一次性使用衛(wèi)生用品的微生物檢測方法解讀

一次性使用衛(wèi)生用品的微生物檢測方法解讀食品實驗室服務微生物指標一PART一次性使用衛(wèi)生用品的微生物指標衛(wèi)生濕巾除必須達到表1中的微生物學標準外，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺滅率須為90%，如需標明對真菌的作用，還須對白色念珠菌的殺滅率＜90%、其殺菌作用在室溫下至少須保持1年?？咕ɑ蛞志┊a(chǎn)品除必須達到表1中的同類同級產(chǎn)品微生物學標準外，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌率須＜50%（溶出性）或＞26%（非溶出性），如需標明對真菌的作用．還須白色念珠菌的抑菌率＜50%（溶出性）或＞26%（非溶出性），其抑菌作用在室溫下至少須保持1年。二PART生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生指標裝配與包裝車間空氣中細菌菌落總數(shù)應＜2500CFU/m3。工作臺表面細菌菌落總數(shù)應＜20CFU/cm2。工人手表面細菌菌落總數(shù)應＜300CFU/只手，并不得檢出致病菌。生產(chǎn)環(huán)境采樣與測試方法一PART空氣采樣與測試方法1、樣品采集室內(nèi)面積不超過30m2，在對角線上設里、中、外三點，里、外點位置距墻1m。室內(nèi)面積超過30m2,設東、西、南、北、中5點，周圍4點距墻1m。采樣時，將含營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板（直徑9cm)置采樣點（約桌面高度），打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5min.2、細菌培養(yǎng)在采樣前將準備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基置35℃士2℃培養(yǎng)24h，取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除.將已采集的培養(yǎng)基在6h內(nèi)送實驗室，于35℃士2℃培養(yǎng)48h觀察結果，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。3、菌落計算y1--空氣中細菌菌落總數(shù)，CFU/m3A--平板上平均細菌菌落數(shù)；S1--平板面積，cm2；t--暴露時間，min。二PART工作臺表面與工人手表面采樣與測試方法1、樣品采集工作臺：將經(jīng)滅菌的內(nèi)徑為5cm*5cm的滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用一浸有滅菌生理鹽水的棉簽在其內(nèi)涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。工人手：被檢人五指并攏，用一浸漫生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次．然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放人含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。2、細菌菌落總數(shù)檢測將已采集的樣品在6h內(nèi)送實驗室，每支采樣管充分混勻后取1mL樣液，放人滅菌平皿內(nèi)，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每個樣品平行接種兩塊平皿，置35℃士2℃培養(yǎng)48h，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。計算公式：y2--工作臺表面細菌菌落總數(shù)，CFU/m3A--平板上平均細菌菌落數(shù)；S2--采樣面積,cm2；y3--工人手表面細菌菌落總數(shù)，CFU/只手。產(chǎn)品的微生物檢測方法一PART產(chǎn)品采集與樣品處理于同一批號的三個運輸包裝中至少抽取12個最小銷售包裝樣品，1/4樣品用于檢測，1/4樣品用于留樣。另1/2樣品（可就地封存）必要時用千復檢。抽樣的最小銷售包裝不應有破裂，檢驗前不得啟開。在100級凈化條件下用無菌方法打開用千檢測的至少3個包裝，從每個包裝中取樣，準確稱取10g土1g樣品。剪碎后加人到200mL滅菌生理鹽水中，充分混勻，得到一個生理鹽水樣液。液體產(chǎn)品用原液直接做樣液。如被檢樣品含有大量吸水樹脂材料而導致不能吸出足夠樣液時，稀釋液量可按每次50mL遞增．直至能吸出足夠測試用樣液。在計算細菌菌落總數(shù)與真菌菌落總數(shù)時相應調整稀釋度。二PART細菌菌落總數(shù)與初始污染菌檢測方法本方法適用于產(chǎn)品初始污染菌與細菌菌落總數(shù)（以下統(tǒng)稱為細菌菌落總數(shù)）檢測。1、操作步驟待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作菌落計數(shù)。共接種5個平皿．每個平皿中加入1mL樣液．然后用冷卻至45℃左右的熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15~20mL倒入每個平皿內(nèi)混合均勻。待瓊脂凝固后翻轉平皿35℃士2℃培養(yǎng)48h后，計算平板上的菌落數(shù)。2、菌落總數(shù)計算X1--細菌菌落總數(shù)CFU/g或CFU/mLA--營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上的細菌菌落總數(shù)；K--稀釋度。當菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實有數(shù)報告，大于100時采用二位有效數(shù)字。如果樣品菌落總數(shù)超過本標準的規(guī)定，按B2.3進行復檢和結果報告。3、復檢方法將留存的復檢樣品依前法復測2次，2次結果平均值都達到本標準的規(guī)定，則判定被檢樣品合格；其中有任何1次結果平均值超過本標準規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。三PART大腸菌群檢測方法1、操作步驟取樣液5mL接種50mL乳糖膽鹽發(fā)酵管，置35℃士2℃培養(yǎng)24比如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報告為大腸菌群陰性。如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃線接種伊紅美藍瓊脂平板，置35℃士2℃培養(yǎng)18~24h，觀察平板上菌落形態(tài)。典型的大腸菌群為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落．取疑似菌落1~2個作革蘭氏染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)酵管，置35℃士2℃培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)氣情況。