免疫學(xué)檢驗技術(shù) 課件匯 馬春玲 13 免疫組織化學(xué)技術(shù)-23 免疫學(xué)檢驗的質(zhì)量控制

第十三章免疫組織化學(xué)技術(shù)免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫又稱免疫細胞化學(xué)技術(shù)，是利用標(biāo)記的特異性抗體（或抗原）與組織細胞內(nèi)抗原（或抗體）進行的抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對組織和細胞抗原進行定性、定位、定量測定的免疫檢測方法。免疫組織化學(xué)技術(shù)概念免疫組織化學(xué)技術(shù)根據(jù)標(biāo)記物的不同，免疫組織化學(xué)技術(shù)可分為：酶免疫組織化學(xué)技術(shù)熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)免疫金（銀）組織化學(xué)技術(shù)親和組織化學(xué)技術(shù)免疫標(biāo)記電鏡組織化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)的分類免疫組織化學(xué)技術(shù)的基本過程1、抗原的提取與純化2、免疫動物或細胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化3、將標(biāo)記物與抗體結(jié)合形成標(biāo)記抗體4、標(biāo)本的處理與制備5、抗原抗體免疫學(xué)反應(yīng)以及標(biāo)記物呈色反應(yīng)6、觀察結(jié)果免疫組織化學(xué)技術(shù)第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識免疫組織化學(xué)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫一、標(biāo)本制作（一）標(biāo)本的主要來源主要有：①活體組織②各種體液及穿刺液③培養(yǎng)細胞等

標(biāo)本制作是獲得良好的免疫細胞組織化學(xué)分析的保障，良好的細胞和組織學(xué)結(jié)構(gòu)將有助于抗原的準(zhǔn)確顯示和定位。第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識（二）標(biāo)本的固定與保存

2．固定劑的選擇3．固定方法1．組織材料的固定目的

①浸泡法②灌注法適用于動物實驗研究主要適用于活檢和手術(shù)標(biāo)本以及其它不能進行灌注的組織固定。第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識（三）玻片的處理玻片的處理是做好免疫組化染色的重要步驟之一一般用免疫組織化學(xué)的載玻片均需涂一定的黏合劑，常用的切片黏合劑有樹脂膠、多聚賴氨酸和防脫片劑第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識（四）切片方法的選擇二、抗原處理片的處理（一）進行抗原的暴露和修復(fù)的原因1.固定液的影響2.抗體制備的影響

（二）抗原的暴露

主要采用酶消化的方法在選擇酶消化時，應(yīng)針對要顯示的不同的抗原成分而選用不同的酶

在日常工作中用胰蛋白酶消化即可

第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識二、抗原處理片的處理（三）熱誘導(dǎo)的抗原修復(fù)抗原修復(fù)是以高溫、高壓對常規(guī)固定石蠟切片進行抗原修復(fù)以提高抗原抗體的陽性檢出率。壓力鍋法微波處理法水浴鍋法第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識三、抗體處理抗體是免疫組織化學(xué)技術(shù)的首要試劑

（一）抗體的選擇（二）抗體的稀釋（三）抗體的合理保存高度特異性和穩(wěn)定性適當(dāng)?shù)谋壤３挚贵w的生物活性

第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識四、常用標(biāo)記物（一）熒光素FITC、RB200（二）酶HRP（三）生物素-親和素系統(tǒng)（四）免疫金標(biāo)記技術(shù)（五）免疫鐵蛋白技術(shù)第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識五、免疫組織化學(xué)技術(shù)的結(jié)果判斷（一）對照染色設(shè)計通常需針對第一抗體設(shè)立對照1.陽性對照已知抗原陽性的切片，免疫組化染色流程的有效性，排除假陰性2.陰性對照確證不含已知抗原的標(biāo)本，目的是排除假陽性3.陰性試劑對照4.自身對照指用于證實在免疫組化染色中所用試劑（尤其是特異性抗體試劑的有效性和可靠性）而設(shè)立的同步免疫染色對照，包括有：空白對照、替代對照、吸收試驗和抑制試驗等指在同一標(biāo)記切片上的自身組織成分的陰性背景對照。第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識五、免疫組織化學(xué)技術(shù)的結(jié)果判斷陽性細胞的顯色可位于細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核免疫顯色強度和陽性細胞密度是定性、定量指標(biāo)陽性細胞的著色形態(tài)（如胞膜型、胞核型、胞質(zhì)(漿)型等）及組織分布特點（如局灶型、彌漫型、片塊型等）主要是定位指標(biāo)哪怕只有少數(shù)細胞陽性（只要是抗原所在部位）也應(yīng)視為陽性表達（二）陽性結(jié)果第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識五、免疫組織化學(xué)技術(shù)的結(jié)果判斷（三）陰性結(jié)果

陰性結(jié)果不能簡單視為抗原不表達，由于染色方法靈敏度有高低之分，有時可因靈敏度不夠，而導(dǎo)致陰性反應(yīng)。（四）特異性顯色和非特異性顯色的鑒別

1.分布位置

特異性反應(yīng)必須分布于特定抗原部位非特異性反應(yīng)無一定的分布規(guī)律

第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識五、免疫組織化學(xué)技術(shù)的結(jié)果判斷2.顯色強度

特異性反應(yīng)由于細胞內(nèi)抗原含量不同，顯色強度不一。陽性細胞的染色常定位于細胞，并與陰性細胞間有明顯間隔而非特異性染色常不限于單個細胞，常為成片的細胞3.其他

在過大的組織塊，中心固定不良也會導(dǎo)致非特異性顯色

第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識六、質(zhì)量控制質(zhì)量控制是免疫組織化學(xué)檢驗技術(shù)取得滿意結(jié)果的必要條件。（一）試劑質(zhì)量控制抗體的質(zhì)量是免疫組織化學(xué)染色成功的關(guān)鍵

（二）操作過程質(zhì)量控制

實驗操作標(biāo)本的質(zhì)量控制（三）儀器設(shè)備和器具的質(zhì)量控制第一節(jié)免疫組化技術(shù)基本知識第二節(jié)

熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫第二節(jié)熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)概述利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先用熒光素標(biāo)記已知抗體并以此作為探針，檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后，即會發(fā)出一定波長的熒光，進而對組織中的某種抗原進行定性、定位和定量分析。第二節(jié)熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)一、標(biāo)本制作常見的臨床標(biāo)本材料主要有組織、細胞和細菌三大類，按不同標(biāo)本性質(zhì)可制作涂片、印片或組織切片等。（一）載玻片和蓋玻片的處理載玻片和蓋玻片要厚薄均勻、潔凈及透光性好

一、標(biāo)本制作（二）制片1．組織切片組織材料可制備成冰凍切片或石蠟切片。

2．印片組織材料也可制成印片。3．涂片細胞或細菌要制成涂片，涂片應(yīng)薄且均勻。第二節(jié)熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)一、標(biāo)本制作（三）標(biāo)本的固定主要目的是：

1.防止細胞或切片從玻片上脫落

2.去除妨礙抗原抗體結(jié)合的類脂

3.便于保存。除活細胞外，其他標(biāo)本應(yīng)在染色前以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ā?/p>

（四）標(biāo)本片的保存固定好的標(biāo)本片應(yīng)盡快熒光染色檢查，如需保存，置-20℃下低溫干燥保存。第二節(jié)熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)二、熒光抗體標(biāo)記及染色熒光抗體是熒光免疫技術(shù)的關(guān)鍵試劑，是將熒光素與特異性抗體通過共價鍵的方式結(jié)合而成。其制備過程通常包括抗體的標(biāo)記、純化和鑒定三步。在已固定的標(biāo)本上滴加經(jīng)適當(dāng)稀釋的熒光抗體，置于帶蓋的濕盒內(nèi)，37℃溫育30min。檢測不耐熱抗原以4℃過夜為宜。溫育后充分洗滌、干燥、鏡檢。第二節(jié)熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)第三節(jié)

酶免疫組織化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫酶免疫組織化學(xué)概述

酶免組織化學(xué)檢驗技術(shù)是在一定條件下，應(yīng)用酶標(biāo)抗體（抗原）與組織或細胞標(biāo)本中的抗原（抗體）發(fā)生反應(yīng)，然后加入酶的底物，催化底物顯色，借助光鏡或電鏡，就可識別出標(biāo)本中抗原（抗體）的分布和性質(zhì)；也可通過圖像分析技術(shù)達到定量的目的。第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)一、標(biāo)本制作常用的標(biāo)本有組織切片、組織印片和細胞涂片酶免組織化學(xué)檢驗技術(shù)可分為酶標(biāo)記抗體免疫組織化學(xué)染色法非標(biāo)記抗體酶免疫組織化學(xué)染色法第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)二、酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色法

（一）原理酶標(biāo)記抗體的免疫組織化學(xué)染色法是借助交聯(lián)劑的共價鍵作用將酶直接連接在抗體（或抗抗體）上，酶標(biāo)抗體（或抗抗體）與組織內(nèi)特異抗原或抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)后，通過酶對底物的催化作用，生成不溶性有色產(chǎn)物并沉淀在特定位置，達到對抗原定性、定位、定量檢測的目的。第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)二、酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色法（二）技術(shù)類型

