第二章農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)課件

1農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)第二章2本章內(nèi)容第一節(jié)農(nóng)藥殘留及危害第二節(jié)樣品的采集和保存第三節(jié)樣品的制備第四節(jié)農(nóng)藥殘留的檢測技術(shù)3第一節(jié)農(nóng)藥殘留及危害一、農(nóng)藥概述二、農(nóng)藥殘留的來源三、農(nóng)藥殘留的危害4

一、農(nóng)藥概述

（一）農(nóng)藥的定義農(nóng)藥(pesticides)是指用于防治危害農(nóng)作物及農(nóng)副產(chǎn)品病蟲害、雜草及其他有害生物的藥物總稱。

現(xiàn)在農(nóng)藥不僅應(yīng)用于農(nóng)業(yè)，而且也廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)、林業(yè)和公共衛(wèi)生事業(yè)等方面。5（二）農(nóng)藥的種類1.按用途

可分為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、昆蟲生長調(diào)節(jié)劑等。62.按化學成分

可分為有機氯、有機磷、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類及砷、汞、銅、硫磺等制劑。常見有機氯類農(nóng)藥：666、DDT、狄氏劑、艾氏劑、毒殺芬、氯丹、七氯、五氯酚鈉等具有高度的物理、化學、生物學穩(wěn)定性，在自然界不易分解，高殘留。脂溶性強。7常見有機磷農(nóng)藥：對硫磷（1605.）、內(nèi)吸磷（1509）、鋅硫磷、馬拉硫磷（4049）、樂果、敵百蟲、敵敵畏（DDVP）、殺螟松屬于磷酸酯或硫代磷酸酯類化合物。大多為無色或黃色的油狀液體，部分為低熔點的固體如敵百蟲、樂果等?？扇苡谟袡C溶劑，性質(zhì)不穩(wěn)定，易光解、堿解和水解。83、按急性毒性劃分

劇毒、高毒、中毒、低毒農(nóng)藥94、按作用類型劃分

胃毒劑：通過昆蟲消化器官吸收觸殺劑：通過昆蟲體表侵入體內(nèi)熏蒸劑：通過昆蟲呼吸道侵入蟲體內(nèi)吸劑：被植物吸收傳導分布于各部位引誘劑藥劑：誘集昆蟲以便捕殺或毒殺趨避劑：使昆蟲趨避受保護作物拒食劑：昆蟲中毒后拒絕攝食不育劑：昆蟲中毒后失去生育力10氨基甲酸酯類：分為五大類：①萘基氨基甲酸酯類，如西維因；②苯基氨基甲酸酯類，如葉蟬散；③氨基甲酸肟酯類，如涕滅威；④雜環(huán)甲基氨基甲酸酯類，如呋喃丹；⑤雜環(huán)二甲基氨基甲酸酯類，如異索威。除少數(shù)品種如呋喃丹等毒性較高外，大多數(shù)屬中、低毒性。

擬除蟲菊酯類：一類仿生合成的殺蟲劑，是改變天然除蟲菊酯的化學結(jié)構(gòu)衍生的合成酯類。多達19種，氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯等。擬除蟲菊酯是一類能防治多種害蟲的廣譜殺蟲劑，其殺蟲毒力比老一代殺蟲劑如有機氯、有機磷、氨基甲酸酯類提高10～100倍。11（三）農(nóng)藥的作用

農(nóng)藥在防治農(nóng)作物病蟲害和雜草、提高農(nóng)業(yè)產(chǎn)量方面具有顯著的效果。

農(nóng)藥與人、動物的健康有著密切的關(guān)系。農(nóng)藥的使用，殺滅了一些病原及傳播媒介，使某些疾病得到了控制，在一定程度上提高了人類的健康水平。提高農(nóng)畜產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量等方面，起著重要的作用。但是，大量廣泛施用農(nóng)藥也會造成對食物的污染。12

農(nóng)藥還存在殘毒和污染的嚴重問題，農(nóng)藥對食品，特別是動物性食品的污染。長期食用被農(nóng)藥污染的食品，人類健康會受到嚴重的危害。食品中殘留農(nóng)藥過高會導致癌癥和帕金森癥。每年，我國農(nóng)藥中毒人數(shù)超過10萬人，大部分是由于農(nóng)藥殘留而引起。死亡2000~3000人。近170種農(nóng)藥被列入致癌物。因此，我國相繼制訂了一系列措施，來控制農(nóng)藥對食品的污染。13二、農(nóng)藥殘留的來源

