第八章-食品微生物檢驗的質(zhì)量控制

第九章食品微生物檢驗的質(zhì)量控制GB4789.1-2010食品微生物學(xué)檢驗總則GB4789.28-2013培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB/T27405-2008實驗室質(zhì)量控制規(guī)范

食品微生物檢驗內(nèi)容食品微生物檢驗質(zhì)量控制概述食品微生物檢驗的室內(nèi)質(zhì)量控制食品微生物檢驗的室間質(zhì)量控制食品微生物檢驗質(zhì)量控制概述一、質(zhì)量控制相關(guān)定義質(zhì)量控制：滿足質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動。質(zhì)量保證：為了滿足實驗室質(zhì)量要求，制定相應(yīng)的計劃并實施所進行的一系列系統(tǒng)活動質(zhì)量手冊：是描述質(zhì)量系統(tǒng)元素的文件或文件的集合。二、食品微生物檢驗質(zhì)量控制概念質(zhì)量控制是食品微生物學(xué)實驗室為了保證檢驗結(jié)果實事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系。三、食品微生物檢驗質(zhì)量控制目的食品微生物學(xué)的質(zhì)量控制是保證食源性致病菌的培養(yǎng)、分離、鑒定及血清學(xué)試驗等的準確性，避免因操作變化導(dǎo)致檢驗結(jié)果錯誤。四、質(zhì)量控制分類分為室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價兩個組成部分室內(nèi)質(zhì)量控制：實驗室內(nèi)部采取的以對比分析、跟蹤以及對實驗室工作的連續(xù)性控制計劃。室間質(zhì)量評價：通過互相校準和/或檢驗對實驗室的操作和結(jié)果所進行的評價。五、質(zhì)量控制內(nèi)容室內(nèi)質(zhì)量控制

實驗室內(nèi)部

質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)室間質(zhì)量評價

外部組織或機構(gòu)

質(zhì)量評價食品微生物學(xué)檢驗

室內(nèi)質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)量控制一、對檢驗人員的要求二、操作手冊三、檢測環(huán)境要求四、設(shè)備/儀器要求五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測六、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控八、檢驗過程的質(zhì)量控制九、標(biāo)準菌株的來源和保存十、實驗室安全防護一、對檢驗人員的要求相應(yīng)崗位的人員，應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力，相應(yīng)的技術(shù)能力證明（證書及證件）。微生物檢驗室應(yīng)有相應(yīng)技術(shù)能力的人負責(zé)室內(nèi)的技術(shù)工作，并設(shè)立質(zhì)量監(jiān)督員。一、對檢驗人員的要求高度的主觀判斷力

個人的技能、經(jīng)驗細菌學(xué)的專業(yè)水平培訓(xùn)班實驗室進修學(xué)術(shù)交流專業(yè)期刊二、操作手冊各級人員的職責(zé)和權(quán)限實驗室安全措施樣品采集和處理指南培養(yǎng)基和試劑的配制方法….等等三、檢測環(huán)境要求-房屋要求房屋要求：足夠?qū)挸?、通風(fēng)、有良好的照明。房屋內(nèi)墻面及地等應(yīng)采用易于清潔的材料。房間的設(shè)置應(yīng)根據(jù)工作內(nèi)容加以分用，設(shè)立專用房間。三、檢測環(huán)境要求-環(huán)境設(shè)施要求專用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室）特殊環(huán)境的微生物指標(biāo)控制與記錄（無菌室等）專用工作室的標(biāo)準操作規(guī)程和定期的檢測校準程序。（潔凈室等）特殊環(huán)境中的專用設(shè)施質(zhì)量控制應(yīng)符合有關(guān)要求（凈化工作臺）三、檢測環(huán)境要求食品微生物學(xué)檢驗室要求布局合理，操作區(qū)域與辦公區(qū)域分開。洗滌室、培養(yǎng)室、消毒間、無菌室應(yīng)分開。無菌室要設(shè)有套間或緩沖間。微生物檢驗室應(yīng)備有自動或腳踩式洗手池和固定的消毒設(shè)施。微生物實驗室要求細菌49.1%，病毒31.6%，立克次氏體11.3%，真菌5.7%，寄生蟲2.3%。要做到檢驗結(jié)果準確，又不造成自身感染和從實驗室擴散病原微生物，對實驗室必須有具體的要求。基本要求：合理的實驗室建筑結(jié)構(gòu)和布局、設(shè)備設(shè)施、規(guī)章制度、人員能力等。生物危害評估生物因子的種類（已知、未知和基因修飾的）來源傳染性致病性傳播途徑在環(huán)境中的穩(wěn)定性感染劑量、濃度動物實驗數(shù)據(jù)預(yù)防和治療情況微生物危害程度的分級Ⅰ級（低個體、群體危害）：不會導(dǎo)致健康人和動物致病的微生物。Ⅱ級（中等個體危害，有限群體危害）：能導(dǎo)致發(fā)病，但一般情況下對健康個體、群體和環(huán)境不會引起嚴重危害的病原體。有治療藥物且傳播風(fēng)險有限。Ⅲ級（高個體危害，低群體危害）：能引起人或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失；但不會因偶然接觸而傳播，或有治療藥物的病原體。Ⅳ級（高個體危害，高群體危害）：能引起非常嚴重的、一般不可治愈疾病，容易在直接、間接或偶然接觸中傳播的病原菌。安全控制生物安全防護級別與其擬從事的實驗活動相適應(yīng)。一級、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。三級、四級實驗室認證后可從事高致病性病原微生物實驗活動。對我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的病原微生物，任何單位和個人未經(jīng)批準不得從事相關(guān)實驗活動。食品微生物檢驗室設(shè)計原則：方便、使用、保證檢驗工作的順利進行組成：準備室、洗滌室、滅菌室、無菌室、培養(yǎng)室和普通實驗室安全級別：為了防止交叉污染，保護工作人員健康，實驗室應(yīng)至少劃分成3個區(qū)：清潔區(qū)、操作區(qū)和。清潔區(qū)范圍：包括辦公室、休息室、培養(yǎng)基配制室與試劑儲藏室。基本要求：此區(qū)域禁止帶人細菌檢驗標(biāo)本。