1.直接法形成抗原一抗體一酶復(fù)合物2.間接法形成Ag-Ab1-Ab2﹡E復(fù)合物3.酶標(biāo)抗體三步染色法為間接法的改良法形成Ag-Ab1-Ab2﹡E-Ab3﹡E復(fù)合物第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)二、酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色法直接法間接法優(yōu)點操作簡便特異性強檢測敏感性高制備一種酶標(biāo)二抗可用于檢測多種抗原或抗體缺點敏感性低制備的抗體種類有限特異性不如直接法操作較為繁瑣第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)三、非標(biāo)記抗體酶免疫組化染色法（一）原理該技術(shù)首先用酶免疫動物，制備效價高、特異性強的抗酶抗體（Ab3），將酶與Ab3結(jié)合形成復(fù)合物，然后利用第二抗體（Ab2）作橋，Ab2既可與Ab3的Fc段結(jié)合，又可與結(jié)合在組織抗原上的第一抗體（Ab1）的Fc段結(jié)合，經(jīng)酶催化底物的顯色反應(yīng)，達到對抗原的檢測。第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)三、非標(biāo)記抗體酶免疫組化染色法（二）技術(shù)類型1.酶橋法用辣根過氧化物酶（HRP）免疫動物（如兔）制備抗HRP的抗體（Ab3），經(jīng)Ab2（如羊抗兔）作橋，將結(jié)合在組織抗原上的Ab1(兔抗相應(yīng)組織抗原的抗體)與Ab3連接起來，最后將HRP與Ab3結(jié)合形成Ag-Ab1-Ab2-Ab3-HRP復(fù)合物，加底物顯色第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)三、非標(biāo)記抗體酶免疫組化染色法第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)三、非標(biāo)記抗體酶免疫組化染色法2.PAP法即過氧化物酶（P）-抗過氧化物酶（AP）法，為酶橋法的改良，技術(shù)要點基本上與酶橋法相同，但該法將抗酶抗體（抗過氧化物酶（AP））與酶（過氧化物酶（P））制成了可溶性復(fù)合物（PAP）,該復(fù)合物由2個抗酶抗體和3個過氧化物酶分子組成，呈五角形，非常穩(wěn)定。通過橋抗體（Ab2）將特異性識別組織抗原的抗體（Ab1）與PAP復(fù)合物的抗酶抗體連接起來第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)三、非標(biāo)記抗體酶免疫組化染色法三、非標(biāo)記抗體酶免疫組化染色法3.雙橋PAP法

該法是PAP法的改良，通過兩次連接橋抗體和PAP，形成Ag-Ab1-Ab2-PAP-Ab2-PAP復(fù)合物，在抗原抗體復(fù)合物上結(jié)合了比PAP法更多的酶分子，大大增強了方法的敏感性。4.APAAP法

APAAP法就是以堿性磷酸酶代替HRP建立的堿性磷酸酶（AP）-抗堿性磷酸酶（AAP）法，簡稱APAAP法。技術(shù)要點與PAP法相似。第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)四、酶免疫組化染色中的常用酶及顯色底物酶底物顏色辣根過氧化物酶（HRP）二氨基聯(lián)苯胺（DAB）棕色氨基乙基卡巴唑（AEC）橘紅色4-氯-1-萘酚灰藍色堿性磷酸酶（ALP）α-萘酚磷酸鹽+快藍深藍色α-萘酚磷酸鹽+快紅紅色溴氯羥吲哚磷酸鹽（BCIP）+氮藍四唑（NBT）紫藍色第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)第四節(jié)

親和組織化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫親和組織化學(xué)技術(shù)概述親和組織化學(xué)是利用兩種物質(zhì)之間的高度親和力而建立的一種方法。一些具有雙價或多價結(jié)合力的物質(zhì)如生物素、葡萄球菌A蛋白、植物血凝素等，對某種組織成分具有高度親和力，可與蛋白質(zhì)、糖類、熒光素和酶等多種類型的大小分子結(jié)合形成相應(yīng)復(fù)合物，采用熒光顯微鏡、酶加底物的顯色反應(yīng)等技術(shù)，在細胞或亞細胞水平進行對應(yīng)親和物質(zhì)的定位、定性或定量分析。用于親和組織化學(xué)的物質(zhì)有生物素與親和素、植物凝集素與糖類、SPA與IgG、鏈霉親和素與生物素等。第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)一、生物素-親和素法生物素可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素也稱抗生物素，每個親和素分子有生物素結(jié)合的4個位點，二者可牢固結(jié)合成不可逆的復(fù)合物。第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)一、生物素-親和素法常用的技術(shù)類型有：1.標(biāo)記親和素-生物素法（LAB法）將親和素與標(biāo)記物（HRP）結(jié)合，一個親合素可結(jié)合多個HRP；將生物素與抗體（一抗與二抗）結(jié)合，一個抗體分子可連接多個生物素分子，抗體的活性不受影響。細胞的抗原（或通過一抗）先與生物素化的抗體結(jié)合，繼而將標(biāo)記親和素結(jié)合在抗體的生物素上，如此多層放大，提高了檢測抗原的敏感性。第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)一、生物素-親和素法一、生物素-親和素法2.橋聯(lián)親和素-生物素法（BAB法）先使抗原與生物素化的抗體結(jié)合，再以游離親和素將生物素化的抗體與酶標(biāo)生物素搭橋連接，也達到多層放大效果。第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)一、生物素-親和素法第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)一、生物素-親和素法3.ABC法此法是前兩種方法的改進，即先按一定比例將親和素與酶標(biāo)生物素結(jié)合在一起，形成親和素-生物素-辣根過氧化物酶復(fù)合物（ABC復(fù)合物），當(dāng)其與檢測反應(yīng)體系中的生物素化抗體或生物素化第二抗體相遇時，ABC中未飽和的親和素結(jié)合部位即可與抗體上的生物素結(jié)合，最終形成晶格樣結(jié)構(gòu)的復(fù)合體，其中網(wǎng)絡(luò)了大量酶分子，加底物顯色，可大大提高檢測抗原的靈敏度。

第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)一、生物素-親和素法第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)二、SPA法SPA具有和人及許多動物如豚鼠、豬、小鼠、猴等的IgGFc結(jié)合的能力，這種結(jié)合不會影響抗體的活性。每個SPA分子可同時結(jié)合兩個IgG分子，也可一方面同IgG相結(jié)合，一方面與標(biāo)記物如熒光素、過氧化物酶、膠體金和鐵蛋白等相結(jié)合。第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)二、SPA法第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)三、鏈霉親和素—生物素技術(shù)鏈霉親和素與生物素的結(jié)合是已知自然界中最強的非共價相互作用之一，其功能類似親和素。利用生物素結(jié)合的二抗與酶標(biāo)記的鏈霉親和素蛋白就組成酶標(biāo)鏈霉親和素-生物素方法（LSAB）。

LSAB法的特點:①特異性強；②分子量小，穿透力強，放大效應(yīng)遠超ABC法，故其敏感性更強；③等電點中性更適合組織，可明顯減少非特異性染色，低背景著色使特異性著色更清晰；④操作時間縮短，更簡便。第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)三、鏈霉親和素—生物素技術(shù)第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)四、凝集素法一種凝集素具有專一性結(jié)合某種特異性糖基的能力，同時所有生物膜都含有一定量的糖類，后者主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。因此，凝集素可作為一種探針來研究細胞膜上特定的糖基。另一方面，凝集素具有多價結(jié)合能力，能與熒光素、生物素、酶、膠體金和鐵蛋白等示蹤物結(jié)合，從而在光鏡或電鏡水平顯示其結(jié)合部位。第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)四、凝集素法一般認為細胞膜上特定的糖基可用以區(qū)別細胞的類型并反映細胞在分化、成熟和細胞病變中的變化。標(biāo)記了相應(yīng)示蹤物的凝集素可用來：①作為細胞分化和成熟的標(biāo)記②作為細胞特殊類型的標(biāo)記③腫瘤細胞伴有細胞膜的改變，細胞膜上的糖基也會產(chǎn)生相應(yīng)的變化，也可用凝集素檢測出腫瘤細胞。四、凝集素法常用下列染色法：①直接法—標(biāo)記物直接標(biāo)記凝集素，使之直接與切片中的相應(yīng)糖蛋白或糖脂相結(jié)合②間接法—將凝集素直接與切片中的相應(yīng)糖基結(jié)合，而將標(biāo)記物結(jié)合在抗凝集素抗體上③糖—凝集素—糖法—利用過量的凝集素與組織切片中特定的糖基相結(jié)合，經(jīng)沖洗后，凝集素上還存在未被占用的結(jié)合部位，未結(jié)合部位與有過氧化物酶標(biāo)記的特異性糖基相結(jié)合，形成一個“三明治樣”的糖—凝集素—糖結(jié)合物。第四節(jié)親和組織化學(xué)技術(shù)第五節(jié)