食品中的殘留物，是指殘留于食品中對人體有害的物質(zhì)。主要包括農(nóng)藥殘留、獸藥殘留等。這些物質(zhì)以不同的途徑進入動植物體內(nèi)而殘存下來。當人們長期食用含有以上殘留物的食品時，健康會受到不同程度的危害。因此必須對食品中各種殘留物加強監(jiān)測，嚴格控制，才能保證食用安全。14概念：農(nóng)藥殘留(pesticideresidues)是指農(nóng)藥施用后，殘存在生物體、農(nóng)副產(chǎn)品和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝產(chǎn)物、降解物和雜質(zhì)的總稱。殘留的數(shù)量叫殘留量。15二、農(nóng)藥殘留的來源

直接污染間接污染（環(huán)境農(nóng)作物人）由食物鏈和生物富集作用造成污染運輸及貯存中造成的污染16（三）食物鏈和生物富集作用

生物富集作用又叫生物濃縮，是指生物體通過對環(huán)境中某些元素或難以分解的化合物的積累，使這些物質(zhì)在生物體內(nèi)的濃度超過環(huán)境中濃度的現(xiàn)象。在同一食物鏈上，生物富集系數(shù)從低位營養(yǎng)級到高位營養(yǎng)級逐級增大的現(xiàn)象--生物放大。1718最快：花生、胡蘿卜、豌豆第二：甜菜、蘿卜、黃瓜、馬鈴薯、大豆第三：萵苣、芹菜最慢：卷心菜、洋蔥、茄子、圓辣椒、白菜、果類農(nóng)作物對農(nóng)藥的吸收速度19三、農(nóng)藥殘留的危害農(nóng)藥殘留污染環(huán)境、破壞生態(tài)農(nóng)藥殘留對健康的影響三致性：致癌、致畸、致突變①對免疫系統(tǒng)的影響；②對肝臟的影響；③慢性中毒。藥害影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)農(nóng)藥殘留影響進出口貿(mào)易20農(nóng)藥殘留分析的一般程序樣品的采集和保存樣品的制備成分分析數(shù)據(jù)記錄、整理分析報告的撰寫步驟：21第二節(jié)樣品的采集和保存一、樣品的采集采樣----是從大量的分析對象中抽取有代表性的一部分樣品作為分析材料，即分析樣品。

采樣是分析的首項工作。22采樣的意義盡管一系列檢驗工作非常精密、準確，但如果采取的樣品不足以代表全部物料的組成成分，則其檢驗結(jié)果也將毫無價值，所以采用正確的采樣技術(shù)采集樣品尤為重要。意義：采樣的正確與否，是檢驗工作成敗的關(guān)鍵。231、采樣的原則采樣的原則樣品要均勻具有代表性樣品應(yīng)保持原有的理化指標單擊返回目錄24要求①采集的樣品要均勻、有代表性，能反映全部被檢食品的組成、質(zhì)量和衛(wèi)生狀況。②采樣方法要與分析目的一致。③采樣過程要設(shè)法保持原有的理化指標，防止成分逸散（如水分、氣味、揮發(fā)性酸等）。④防止帶入雜質(zhì)或污染。⑤采樣方法要盡量簡單，處理裝置尺寸適當。252、樣品的分類樣品一般分為檢樣、原始樣品和平均樣品三種。檢樣：從整批待測食品的各個部分所采取的少量樣品。原始樣品：把許多份檢樣綜合在一起。平均樣品：原始樣品經(jīng)過處理再抽取其中一部分供分析檢驗用。26采樣的一般步驟

檢樣原始樣品平均樣品復(fù)檢樣品0.5Kg檢驗樣品0.5Kg備查樣品0.5Kg273、理化檢測用樣品采樣數(shù)量：小數(shù)量食品：抽樣量約為總量的1/10；包裝固體樣品：>250g包裝的，取樣件數(shù)不少于3件；<250g包裝的，不少于6件。罐頭食品或其它小包裝食品，一般取樣量3件；若在生產(chǎn)線上流動取樣，則一般每批采樣3～4次，每次采樣50g；2829304、采樣的一般方法

有隨機抽樣和代表性抽樣2種方法。隨機抽樣是指不帶主觀框架，在抽樣過程中保證整批食品中的每一個單位產(chǎn)品都有被抽取的機會。隨機——要保證所有物料各個部分被抽到的可能性均等。注意：隨機≠隨意；對于不均勻樣品，僅用隨機抽樣是不夠的，必須結(jié)合代表性取樣。