操作區(qū)（1）范圍：藥品、血清、菌種、樣品、試劑、培養(yǎng)基制備與準備。（1）整潔：微生物操作區(qū)是各種病原菌相對集中的地方，為了減少粉塵流動，防止交叉污染，操作區(qū)應(yīng)與外界分開。工作前后，進行消毒。（2）光線：除設(shè)置常規(guī)照明燈外，還必須安裝操作臺燈，以保證實驗結(jié)果的正確判斷。

（3）

通風(fēng)：由于各種病原菌集中，空氣污濁，實驗室要求保持排的生物安全柜中進行。

操作區(qū)（2）（4）溫度和濕度：不能安裝吊扇，應(yīng)安裝空調(diào)。（5）電源：要求提供穩(wěn)壓、恒頻的電源；根據(jù)儀器設(shè)備要求，必要時配備不間斷電源。（6）水源：操作區(qū)內(nèi)須設(shè)置水源。用于標(biāo)本處理（如細菌染色）

的水槽與工作人員洗手用的水槽不能混用。（7）污染物處理：操作區(qū)須備有消毒缸，以處理沾有活菌的玻片等污染物品。檢驗剩余的標(biāo)本及使用過的帶菌平板、試管均須集中地點安全放置，經(jīng)消毒滅菌處理后再洗滌或丟棄。無菌區(qū)（1）無菌室應(yīng)完全封閉，進出無菌室至少要經(jīng)兩道門，中間隔有緩沖間，無菌室與外間設(shè)置一個可開閉的窗口，用于傳遞器具。（2）無菌室必須保持整潔。工作人員進入無菌室應(yīng)換專用鞋、專用衣。無菌室使用前須用紫外線消毒30min

，操作結(jié)束后清潔臺面，再用紫外線消毒30min

。定期用乳酸或甲醛熏蒸，徹底消毒。（3）無菌室僅用于培養(yǎng)基分裝等無菌操作，不能進行有菌標(biāo)本的操作。操作人員操作時應(yīng)嚴格關(guān)門，并戴好專用的口罩、帽子。室內(nèi)的布局(1)動儀器與靜儀器分開：精密儀器（如光度計、天平、比色計、酸度計、色譜儀等）應(yīng)必須與震動儀器（如震蕩器、驗粉篩、離心機、攪拌器等）。(2)常溫與熱源設(shè)備分開：熱源儀器（如電熱蒸餾水器、恒溫干燥箱、高溫電阻爐、恒溫培養(yǎng)箱、水浴鍋、電爐等）必須與其它一切設(shè)備分開，不然會影響其它設(shè)備的正常使用，嚴重的會造成熱蒸汽腐蝕其它設(shè)備，影響其使用壽命。(3)化學(xué)分析臺與熱源設(shè)備分開：化學(xué)分析臺面上應(yīng)盡量少放易燃和腐蝕性試劑。使用電爐或酒精燈加熱時應(yīng)堅持有人看管和監(jiān)視。化學(xué)分析臺的擺放應(yīng)遠離熱源設(shè)備。檢驗室建設(shè)布局圖