免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫一、金免疫組織化學(xué)技術(shù)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學(xué)活性沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如SPA)等作為探針，能對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性、定位或定量研究。一、金免疫組織化學(xué)技術(shù)（一）免疫金（銀）光鏡染色技術(shù)基本原理是通過免疫反應(yīng)沉積在抗原位置的膠體金顆粒起著一種催化劑作用，用對苯二酚還原劑將銀離子(Ag＋)還原成銀原子(Ag)，被還原的銀原子圍繞金顆粒形成一個“銀殼”，“銀殼”一旦形成，本身亦具有催化作用，從而使更多銀離子還原并促使“銀殼”不斷變大，最終使抗原位置得到更清楚的放大，在光鏡下就可觀察到被放大的抗原位置呈現(xiàn)黑色或黑褐色。

第五節(jié)免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)一、金免疫組織化學(xué)技術(shù)第五節(jié)免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)一、金免疫組織化學(xué)技術(shù)（二）免疫金電鏡染色技術(shù)

膠體金與鎳網(wǎng)上待檢標(biāo)本的相應(yīng)蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)合，由于膠體金具有高電子密度，故金標(biāo)蛋白結(jié)合處，電鏡下可見黑褐色顆粒，從而可對細胞膜上或細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)進行定性與定位分析。第五節(jié)免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)二、金酶標(biāo)記免疫電鏡技術(shù)

酶標(biāo)記免疫電鏡技術(shù)是用酶標(biāo)抗體與組織或細胞抗原發(fā)生特異性結(jié)合后，加酶底物顯色，在電鏡下觀察顯色反應(yīng)的強度。它是將電鏡的高分辨力與酶免疫技術(shù)的特異性結(jié)合，在亞細胞和超微結(jié)構(gòu)水平上對抗原物質(zhì)進行定性分析的一種高度精確、靈敏的方法。

第五節(jié)免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)三、免疫膠體鐵細胞組織化學(xué)技術(shù)

膠體鐵是一種陽離子膠體，將抗體分子標(biāo)記上膠體鐵，通過普魯藍反應(yīng)呈色，膠體鐵顆粒有一定大小和電子密度，可用在電鏡和光鏡水平的抗原（抗體）的定位研究。第五節(jié)免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)第六節(jié)免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫一、免疫組織化學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用（一）熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用：1.在自身免疫性疾病中的應(yīng)用2.細菌和病毒的快速鑒定3.寄生蟲的檢測與研究（二）酶免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用：1.提高病理診斷準(zhǔn)確性2.癌基因蛋白的臨床應(yīng)用3.對腫瘤細胞增生程度的評價4.發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶5.在腫瘤分期上的意義6.指導(dǎo)腫瘤的治療第六節(jié)免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用二、免疫組織化學(xué)技術(shù)的拓展（一）熒光激活細胞分類儀（FACS）（二）共聚焦顯微鏡技術(shù)（三）免疫組織化學(xué)—顯微切割技術(shù)第六節(jié)免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用第十四章

免疫細胞及其功能檢驗技術(shù)免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫免疫細胞是指參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答相關(guān)的細胞，主要包括淋巴細胞、單核-巨噬細胞和樹突狀細胞等。通過分離、純化免疫細胞及其亞群，并對其數(shù)量和功能測定，可以判斷機體免疫功能狀態(tài)，對指導(dǎo)臨床實踐和科學(xué)研究具有重要意義。前言第一節(jié)免疫細胞的分離與純化免疫細胞的分離方法很多，主要根據(jù)細胞表面標(biāo)志、理化性狀和細胞功能等特征。應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)康摹⑺蛛x的目的細胞群種類、數(shù)量和純度等要求選擇分離方法。所用的方法應(yīng)力求操作簡便、盡量保持細胞活性兼顧細胞純度和獲得率。一、白細胞的分離加抗凝血于試管中室溫或37℃中靜置（30-60min）分層結(jié)果示意圖（一）自然沉降法（二）高分子聚合物沉降法抗凝血與等量3%明膠或6%右旋糖酐溶液混勻室溫或37℃中靜置（30～60min）分層結(jié)果與自然沉降法類似優(yōu)點：速度快、得率高不足：白細胞黏性增加二、外周血單個核細胞的分離外周血單個核細胞主要是指淋巴細胞和單核細胞。PBMC是免疫學(xué)實驗中最常用的細胞群PBMC也是T、B細胞分離純化的細胞來源。細胞種類密度紅細胞1.093白細胞1.092淋巴細胞和單核細胞1.075~1.090血小板1.030~1.035人外周血中各類血細胞密度常用的分離液：Ficoll液和Percoll液尤以密度為1.077±0.001的聚蔗糖-泛影葡胺分層液（Ficoll液）最常用。（一）Ficoll分離法注意：溫度以20℃最適宜，超過25℃影響細胞得率（二）Percoll分層液法連續(xù)密度梯度分離液（Percoll液+PBS，離心）加入PBMC懸液或抗凝全血1000×g離心20min結(jié)果示意圖三、淋巴細胞的純化及亞群的分離采用Ficoll和Percoll分離法獲得的細胞懸液成分仍然較為復(fù)雜、均一性不佳。通常需要進一步分離純化淋巴細胞及其亞群。分離原理主要基于細胞的表面標(biāo)志和功能等性質(zhì)。淋巴細胞及其亞類的分離純化是免疫學(xué)檢驗與研究的重要基礎(chǔ)技術(shù)。（一）淋巴細胞的純化去除紅細胞：低滲裂解法、氯化銨裂解法。去除血小板：多次洗滌離心法、胎牛血清梯度離心法。去除單核細胞：黏附法、羧基鐵吞噬法、苯丙氨酸甲酯去除法（二）淋巴細胞的分離E花環(huán)沉降法該法簡便易行，主要用于T細胞的分離PBMC懸液與SRBC混合Ficoll法密度梯度離心收集管底細胞并低滲裂解（二）淋巴細胞的分離尼龍棉分離法該法簡單快速，可分離T細胞和B細胞PBMC懸液加入尼龍棉柱37℃中靜置1～2小時預(yù)熱的含小牛血清培養(yǎng)液洗脫獲得T細胞冷培養(yǎng)液邊沖洗邊擠壓獲得B細胞（二）淋巴細胞的分離免疫磁珠分離法（二）淋巴細胞的分離流式細胞術(shù)分離法該法快速、細胞純度和獲得率高，可分離各種淋巴細胞及其亞群。四、吞噬細胞的分離吞噬細胞包括兩類：一類是大吞噬細胞即單核吞噬細胞系統(tǒng)（包括血液中的單核細胞以及組織器官中的巨噬細胞）；另一類是小吞噬細胞，即中性粒細胞。分離原理：主要根據(jù)其表面標(biāo)志和生物學(xué)特性。（一）單核細胞的分離Percoll密度梯度分離法流式細胞術(shù)分離法（常用方法）免疫磁珠分離法：分選CD14+細胞（常用方法）黏附法黏附法會影響單核細胞的功能，僅適用于去除單核細胞。（二）巨噬細胞的分離斑蝥敷貼法：（用于分離人巨噬細胞）

操作要點：10%斑蝥酒精浸液浸泡后的濾紙?zhí)笤谇氨蹆?nèi)側(cè)皮膚，4~5小時后見皮膚局部充血，48小時后出現(xiàn)水泡，吸取滲出液（主要為巨噬細胞）、離心洗滌。腹腔滲出液分離法：（用于分離動物巨噬細胞）

操作要點：少量液體石蠟注入動物腹腔內(nèi)，3~4天后沖洗出腹腔滲出液（70%~80%為巨噬細胞）。（三）中性粒細胞的分離右旋糖酐沉降法：

操作要點：抗凝靜脈血與6%右旋糖酐溶液按比例混合，室溫條件垂直靜置一定時間后，紅細胞在右旋糖酐作用下凝集成串而快速沉降，白細胞沉降速度慢位于上層，獲取上層細胞。第二節(jié)淋巴細胞數(shù)量及功能檢測許多疾病或生物及其他理化因素均可引起淋巴細胞數(shù)量和功能變化。數(shù)量檢測：根據(jù)淋巴細胞及其亞群的表面標(biāo)志。功能測定：包括體內(nèi)試驗和體外試驗。一、T細胞數(shù)量及功能檢測（一）T細胞的數(shù)量檢測根據(jù)T細胞表面CD分子檢測：（1）間接熒光免疫法（2）免疫組織化學(xué)法：①酶標(biāo)（ABC法、APAAP法）②金標(biāo)法（即IGSS法）（二）T細胞功能檢測T細胞增殖試驗：形態(tài)學(xué)法、3H-TdR摻入法、MTT法CTL介導(dǎo)的細胞毒試驗：51Cr釋放法抗原特異性T細胞定量檢測：MHC-抗原肽四聚體技術(shù)淋巴細胞內(nèi)細胞因子檢測：流式細胞術(shù)體內(nèi)試驗：結(jié)核菌素試驗、PHA皮膚試驗PBMCPHA5％CO2、

