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文檔簡(jiǎn)介
?非編碼RNA基礎(chǔ)——microRNA解螺旋
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知識(shí)金牌解
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長(zhǎng)知
識(shí)
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牌010203歷史機(jī)制高通量技術(shù)與microRNACONTENTS課
程
目
錄歷史01知
識(shí)
金
牌從RNAi到microRNARNAi:1990年1994年1995年1998年矮牽牛中發(fā)現(xiàn)粗糙脈孢菌
線蟲(chóng)Fire和Mello闡明了其原理,并于2006年因此獲得了Nobel
P&M
PrizemicroRNA:1993年
由Victor
Ambros和Gary
Ruvkun分別發(fā)現(xiàn)第一個(gè)microRNA是lin-4被稱為“小分子時(shí)序RNA”(stRNA)解
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牌七年之后再起征1990年,人類基因組計(jì)劃正式啟動(dòng)越來(lái)越多的物種被測(cè)序:流感嗜血桿菌、大腸桿菌、釀酒酵母、線蟲(chóng)等到了2001年,已有越來(lái)越多的microRNA被發(fā)現(xiàn)2001年10月,Tuschl、Bartel和Ambros三人在Science上撰文,將其命名為microRNA,簡(jiǎn)稱miRNA解
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牌動(dòng)物miRNA的合成經(jīng)過(guò)Drosha切割,形成60~70nt長(zhǎng)度的莖環(huán)結(jié)構(gòu)pre-miRNA核DNA轉(zhuǎn)錄pri-miRNA通過(guò)Exportin5進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)經(jīng)Dicer切割莖環(huán),形成雙鏈小RNA雙鏈RNA解體,形成成熟miRNA裝配形成miRISC不完全匹配結(jié)合在3’UTR,抑制靶基因蛋白翻譯完全匹配,靶基因mRNA降解解
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長(zhǎng)解
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牌pre-miRNA (前體)stem-loop
莖環(huán)結(jié)構(gòu)左右兩臂均可以產(chǎn)生成熟microRNA是預(yù)測(cè)新microRNA的基礎(chǔ)成熟miRNA存在于胞質(zhì)中以及廣泛分布于遠(yuǎn)端組織、體液中動(dòng)物miRNA的合成解
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長(zhǎng)知
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牌網(wǎng)址 是綜合性的收錄microRNA及其前體信息的網(wǎng)站特點(diǎn):①全面、權(quán)威;②包括成熟序列及前體序列③用miR-Seq數(shù)據(jù)來(lái)發(fā)現(xiàn)及校正microRNA④提供靶基因數(shù)據(jù)庫(kù)的外部鏈接及wiki詞條模塊⑤在線搜索及查詢綜合數(shù)據(jù)庫(kù)miRBase解
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牌綜合數(shù)據(jù)庫(kù)miRBase機(jī)制02解
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牌miRNA的作用機(jī)制轉(zhuǎn)錄后抑制切割mRNA降解mRNA核內(nèi)增強(qiáng)mRNA的表達(dá)解
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牌3·UTR有多個(gè)miR結(jié)合位點(diǎn)miR有多種結(jié)合3`UTR方式一條microRNA可以調(diào)控?cái)?shù)百條mRNAmiR與3`UTR解
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牌與lncRNA相互作用lncRNA也是可以有3`UTR的miR與lncRNA知
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牌miRNA與circRNA(Ashwal-Fluss
et
al.,
2014)解
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長(zhǎng)circRNA是一種長(zhǎng)鏈環(huán)狀非編碼RNA分子miRNA與circRNA結(jié)合形成所謂的”miRNA
Sponge”circRNA如同海綿一樣“吸附”多種miRNA,從而阻止miRNA行使原有功能circRNA與mRNA形成了所謂的”ceRNA”關(guān)系知
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牌hsa-mir-19hsa-mir-19ahsa-mir-19b-1hsa-miR-19b-1-5phsa-miR-19b-3phsa-mir-19b-2hsa-miR-19b-2-5phsa-miR-19a-5phsa-miR-19a-3phsa-mir-19a*hsa-miR-19b-1*hsa-miR-19b-2*miRNA的命名體系解
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牌miRNA的命名體系解
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牌循環(huán)miRNA2008年,發(fā)現(xiàn)血清中穩(wěn)定存在游離的miRNA隨后,在血漿、唾液、尿液等體液以及牛奶等中均發(fā)現(xiàn)了循環(huán)miRNA的存在循環(huán)miRNA的來(lái)源主要有三種:①細(xì)胞或組織被動(dòng)釋放出來(lái)的miRNA;②外泌體主動(dòng)分泌的miRNA;③僅與蛋白結(jié)合的miRNA。被引次數(shù)2500+解
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長(zhǎng)解
