溶液上時(shí)，一部分光會(huì)被吸收或被反射，不同的物質(zhì)對于照射它們的光束的吸收程度是不同的，對某個(gè)波長的光吸收強(qiáng)烈，對另外波長的光吸收很小或不吸收，我們把這種現(xiàn)象稱為光的選擇吸收。

一切物質(zhì)都會(huì)對可見和不可見光中的某些波長的光進(jìn)行吸收。

物質(zhì)呈現(xiàn)各種各樣顏色，就是它們對可見光中某些特定波長的光線選擇吸收的結(jié)果。

物質(zhì)顏色和吸收光顏色的關(guān)系

吸收光

物質(zhì)顏色

顏色波長(nm)

黃綠紫400~450

黃藍(lán)450~480

橙綠藍(lán)480~490

紅藍(lán)綠490~500

紫紅綠500~560

紫黃綠560~580

藍(lán)黃580~600

綠藍(lán)綠600~650

藍(lán)綠紅650~750物質(zhì)的結(jié)構(gòu)決定了物質(zhì)在吸收光時(shí)只能吸收某些特定波長的光。我們可以利用測量物質(zhì)對某種波長的光的吸收來了解物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性。用經(jīng)過分光后的不同波長的光依次透過該物質(zhì)，通過測量物質(zhì)對不同波長的光的吸收程度（吸光度），以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，就可以得到該物質(zhì)在測量波長范圍內(nèi)的吸收曲線。這種曲線體現(xiàn)了物質(zhì)對不同波長的光的吸收能力，稱為吸收光譜。紫外-可見分光光度法的原理

入射光透射光不同波長光檢測器吸收光譜紫外-可見分光光度法的原理

紫外-可見分光光度法是利用物質(zhì)對光的吸收光譜，對物質(zhì)進(jìn)行定性分析或定量分析的方法。按所吸收光的波長區(qū)域不同，分為紫外分光光度法和可見分光光度法，合稱為紫外-可見分光光度法。

0.01nm0.1nm800nm10μm500μm1cm

波長200nm400nm2.5μm25μm1m

光譜可

區(qū)域見

γ射線χ射線紫外光光紅外光微波無線電波

分析分光

方法χ射線紫外分

光度核磁共振

γ射線光譜法光譜法光光度法

法紅外光譜法微波光譜法光譜法

紫外-可見分光光度法的原理-定性分析不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)吸收光譜也不同，這是對物質(zhì)進(jìn)行定性分析的基礎(chǔ)：通過檢測吸收光譜來比對鑒定分析物質(zhì)。

波長范圍吸光度利用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定性分析

在相同條件下，測定未知物的吸收光譜，與標(biāo)準(zhǔn)物的吸收光譜進(jìn)行比較，如果兩吸收光譜的形狀和吸收峰的數(shù)目、位置、拐點(diǎn)等完全一致，就可初步判定未知物與標(biāo)準(zhǔn)物是同一種物質(zhì)。紫外-可見分光光度法的原理-定量分析

Lambert–Beer光吸收定律：當(dāng)一束平行單色光通過均勻的樣品時(shí)，其吸光度與吸光組分的濃度、吸收池的厚度乘積成正比.入射光I0透射光ItLC紫外-可見分光光度法的原理-定量分析波長范圍吸光度最大吸收波長利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量分析在一定波長（λmax）下測定某物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測定樣品溶液的吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品溶液的濃度或含量。

01.02.03.04.0c(mg/mL)。。。。0.800.600.400.200.00Axcx吸光度的測量：紫外-可見分光光度計(jì)0.575光源單色器吸收池檢測器顯示在紫外可見分光光度計(jì)中，常用的光源有兩類：可見光光源，如鎢燈和鹵鎢燈；紫外光源，如氫燈和氘燈。

1光源

紫外-可見分光光度計(jì)的組成單色器以棱鏡或光柵分光，提供單色光。

2單色器吸收池又稱比色皿或比色杯，按材料可分為玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外區(qū)。

3吸收池紫外-可見分光光度計(jì)的組成4檢測器檢測器的作用是檢測光信號，并將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枴，F(xiàn)今使用的分光光度計(jì)大多采用光電管或光電倍增管作為檢測器。5信號顯示系統(tǒng)常用的信號顯示裝置有自動(dòng)記錄和數(shù)字顯示裝置等。相對其他光譜分析方法來說，其儀器設(shè)備和操作都比較簡單，費(fèi)用少，分析速度較快。靈敏度高。如在紫外區(qū)直接檢測Vc時(shí)，其最低檢出濃度可達(dá)到10-6g/mL。有較好的選擇性。通過適當(dāng)?shù)倪x擇測量條件，一般可在多種組分共存的體系中，對某一物質(zhì)進(jìn)行測定。精密度和準(zhǔn)確度較高。在儀器設(shè)備和其他測量條件較好的情況下，其相對誤差可減小到1%~2%?？捎糜趯ξ⒘拷M分的測定。用途廣泛。紫外-可見分光光度法的優(yōu)點(diǎn)紫外-可見分光光度法的應(yīng)用范圍幾乎所有的無機(jī)元素和在紫外及可見光區(qū)有特征吸收的有機(jī)物或有機(jī)化合物都能用紫外/可見分光光度法進(jìn)行測定。目前，紫外可見分光光度計(jì)已成為全世界歷史最悠久、使用最多、覆蓋面最廣的常規(guī)分析儀器。紫外-可見分光光度法的應(yīng)用范圍紫外-