37℃培養(yǎng)72h細胞涂片染色顯微鏡檢查該法簡便易行、容易在基層推廣，但主觀因素影響大。形態(tài)學(xué)法T細胞增殖試驗未轉(zhuǎn)化淋巴細胞轉(zhuǎn)化的淋巴母細胞轉(zhuǎn)化率（％）＝轉(zhuǎn)化的淋巴細胞數(shù)計數(shù)的淋巴細胞總數(shù)X100％培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細胞抗凝全血分離液離心過濾測量放射性3H-TdR摻入法靈敏度高客觀性好原理：外周血T細胞

PHA發(fā)生增殖

MTT含藍色甲顆粒的T細胞

MTT

PHA有機溶劑測吸光度（A）值

計算SI判定細胞增殖結(jié)果(SI≧2具有意義)MTT法操作簡便無放射污染51Cr釋放法淋巴細胞（CTL）+含51Cr的腫瘤細胞腫瘤細胞破壞51Cr釋放測定γ射線CTL介導(dǎo)的細胞毒試驗淋巴細胞內(nèi)細胞因子檢測實驗原理:用刺激劑體外激活淋巴細胞，用蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑如莫能霉素阻止細胞因子分泌到細胞外，細胞內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運方式被打亂，引起細胞因子向高爾基體積聚，用流式細胞儀測定淋巴細胞內(nèi)的細胞因子種類，確定Th1/Th2細胞的百分率。分泌的細胞因子ThlTh2

IL-2++-IFN-γ++-TNF-β++++IL-3+++GM-CSF+++TNF-α-++IL-4-++IL-5-++IL-6-++IL-10-++Thl和Th2分泌的細胞因子二、B細胞數(shù)量及功能檢測（一）B細胞數(shù)量檢測根據(jù)B細胞表面標(biāo)志進行檢測：（1）mIg的檢測：免疫熒光、免疫組化（2）

CD分子的檢測：檢測CD19、CD20、CD21、CD22、

CD29以及CD5等（3）小鼠紅細胞受體的檢測：花環(huán)試驗（二）B細胞功能檢測B細胞增殖試驗：3H-TdR摻入法、MTT法（刺激物：小鼠用LPS；人用SPA的金黃色葡萄球菌菌體或抗IgM抗體）B細胞抗體產(chǎn)生能力檢測：溶血空斑試驗、ELISPOT經(jīng)典溶血空斑試驗1.SRBC致敏的B細胞與SRBC在凝膠介質(zhì)中混勻；2.抗體形成細胞(Antibodyformingcell,AFC)周圍的SRBC與AFC產(chǎn)生的抗體結(jié)合而被致敏；3.加入豚鼠新鮮補體，致敏SRBC激活補體而溶解，在AFC周圍出現(xiàn)肉眼可見的溶血空斑；4.計算溶血空斑的數(shù)目。溶血空斑試驗酶聯(lián)免疫斑點試驗抗體產(chǎn)生B細胞抗原包被酶聯(lián)抗抗體凝膠底物顯色可在單細胞水平上檢測B產(chǎn)生抗體和T細胞分泌細胞因子三、NK細胞數(shù)量及功能檢測（一）NK細胞數(shù)量檢測根據(jù)NK細胞表面標(biāo)志進行檢測：

CD分子的檢測：檢測CD3、CD56、CD16等（CD3-CD56+CD16+）

（二）NK細胞功能檢測形態(tài)學(xué)法酶釋法：LDH釋放法熒光法：時間分辨熒光免疫分析法放射性核素釋放法：51Cr釋放法、125I-UdR釋放法流式細胞術(shù)：PI染色NK靶細胞檢測熒光強度、cpm等K562細胞為人NK細胞殺傷功能檢測的常用靶細胞第三節(jié)吞噬細胞功能檢測一、中性粒細胞功能檢測趨化功能檢測：體內(nèi)法（也稱皮膚窗口法）體外法（濾膜滲透法/

Boyden小室法、瓊脂糖平板法）吞噬功能檢測：（吞噬金黃色葡萄球菌或白色念珠菌）殺傷功能檢測：

溶菌法、硝基藍四氮唑（NBT）還原試驗體內(nèi)實驗法--皮膚窗口法在受檢者前臂屈側(cè)中央3㎜范圍內(nèi)，搔刮皮膚后，用蓋玻片壓緊固定，在第2，5，8，12，24，36小時各取樣一次，染色觀察中性粒細胞聚集開始時間、聚集程度等。健康正常人一般2～3小時后開始聚集，達50～100個，6小時可達1000個以上。（一）中性粒細胞趨化功能檢測體外法--Boyden小室法Boyden小室體外法--瓊脂糖平板法原理及技術(shù)要點

在瓊脂糖凝膠平板的中孔加白細胞懸液，左孔加趨化因子，右孔加對照液，溫育4～8小時后，用顯微鏡測微器測定中性粒細胞向左孔的移動距離A和向右孔的移動距離B，計算趨化指數(shù)。趨化指數(shù)越大運動能力越強將細胞懸液與金黃色葡萄球菌或白色念珠菌懸液混合，溫育后涂片、固定和染色。在油鏡下觀察中性粒細胞對細菌的吞噬情況，計數(shù)100個細胞中吞噬和未吞噬細菌的中性粒細胞數(shù)，并記錄吞噬的細菌數(shù)。（二）中性粒細胞吞噬功能檢測（三）中性粒細胞殺傷功能檢測硝基藍四氮唑（NBT）還原試驗

