洗滌用纖維素酶制劑編制說明（送審稿）

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《洗滌用纖維素酶》編制說明一、任務(wù)來源1、任務(wù)來源本項(xiàng)目為xxx，項(xiàng)目編號(hào)xxx。主要起草單位：xxx，項(xiàng)目實(shí)施周期xxx個(gè)月。2、主要工作過程起草階段：征求意見階段：3、主要參加單位和工作組成員二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和主要內(nèi)容1、標(biāo)準(zhǔn)編制原則本標(biāo)準(zhǔn)的修訂符合產(chǎn)業(yè)發(fā)展的原則，本著先進(jìn)性、科學(xué)性、合理性、可操作性等原則以及標(biāo)準(zhǔn)的目標(biāo)、統(tǒng)一性、協(xié)調(diào)性、適用性、一致性和規(guī)范性原則來進(jìn)行本標(biāo)準(zhǔn)的修訂工作。本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求進(jìn)行編寫。方法建立過程中盡量采用目前酶制劑生產(chǎn)廠商以及洗滌劑生產(chǎn)廠商檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室普遍采用的分析技術(shù)及儀器，選擇準(zhǔn)確、可行、便于操作的分析條件，保證檢測(cè)方法的可操作性和可重復(fù)性。該標(biāo)準(zhǔn)制定過程中主要參考了以下標(biāo)準(zhǔn)或文件：GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB/T4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定GB/T4789.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T603化學(xué)試劑試驗(yàn)方法中所用制劑及制品的制備（GB/T603-2002，ISO6353-1：1982，NEQ）GB15258化學(xué)品安全標(biāo)簽編寫規(guī)定GB/T9721-2006

化學(xué)試劑分子吸收分光光度法通則

(紫外和可見光部分)GB/T42239.1-2022洗滌用酶制劑第1部分：堿性蛋白酶2、標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容纖維素酶目前已在洗滌劑中廣泛使用，纖維素酶它能將棉纖維上的蠟質(zhì)剝離下來，同時(shí)纖維素酶能擴(kuò)大織物纖維中的空穴，使內(nèi)嵌在纖維內(nèi)部的頑固污漬得到更好的去除。目前，立白、納愛斯等國內(nèi)外知名洗滌劑生產(chǎn)商都有纖維素酶的應(yīng)用。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了洗滌劑用纖維素酶的術(shù)語和定義、產(chǎn)品分類、技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則以及標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期。本標(biāo)準(zhǔn)適用于經(jīng)微生物發(fā)酵、提純等工藝制得的適用于洗滌劑工業(yè)的纖維素酶。2.1、產(chǎn)品分類本標(biāo)準(zhǔn)按照纖維素酶的形態(tài)分為兩類：液體劑型酶制劑和固體劑型酶制劑。2.2、要求2.2.1、感官要求本標(biāo)準(zhǔn)從色澤、氣味、狀態(tài)等方面對(duì)感官要求進(jìn)行了規(guī)定。發(fā)酵產(chǎn)品由于生產(chǎn)過程比較復(fù)雜，每一批產(chǎn)品的顏色會(huì)有區(qū)別，但是產(chǎn)品顏色的深淺與酶活力的高低沒有任何關(guān)系，所以在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了顏色是一個(gè)過渡色；同時(shí)產(chǎn)品會(huì)有一些特殊的“發(fā)酵”氣味，經(jīng)常會(huì)有客戶詢問廠家氣味的問題，所以在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了產(chǎn)品可能有發(fā)酵氣味。同時(shí)根據(jù)洗滌劑產(chǎn)品行業(yè)的特點(diǎn)，固體產(chǎn)品可以根據(jù)客戶的要求，制成多種顏色。2.2.2、理化要求酶活力是產(chǎn)品的一個(gè)重要的理化指標(biāo)，但同時(shí)酶活力也是一個(gè)商業(yè)指標(biāo)，廠家可以根據(jù)客戶的要求，生產(chǎn)出各種酶活力的產(chǎn)品。所以在標(biāo)準(zhǔn)中沒有規(guī)定酶活力具體的數(shù)值。建議這個(gè)數(shù)值在合同中規(guī)定。對(duì)于固體產(chǎn)品，規(guī)定了產(chǎn)品最小顆粒度指標(biāo)。