化妝品原料祛痘功效評價試驗方法（征求意見稿）編制說明

1T/LNPCXXX-2024化妝品原料祛痘功效評價試驗方法本文件規(guī)定了基于體外人皮膚模型的化妝品原料的祛痘功效試驗方法。本文件適用于具有生物學祛痘作用的化妝品原料祛痘功效試驗。本文件可作為化妝品原料祛痘功效試驗方法之一，對化妝品原料祛痘功效進行評價。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理痤瘡是毛囊皮脂腺的慢性炎癥，毛囊內(nèi)過度分泌的脂質(zhì)和堵塞的角栓給厭氧、嗜脂的痤瘡丙酸桿菌提供適宜的環(huán)境和食物，使痤瘡丙酸桿菌過度增殖，同時痤瘡丙酸桿菌可大量分泌胞外多糖形成生物膜。生物膜是微生物的一種不同于懸?。▎蝹€）細胞存在形式的三維結(jié)構(gòu)菌體細胞群，其主要結(jié)構(gòu)包括菌體及由菌體分泌并包裹于菌體外的胞外聚合物（胞外多糖、胞外DNA、蛋白質(zhì)等），該狀態(tài)下微生物的抗藥能力及對機體的致病性都顯著增加。本文件構(gòu)建痤瘡丙酸桿菌生物膜，檢測加入化妝品原料后痤瘡丙酸桿菌生物膜活力的抑制作用，進而評價化妝品原料是否具有祛痘功效。5儀器及設(shè)備5.1生物安全柜。5.2倒置顯微鏡。5.3CO2培養(yǎng)箱：37℃,95%相對濕度、5%CO2/空氣。5.4低溫高速離心機。5.5熒光酶標儀：激發(fā)波長560nm，發(fā)射波長590nm。5.6分析天平：精度0.1mg。5.7微量移液器：5000μL、1000μL、200μL、20μL。6試劑和耗材6.1痤瘡丙酸桿菌CICC10864。6.2RCM培養(yǎng)基。6.30.85%生理鹽水。6.4刃天青試劑。7試驗步驟7.1體外模型的準備2T/LNPCXXX-20247.1.1生物膜的構(gòu)建將痤瘡丙酸桿菌接種于斜面上，培養(yǎng)24h。然后加入無菌生理鹽水制備成菌濃約為108CFU/ml的菌懸液，然后以2%的接種量加到RCM液體培養(yǎng)基中，混合均勻后接種于96孔板中，37℃厭氧培養(yǎng)72h至生物膜形成。7.2給予化妝品原料試驗設(shè)置空白對照組、模型對照組和化妝品原料組。稱取一定量的化妝品原料，用無菌蒸餾水溶解，無菌過濾制備為一定濃度的儲備液，然后用RCM液體培養(yǎng)基將儲備液以兩倍稀釋法作系列稀釋，棄掉96孔板中培養(yǎng)基，化妝品原料組加入稀釋液，模型對照組只替換為RCM空白培養(yǎng)基?？瞻讓φ战M不接種痤瘡丙酸桿菌，只加入空白培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24h。7.3樣品的測定培養(yǎng)24h后，棄掉培養(yǎng)基，加入刃天青試劑，37℃孵育1h，檢測生物膜活力。7.4測定條件在激發(fā)波長為560nm，發(fā)射波長為590nm測定熒光強度I，計算生物膜相對活力。8結(jié)果計算式中：dc——生物膜相對活力，%；I試——化妝品原料組熒光強度；I空——空白組熒光強度；I對——對照組熒光強度。9結(jié)果判定全部符合以下條件說明化妝品原料具有祛痘功效:1、96孔板底面出現(xiàn)肉眼可見白色薄膜。2、與對照組相比，化妝品原料組生物膜相對活力小于100%，且具有顯著性差異（p＜0.05）。3T/LNPCXXX-2024參考文獻[1]國家藥品監(jiān)督管理局