方法：1.抗凝血+硝基藍四氮唑（NBT），溫育25min；2.推片染色、鏡檢（含甲臜顆粒的中性粒細胞）。正常值：NBT陽性細胞率應(yīng)7%~15%二、巨噬細胞功能檢測炭粒廓清試驗：主要用于動物實驗吞噬功能檢測：（吞噬雞紅細胞或白假絲酵母等）促凝血活性測定：正常小鼠肝中庫普弗細胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10％炭粒。據(jù)此給小鼠靜脈注射定量印度墨汁（炭粒懸液），間隔一定時間反復(fù)取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。主要用于動物實驗（一）炭粒廓清試驗（二）巨噬細胞吞噬功能檢測巨噬細胞雞紅細胞或白假絲酵母＋孵育涂片染色鏡檢計算吞噬率和吞噬指數(shù)謝謝！第十五章流式細胞術(shù)免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫流式細胞術(shù)流式細胞術(shù)概念以流式細胞儀作為檢測工具的高科學(xué)技術(shù)，借助單克隆抗體技術(shù)和熒光染料標(biāo)記技術(shù)，對懸液中的單細胞或其他生物粒子進行高速、逐一的細胞定量分析和分選。流式細胞術(shù)的檢測原理免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫流式細胞術(shù)的檢測原理流式細胞儀的基本結(jié)構(gòu)流式細胞儀有四個主要構(gòu)成系統(tǒng)：液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、電子系統(tǒng)、分選系統(tǒng)。流式細胞術(shù)的檢測原理流式細胞儀的基本機構(gòu)流式細胞儀有四個主要構(gòu)成系統(tǒng)：液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、電子系統(tǒng)、分選系統(tǒng)。流式細胞術(shù)的檢測原理液流系統(tǒng)由流動室與液流驅(qū)動系統(tǒng)構(gòu)成，是流式細胞儀的核心元件。流動室由樣品管、鞘液和噴嘴等組成，分析時，鞘液包裹著細胞樣品在氣體正壓的驅(qū)動下一同進入細胞流動室。流式細胞術(shù)的檢測原理光學(xué)系統(tǒng)流式細胞儀的光學(xué)系統(tǒng)由激光光源、分色反光鏡、光速形成器、透鏡組和光電倍增管組成。流式細胞術(shù)的檢測原理數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)由計算機及相應(yīng)的軟件組成，是實驗數(shù)據(jù)分析、存儲、顯示的重要組件。流式細胞儀的數(shù)據(jù)參數(shù)主要包括前向散射光、側(cè)向散射光和熒光。流式細胞術(shù)的檢測原理前向散射光（forwardscatter，F(xiàn)S）激光束照射細胞時，光以相對軸較小的角度（0.5°-10°）向前方散射的訊號。FS由位于激光束正前方的檢測器收集，其強度與細胞的大小有關(guān)。對于同一細胞群體，F(xiàn)S信號的強弱與細胞體積大小呈正比。因此，F(xiàn)S主要用于檢測細胞或其他顆粒的表面屬性。流式細胞術(shù)的檢測原理側(cè)向散射光（sidescatter，SS）激光束照射細胞時，光以90°散射的信號。由位于激光束90o方向的檢測器所收集，其信號主要由細胞內(nèi)部的顆粒性成分對光發(fā)生折射而產(chǎn)生，反映細胞或顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度、表面的光滑程度。SS信號的強弱與細胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)呈正比。流式細胞術(shù)的檢測原理細胞分析的原理將待測樣本制備成單細胞懸液，經(jīng)特異性熒光染色后，在氣體壓力推動下進入流動室。在流動室內(nèi)被鞘液包繞形成單列細胞液柱，與水平方向的激光光束垂直相交。待測細胞在鞘液的包裹下單行排列，依次經(jīng)過流式細胞儀的檢測區(qū)，被熒光染料染色的細胞受到激光照射后發(fā)出熒光，同時，混合細胞群根據(jù)細胞大小和細胞內(nèi)顆粒的多少會被激發(fā)而產(chǎn)生不同的散射光。流式細胞術(shù)的檢測原理細胞分選的原理當(dāng)單細胞懸液形成液柱通過流動室時，液柱被分隔成一連串均勻的液滴，當(dāng)含有滿足設(shè)定分選條件細胞的液滴通過檢測區(qū)時，脈沖發(fā)生器產(chǎn)生充電脈沖，使被選定的細胞液滴帶有特定的電荷，而未被選定細胞形成的液滴及不含細胞的空白液滴不被充電而不帶有電荷。帶電細胞液滴通過靜電場而發(fā)生偏轉(zhuǎn)，落入收集器中，其他液體則被當(dāng)作廢液抽吸掉，完成細胞分選的目的。流式細胞術(shù)的技術(shù)特點流式細胞術(shù)的技術(shù)特點①測量速度快。②多參數(shù)分析。③靈敏度高。④精度高，分辨率高。⑤分選細胞的純度可達到99%以上。⑥保持細胞、細胞器和微粒結(jié)構(gòu)及功能不被破壞。流式細胞術(shù)的關(guān)鍵技術(shù)免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫FCM單細胞樣本的制備樣品類型外周血和骨髓標(biāo)本培養(yǎng)細胞新鮮實體組織石蠟包埋組織脫落細胞FCM樣本的熒光染色最常用的染料異硫氰基熒光素和藻紅蛋白碘化丙啶藻紅蛋白-得克薩斯紅羅丹明FCM樣本的熒光染色免疫熒光染色直接免疫熒光染色間接免疫熒光染色FCM的檢測分析方法免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫FCM的檢測分析方法單參數(shù)直方圖單參數(shù)直方圖是一維數(shù)據(jù)中常用的圖形，可用于定性、定量資料的分析，反映相同熒光或散射光強度的顆粒的相對數(shù)量。單參數(shù)直方圖僅表示一個測量參數(shù)與細胞數(shù)量之間的分布關(guān)系，不能顯示兩個獨立的參數(shù)與細胞之間的關(guān)系。FCM的檢測分析方法雙參數(shù)散點圖雙參數(shù)散點圖是一種細胞數(shù)與雙測量參數(shù)的圖形，X軸和Y軸分別代表與細胞有關(guān)的兩個獨立參數(shù)，根據(jù)這兩種參數(shù)就可以確定細胞在雙參數(shù)圖上的表達位置。FCM的檢測分析方法三參數(shù)直方圖三參數(shù)直方圖的三維坐標(biāo)均為參數(shù)（散射光或熒光）而非細胞數(shù)。任意在如FSC、SSC、FL1、FL2、FL3或FL4等參數(shù)中選擇3個參數(shù)為X、Y、Z軸，構(gòu)成一個三維圖。在三維空間中每一群細胞各處于獨立的空間位置，因此對復(fù)雜的細胞亞群觀察更為直觀、準(zhǔn)確，但對其數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析較難。FCM的檢測分析方法多參數(shù)綜合分析多參數(shù)數(shù)據(jù)可每兩個數(shù)據(jù)組成一對，用直方圖、散點圖、等高圖或假三維圖等進行分析。門（gate）和區(qū)域（region）的設(shè)置是多參數(shù)分析的基礎(chǔ)。通過多參數(shù)分析能夠同時比較各種細胞的不同抗原表達水平，可以統(tǒng)計各種細胞群體的數(shù)量或百分比以及平均熒光強度等，分析細胞的多種生物學(xué)特性。FCM的臨床應(yīng)用免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫FCM的臨床應(yīng)用淋巴細胞及其亞群的分離淋巴細胞亞群分析淋巴細胞功能分析FCM的臨床應(yīng)用白血病免疫表型分析是研究白血病分化抗原和白血病分類診斷的重要手段，即利用單克隆抗體（McAb）檢測白血病細胞的細胞膜和細胞漿抗原，分析其表現(xiàn)型，以了解白血病細胞的分類和分期。FCM的臨床應(yīng)用艾滋病的診斷與治療流式細胞術(shù)是AIDS免疫功能檢測的重要手段，它可以實現(xiàn)CD4+T淋巴細胞的絕對計數(shù)，對于HIV感染的人群定期監(jiān)測CD4+T細胞的絕對數(shù)可以了解他們的免疫狀態(tài)，已成為臨床上診斷AIDS和進行療效評估不可或缺的重要指標(biāo)。FCM的臨床應(yīng)用免疫性血液病診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥免疫性血小板疾病和中性粒細胞減少癥FCM的臨床應(yīng)用自身免疫性疾病與HLA表型分析自身免疫性疾病與某些類型的人類白細胞抗原（Humanleukocyteantigen,HLA）異常表達有關(guān)。如強直性脊柱炎，其外周的HLA-B27的表達程度與疾病的發(fā)生有很高的相關(guān)性。用流式細胞術(shù)測定淋巴細胞表面HLA-B27的表達，操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好。FCM的臨床應(yīng)用臨床腫瘤學(xué)與移植免疫中的應(yīng)用FCM可進行細胞周期分析、定量分析檢測細胞增殖標(biāo)志物、細胞表面標(biāo)志、癌基因蛋白產(chǎn)物、耐藥蛋白、細胞凋亡，從而獲得組織形態(tài)學(xué)方法難以得到的信息，可為腫瘤的臨床診斷、治療和預(yù)防提供幫助。HLA組織配型，流式細胞交叉配型技術(shù)較傳統(tǒng)應(yīng)用的補體依賴淋巴細胞毒試驗更加敏感、特異，且操作簡便。謝謝！第十六章感染性疾病的免疫學(xué)檢驗免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫感染性疾病感染性疾病概念感染性疾?。↖nfectiousdiseases）指致病微生物引起炎癥或器官功能障礙的癥狀。當(dāng)病原微生物作為抗原入侵機體，在導(dǎo)致機體發(fā)生感染的同時，亦可誘導(dǎo)機體建立對微生物感染的免疫，以維持機體生理功能的平衡與穩(wěn)定。固有免疫免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫免疫應(yīng)答免疫應(yīng)答分類根據(jù)免疫應(yīng)答識別的特點、獲得形式以及效應(yīng)機制，可分為適應(yīng)性免疫（adaptiveimmunity）和固有免疫（innateimmunity）。固有免疫固有免疫概念固有免疫亦稱天然免疫或非特異性免疫，是人類在長期的種系發(fā)育和進化過程中，逐漸建立起來的一系列防御病原體等抗原的功能，構(gòu)成了機體抵御病原生物入侵的第一道防線。微課：固有免疫應(yīng)答的概念、組成、特點和機制固有免疫固有免疫的組成固有免疫的屏障結(jié)構(gòu)屏障結(jié)構(gòu)組成（1）物理屏障作用（2）化學(xué)屏障作用（3）生物學(xué)屏障作用

1、皮膚黏膜屏障固有免疫的屏障結(jié)構(gòu)屏障結(jié)構(gòu)組成功能：對中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生保護作用

2、血腦屏障固有免疫的屏障結(jié)構(gòu)屏障結(jié)構(gòu)組成功能：保護胎兒免遭感染、使之正常發(fā)育

3、血胎屏障固有免疫的效應(yīng)細胞吞噬細胞吞噬細胞主要包括中性粒細胞（neutrophil）和單核-巨噬細胞（mononuclearphagocyte）兩類。

固有免疫的效應(yīng)細胞NK細胞NK細胞表面表達IgGFc受體，也可借助ADCC作用殺傷靶細胞。

固有免疫的效應(yīng)細胞γδT細胞可直接識別某些完整的多肽抗原，是皮膚黏膜局部參與早期抗感染免疫的主要效應(yīng)細胞，也具有非特異性殺瘤作用

固有免疫的效應(yīng)細胞B1細胞B1細胞主要分布于胸腔、腹腔和腸壁固有層中。在機體早期抗感染免疫和維持自穩(wěn)中具有重要作用。

固有免疫的效應(yīng)細胞肥大細胞可直接識別某些完整的多肽抗原，是皮膚黏膜局部參與早期抗感染免疫的主要效應(yīng)細胞，也具有非特異性殺瘤作用固有免疫的效應(yīng)分子1、補體（1）細胞溶解作用（2）趨化和促炎癥發(fā)生作用。在機體早期抗感染免疫中具有十分重要的意義固有免疫的效應(yīng)分子2、細胞因子病原體感染機體后，可刺激免疫細胞和感染的組織細胞產(chǎn)生多種細胞因子，引起炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等作用。固有免疫的效應(yīng)分子3、溶菌酶溶菌酶能夠裂解G+菌細胞壁中N-乙酰葡萄糖胺與N-乙酰胞壁酸之間的β-1，4糖苷鍵，使細胞壁的重要組分肽聚糖破壞，從而導(dǎo)致細菌溶解、破壞。固有免疫的效應(yīng)分子4、乙型溶素乙型溶素可作用于G+菌細胞膜，產(chǎn)生非酶性破壞效應(yīng)，但對G-菌無效。固有免疫的效應(yīng)分子5、C-反應(yīng)蛋白CRP可以激活補體和加強吞噬細胞的吞噬而起調(diào)理作用，從而清除入侵機體的冰原微生物和損傷、壞死、凋亡的組織細胞，在機體的天然免疫過程中發(fā)揮重要的保護作用。固有免疫的效應(yīng)分子固有免疫的應(yīng)答機制以吞噬細胞為例（1）接觸病原菌（2）吞入病原菌（3）殺死和破壞病原菌視頻：吞噬細胞吞噬細菌的過程固有免疫的應(yīng)答機制接觸病原菌巨噬細胞能表達多種模式識別受體（PAMP），參與對病原體的吞噬和殺傷作用。固有免疫的應(yīng)答機制吞入病原菌吞噬細胞與細菌接觸部位的細胞膜內(nèi)陷，伸出偽足將細菌攝入，形成由部分細胞膜包繞的吞噬體。固有免疫的應(yīng)答機制殺死和破壞病原菌1.氧依賴性途徑：該途徑主要效應(yīng)分子是反應(yīng)性氧中間物和反應(yīng)性氮中間物。固有免疫的應(yīng)答機制殺死和破壞病原菌2.氧非依賴途徑：指無需氧分子參與的殺菌作用。主要通過：酸性環(huán)境、溶菌酶、防御素。固有免疫的生物學(xué)意義生物學(xué)意義

