2025年正交設(shè)計法探究酶活性影響因素的實驗研究報告

正交試驗法就是運用排列整潔的表-正交表來對試驗進(jìn)行整體設(shè)計、酶活力(enzymeactivity)也稱為酶活性，是指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)1.學(xué)習(xí)并掌握正交法應(yīng)用原理。2.采用正交法測定多種原因?qū)γ富盍Φ挠绊憽Ｈ?、試驗原理酶促反?yīng)常常同步受到多種原因(包括激活劑和克制劑等)的交互影響，可采用正交法進(jìn)行綜合研究，即通過少許試驗收到更好的效果：多快好省。本試驗以正交法同步測定[S]、[E]、溫度和pH值對trypsin活性的影響，以求得酶活最大時對應(yīng)影響原因的最佳值(水平),并借此初步掌握正交法的使用。①試管④吸管②漏斗⑤恒溫水浴鍋③溫度計⑥分光光度計①2%血紅蛋白液(Hb)④0.04mol/L巴比妥緩沖②15%三氯醋酸液(TCA)⑤考馬斯亮藍(lán)染液五、試驗操作9次試驗),展開后其特性為均衡搭配(1)每列中水平數(shù)1、2、3出現(xiàn)次數(shù)相似，均為3次；列號試驗號1234111112122231333421235223162312731328321393321試驗號試劑/ml1682493572%血紅蛋白液緩沖溶液37℃預(yù)溫5min50℃預(yù)溫5min60℃預(yù)溫5min(1)各試管編號，分別加入對應(yīng)容量的底物(2%Hb)和對應(yīng)pH值的(2)同溫處理的3支試管同步預(yù)溫5min;(3)各試管依序分別加入對應(yīng)容量的trypsin酶液(統(tǒng)一加樣時間間隔),混勻；(4)同溫處理的3支試管置對應(yīng)恒溫水浴中反應(yīng)10min;(5)各試管依次加入15%三氯醋酸液2ml,混勻以終止反應(yīng)；(6)非酶促對照：另取一試管，先加入2%血紅蛋白液0.5ml及pH8緩沖液2.0ml,再加15%三氯醋酸液2.0ml,混勻靜置10min后再加入酶液(7)上述各管反應(yīng)液室溫靜置15min后過濾，取濾液待測酶活；(8)酶活測定(考馬斯亮藍(lán)法，原則曲線制備略):取試管若干支編號，分別加入對應(yīng)的樣品濾液1.0ml及考馬斯亮藍(lán)液4.0ml,混勻，室溫靜置3min,以非酶促對照管為空白，于波長595nm比色測定。水平的試驗成果總和I、Ⅱ和Ⅲ,并分別取其平均值計算對應(yīng)的極差(各列中最大與最小值之差);比較各原因極差的大小以評估各原因?qū)γ富畹臏囟葴y量值測量值測量值2.試驗數(shù)據(jù)處理分析：列號試驗號123溫度/(℃)試驗成果123456789I(一水平試驗成果總和)II(二水平試驗成果總和)Ⅲ(三水平試驗成果總和)極差由上述表格各原因極差大小可看出，底物濃度對于酶活力影響最大，另一方面是酶濃度，再次是pH,最終是溫度。根據(jù)上表數(shù)據(jù)，以吸光度值(I/3、Ⅱ/3、Ⅲ/3)為縱坐標(biāo)，原因的水平數(shù)為橫坐標(biāo)作圖圖一底物濃度對酶活力的影響從圖一可看出，在一定濃度范圍內(nèi)，伴隨底物濃度的增大，酶活力是逐漸減少的，約在底物濃度為0.5mol/ml時酶活力到達(dá)最低。圖二酶濃度對酶活力的影響從圖二可看出，在一定濃度范圍內(nèi)，伴隨酶濃度升高，酶活力是逐漸減少的，約在酶濃度為0.55mol/ml時酶活力到達(dá)最低。圖三溫度對酶活力的影響升高的，即酶活力是逐漸升高的，約在溫度為50℃時酶活力到達(dá)最高。圖四pH對酶活力的影響從圖四可看出，在一定濃度范圍內(nèi)，伴隨pH升高，反應(yīng)速率是逐漸升高的，即酶活力是逐漸升高的，約在pH為8時酶活力到達(dá)最高。1.每加入一種試劑都需要充足混勻。2.應(yīng)保證酶促反應(yīng)的溫度及反應(yīng)時間的精確性。1.正交法有何長處?答：通過少數(shù)的試驗次數(shù)找到很好的生產(chǎn)條件，可以在原因變化范圍內(nèi)均衡抽樣，使每次試驗都具有較強(qiáng)的代表性，保證了全面試驗的某些規(guī)定，這些試驗往往可以很好或更好的到達(dá)試驗的目的。2.各管溫育后為何要加入三氯醋酸液?答：三氯醋酸液可作為蛋白質(zhì)沉淀劑，使反應(yīng)停止，進(jìn)而保證變量的3.非酶促空白對照的作用是什么