生物浙科版學案：預(yù)習導(dǎo)航實驗DNA片段的PCR擴增

學必求其心得，業(yè)必貴于專精學必求其心得，業(yè)必貴于專精學必求其心得，業(yè)必貴于專精預(yù)習導(dǎo)航一、PCR技術(shù)1．PCR的全稱是:____________。2．PCR技術(shù)是用于DNA片段復(fù)制、擴增的生化技術(shù)。3．PCR技術(shù)用途:除用于基因擴增外，還用于____________.4．PCR技術(shù)的具體應(yīng)用：在法學、醫(yī)學、食品和考古學上也是重要的實用工具，如______鑒定、______鑒定、食品質(zhì)量的確定、______病診斷、腫瘤病和其他疾病的診斷以及考古中人種的確定等。答案:1。聚合酶鏈反應(yīng)3．測定DNA序列4．親子犯罪遺傳二、DNA的體內(nèi)自我復(fù)制與PCR技術(shù)DNA聚合酶在有________的存在時,利用4種____________,可從____末端向____末端合成新鏈。PCR技術(shù)還需要____________________作為________________，這一段叫______。答案:DNA模板脫氧核苷三磷酸5′3′與DNA模板互補的一段單鏈DNA聚合酶作用的起點引物三、PCR作用的過程1．1個循環(huán)的操作:步驟具體操作雙鏈DNA____將雙鏈DNA加熱至____℃，DNA____，DNA之間的______打開，雙鏈分離(也叫做______）續(xù)表步驟具體操作與______結(jié)合雙鏈分離后，將溫度____________℃，這一降溫過程叫______。退火后,引物可與2個____________分別結(jié)合DNA新鏈的____________℃下，聚合酶可利用________組裝模板的互補鏈，從引物延伸至____末端2.一般大約需要重復(fù)上述3步驟______個循環(huán).3．結(jié)果：一個循環(huán)形成____個雙鏈DNA,在20個循環(huán)后（大約1h)，1個DNA片段可擴增上百萬個拷貝,30個循環(huán)可產(chǎn)生10億個拷貝。答案：1。分開95變性氫鍵解鏈引物迅速降至40～60退火單鏈的DNA模板延伸724種dNTP3′2．15~303．2四、實驗操作1．設(shè)備、用品(略）2．材料：凝膠、DNA標樣、PCR試劑盒、TBE緩沖液、0。1%亞甲藍3.步驟:文字說明：取3個0.5mL微量離心管,分別記做1、2、3號.用取樣器按表一加入試劑，關(guān)閉上蓋并在振蕩器上振蕩20s，使之混合均勻↓將3個微量離心管放在固定器上，保證每管中的液面在水浴中的水面以下.依表二的時間依次放入3個水浴進行PCR↓將TBE緩沖液加入到電泳槽中,使緩沖液高出凝膠面3~4mm,再將樣品加入凝膠板的加樣孔中。所加順序內(nèi)容依次為：凝膠板中的加樣情況說明表加樣孔編號（對應(yīng)右圖所示）1234離心管中樣品標號SA1A2A3所加樣品1號樣品20微升DNA標準溶液PCR產(chǎn)物1（72℃1min后得到的）PCR產(chǎn)物2（72℃1min、70℃2min后得到的)對照組產(chǎn)物2號樣品2微升藍色緩沖液1號樣品與2號樣品必須充分混勻后再加入↓開始進行電泳，若用18V電池的電泳4～6h;若甲直流電泳儀電源，80V可電泳40min↓電泳后將凝膠緩沖液倒出，緩沖液可再利用。將10mL染色劑(亞甲藍)覆蓋在凝膠表面，15~20min后移去（可再利用），再加入5mL70%乙醇,不斷搖動1～2min，使其分布均勻，再除去，加入冷水，幾分鐘后看到藍色的區(qū)帶出現(xiàn)，這就是擴增的DNA↓比較、判斷膠片結(jié)果圖表輔助：表一：試劑1號管（12個循環(huán))2號管(14個循環(huán))3號管(對照）PCR混合液2020—蒸餾水—-20引物202020模板DNA101010總體積505