（1）抗感染作用（2）抗腫瘤作用和移植排斥反應(yīng)（3）參與和促進炎癥反應(yīng)作用（4）參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答人工抗感染免疫免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫抗感染免疫抗感染免疫概念抗感染免疫（anti-infectionimmunity）是機體對入侵病原體的防御性免疫，是機體抵御和清除病原微生物及其有害物質(zhì)的一種生理功能。人工主動免疫人工主動免疫概念人工主動免疫（artificialactiveimmunization）是用人工方法給機體輸入抗原，如疫苗、類毒素等，刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)免疫效應(yīng)的方法。人工主動免疫人工主動免疫制劑1、死疫苗（killedvaccine）又稱滅活疫苗，是用理化方法將致病微生物殺死而制成的疫苗。只激發(fā)體液免疫；全身和局部不良反應(yīng)明顯；穩(wěn)定性好，易于保存。人工主動免疫人工主動免疫制劑2、活疫苗（livingvaccine）又稱減毒疫苗，是通過自然篩選或人工誘變?yōu)槿醵净驘o毒的活微生物而制成的疫苗。產(chǎn)生體液免疫和細胞免疫；一般只需接種一次，用量小，不良反應(yīng)輕，免疫效果持久；穩(wěn)定性差，不易保存。人工主動免疫人工主動免疫制劑3、類毒素（toxoid）細菌的外毒素經(jīng)0.3%~0.4%甲醛處理后失去毒性，仍保留免疫原性的制劑成為類毒素；接種后可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗外毒素抗體，稱為抗毒素。人工主動免疫人工主動免疫制劑4、新型疫苗（1）亞單位疫苗（subunitvaccine）（2）合成疫苗（conjugatevaccine）（3）基因工程疫苗（geneticallyengineeringvaccine）人工被動免疫人工被動免疫概念人工被動免疫（artificialpassiveimmunization）是用人工方法給機體直接輸入抗體，使機體獲得相應(yīng)免疫力的方法。人工被動免疫人工被動免疫制劑1、抗毒素是用類毒素多次注射給馬而產(chǎn)生的抗外毒素抗體，采集馬血清濃縮純化而制成。抗毒素主要用于外毒素所致疾病的治療和緊急預(yù)防。人工被動免疫人工被動免疫制劑2、丙種球蛋白按制劑來源分為胎盤丙種球蛋白（取自健康產(chǎn)婦的胎盤血，主要含IgG類抗體）和血漿丙種球蛋白（取自正常人血漿，主要含IgG、IgM等抗體）。人工被動免疫人工被動免疫制劑3、特異性免疫球蛋白如抗乙肝免疫球蛋白、抗狂犬免疫血清、抗蛇毒免疫血清等特異性免疫球蛋白，用于緊急預(yù)防和治療相應(yīng)的傳染病。計劃免疫計劃免疫概念計劃免疫（planedimmunization）是根據(jù)某些傳染病疫情監(jiān)測和人群免疫狀況分析，按照國家規(guī)定的免疫程序，將有關(guān)疫苗有計劃地對人群進行接種，使人體獲得對這些傳染病的免疫力，從而達到控制、消滅相應(yīng)傳染病的目的。計劃免疫疫苗接種效果監(jiān)測檢測疫苗誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答評價主要是評價疫苗誘導(dǎo)機體產(chǎn)生的特異性抗體反應(yīng)。檢測方法包括體內(nèi)檢測和體外檢測。體液免疫應(yīng)答監(jiān)測疫苗接種效果監(jiān)測細胞免疫應(yīng)答監(jiān)測疫苗誘導(dǎo)的細胞免疫應(yīng)答評價包括體內(nèi)試驗和體外試驗，主要檢測T細胞活化情況。有關(guān)檢測抗體的感染診斷試驗免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點鏈球菌感染的免疫檢測（ASO）鏈球菌溶血素“O”是A群鏈球菌的代謝產(chǎn)物之一，它是一種具有酶活性的蛋白質(zhì)。通過測定血清中ASO水平，有利于A群鏈球菌感染的診斷。過膠乳凝集試驗測定血清中的ASO抗體效價。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點傷寒沙門菌感染的免疫檢測（肥達反應(yīng)）肥達反應(yīng)是檢查患者是否被傷寒或副傷寒桿菌感染的一種檢測方法，常用于傷寒、副傷寒的輔助診斷。肥達反應(yīng)是試管凝集反應(yīng)。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點結(jié)核分枝桿菌感染的免疫檢測結(jié)核菌素試驗是應(yīng)用結(jié)核菌素進行皮膚試驗來測定人體對結(jié)核桿菌是否有變態(tài)反應(yīng)的一種試驗。結(jié)核菌素試驗常采用芒圖（Mantoux）法。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點甲型肝炎病毒抗體的檢測甲型肝炎的實驗室診斷主要依賴對血清中特異性抗體的檢測。通常采用ELISA和化學(xué)發(fā)光技術(shù)對HAVIgG及IgM抗體進行檢測。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點乙型肝炎病毒抗體的檢測1.乙型肝炎病毒表面抗體（抗-HBs）是一種保護性抗體，是機體感染或接種乙肝疫苗的標(biāo)志。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點乙型肝炎病毒抗體的檢測2.乙型肝炎病毒e抗體（抗-HBe）多出現(xiàn)于急性肝炎恢復(fù)期的患者中，比抗-HBs轉(zhuǎn)陽要早，常在HBsAg即將消失或已經(jīng)消失時檢出。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點乙型肝炎病毒抗體的檢測3.乙型肝炎病毒核心抗體（抗-HBcIgM和抗-HBcIgG）抗-HBcIgM是早期HBV感染的特異性血清學(xué)標(biāo)志，這對于急性乙肝診斷很有意義?？?HBcIgG出現(xiàn)較晚，不是保護性抗體，檢測抗-HBcIgG有流行病學(xué)調(diào)查意義。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點丙型肝炎病毒抗體的檢測丙型肝炎病毒感染的實驗室檢查主要包括免疫學(xué)及分子生物學(xué)檢測，針對特異性抗體HCVIgG和HCVIgM的免疫學(xué)檢測是臨床常用的診斷方法，常用ELISA法進行檢測。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點梅毒螺旋體感染的免疫學(xué)檢測1.非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗：是用正常牛心肌的心磷脂（cardiolipin）作為抗原，檢測病人血清中的反應(yīng)素。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點梅毒螺旋體感染的免疫學(xué)檢測2.梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗：抗原為梅毒螺旋體，以檢測血清中的特異性抗體，該試驗特異性高，目前常用的方法有梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）、梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點人獲得性免疫缺陷病毒感染的免疫檢測血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標(biāo)。根據(jù)其主要的適用范圍，可將現(xiàn)有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。篩檢試驗主要用ELISA方法、化學(xué)發(fā)光法和免疫層析方法；確證試驗包括免疫印跡檢測法（WesternBlot，簡稱WB法）；放射免疫沉淀法（RIP）。不同病原體感染抗體產(chǎn)生的特點TORCH檢測優(yōu)生四項（TORCH）指可導(dǎo)致先天性宮內(nèi)感染及圍生期感染的病原體，它是一組病原生物的英文名稱縮寫。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法檢測弓形蟲抗體IgG、IgM（TOX-IgG、TOX-IgM）和循環(huán)抗原。檢測抗體診斷感染的應(yīng)用評價ASO評價A群鏈球菌感染后1周，ASO即開始升高，4~6周可達高峰，并能持續(xù)數(shù)月，當(dāng)感染減退時，ASO值下降并在6個月內(nèi)回到正常值，如果ASO值不下降，提示可能存在復(fù)發(fā)性感染或慢性感染。檢測抗體診斷感染的應(yīng)用評價肥達反應(yīng)評價機體感染傷寒、副傷寒桿菌后會在體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)抗體，即O抗體，H抗體，傷寒抗體常在病后一周左右出現(xiàn)，第3~4周陽性率最高，并可持續(xù)數(shù)月。檢測抗體診斷感染的應(yīng)用評價結(jié)核菌素試驗評價陽性反應(yīng)表明機體對結(jié)核桿菌有變態(tài)反應(yīng)，過去曾感染過結(jié)核，但不表示患病，因接種過卡介苗的人也呈陽性反應(yīng)。強陽性反應(yīng)則表明可能有活動性感染，應(yīng)進一步檢查是否有結(jié)核病。結(jié)核菌素試驗可為接種卡介苗及測定免疫效果提供依據(jù)。檢測抗體診斷感染的應(yīng)用評價梅毒螺旋體的血清學(xué)試驗評價采用密螺旋體抗原血清學(xué)試驗，如ELISA和TPPA作為篩查試驗。如懷疑一期梅毒，可進行特異性梅毒螺旋體IgM血清學(xué)試驗，如有必要，可在1~2周后重復(fù)檢測。檢測抗體診斷感染的應(yīng)用評價艾滋病病毒抗體檢測評價篩選試驗敏感性高，但特異性不高，故有假陽性；所以篩選試驗陽性時需用確診試驗證實。確診試驗陽性，特別是RT-PCR法檢測HIV-RNA陽性，對肯定診斷和早期診斷頗有價值。有關(guān)檢測抗原的感染診斷試驗免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫檢測抗原的感染診斷試驗輪狀病毒感染的免疫檢測輪狀病毒（rotavirus，RV）是嬰幼兒秋冬腹瀉的主要病原菌，常導(dǎo)致水電解質(zhì)酸堿平衡紊亂。輪狀病毒抗原的檢測是人類輪狀病毒感染的特異診斷。檢測抗原的感染診斷試驗 乙型肝炎表面抗原（HBsAg）血清HBsAg的檢測可采用ELISA、固相放射免疫法等方法，用于乙型肝炎病毒感染的篩選和普查。檢測抗原的感染診斷試驗 乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）多存在于HBsAg陽性的標(biāo)本中，很少有HBeAg單獨陽性者。HBeAg陽性是乙肝傳染性的標(biāo)志，在急性乙型肝炎早期常有HBeAg的檢出。HBeAg陽性尚和HBVDNA復(fù)制、肝臟損害程度相關(guān)。檢測抗原的感染診斷試驗 乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）能反映血清中Dane顆粒的存在及肝內(nèi)HBV的復(fù)制，并可與其他的HBV血清標(biāo)志物起互相配合和補充的作用，但在血清中難以檢測。檢測抗原的感染診斷試驗謝謝！第十七章超敏反應(yīng)性疾病免疫學(xué)檢驗免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫超敏反應(yīng)性疾病免疫學(xué)檢驗?zāi)夸?Contents01020304過敏原皮膚實驗血清IgE檢測抗血細胞抗體的檢測第四節(jié)循環(huán)免疫復(fù)合物檢測05第五節(jié)藥物過敏篩選試驗超敏反應(yīng)性疾病免疫學(xué)檢驗超敏反應(yīng)（hypersensitivityreaction）：

