牛流感病毒抗體血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)方法征求意見(jiàn)稿

1牛流感病毒抗體血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)方法4儀器和材料水浴鍋、單道及多道微量移液器、計(jì)時(shí)器、吸25.1阿氏（Alsevers）液，按照附錄A.1配置。5.5禽流感病毒血凝素分型標(biāo)準(zhǔn)抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、陰性血清。到吸附后的血清中，含原始血清20μL，則應(yīng)加入80μ在37°C下，將RDE與牛血清的混合溶液孵育18-20小時(shí)。將血清樣本在56°C水浴中如果需要更長(zhǎng)時(shí)間的儲(chǔ)存，需冷凍保存在-20°C或更低的溫度下。6.2.1使用微量移液器在血凝板A觀察紅細(xì)胞有無(wú)淚珠狀流淌，完全無(wú)淚珠狀流淌（100%凝集）表明該抗原稀釋度可導(dǎo)致紅細(xì)胞全血凝，導(dǎo)致完全血凝的病毒最高稀釋度即HA血36.3.1根據(jù)HA試驗(yàn)測(cè)定的效價(jià)配置4個(gè)血凝單位（即4HAU）病毒抗原。4HAU抗原應(yīng)根據(jù)回滴檢示例：配制的4HAU抗原需檢査血凝價(jià)是否準(zhǔn)確，將配制的25μL混勻。將血凝板在室溫（20~25℃)靜置30min或4℃60min，如果配制的抗原液為4HAU，6.3.4第1孔~第11孔均加入25μL4HAU抗原，在室溫（20~25℃)靜置30min或4℃60min。6.3.5每孔加入25μL1.0%（體積分?jǐn)?shù)）雞紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻，在室溫（20~25℃)靜置30min7.1若樣品無(wú)非特異性吸附，可不使用雞紅細(xì)胞預(yù)吸附去除非特異性凝集素。非特異性凝集檢測(cè)的方7.21.0%（體積分?jǐn)?shù)）的紅細(xì)胞懸液可存在批4試劑配置A.1阿氏(Alsevers)液配制稱(chēng)取葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸A.21.0%雞紅細(xì)胞懸液采集至少三只SPF雞或無(wú)禽流感和新城疫等抗體的健康公雞的血液與等體積阿氏液混合，用pH配成1%（體積分?jǐn)?shù)）紅細(xì)胞懸液，4取1×PBS，用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)pH至7.2，滅菌或過(guò)濾除菌，PBS一經(jīng)使用，于4℃保存不應(yīng)超5有些牛血清可能對(duì)雞紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性凝集,可先用待檢血清做檢測(cè),如果待檢血清出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象,則說(shuō)明有非特異凝集因子存在,宜按6.1.B.2.5在室溫(22°C至25°C6[3]WOAHTerrestrialManual2023CHAPTE[4]YuJ,WenZ,HuW,ChenM,ZhangY,LiuS,WangG,WangZ,WangD,ZhaiSL,WeiWK,LiT,LiaoM.InfluenzaDvirusinfectioninChdoi:10.1080/2222175