1.辦公臺2.文件柜3.樣品柜4.通風(fēng)櫥5.實驗邊臺6，7.無菌臺8.天平臺9.在落地儀器區(qū)再加個高溫儀器臺，放高壓滅菌鍋、干燥箱、水浴鍋、電熱板等無菌室建設(shè)

無菌臺上可放置的物品物品數(shù)量物品數(shù)量酒精燈1個滅菌營養(yǎng)瓊脂200ml打火機1個滅菌雙料發(fā)酵管6根接種針1個滅菌單料發(fā)酵管12根消毒面團1瓶滅菌平皿10塊洗耳球1個試管架2副鑷子1個2ml滅菌吸管5根油筆1支10ml滅菌吸管3根試管簍2個125ml滅菌燒杯2個三、檢測環(huán)境要求微生物檢驗室應(yīng)制定合理、完善的衛(wèi)生管理制度，采用濕式保潔，定期對操作環(huán)境進行消毒。對廢棄物，應(yīng)投入指定的容器內(nèi)，經(jīng)無害化處理后方可排放，，以防某些病原微生物傳播。需在無菌條件下工作的區(qū)域應(yīng)以明確標(biāo)識并能有效地控制、監(jiān)測和記錄。每天記錄環(huán)境檢測報告，并經(jīng)常進行空氣落菌實驗：定期對無菌室進行室內(nèi)環(huán)境消毒。三、環(huán)境設(shè)施的相關(guān)技術(shù)指標(biāo)凈化室、凈化工作區(qū)域、潔凈環(huán)境按國家及部頒標(biāo)準進行檢測。空氣潔凈度指標(biāo)：檢測頻率及檢測方法。一次/月；空氣細菌檢測（沉降法）。級別≥0.5μm塵粒(個/L)≥5μm塵粒(個/L)活菌顆粒平均數(shù)(cfu/平板)100≤3.5≤0.0≤1.010000≤350.0≤2.5≤3.0四、設(shè)備/儀器要求-總則滿足開展相關(guān)檢測項目的要求。制定相關(guān)設(shè)備/儀器的作業(yè)指導(dǎo)書。設(shè)備/儀器需進行檢定校準。設(shè)備/儀器的運行狀況記錄。維修后設(shè)備/儀器的再校準或檢查，應(yīng)具有完整的檢查記錄。溫度計實驗室必須要有工作溫度計和參照溫度計。工作溫度計：用于日常溫度檢查。參照溫度計：用于校正工作的溫度計。溫度計運行檢查：一般可采用一次/半年的運行檢查。日常檢查、校準檢查、運行檢查等都應(yīng)做好相應(yīng)的記錄。培養(yǎng)箱、水浴箱和冰箱的溫度控制培養(yǎng)箱的溫差要求，一般顯示值與實測值相差不大于±1℃，箱體內(nèi)各點溫差（內(nèi)部的溫度均衡性）以及溫度波動同樣不大于±1℃。溫度監(jiān)控方法：可將工作溫度計置甘油中，放入待測箱體內(nèi)，觀察工作溫度計的溫度，最好1-2次/天監(jiān)控并記錄。高壓滅菌鍋的溫度控制（一）高壓滅菌鍋；可用生物指示菌法（常用）、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法進行檢測。生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。高壓滅菌鍋由專人操作，并做好作業(yè)記錄。高壓滅菌鍋使用時，內(nèi)置物品不能太多，單位體積內(nèi)的內(nèi)容物（每瓶內(nèi)的培養(yǎng)基）不能太多。高壓滅菌鍋的溫度控制（二）高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和121±2℃。高壓滅菌鍋校準周期一般在半年。干燥滅菌箱溫度控制干燥滅菌箱的溫度校準：用參考溫度計進行溫度測試。干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5℃或180±5℃。干燥滅菌箱校準周期一般為一年。培養(yǎng)基配制用蒸餾水的控制按設(shè)備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。檢測要求：西歐標(biāo)準為微生物檢驗用蒸餾水的特定電導(dǎo)率＜0.5ms/m；細菌數(shù)＜50cfu/ml。我們?nèi)粘Ｓ玫臉?biāo)準為＜10ms/m。檢測頻率：1次/每月。蒸餾水定點供應(yīng)，并做好相應(yīng)的質(zhì)量控制及記錄。天平的管理天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。天平要有使用記錄。天平作為計量儀器是列入國家強制檢定的范圍，一般1次/年進行檢定。容積的控制（一）保證高壓滅菌后的稀釋劑滿足標(biāo)準用量。采取稱中法來測定蒸發(fā)量，體積100ml的稀釋劑起重量為101g。高壓結(jié)束體積偏差不得超過1%。采取先高壓后定量分裝，可避免因高壓造成的體積誤差。對保存的定量液體應(yīng)在使用時，注意補充容積。容積的控制（二）吸管的控制：通過小計量容器校準后使用。小計量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校準周期一般為1-2次/一年。小計量容器日常使用檢查可每周進行一次，包括容器的完整性，并做好相應(yīng)的記錄。pH計pH計使用前應(yīng)用標(biāo)準液進行校準。緩沖液使用有效期：PH4.00約1年