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長(zhǎng)miRNA的跨物種調(diào)控 知
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牌2018年,菟絲子的miRNA
能夠跨物種靶向寄主mRNA從而調(diào)控其基因表達(dá)2012年,南京大學(xué)張辰宇的一篇文章,發(fā)現(xiàn)食物中的外源植物miRNA可以調(diào)控哺乳動(dòng)物靶基因表達(dá)高通量技術(shù)與microRNA03知
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牌miRNA研究基本思路1Whole
genome
screen~100~1000Candidate
miRNAs~10~50FuncitonDiscoveryValidationFunctionApplicationDiagnosisDrug
discoverymiRNA
SeqmiRNA
microarrayBiomarker&validationApplicationR&DHigh
throughputmiRNA
screenLow
throughput
&ValidationReal-Time
qPCRFunctionresearch解
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長(zhǎng)知
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牌miRNA研究基本思路2Training
setTesting
set芯片或測(cè)序qRT-PCR發(fā)現(xiàn)miRNA標(biāo)志物診斷預(yù)后RNA
抽提組織、體液樣本病人、正常人(疾病組織/正常組織)miRNA
analysis
初步篩選驗(yàn)證建立模型解
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長(zhǎng)解
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長(zhǎng) 22知
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牌BioMarker的尋找大樣本基因芯片篩選RT-PCR驗(yàn)證ROC分析HCC:hepatitis
B
virus
related
HCC,肝癌Healthy:正常個(gè)體CHB:chronic
hepatitis
B,慢性乙型肝炎Cirrhosis:肝硬化Mann-Whitney
test解
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牌BioMarker的尋找232018年月26日復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院樊嘉院長(zhǎng)領(lǐng)銜的肝外科團(tuán)隊(duì)聯(lián)合發(fā)布了miR診斷試劑盒上市的消息2011年11月21日樊嘉等在JCO上發(fā)表論文探索了肝癌診斷中miR分子的作用
中科普瑞團(tuán)隊(duì)成員深入?yún)⑴c該項(xiàng)工作Agilent解
螺A旋ffy|m陪et伴rix醫(yī)
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牌使用基因芯片來(lái)探索miRNAObjectivemiRNA
expressionresearchDifferentialexpressmiRNACandidatemiRNAmiRNAfunctionSample
typeTissueCellBloodSerum/plasmaFFPE……ProcessExtraction
miRsQCmiRNA
labelingHybridizationWashingMicroarrayscanningData
analysisRaw
data
QCNormalizationDiff-microRNAmiRNA
screenData
exhibition解
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牌AgilentmiRNA
ChipTechnical
CharacteristicsTheonlychipplatformtodistinguishbetweenmaturemiRNAandmiRNA
precursors;TotalRNA
used
for
experiments
without
separation
of
miRNA.
Only
100ng
of
TotalRNA
canbeused;Samples
have
a
widerange
of
applications:
tissue,
serum,
plasma,
FFPE,
frozen
biopsytissues,etc;High
specificity:
a
special
patented
probe
design
can
distinguish
differences
in
a
base;High
sensitivity:detection
abundance
steps
across
four
logs,
6logat
most;Datacomes
from
the
Sanger
miRBaseV21,
easy
to
beupdated.SpeciesMicroarray
NameDatabaseHumanSurePrint
Human
microRNA
microarray,
V21.0Sanger
miRBase
release
21.0MouseSurePrint
Mouse
microRNA
microarray,
V21.0Sanger
miRBase
release
21.0RatSurePrint
Rat
microRNA
microarray,
V21.0Sanger
miRBase
release
21.0OthersAgilent
Custom
microRNA
MicroarraySanger
miRBase
release
21.0Agilent
miRNA芯片知
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牌Inthe2014miRQCplatformbenchmarkstudy,AgilentmiRNAmicroarrays
exhibitedthemostconsistentperformanceinmiRNAdetection,superiorto
qPCR,sequencing,
and
other
microarray
platforms.2014年
FDA的miRQC文章解
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牌ProbesetsHumanMouseRatMature
microRNAPre-microRNAsn
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