參照GB/T42239.1-2022洗滌用酶制劑第1部分：堿性蛋白酶，數(shù)值定為粒度<150μm≤0.5%。2.3、試驗(yàn)方法本標(biāo)準(zhǔn)包括了纖維素酶酶活力，水分，粒度的檢測(cè)方法。與現(xiàn)有的纖維素酶活力檢測(cè)方法QB2583-2003《纖維素酶制劑》有較大差別，在對(duì)纖維素酶活力檢測(cè)方法不斷完善的過程中形成了新版本；對(duì)于顆粒產(chǎn)品，水分含量即干燥失重參照GB/T42239.1-2022洗滌用酶制劑第1部分：堿性蛋白酶6.5干燥失重。粒度檢測(cè)參照GB/T42239.1-2022洗滌用酶制劑第1部分：堿性蛋白酶附錄3粒度的測(cè)定篩分法進(jìn)行。2.4、檢驗(yàn)規(guī)則檢驗(yàn)規(guī)則包括批次的確定、取樣規(guī)則、型式檢驗(yàn)、出廠檢驗(yàn)、判定規(guī)則等內(nèi)容，對(duì)其都做了具體說明。2.5、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期產(chǎn)品的外包裝宜使用符合GB/T191要求的標(biāo)志。關(guān)于產(chǎn)品標(biāo)簽，規(guī)定了一些通用要求：如產(chǎn)品名稱、凈含量、生產(chǎn)者和（或）經(jīng)銷者的名稱、地址和聯(lián)系方式、生產(chǎn)日期和保質(zhì)期、貯存條件、批號(hào)及其他需要標(biāo)示的內(nèi)容。同時(shí)化學(xué)品應(yīng)該有安全標(biāo)簽，建議安全標(biāo)簽的內(nèi)容應(yīng)該符合GB15258《化學(xué)品安全標(biāo)簽編寫規(guī)定》的要求。產(chǎn)品保質(zhì)期由廠家根據(jù)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)決定。三、主要試驗(yàn)（或驗(yàn)證）情況1、酶活力檢測(cè)方法1.1、方法介紹該標(biāo)準(zhǔn)在纖維素酶檢測(cè)方法多年運(yùn)用的經(jīng)驗(yàn)和不斷完善的過程中提出。考察了不同廠家底物羧甲基纖維素鈉和DNS試劑對(duì)試驗(yàn)的影響，不同試驗(yàn)步驟對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。本方法重點(diǎn)提出的地方：——對(duì)纖維素酶活力定義——羧甲基纖維素鈉溶液的配制——DNS試劑的配制——葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液及標(biāo)曲的繪制——待測(cè)酶液吸光度范圍——操作程序——活力計(jì)算1.2、主要指標(biāo)（1）不同廠家底物羧甲基纖維素鈉CMC和DNS對(duì)試驗(yàn)的影響CMC：光復(fù)（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）的試劑溶解后有少量雜質(zhì)，沒有沉淀。sigma-C5678的試劑溶解后無雜質(zhì)和沉淀。恒興（天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）的試劑溶解后無雜質(zhì)和沉淀。河北業(yè)之源化工有限公司的試劑溶解后無雜質(zhì)和沉淀。結(jié)果差別較大，因此在提供酶活力數(shù)據(jù)時(shí)要注明廠家。原因是羧甲基纖維素鈉在中性或堿性時(shí)，溶液呈高粘度液，實(shí)驗(yàn)中易造成誤差，且粘度不同所測(cè)活力不同。表1同一個(gè)樣品不同底物對(duì)比底物活性(u/g)活性平均值(u/g)新配光復(fù)10mg/mLCMC281828222826新配sigma-C567810mg/mLCMC830784188528新配國藥10mg/mLCMC599161606328新配恒興10mg/mLCMC205720241990新配河北10mg/mLCMC312430713017DNS：不同廠家的DNS試劑對(duì)纖維素酶活力的測(cè)試影響不大。表2同一個(gè)樣品同一底物不同DNS試劑對(duì)比DNS標(biāo)曲活性(u/g)活性平均值(u/g)光復(fù)y=0.0026x-0.0628281828222826國藥y=0.0024x-0.0965267227062739（2）不同試驗(yàn)步驟對(duì)試驗(yàn)的影響對(duì)于檢測(cè)步驟，在與各單位的交流中發(fā)現(xiàn)爭議較大的是對(duì)于空白樣的處理，經(jīng)過系列試驗(yàn)證明，采用方法一無論怎么稀釋，樣品吸光度都達(dá)不到檢測(cè)要求，而采用我們的方法測(cè)試穩(wěn)定性較好。表3同一樣品同一底物同一DNS不同測(cè)試方法方法一方法二稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋250倍0.1793216稀釋130倍0.2452096稀釋200倍0.1822602稀釋120倍0.2962237稀釋125倍0.1931694稀釋110倍0.3142148稀釋100倍0.2261519稀釋100倍0.3372067注：方法一空白樣先加酶液再煮沸顯色，方法二為我們的檢測(cè)方法（3）吸光度在0.29-0.33區(qū)間時(shí)纖維素酶酶活力數(shù)值更穩(wěn)定。