又稱變態(tài)反應(yīng)，是機體再次受到相同抗原刺激后發(fā)生的一種異?；虿±硇缘拿庖邞?yīng)答，這種免疫應(yīng)答會使機體生理功能紊亂或組織細胞損傷，引起一系列疾病。引起超敏反應(yīng)的抗原稱為變應(yīng)原（allergen），此類疾病即為超敏反應(yīng)性疾病。課堂復(fù)習(xí)提問超敏反應(yīng)分為幾型？它們的特點分別是什么？超敏反應(yīng)I型：速發(fā)型II型：細胞毒型或細胞溶解型III型：中等大小免疫復(fù)合物型IV型：遲發(fā)性病案討論

劉某，男，7歲，因“頻繁嘔吐半天伴腹痛”就診。發(fā)病前兩小時患兒進食海蝦3只，而后出現(xiàn)嘔吐，為清水樣，量中等。伴有腹痛，為臍周、中上腹陣發(fā)性疼痛。無發(fā)熱、無腹瀉、無皮疹。

該患兒哮喘性支氣管炎病史，3歲時喘息發(fā)作過1次，給予普米克（糖皮質(zhì)激素類藥）、喘康速（β2腎上腺素受體激動劑）吸入治療，并服用開瑞坦（抗組胺藥），以后未再發(fā)作。以往曾有進食海鮮史?；純耗赣H和外祖父有類似食物過敏史。

超敏反應(yīng)病案討論

查體：神清，雙側(cè)腕關(guān)節(jié)、肘關(guān)節(jié)處可見濕疹，雙下肢未見異常，心肺正常，腹平軟，臍周、中上腹壓痛（+），反跳痛（-），無肌緊張。頸軟，神經(jīng)系統(tǒng)（-）。實驗室檢查：血常規(guī)：嗜酸性粒細胞百分比為12%(正常值0.5～5%)，其他指標(biāo)正常。血清IgE為1350IU/ml(正常值0～100IU/ml)。超敏反應(yīng)1.該病人的主要診斷是什么？2.該病人可以通過何種檢測輔助診斷？過敏原皮膚試驗免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫過敏原皮膚試驗皮膚試驗的原理

皮膚試驗(skin

test)簡稱皮試,是在人體皮膚上進行的體內(nèi)免疫學(xué)試驗。通過少量抗原的經(jīng)皮進入人體,觀察局部皮膚反應(yīng)判斷。如果試驗抗原為變應(yīng)原,則皮膚中結(jié)合有IgE的肥大細胞或致敏T細胞就會與其結(jié)合,引發(fā)即刻型或遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)。過敏原皮膚試驗皮膚試驗的原理

皮膚試驗主要用于檢測I型和IV型超敏反應(yīng)。此外,試驗抗原也可從注射部位進入微血管,觀察是否與循環(huán)中相,抗體結(jié)合,形成免疫復(fù)合物沉積,激活補體在局部皮膚引起炎癥,檢測Ⅲ型超敏反應(yīng)。目前臨床常見的檢測方式主要為點刺實驗和斑貼試驗。（一）I型超敏反應(yīng)皮膚試驗原理

當(dāng)變應(yīng)原通過皮膚挑刺、劃痕、皮內(nèi)注射等方法進入致敏者皮膚,與吸附在肥大細胞或(和)嗜堿性粒細胞上的特異IgE高變區(qū)結(jié)合,導(dǎo)致肥大細胞或嗜堿性粒細胞脫顆粒,釋放生物活性介質(zhì)。在20~30分鐘內(nèi)局部皮膚出現(xiàn)紅暈、紅斑、風(fēng)團以及瘙癢感,數(shù)小時后消失。出現(xiàn)此現(xiàn)象者判斷為皮試陽性,即對該變應(yīng)原過敏;未出現(xiàn)紅暈紅斑、風(fēng)團者為陰性,即對該變應(yīng)原不過敏。皮膚試驗的原理（二）IV型超敏反應(yīng)皮膚試驗原理

用皮內(nèi)注射、皮膚斑貼等方法使變應(yīng)原進入已致敏機體,體內(nèi)致敏的T細胞再次接觸到變應(yīng)原后,釋放多種細胞因子,造成局部以單核細胞和淋巴細胞浸潤為主的炎癥反應(yīng)。24-48小時后局部出現(xiàn)紅腫、硬結(jié)或水泡,以此來判斷變應(yīng)原是否引起機體IV型超敏反應(yīng)或機體的細胞免疫功能狀態(tài)。皮膚試驗的原理皮膚實驗的方法

皮膚實驗最常用的部位是前臂曲側(cè)、上臂伸側(cè)或背部，此處皮膚較多樹突狀細胞且光滑細膩，適合實驗操作和結(jié)果觀察。左右兩臂應(yīng)一側(cè)做試驗，一側(cè)做對照。（一）皮內(nèi)試驗（intradermaltest）

將實驗抗原與對照液各0.01-0.03ml分別用皮試針頭注入皮內(nèi)，使局部形成圓形皮丘，如同時實驗多種抗原時，相互間隔至少為4cm，以免強烈反應(yīng)時互相混淆結(jié)果。

皮膚實驗的方法（一）皮內(nèi)試驗（intradermaltest）

皮內(nèi)試驗是最常用的皮膚試驗,測試劑量控制嚴格,結(jié)果較可靠,有助于準(zhǔn)確判斷變應(yīng)原，應(yīng)用范圍廣。

幾乎各類抗原及各型反應(yīng)都可用皮內(nèi)試驗進行測定，只是不同類型的反應(yīng)觀察結(jié)果的時間和判定標(biāo)準(zhǔn)有所不同。皮膚實驗的方法（一）皮內(nèi)試驗（intradermaltest）

當(dāng)高可疑性抗原出現(xiàn)陰性結(jié)果時，可逐漸加大抗原濃度進行重復(fù)試驗，須注意皮內(nèi)試驗敏感性相對其他皮膚試驗高，所用抗原濃度應(yīng)嚴格控制，以免出現(xiàn)嚴重反應(yīng)。皮膚實驗的方法（一）皮內(nèi)試驗（intradermaltest）皮膚實驗的方法（二）點刺試驗（pricktest）