31第二種采集方法是代表性抽樣：可按不同生產(chǎn)日期也可在流水線上按一定的時間間隔抽樣按分析的目的取樣按分析對象性質(zhì)取樣如：粘稠不好混勻的液體，從包裝內(nèi)上、中、下分別取樣。蔬菜的營養(yǎng)成分（全菜）要從莖、枝、葉分別取，粉碎后，混勻。測魚頭部分的成分就只取魚頭。

323334353637二、樣品的記錄和保存38

制備好的樣品應(yīng)盡快分析，如不能馬上分析，則需妥善保存。

樣品保存的目的：是防止樣品發(fā)生受潮、揮發(fā)、風干、變質(zhì)等現(xiàn)象，確保其成分不發(fā)生任何變化。

保存的方法:是將制備好的樣品裝入具磨口塞的玻璃瓶中，置于暗處；易腐敗變質(zhì)的樣品應(yīng)保存在0～5℃的冰箱中，保存時間也不能太長。樣品的保存39容易腐敗變質(zhì)的樣品可用以下方法保存，使用時可根據(jù)需要和測定要求選擇。1.冷藏短期保存溫度一般以0～50C為宜。2.干藏可根據(jù)樣品的種類和要求采用風干、烘干、升華千燥等方法。其中升華干燥又稱為冷凍干燥，它是在低溫及高真空度的情況下對樣品進行干燥（溫度：－30～－100C，壓強：10～40Pa），所以食品的變化可以減至最小程度，保存時間也較長。403.罐藏不能即時處理的鮮樣，在允許的情況下可制成罐頭貯藏。例如，將一定量的試樣切碎后，放入乙醇（φ=96%）中煮沸30min（最終乙醇濃度應(yīng)在78%～82%的范圍內(nèi)），冷卻后密封，可保存一年以上。一般樣品在檢驗結(jié)束后應(yīng)保留一個月以備需要時復(fù)查，保留期從檢驗報告單簽發(fā)之日起開始計算；易變質(zhì)食品不予保留。保留樣品加封存入適當?shù)牡胤剑⒈M可能保持原狀。

THANKYOUSUCCESS2024/12/1841可編輯42思考題農(nóng)殘分析的一般程序分為幾個步驟？

什么是檢樣、原始樣品、平均樣品？什么是采樣？采樣的原則是什么？4.樣品如何保存？5.樣品采集的方法有幾種？43農(nóng)藥殘留分析的一般程序樣品的采集和保存樣品的制備成分分析數(shù)據(jù)記錄、整理分析報告的撰寫步驟：44第三節(jié)樣品的制備

概念目的步驟：提取、濃縮、凈化45為什么要對樣品進行預(yù)處理？食品的組成十分復(fù)雜，其中的雜質(zhì)或某些組分（如蛋白質(zhì)、脂肪、糖類等）對分析測定常常產(chǎn)生干擾，使反應(yīng)達不到預(yù)期的目的。因此，在測定前必須對樣品加以處理，以保證檢驗工作的順利進行。此外，有些被測組分在樣品中含量很低時，測定前還必須對樣品進行濃縮，以便準確測出它們的含量。46一、樣品的提取概念：提取:是指通過溶解、吸附或揮發(fā)等方式將樣品中的殘留農(nóng)藥分離出來的操作步驟，也叫萃取。方法：溶劑提取法固相提取法強制揮發(fā)提取法47（一）溶劑提取法根據(jù)溶解性差異，選用對殘留農(nóng)藥溶解度大的溶劑，通過振蕩、搗碎或回流等方式將分析物從樣品基質(zhì)中提取出來的方法。最常用、最經(jīng)典的方法關(guān)鍵：選擇合適的提取溶劑。（相似相溶）481、固液提取固體樣品的提?。ㄍ寥馈又参飿悠罚┯眠m當?shù)娜軇⒐腆w樣品中的某種被測組分浸取出來稱浸取。也即液-固萃取法。單擊返回目錄49提取劑應(yīng)根據(jù)被提取物的性質(zhì)來選擇，遵從“相似相溶”的原則。

極性弱成分(如有機氯農(nóng)藥)→用極性小的溶劑

(如正乙烷,石油醚)

極性強成分(如黃曲霉毒素B1)→用極性大的溶劑

(如甲醇,乙醇,水)

