臨床檢驗技術(shù)第十七章 床旁分析技術(shù)課件

第十七章床旁分析技術(shù)1臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)POCT的概念:“POCT”的組成包括：

point（地點、時間)

care（保健、照料）

testing（檢驗、試驗）

point-of-caretesting即:即時檢測或床邊檢測,主要是指可以遠(yuǎn)離中心實驗室，在患者身邊快速進行并能快速獲取準(zhǔn)確結(jié)果的實驗室檢查2臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)POCT的應(yīng)用早期：尿液分析、血糖分析

目前：血氣分析、電解質(zhì)分析、血液分析、藥物應(yīng)用監(jiān)測、抗凝測定、心肌損傷標(biāo)志物檢測、甲狀腺激素檢測3臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)POCT采用的主要技術(shù):電化學(xué)分析酶學(xué)分析免疫分析熒光分析層析技術(shù)酶聯(lián)免疫分析雙層膜法（干化學(xué)法測定）多層膜法（干化學(xué)法測定）免疫金標(biāo)記技術(shù)免疫熒光技術(shù)

生物傳感器技術(shù)生物芯片技術(shù)紅外和遠(yuǎn)紅外分光光度技術(shù)4臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)

實驗儀器小型化

操作方法簡單化

結(jié)果報告即時化

POCT儀器的主要特點:5臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)第一節(jié)免疫膠體金分析技術(shù)6臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)一、基本原理以膠體金標(biāo)記結(jié)合抗原抗體反應(yīng)的一種新型的免疫標(biāo)記分析技術(shù)。

斑點免疫金滲濾分析法（DIGFA）免疫層析法（ICA）檢測原理:膠體金標(biāo)記物膠體金7臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)斑點免疫金滲濾分析法（DIGFA）以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔濾膜的可過濾性，使抗原抗體反應(yīng)和洗滌在一特殊的滲濾裝置上以液體濾過膜的方式迅速完成免疫滲濾裝置及操作示意圖8臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)以金膠?；蛑槟z粒等有色粒子作標(biāo)記物，層析條通過多種材料復(fù)合而成，多用于定性的檢測，也可半定量分析。免疫層析法（ICA）免疫層析法檢測試劑條結(jié)構(gòu)

9臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)

BCTRA

免疫層析試驗原理示意圖吸水材料免疫金復(fù)合物測試區(qū)參照區(qū)末段吸水材料層析方向10臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)檢測特點：試劑和樣本用量極小不需貴重儀器沒有污染性物質(zhì)檢測速度快技術(shù)關(guān)鍵步驟：膠體金制備蛋白質(zhì)(第二抗體)的膠體金標(biāo)記11臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)二、膠體金的制備還原法還原劑：檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、硼氫化鈉等制備方法及注意事項：方法：在加熱攪拌器上將0.01％氯金酸水溶液加熱沸騰后，滴加一定量的1％檸檬酸三鈉溶液，煮沸約15min后冷卻即可。檸檬酸三鈉用量從低到高可獲得相應(yīng)膠體金的顏色從藍(lán)、紫到紅、橙。注意事項：注意所用玻璃容器的清潔及硅化12臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)三、抗體蛋白的膠體金標(biāo)記標(biāo)記方式:靜電吸附在弱堿環(huán)境下膠體金顆粒帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子中堿性氨基酸帶正電荷的基團形成靜電結(jié)合，屬于非共價結(jié)合。

影響蛋白質(zhì)與膠體金的結(jié)合的因素蛋白質(zhì)所帶電荷溶液的pH蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量膠體金顆粒的大小蛋白質(zhì)與膠體金的比例溶液的離子強度13臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)膠體金標(biāo)記的關(guān)鍵步驟：(一)待標(biāo)記抗體蛋白溶液的準(zhǔn)備去無機離子和蛋白聚合物(二)待標(biāo)記膠體金溶液的準(zhǔn)備合適的pH和離子強度(三)標(biāo)記抗體蛋白最適用量的確定以最低穩(wěn)定用量的120％為標(biāo)記抗體蛋白的最適用量