表4吸光度區(qū)間測(cè)定樣品1樣品2樣品3稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋180倍0.1922433稀釋250倍0.2454637稀釋450倍0.2397127稀釋150倍0.2652568稀釋220倍0.2984125稀釋420倍0.2907709稀釋120倍0.2962238稀釋210倍0.3224187稀釋410倍0.3137991稀釋110倍0.3142149稀釋170倍0.3583691稀釋400倍0.3298112稀釋100倍0.3372068稀釋160倍0.3543443稀釋350倍0.36974441.3、方法精密度根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算，方法精密度小于6.0%（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表4不同實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證結(jié)果）1.4、方法學(xué)驗(yàn)證本方法經(jīng)方法學(xué)研究，驗(yàn)證如下：——不同廠家底物對(duì)試驗(yàn)影響顯著——不同DNS試劑無顯著影響。——測(cè)試步驟對(duì)結(jié)果影響顯著。1.5、不同實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證結(jié)果實(shí)驗(yàn)介紹實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集主要在山西勇寧記科技有限公司與山西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，根據(jù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，各實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)收集已經(jīng)完成，經(jīng)分析報(bào)告以下部分會(huì)展示不同實(shí)驗(yàn)室之間和不同樣品之間的對(duì)比情況。表4樣品活性均值表樣品活性（U/g）勇寧記山西大學(xué)樣品132573203樣品225342608樣品331203082樣品412491233樣品528353007樣品662776069樣品781348094四、標(biāo)準(zhǔn)中如果涉及專利，應(yīng)有明確的知識(shí)產(chǎn)權(quán)說明未涉及專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)問題。五、產(chǎn)業(yè)化情況、推廣應(yīng)用論證和預(yù)期達(dá)到的經(jīng)濟(jì)效果等情況洗滌行業(yè)是酶制劑最重要應(yīng)用領(lǐng)域之一，在全球范圍內(nèi)，每年所生產(chǎn)的酶制劑中，有三分之一被應(yīng)用于洗滌行業(yè)。在發(fā)達(dá)國家，洗滌用品加酶已逐漸成為新產(chǎn)品開發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)配置。從最新發(fā)布的中國洗滌用品行業(yè)發(fā)展十三五規(guī)劃中可以看出，目前我國洗衣粉加酶比例已高達(dá)80%。行業(yè)協(xié)會(huì)也在積極引導(dǎo)國內(nèi)洗滌用品往液體化、濃縮化、綠色化的方向創(chuàng)新發(fā)展。但是缺乏統(tǒng)一的洗滌用酶制劑標(biāo)準(zhǔn)，使得傳統(tǒng)的加酶洗衣粉和新興的加酶洗滌劑都缺乏權(quán)威的檢測(cè)方法和監(jiān)管依據(jù)，很容易被不良企業(yè)拿來作為概念炒作并用劣質(zhì)產(chǎn)品低價(jià)競(jìng)爭，從而破壞新興產(chǎn)品市場(chǎng)，打擊消費(fèi)者信任度，壓抑業(yè)內(nèi)優(yōu)秀企業(yè)的積極性，阻礙行業(yè)規(guī)劃的發(fā)展進(jìn)程。在此背景下，制定和推出洗滌用酶制劑質(zhì)量規(guī)格及測(cè)試方法，對(duì)于我國洗滌行業(yè)規(guī)范含酶類洗滌用品細(xì)分領(lǐng)域的市場(chǎng)，指導(dǎo)行業(yè)內(nèi)企業(yè)創(chuàng)新開發(fā)新產(chǎn)品，杜絕不良企業(yè)用假冒偽劣產(chǎn)品欺騙消費(fèi)者，促進(jìn)洗滌行業(yè)快速、良性、正常發(fā)展有重要的意義，同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)的出臺(tái)對(duì)于監(jiān)管和規(guī)范含纖維素酶的洗滌用品的上市也具有重要指導(dǎo)意義。六、采