（1）提取劑的選擇50（2）提取方法常用提取方法振蕩浸漬法組織搗碎法索氏提取法單擊返回目錄51食品中脂肪測定（索氏抽提法）以乙醚或石油醚作為提取劑，用索氏提取器抽提出樣品中的脂肪回收溶劑后所得的殘留物，即為粗脂肪。該法提取出來的脂類主要是游離脂肪，但還含有游離脂肪酸、蠟、色素、磷脂、固醇等脂溶性物質(zhì)。此法為經(jīng)典方法，結(jié)果可靠，但費時，在整個提取過程中應(yīng)注意防火，切忌用明火加熱。52例：食品中脂肪測定（索氏抽提法）532、液液提取

液體樣品如水樣的提取利用適當?shù)娜軇ǔ橛袡C溶劑）將液體樣品中的被測組分（或雜質(zhì)）提取出來稱為液-液萃取。

原理：用一種溶劑把樣品溶液中的一種組分萃取出來，利用被提取的組分在兩互不相溶的溶劑中分配系數(shù)不同，從一相轉(zhuǎn)移到另一相中而與其它組分分離。

特點：操作簡單、快速，分離效果好，使用廣泛。單擊返回目錄54（1）萃取劑的選擇：

萃取劑應(yīng)對被測組分有最大的溶解度，對雜質(zhì)有最小的溶解度，且與原溶劑不互溶；兩種溶劑易于分層，無泡沫。（2）萃取方法：

萃取常在分液漏斗中進行，一般需萃取4～5次方可分離完全。單擊返回目錄例：水樣中非極性農(nóng)藥殘留的提?。≒52）55

例如：《水質(zhì)六六六、滴滴涕的測定氣相色譜法》GB7492-87

用環(huán)已烷萃取水中的六六六、滴涕。萃取液用帶電子捕獲檢測器的氣相色譜儀測定。

水樣的前處理步驟：于250mL分液漏斗中加入100mL水樣，10mL環(huán)已烷，充分振搖后，取上層液進行分析。56二、固相萃取SPESPE：SolidPhaseExtraction

是一種液相色譜分離，利用固體吸附劑將液體樣品中的目標化合物與干擾化合物分離，達到分離和富集目標化合物的目的。水樣中強極性農(nóng)藥的提取573、蒸餾法（揮發(fā)法）

利用待檢成分沸點低易揮發(fā)的特點，是將樣品加熱，使待檢成分生成揮發(fā)性物質(zhì)逸出，然后進行測定。例：水樣中揮發(fā)性有機物測定58二、樣品的凈化凈化概念目的方法59凈化提取物目的：去除油脂、色素、蠟質(zhì)等干擾物質(zhì)。（1）柱層析法柱中吸附劑可用活性炭、氧化鋁、弗羅里硅土、無水Na2SO4或硅藻土等按一定比例配成。溶劑石英砂氧化鋁砂芯60（2）沉淀凈化法

它是利用沉淀反應(yīng)有選擇地沉淀某些組分，而其他組分則留存于溶液中，從而達到分離的目的。本法是向樣液中加入沉淀劑，利用沉淀反應(yīng)使被測組分或干擾組分沉淀下來，再經(jīng)過濾或離心實現(xiàn)與母液分離。

如飲料中糖精鈉的測定，可加堿性硫酸銅將蛋白質(zhì)等雜質(zhì)沉淀下來，過濾除去。61（3）化學凈化法

加強酸、強堿將樣品基體消解

1、磺化法和皂化法（1）磺化法：用硫酸處理樣品提取液，硫酸使其中的脂肪磺化，并與脂肪和色素中的不飽和鍵起加成作用，生成溶于硫酸和水的強極性化合物從有機溶劑中分離出來。主要用于有機氯農(nóng)藥殘留物的測定?；厥章试?0%以上。（2）皂化法：用熱堿KOH-乙醇溶液與脂肪及其雜質(zhì)發(fā)生皂化反應(yīng)，而將其除去。本法只適用于對堿穩(wěn)定的農(nóng)藥提取液的凈化。單擊返回目錄62三、樣品的濃縮

樣品在提取、凈化后，往往樣液體積過大、為了提高待測組分的濃度，常對樣品提取液進行濃縮。常用的濃縮方法有常壓濃縮和減壓濃縮。1.常壓濃縮

待測組分不易揮發(fā)，可用蒸發(fā)皿直接加熱濃縮，也可用蒸餾裝置等。2.減壓濃縮適用對易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定性組分的濃縮。常用K—D濃縮器，水浴加熱并抽氣減壓，濃縮速度快，被測組分損失少。單擊返回目錄63附錄2：食品中666、DDT殘留量的測定學會各種樣品制備的方法：（1）水果、蔬菜（2）土壤（3）食用油64第四節(jié)農(nóng)藥殘留檢測方法