2、結果報告凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣．乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性，可報告被檢樣品檢出大腸桿菌。四PART綠膿桿菌檢測方法1、操作步驟取樣液5mL,加人到50mLSCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置35℃士2℃培養(yǎng)18~24h如有綠膿桿菌生長，培養(yǎng)液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍綠色。從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種十六炾三甲基漠化欽瓊脂平板，置35℃士2℃培養(yǎng)18~24h，觀察菌落特征。綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色，其他菌不長。取可疑菌落涂片作革蘭氏染色．鏡檢為革蘭氏陰性菌者應進行下列試驗：氧化酶試驗、綠膿菌素試驗、硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗、明膠液化試驗、42℃生長試驗綠膿菌素試驗：取2~3個可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培養(yǎng)基斜面，35℃士2℃培養(yǎng)24h,加人三氯甲燒3~5mL，充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解，待三氯甲燒呈藍色時，用吸管移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL，振蕩后靜置片刻。如上層出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。2、結果報告氧化酶及綠膿桿菌試驗均為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。五PART金黃色葡萄球菌檢測方法1、操作步驟取樣液5mL．加人到50mLSCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置35℃士2℃培養(yǎng)24h。自上述增菌液中取1~2接種環(huán)，劃線接種在血瓊脂培養(yǎng)基上，置35℃士2℃培養(yǎng)24~48h在血瓊脂平板上該菌落呈金黃色．大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革蘭氏染色鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄狀，無芽胞與莢膜。鏡檢符合上述情況，應進行下列試驗：甘露醇發(fā)酵試驗：取上述菌落接種甘露醇培養(yǎng)液，置35℃士2℃培養(yǎng)24h，發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽性。血漿凝固酶試驗：玻片法：取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔血漿．挑取菌洛分別與生理鹽水和血漿混合，5min如血漿內(nèi)出現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固則為陽性，如兩者均無凝固則為陰性。凡鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進行試管凝固酶試驗；試管法：吸取1:4新鮮血漿0.5mL，放滅菌小試管中，加人等量待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5mL?；靹?，放35℃士2℃溫箱或水浴中．每半小時觀察一次．24h之內(nèi)呈現(xiàn)凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物各0.5mL作為陽性與陰性對照。2、結果報告凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長，鏡檢為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。六PART溶血性鏈球菌檢測方法1、操作步驟取樣液5mL加入到50mL葡萄糖肉湯，35℃士2℃培養(yǎng)24h。將培養(yǎng)物劃線接種血瓊脂平板，35℃士2℃培養(yǎng)24h觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為灰白色，半透明或不透明，針尖狀突起，表面光滑，邊緣整齊，周圍有無色透明溶血圈。挑取典型菌落作涂片革蘭氏染色鏡檢，應為革蘭氏陽性，呈鏈狀排列的球菌．鏡檢符合上述情況，應進行下列試驗：鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿0.2rnL(0.01g草酸鉀加5mL兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀．吸取上清液），加人0,8mL滅菌生理鹽水，混勻后再加入待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5mL和0.25％氯化鈣0.25mL，混勻放35℃士2℃水浴中，2min觀察一次（一般10min內(nèi)可凝固），待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化時間。如2h內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置24h觀察，如凝塊全部溶化為陽性，24h仍不溶化為陰性。桿菌膚敏感試驗：將被檢菌菌液涂布血平板上，用滅菌攝子取每片含0.04單位桿菌膚的紙片放在平板表面上，同時以已知陽性菌株作對照，在35℃士2℃下放置18~24h，有抑菌帶者為陽性。2、結果報告鏡檢革蘭氏陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現(xiàn)溶血圈鏈激酶和桿菌肽試驗陽性．可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。七PART真菌菌落總數(shù)檢測方法1、操作步驟待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作真菌計數(shù)。共接種5個平皿，每個平皿中加入1mL樣液，然后用冷卻至45℃左右的熔化的沙氏瓊脂培養(yǎng)基15~25mL倒人每個平皿內(nèi)混合均勻，瓊脂凝固后翻轉平皿置25℃士2℃培養(yǎng)7天，分別于3、5、7天觀察，計算平板上的菌落數(shù)，如果發(fā)現(xiàn)菌落蔓延，以前一次的菌落計數(shù)為準。2、結果報告X2--真菌菌落總數(shù)，CFU/g或CFU/mL；B--5塊沙氏瓊脂培養(yǎng)基平板上的真菌菌落總數(shù)；K--稀釋度。當菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實有數(shù)報告，大于100時采用二位有效數(shù)字。如果樣品菌落總數(shù)超過本標準的規(guī)定，進行復檢和結果報告