DB37T 3479-2018 蘋果苗木傳帶病蟲害檢測(cè)與防控技術(shù)規(guī)范　　

DB37DB37/T3479—2018蘋果苗木傳帶病蟲害檢測(cè)與防控技術(shù)規(guī)范Technicalspecificationfordetectionandcontrolofnurseryappletree-transmittedpests2018-12-29發(fā)布2019-01-29實(shí)施山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I1蘋果苗木傳帶病蟲害檢測(cè)與防控技術(shù)規(guī)范苗傳病蟲害(SeedlingTransm造成樹體生長(zhǎng)發(fā)育不良和嚴(yán)重危害的病毒與類病毒，包括銹果類病毒(ASSVd)、壞死花葉病毒在常規(guī)栽培品種上，能造成明顯癥狀和嚴(yán)重危害的病毒或類病毒，主要為銹果類病毒(ASSVd)2宜選擇開闊通風(fēng)、灌溉與排水條件良好、土壤肥沃地塊作育苗地。周圍5km范圍內(nèi)不3用0℃~4℃的冷藏箱短期保存(2周內(nèi))；長(zhǎng)期保存時(shí)，需先將樣品用液氮速凍后，放于負(fù)80檢測(cè)混合樣品時(shí)，可分成多個(gè)樣品檢測(cè)。RT-PCR檢測(cè)技術(shù)按附錄A的方法進(jìn)行，免疫學(xué)檢測(cè)和生物4冬春季室內(nèi)嫁接的苗木，嫁接后立即噴淋有效成份含量為0.03%～0.05%的吡唑醚菌酯或0.3%~噴3～5波美度的石硫合劑、1%～2%多量式波爾多液或95%機(jī)油乳劑80倍～100倍藥液等于5月、6月份和9月、10月份綿蚜遷飛期，用誘蟲板監(jiān)測(cè)遷飛成蟲，發(fā)現(xiàn)有綿蚜遷入時(shí)雨水少的季節(jié)或年份，結(jié)合其他病害防治噴施殺菌劑；遇雨量大于10mm雨，雨后及時(shí)噴施內(nèi)吸性殺菌劑。多雨季節(jié)或連續(xù)陰雨期，每7d～10d噴施一次殺菌劑，內(nèi)吸起苗后剔除染有病蟲和生長(zhǎng)不良的苗木，用苗木處理劑處理苗木，或用有吡唑醚菌酯或0.3%～0.5%甲基硫菌靈藥液，混加0.05%～0.1%吡蟲啉或0.3%～0澆足水后，移入溫度為20℃~30℃的光照環(huán)境中培養(yǎng)，后期不再澆水。苗木萌芽后檢查苗木發(fā)芽率、5增DNA序列。這是一個(gè)指數(shù)增長(zhǎng)的過程，上一輪的擴(kuò)增產(chǎn)物又可作為下一輪擴(kuò)增的模板，使其成A.2.1Trizol試劑：由苯酚和硫氰酸胍配制而成的單相的快速抽提--380ml/L，硫氰酸胍鹽（0.8M）--118.16g/L，硫氰酸銨（0.4M）A.4.1.3研磨液室溫放置5min，然后每1mlTrizol加入0.2ml氯仿，蓋緊離心管，用手劇烈搖蕩離A.4.1.4取上層水相于一新的離心管，加入等體積異丙醇，室溫放置10min，12000r/min離心10miA.4.1.5棄去上清液，加入1ml的6A.4.1.7將RNA溶于DEPC處理過的無(wú)菌水中，可55℃~60℃水浴10min，增加RNA的溶解度。RNA可進(jìn)計(jì)算其濃度由下面公式計(jì)算。1OD260≈40μg/mlRNA，RNA(μg/ml）=測(cè)得ODR:AGTCTACAGGCTATTTATF:GGAATTTCACACGACTCCTAAR:CCCGCTGTTGGATTTGATF:TGCCTCAAAGTACACCCF:CC