經(jīng)典檢測技術(shù)快速檢測技術(shù)65農(nóng)藥殘留經(jīng)典檢測技術(shù)

氣相色譜法GC氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法GC-MS高效液相色譜法HPLC液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法LC-MS18十二月202466樣品分析方法GC/FPD-適合有機磷和有機硫農(nóng)殘化合物GC/ECD-適合有機氯農(nóng)殘化合物GC/NPD-適合有機氮和有機磷化合物HPLC-適合氨基甲酸酯類化合物的分析67表5-1食品中有機氯農(nóng)藥的最大殘留限量/（mg/kg）食物最大允許殘留限量六六六滴滴涕原糧0.050.05蔬菜、水果0.050.05豆類、薯類0.050.05水產(chǎn)品0.10.5蛋品0.10.1肉及肉制品脂肪含量10%以下(以原樣計)脂肪含量10%及以上(以脂肪計)0.10.212牛乳0.021.0乳制品脂肪含量10%以下(以原樣計)脂肪含量10%及以上(以脂肪計)0.010.010.50.5茶葉0.20.2表5-2食品中有機磷農(nóng)藥最大殘留限量/（mg/kg）農(nóng)藥名稱及標準食物最大殘留限量農(nóng)藥名稱及標準食物最大殘留限量馬拉硫磷GB2763—2005原糧、大豆8樂果GB2763—2005稻谷、小麥、大豆0.05葉菜類蔬菜8葉菜類、甘藍類蔬菜1甘藍類、果菜類蔬菜0.5果菜類、豆類、莖類蔬菜0.5豆類蔬菜2鱗莖類蔬菜0.2芹菜1塊根類蔬菜0.5塊根類蔬菜0.5梨果類水果1梨果類水果2核果類、柑橘類水果2核果類水果6食用植物油0.05草莓1甲拌磷GB2763—2005小麥、高粱0.02葡萄8花生0.1柑橘類水果4花生油、棉籽0.05敵敵畏GB2763—2005原糧0.1對硫磷GB2763—2005原糧、棉籽油0.1蔬菜、水果0.2馬鈴薯0.05水胺硫磷GB2763—2005稻谷0.1蔬菜、水果0.01*69膽堿酯酶抑制法測定有機磷農(nóng)藥殘留量(本法參照GB/T5009·199-2003)研究最多且相對成熟的一種快速檢測技術(shù)快速現(xiàn)場檢測方法：

農(nóng)藥速測卡法（農(nóng)藥殘留試紙法）農(nóng)藥速測片法比色法快速檢測方法701.酶抑制法原理

有機磷類(OPS)和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶(AchE)的活性具有很強的抑制作用。向樣品中添加一定量的乙酰(或丁酰)膽堿酯酶，如果樣品中含有上述兩大類農(nóng)藥，即會對酶的活性產(chǎn)生抑制作用。當向含有農(nóng)藥的樣品中添加底物(碘化硫代乙酰膽堿)和顯色劑(二硫代二硝基苯甲酸)時，酶由于喪失活性而不能催化底物分解并完成顯色反應(yīng)；相反，如果樣品中不含農(nóng)藥，膽堿酯酶則能催化底物分解并完成顯色反應(yīng)。通過分光光度計于412nm波長下比色，能測出顏色變化造成的吸光度之差，再通過吸光度的變化計算出酶的抑制率。酶的抑制率越大，說明樣品中殘留農(nóng)藥的含量越高。71酶抑制法顯色原理

水解加酶顯色劑未水解顯色劑不顯色顯色無農(nóng)藥有農(nóng)藥72試劑：1、磷酸鹽緩沖溶液：3.2gKH2PO4和11.9gK2HPO4配成1000mL，PH8.0。2、顯色劑：160mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6mg碳酸鈉，用20mL緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存。3、底物：取25.0mg碘化硫代乙酰膽堿，加3.0mL蒸餾水溶解，搖勻后4℃冰箱中保存?zhèn)溆?，保存期不超過2周。4、膽堿酯酶溶液：稱取0.040g丁酰膽堿酯酶(粉劑)或乙酰膽堿酯酶，加入2mL磷酸鹽緩沖溶液，溶解后低溫保存，1周內(nèi)可用。73儀器設(shè)備：1、農(nóng)藥殘留快速測定儀或分光光度計。2、分析天平。3、恒溫烘箱。74測定方法

加入5ml緩沖液提取

取2g樣品（非葉菜類取4g），切碎取樣振蕩1~2min抑制反應(yīng)將上清液倒入試管中，靜止3min