又稱挑刺試驗或刺痕試驗，將抗原與對照液分別滴于試驗部位皮膚表面，用針尖穿過液滴在皮膚上以刺破皮膚不出血為度進行點刺，1分鐘后拭去抗原液，15分鐘后觀察結(jié)果，如同時試驗多種抗原時，應(yīng)注意抗原間不能交叉混合。皮膚實驗的方法（二）點刺試驗（pricktest）皮膚實驗的方法（三）斑貼試驗（patchtest）

取1cm2大小四層紗布，浸沾致敏物溶液，貼敷于受檢者前臂內(nèi)側(cè)或背部正常皮膚上。上面蓋以玻璃紙或蠟紙，再用紗布固定。24~72h觀察結(jié)果。皮膚實驗的方法（三）斑貼試驗（patchtest）皮膚實驗的方法（一）結(jié)果判讀

I型超敏反應(yīng)（速發(fā)型）的結(jié)果判定應(yīng)在皮試后的15-30分鐘進行，可參照本表，皮內(nèi)試驗的陽性反應(yīng)以風(fēng)團為主，點刺試驗的陽性反應(yīng)以紅暈為主。臨床意義（一）結(jié)果判讀

IV型超敏反應(yīng)（遲發(fā)型）結(jié)果判定在48-72小時進行，皮內(nèi)試驗陽性結(jié)果以紅腫和硬結(jié)為主。

斑貼試驗一般于48小時后打開斑試器，并等待30分鐘后第一次讀取結(jié)果，并在第三天或第四天再次讀取結(jié)果。試驗的陽性結(jié)果以紅腫和水皰為主。臨床意義（一）結(jié)果判讀臨床意義（二）結(jié)果分析及注意事項

因皮膚試驗影響因素較多，結(jié)果判定無法量化，可能會出現(xiàn)假陰性和假陽性情況，一般常出現(xiàn)的假陰性可能由以下情況引起：1.皮試液的濃度過低或失效。2.老年患者或過敏性休克或哮喘大發(fā)作之后。3.皮試前用過抗組胺藥或免疫抑制劑。4.操作不當(dāng)將皮試液注入皮下或注入量過少等。臨床意義（二）結(jié)果分析及注意事項

而假陽性則常見于以下情況：1.皮試液含有非特異性刺激物。2.患者患有皮膚劃痕征。3.操作手法過重。4.注入量較大或濃度過高。5.少量空氣混入等。臨床意義（三）臨床意義

皮膚試驗屬于體內(nèi)免疫學(xué)試驗,直接在人體上測試，雖然較易受到各種因素的干擾，但是能反映機體目前實際免疫狀態(tài)，加上其操作簡單，結(jié)果可信性高，目前被臨床廣泛應(yīng)用，常用于以下方面：1.尋找過敏原2.預(yù)防藥物或疫苗過敏3.評估機體免疫細胞功能臨床意義課堂提問青霉素皮試屬于什么試驗？為什么我們接種疫苗后需要在接種室等待30分鐘左右點刺試驗1.點刺試驗2.I型超敏反應(yīng)（速發(fā)型）的結(jié)果判定應(yīng)在皮試后的15-30分鐘進行血清IgE檢測免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫血清IgE檢測一、血清總IgE檢測血清總IgE是血清中各類IgE含量的總和，正常情況下血清總IgE的含量極低，僅在ng/ml水平，因此臨床上一般選用敏感度較高的方法放射免疫測定法、酶聯(lián)免疫測定法及化學(xué)發(fā)光法進行檢測。血清總IgE檢測（一）放射免疫吸附試驗（RIST）

將待測血清與標(biāo)準(zhǔn)量放射標(biāo)記的IgE混合，再與結(jié)合于不溶性載體上的抗IgE抗體反應(yīng)，經(jīng)適度的孵育和洗滌后，測定吸附于載體上的放射標(biāo)記的IgE量，故又稱固相放射免疫測定（SPRIA）。臨床常用雙抗體夾心法，多以濾紙為載體，將抗IgE抗體偶聯(lián)到經(jīng)溴化氟活化的濾紙上，使其與待檢血清及IgE標(biāo)準(zhǔn)進行反應(yīng)；洗滌后加入125I標(biāo)記的抗人IgE，再經(jīng)洗滌后測定濾紙片的放射活性，其測定值與標(biāo)本中的IgE含量呈正相關(guān)。血清總IgE檢測（二）酶聯(lián)免疫測定法（ELISA）

測定血清IgE也可用雙抗體夾心ELISA法(見第八章),該法方便、實用，敏感性、特異性均較好，而且無放射性核素污染，也不需要特殊儀器。血清總IgE檢測（三）化學(xué)發(fā)光法

用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗IgE抗體,其與血清中IgE結(jié)合后,通過化學(xué)發(fā)光分析,計算出血清中IgE含量。此法敏感性、特異性均較好,并且自動化程度較高，為臨床上常用方法。特異性IgE檢測

特異性IgE是指能與某種過敏原特異性結(jié)合的IgE，因該抗體只能和相應(yīng)的變應(yīng)原結(jié)合，因此需要用純化的變應(yīng)原進行檢測，常用的檢測方法包括以下幾種（一）放射變應(yīng)原吸附試驗（radioallergosorbenttest，RAST）（二）酶聯(lián)免疫測定法（三）免疫印跡法(immunoblottingtest,IBT)（四）固相熒光免疫測定法此法操作簡單，一次可檢測多種特異性IgE，但反應(yīng)體系單一，易互相影響。特異性IgE檢測（一）放射變應(yīng)原吸附試驗（二）酶聯(lián)免疫測定法（三）免疫印跡法（四）固相熒光免疫測定法此法因沒有同位素污染，酶標(biāo)抗體可長期保存。該法特異性強，敏感性高，影響因素少，但費用較高、花費時間長，易受血清IgG影響。本法敏感度高，特異性強，具備良好的溯源性，越來越廣泛的被臨床使用。臨床意義（一）血清總IgE血清總IgE水平一般用國際單位（IU）或ng表示（1IU=2.4ng）。正常人群IgE水平受環(huán)境、種族、遺傳、年齡、檢測方法及取樣標(biāo)準(zhǔn)等因素的影響，以至各家報道的正常值相差甚遠。嬰兒臍帶血IgE水平小于0.5IU/ml，出生后隨年齡增長而逐漸升高，12歲時達成人水平。臨床意義（一）血清總IgE

成人血清IgE水平約在20～200IU/ml之間，一般認為大于333IU/ml（800ng/ml）時為異常升高。I型超敏反應(yīng)性疾病，如哮喘、變應(yīng)性鼻炎、特發(fā)性皮炎、濕疹、藥物性間質(zhì)性肺炎、支氣管肺曲菌病、寄生蟲感染、急慢性肝炎和IgE型多發(fā)性骨髓瘤均可使血清總IgE水平升高。因此在分析血清總IgE水平診斷I型超敏反應(yīng)時，需要參考當(dāng)?shù)厝巳嚎侷gE水平并排除相關(guān)疾病。（二）特異性IgE特異性IgE測定是體外檢測變應(yīng)原的重要手段。主要用于1型超敏反應(yīng)的診斷。其試驗的靈敏度及特異性都很高。根據(jù)sIgE含量可確定患者變應(yīng)原種類,評價患者過敏狀態(tài)、脫敏治療的療效,對哮喘的診斷和鑒別診斷有重要幫助。臨床意義（二）特異性IgE

但單純特異性IgE升高并不能診斷I型超敏反應(yīng)性疾病，主要因為以下三點：1.sIgE陽性只說明對該過敏原已經(jīng)致敏,而致敏與否還與機體免疫功能狀態(tài)有關(guān)。2.sIgE陽性與現(xiàn)有疾病沒有直接關(guān)系,而是過去致敏的過敏原。3.交叉反應(yīng)。臨床意義抗血細胞抗體檢測免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫

機體產(chǎn)生的抗血細胞抗體是II型超敏反應(yīng)的主要介質(zhì)，其與血細胞結(jié)合后，可導(dǎo)致血細胞破壞，臨床上引起貧血、粒細胞減少、血小板減少等。其大多屬于不完全抗體，與相應(yīng)抗原結(jié)合后不產(chǎn)生凝集現(xiàn)象。對不同的血細胞抗體，檢測方法基本相同，現(xiàn)將抗球蛋白檢測做簡要介紹?？寡毎贵w的檢測

抗球蛋白的檢測通常用抗球蛋白實驗，即Coombs試驗或稱antiglobulinstest（AGT），其作為檢測不完全抗體的經(jīng)典方法，基本原理是利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細胞表面抗原結(jié)合的特異性抗體，使紅細胞凝集。Coombs試驗分為了直接法和間接法?？骨虻鞍讬z測抗球蛋白檢測（一）直接Coombs試驗

用于直接檢測紅細胞表面的不完全抗體?；颊唧w內(nèi)若有抗紅細胞抗原的不完全抗體存在，可與紅細胞發(fā)生