中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)專家講座

試驗(yàn)七思索題：為何慣用密度為1.077土0.002分層液分離人單個(gè)核細(xì)胞？答：這和人外周血中各類成份密度相關(guān)。血小板：1.030-1.035，淋巴細(xì)胞：1.075-1.090，粒細(xì)胞:1.092，紅細(xì)胞：1.093，所以將血液疊加在1.077土0.002分層液上面，經(jīng)離心會(huì)單個(gè)核細(xì)胞會(huì)處于血漿和分離液中間，從而到達(dá)分離目標(biāo)。中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第1頁(yè)試驗(yàn)八中性粒細(xì)胞吞噬功效檢測(cè)臨床微生物及免疫學(xué)檢驗(yàn)教研室中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第2頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)掌握中性粒細(xì)胞吞噬功效試驗(yàn)原理。熟悉中性粒細(xì)胞吞噬功效試驗(yàn)操作方法。中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第3頁(yè)二、試驗(yàn)原理中性粒細(xì)胞含有吞噬細(xì)菌和異物顆粒能力。在體外將中性粒細(xì)胞與細(xì)菌或異物顆粒共同孵育后,即可被中性粒細(xì)胞吞噬、攝入,顯微鏡觀察可見(jiàn)中性粒細(xì)胞內(nèi)有細(xì)菌或異物顆粒。中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第4頁(yè)二、試驗(yàn)原理計(jì)算吞噬有細(xì)菌或異物顆粒中性粒細(xì)胞數(shù)占中性粒細(xì)胞總數(shù)百分率和每個(gè)中性粒細(xì)胞平均吞噬細(xì)菌或異物顆粒數(shù),可反應(yīng)中性粒細(xì)胞吞噬功效。中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第5頁(yè)三、試驗(yàn)器材標(biāo)本:人抗凝血被吞噬物:金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基:肉湯培養(yǎng)基試劑:瑞－吉氏染液、無(wú)菌生理鹽水器材:枸櫞酸鈉抗凝管、試管、載玻片、恒溫箱、顯微鏡等。中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第6頁(yè)制備被吞噬物:金葡菌接種于肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h后，置4℃?zhèn)溆谩?.準(zhǔn)備被檢測(cè)標(biāo)本:枸櫞酸鈉抗凝血1ml。四、試驗(yàn)步驟中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第7頁(yè)試驗(yàn)步驟混合培養(yǎng):在1ml抗凝血中加入金葡菌懸液3-5滴，混勻，置37℃水浴箱中，孵育30min，期間每10min搖勻1次。制備細(xì)胞推片，瑞-吉染色:油鏡觀察:計(jì)數(shù)200個(gè)中性粒細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)吞噬細(xì)菌細(xì)胞數(shù)和每個(gè)中性粒細(xì)胞吞入細(xì)菌數(shù)。中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第8頁(yè)五、結(jié)果判斷中性粒細(xì)胞核深染且分葉,胞漿淡紅色,細(xì)菌呈紫色-中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第9頁(yè)吞噬百分率（%）=×100％吞噬指數(shù)=參考區(qū)間:吞噬率（91+5.8）%；吞噬指數(shù)大于1計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞總數(shù)吞噬細(xì)菌中性粒細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞總數(shù)

-中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第10頁(yè)六、注意事項(xiàng)1.抗凝劑選擇:肝素抗凝時(shí)白細(xì)胞著色不佳，經(jīng)瑞-吉染色后易出現(xiàn)深藍(lán)色背景；EDTA影響白細(xì)胞吞噬功效；構(gòu)椽酸鈉抗凝最適當(dāng)。2.細(xì)菌濃度和孵育溫度:3.血涂片質(zhì)量:中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)第11頁(yè)七、應(yīng)用與評(píng)價(jià)本試驗(yàn)可用于檢測(cè)有吞噬功效障礙病癥,如結(jié)合NBT（硝基藍(lán)四氮唑還原試驗(yàn)）,在一定程度上可反應(yīng)機(jī)體免疫功效狀態(tài),也可用于有免疫調(diào)整活性藥品篩選。此法操作簡(jiǎn)便,不需特殊設(shè)備,省時(shí),費(fèi)用低廉。但光學(xué)顯微鏡分辨率低,有時(shí)難以計(jì)