生物化學(xué)檢驗技術(shù) 課件 第四章 實驗方法的選擇與檢測系統(tǒng)

職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫生物化學(xué)檢驗技術(shù)第四章實驗方法的選擇與檢測系統(tǒng)BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE2目錄

實驗方法的選擇1臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價2檢測系統(tǒng)及量值溯源3第一節(jié)實驗方法的選擇

實驗方法的選擇要結(jié)合其目的、要求等，選擇適當(dāng)?shù)膶嶒灧椒?，這是得到準(zhǔn)確可靠信息的前提，是檢驗質(zhì)量的重要保障。實驗方法是否適合于臨床，必須進行嚴格的選擇和評價。第一節(jié)實驗方法的選擇實驗方法的分級1.決定性方法3.常規(guī)方法2.參考方法準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因的方法。準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)被充分證實，且經(jīng)公認的權(quán)威機構(gòu)(包括國家主管部門、相關(guān)學(xué)術(shù)團體和國際性組織等)頒布的方法。具有足夠的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，性能指?biāo)符合臨床或其它目的需要的實驗方法，由于其經(jīng)濟實用性，是目前臨床實驗室應(yīng)用最為廣泛的常規(guī)分析方法。第一節(jié)實驗方法的選擇參考物質(zhì)的分級1.一級參考物質(zhì)（原級參考物、一級校準(zhǔn)品、一級標(biāo)準(zhǔn)品）

是一種已經(jīng)確定的穩(wěn)定而均一的雜質(zhì)含量定量的物質(zhì)，其計量學(xué)特性位居最高，測量不確定度最小，由決定性方法確定或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定其數(shù)值。

2.二級參考物質(zhì)（次級參考物、二級校準(zhǔn)品或二級標(biāo)準(zhǔn)品）

這類標(biāo)準(zhǔn)品可以是純?nèi)芤?水或有機溶劑的溶液)，也可以是與臨床樣本相似的基質(zhì)中，由參考方法定值或用一級標(biāo)準(zhǔn)品校正而確定其值。3.控制物

控制物也被稱為工作參考物，臨床上常用的控制物有凍干的，還有溶液的，其值以參考方法用適當(dāng)?shù)男?zhǔn)物來定值。第一節(jié)實驗方法的選擇實驗方法選擇的原則1.實用性（1）微量快速：檢測所需的樣本量少，適合批量成套分析。（2）方法簡便：操作容易開展，試劑種類少，易于自動化分析。（3）費用低廉：無需昂貴試劑和儀器，可行性較強。（4）應(yīng)用安全：試劑無毒，腐蝕性小，操作人員無需特殊防護措施。2.可靠性

所選方法應(yīng)具有較高的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和穩(wěn)定性，有較

大的檢測能力及有較寬的測量范圍，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性能符合方法允許誤差限度的要求。第一節(jié)實驗方法的選擇實驗方法選擇的步驟1.廣泛搜集資料：根據(jù)方法選擇的要求，廣泛、仔細查閱國內(nèi)外已發(fā)表的相關(guān)文獻，翻閱相關(guān)文件條例：條件允許時還可以通過實驗室之間的交流、現(xiàn)場考察、專業(yè)會議信息，也可參照國外或國內(nèi)室間質(zhì)評和能力驗證的反饋信息。2.選定候選方法：根據(jù)實驗室的設(shè)備條件、技術(shù)人員業(yè)務(wù)素質(zhì)、工作量等具體情況，選擇適合于本實驗室具體條件的方法作為候選方法。3.初步評價試驗：對候選方法應(yīng)作初步評價試驗。第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

精密度(precision)是指在規(guī)定檢驗條件和同一測量程序下，對同一樣本進行重復(fù)多次測量，所得測量值之間隨機誤差的大小，觀察各數(shù)值之間的接近程度。通常用標(biāo)準(zhǔn)差(standarddeviation,S)(或)變異系數(shù)(cefficientofvariation,CV)的大小即不精密度來描述。

基本方法：批內(nèi)重復(fù)實驗、批間重復(fù)試驗、日內(nèi)重復(fù)試驗一、精密度評價第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價判斷標(biāo)準(zhǔn)

將計算得到的標(biāo)準(zhǔn)差參比國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T403-2012(臨床生物化學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量標(biāo)》)或與美國CLIA'88規(guī)定的總允許誤差進行比較，批內(nèi)不精密度CV應(yīng)小于CLIA'88允許誤差的1/4,批間不精密CV應(yīng)小于CLIA'88允許誤差的1/3作為評價標(biāo)準(zhǔn)。第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

正確度（trueness）是大批檢測結(jié)果的均值與真值的一致程度；準(zhǔn)確度（accuracy）是一次檢測結(jié)果與真值的一致程度。正確度通常用偏倚(bias)表示，已經(jīng)消除了不精密度的影響，偏倚又可用系統(tǒng)誤差表示。

基本方法：回收試驗、干擾試驗和方法比對試驗。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：比例系統(tǒng)誤差小于國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WST403-2012）或CLIA`88規(guī)定的總允許誤差標(biāo)準(zhǔn)，則該檢測方法或檢測系統(tǒng)正確度性能可接受；否則為不可接受。二、正確度評價第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

是指樣本在不經(jīng)過任何稀釋，濃縮和其他預(yù)處理的情況下，直接應(yīng)用檢測系統(tǒng)，測定出樣本的范圍，也稱為線性范圍，在此范圍內(nèi)，測量值與預(yù)測值（真值）呈直線關(guān)系。