(四)膠體金與抗體蛋白的結(jié)合電磁攪拌、加入穩(wěn)定劑(五)膠體金標(biāo)記抗體蛋白的純化離心法和凝膠過濾法14臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)四、免疫膠體金分析技術(shù)任床邊檢測中的應(yīng)用15臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)第二節(jié)干化學(xué)分析技術(shù)

16臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)定義：干化學(xué)分析(drychemicalassav)指建立在某些特殊固相支持物上的檢測分析技術(shù)，通常將測定某些項目所必需的全部或部分試劑固定在具有一定結(jié)構(gòu)的載體上，通過滴加液態(tài)樣品溶解載體上的試劑，并與樣品中的待測成分發(fā)生反應(yīng)，在支持物的局部區(qū)域產(chǎn)生信號變化，再通過檢測以獲取待測物的濃度。17臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)檢測原理：反射光度法差示電位法特點：速度快、檢測靈敏度和準(zhǔn)確度較高可采用儀器進行檢測18臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)一、基本原理(一)雙層膜法：特點：通過反射光度計測定其顏色改變，從而計算待測物質(zhì)的含量雙層膜法不能排除樣品中某些物質(zhì)對吸光度的干擾主要應(yīng)用于尿生化分析試劑19臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)(二)多層膜法采用反射光度法差示電位法檢測原理：特點：集光學(xué)、現(xiàn)代化學(xué)、化學(xué)計量學(xué)、酶學(xué)工程和計算機技術(shù)于一體定量的準(zhǔn)確度和精密度已經(jīng)達(dá)到了常規(guī)濕化學(xué)的水平，部分甚至達(dá)到了參考方法的水平20臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)1．基于反射光度法的多層膜21臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)分布層光漫射層輔助試劑層試劑層又稱滲透擴散層，由高密度多孔聚合物組成，其特點是能夠快速吸附液體樣品并使之迅速、均勻地滲透，并可阻止一些顆粒成分(如血細(xì)胞、結(jié)晶)和大分子(如蛋白質(zhì))向下滲透，因此能透過分布層的基本上是無蛋白濾液為白色不透明層，由反射系數(shù)>95％的物質(zhì)如BaSO4，或TiO2構(gòu)成。光漫射層的特點是可以隔離分布層中有色物質(zhì)的干擾，使反射光不受影響；同時因其具有高反射系數(shù)，可為下面的試劑層提供反射背景，使入射在光漫射層上的光最大限度地反射回去，以減小因光吸收所引起的測量誤差主要作用是去除血清中的內(nèi)源性干擾物，從而使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確，還可運用親和過濾、凝膠過濾、免疫沉淀等方法，有選擇地把待測物和干擾物分離。是多層膜法中保證測定結(jié)果更準(zhǔn)確、誤差更小的一個非常重要的結(jié)構(gòu)又稱為指示劑層或反應(yīng)層，由親水性多聚物構(gòu)成，該層固定了項目檢測時所需的部分或全部試劑。用于檢測不同項目的干片，其固定的試劑成分不同起支持作用，為光學(xué)透明的塑料基片，允許入射光和反射光完全透過22臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)2．基于差示電位法的多層膜結(jié)構(gòu)：兩個ISE，都有5層膜結(jié)構(gòu)23臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)測定時取一定量的血清加入到樣品電極的加樣槽中，再取等量的參比液加人參比電極的加樣槽中，通過電位計來測定這兩個電極的差示電位。若樣品與參比液中的離子活度相同，則差示電位為零；若離子活度不同，則可根據(jù)差示電位的值計算待測離子的活度。測定方法：特點：干片是一次性使用的，消除了電極老化和“蛋白質(zhì)中毒”的缺點，可用于干化學(xué)自動生化分析儀。24臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)二、干化學(xué)分析儀干式尿液分析儀便攜式血糖分析儀25臨床檢驗技術(shù)第十七章床旁分析技術(shù)三、注意事項①試劑條應(yīng)放置在允許的溫度條件下保存。②注意有效期，并在效期內(nèi)用質(zhì)控物進行監(jiān)控。③測定前需將試劑條在室溫下放置一定