注意事項：線性范圍評價最理想的樣本是患者低值和高值的新鮮血清標(biāo)本，實際上這種標(biāo)本往往不容易收集到,因此,多采用人工方法制備。為使人工制備的樣本與實際工作中患者樣本的基質(zhì)一致，多以混合血清作基質(zhì)。樣本濃度應(yīng)覆蓋待評價線性范圍，上下限還應(yīng)包含醫(yī)學(xué)決定水平和常見疾病的檢測值。三、可報告范圍評價第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

檢出限也叫檢測限、檢測低限。是指在給定的顯著性水平內(nèi)，能夠檢出被測物的最低濃度。注意事項：1）檢出限是定性檢出，不能進行準(zhǔn)確定量。2）有些因子，無法準(zhǔn)確的單獨進行檢測，比如PT和APTT的檢測。3）理想的空白樣品或低值樣本要與患者具有相同或相似的基質(zhì).4）實驗過程中，如果LOB和LOD的未知，應(yīng)建立自己的數(shù)值。四、檢出限的驗證第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

是指某項檢查結(jié)果在正常人群中的分布范圍，是解釋檢驗結(jié)果、分析檢驗信息的一個基本尺度和依據(jù)。五、參考區(qū)間驗證第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

通過方法學(xué)評價可以得知候選方法的誤差，解決了樣本與檢驗方法的問題。但是一個實驗在臨床上的應(yīng)用價值，還要與臨床診斷相結(jié)合，解決候選方法和臨床受試者的關(guān)系，主要包括試驗的診斷敏感度、診斷特異度、預(yù)測值、似然比和ROC曲線等指標(biāo)。

診斷試驗指用于某種疾病診斷的臨床試驗檢查方法。金標(biāo)準(zhǔn)是指當(dāng)前臨床醫(yī)學(xué)界公認的診斷疾病最可靠的方法。第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

又稱靈敏度、真陽性率（truepositiverate，TPR），指在用“金標(biāo)準(zhǔn)”確診的患者中，應(yīng)用診斷試驗檢查得到同為某病患者的百分比。靈敏度反映診斷試驗正確識別患病者的能力，靈敏度的理想值是100％。

通常用于：①擬診為嚴重但療效好的疾病，以防漏診；②擬診為有一定治療效果的惡性腫瘤，以便早期確診及時治療；③存在多種可能疾病的診斷，可排除某一診斷；④普查或定期健康體檢，能篩選某一疾病，以防漏診。一、敏感度第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

又稱特異性、真陰性率（truenegativerate，TNR），指用“金標(biāo)準(zhǔn)”診斷的非某病者中，應(yīng)用診斷試驗檢查得到同為非某病患者的百分比。特異度反映診斷試驗正確鑒別非患病者的能力，理想值為100％。

常用于：①擬診患有某病的概率較大時，以便確診；②擬診疾病嚴重但療效與預(yù)后均不好的疾病，以防誤診，盡早解除患者的壓力；③擬診疾病嚴重且根治方法具有較大損害時，需確診，以免造成患者不必要的損害。二、特異度第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

也稱預(yù)告值或診斷價值，包括陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值，分別表示診斷試驗結(jié)果確定或排除某種疾病存在與否的診斷概率。預(yù)測值受流行率的影響，不同流行率的人群中疾病的預(yù)測值不同。三、預(yù)測值第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

似然比是某一特定水平的診斷試驗結(jié)果在患病者中出現(xiàn)的概率與在未患病者中出現(xiàn)的概率之比，性質(zhì)穩(wěn)定，不因流行率的改變而改變。似然比包括陽性似然比和陰性似然比。

似然比可直接判斷一個診斷試驗的好壞。四、似然比第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

受試者工作特征曲線（ROC曲線）又稱為感受性曲線，是以真陽性率（敏感度）為縱坐標(biāo)，假陽性率（1-特異度）為橫坐標(biāo)，并將相對的點連接起來所形成的曲線。

作用：ROC曲線能很容易地查出任意界限值時對疾病的識別能力；選擇最適的診斷閾值（界限值）；比較兩種或兩種以上不同診斷試驗對診斷同種疾病的可靠性，ROC曲線圍成的面積越大，診斷性能越好。五、ROC曲線第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

又稱正確指數(shù)，為靈敏度加上特異度減去1?？梢杂糜趦煞N診斷方法的比較，理想的診斷指數(shù)為100%。

公式為：診斷指數(shù)=（靈敏度＋特異度－1）×100%

診斷指數(shù)表示診斷實驗發(fā)現(xiàn)真正某患病和非患某病的總能力，其值在0-1之間波動，其值愈大表明診斷試驗的真實性越好。六、診斷指數(shù)第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源檢測系統(tǒng)性的定義

檢測系統(tǒng)是指完成一個檢驗項目的測定所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、操作程序、設(shè)備維護程序等的組合。如果是手工操作，還應(yīng)包括具體的操作人員。第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源檢測系統(tǒng)性能的驗證與確認（一）檢測系統(tǒng)的性能驗證

如果實驗室采用的分析系統(tǒng)具有溯源性。實驗室需對該檢測系統(tǒng)進行驗證，用驗證實驗的結(jié)果來驗證該系統(tǒng)能夠達到預(yù)期的水平和取得應(yīng)有的結(jié)果。驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括正確度、精密度和可報告范圍。（二）檢測系統(tǒng)的性能確認

實驗室如果要自建檢測系統(tǒng)或?qū)S商完整的檢測系統(tǒng)中的任何一個組分作出改變,都必須對該系統(tǒng)的性能進行全面確認,用確認實驗的結(jié)果來確認該系統(tǒng)的預(yù)期用途和應(yīng)用要求。確認內(nèi)容主要包括正確度、精密度、檢出限、可報告范圍、生物參考區(qū)間等。第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源量值溯源的定義

通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的傳遞鏈