PH7.00約6個月

pH9.00約6個月pH計的維護：電極外表的定期清洗；電極敏感性檢測及極性恢復(fù)。凈化工作臺的控制水平流凈化工作臺工作區(qū)域，要求潔凈度為100級?？諝獬两?0min，細菌數(shù)＜1個/皿。垂直流凈化工作臺，細菌數(shù)＜0.49個/皿.凈化工作臺運行檢查頻次：1次/月，采用細菌沉降檢測。凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進行粒子與細菌沉降檢測。紫外線燈的控制檢測方法：儀器測試法和生物測試法。前者是通過專用儀器檢測紫外燈管發(fā)射的紫外光強度。國家消毒技術(shù)規(guī)范中表明在距離照射源1米處，要求其強度為90lx。生物測試法：采用一定的菌培養(yǎng)物，經(jīng)一定比例稀釋，菌量控制在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射2min，同時設(shè)置普通光源的對照組，置37℃培養(yǎng)48h，計算其殺滅率，要求殺滅率達99%。顯微鏡的控制顯微鏡應(yīng)有作業(yè)指導(dǎo)書，日常維護記錄及自校記錄。顯微鏡應(yīng)置于無振動、避免灰塵、防潮等要求的環(huán)境。其它微生物檢測專用儀器的控制細菌鑒定儀、酶標(biāo)儀等設(shè)備，工作中常用陽性對照檢測其功能的正常性。儀器的檢定則按檢定或自校作業(yè)指導(dǎo)書進行。儀器的使用登記、校準計劃、校準記錄等文件存檔。儀器專人使用，操作者應(yīng)持證上崗。五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測高壓滅菌器：定期監(jiān)測（每月一次）

生物指示劑：嗜熱脂肪芽孢桿菌化學(xué)指示劑：變色的指示帶培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱：

每日早、晚兩次溫度觀測，繪制溫度曲線圖五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測厭氧培養(yǎng)裝置：

化學(xué)標(biāo)記：美藍生物學(xué)指標(biāo)：銅綠假單胞菌CO2培養(yǎng)箱：

每天檢查箱內(nèi)的CO2含量五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測生物安全柜：

定期更換濾網(wǎng)，紫外線每3月檢查1次微生物鑒定儀及時更新軟件每批號鑒定卡用標(biāo)準菌株測定五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測

表1儀器設(shè)備的質(zhì)量控制標(biāo)準設(shè)備

控制標(biāo)準

允許范圍高壓滅菌器121℃

≥121℃培養(yǎng)箱

35℃

±1℃水浴箱

37℃

±0.5℃冰箱

4℃

±2℃低溫冰箱-20℃

±5℃CO2培養(yǎng)箱5%~10%

<10%培養(yǎng)基的有效性試驗每一批新制或新購的培養(yǎng)基，使用前均須取標(biāo)準菌株試驗.培養(yǎng)基的試驗結(jié)果需要加以記錄，項目包括試驗日期、試驗結(jié)果以及實驗者的簽名等。六、培養(yǎng)基質(zhì)量控制培養(yǎng)基質(zhì)量控制培養(yǎng)基的量：平板培養(yǎng)基的厚度一般為3mm

(90mm平皿+15-20ml培養(yǎng)基）斜面不超過試管的2/3常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制（一）檢驗項目與方法：物理、化學(xué)及生物學(xué)指標(biāo)鑒定A：感官測定，檢查其顏色與透明度，培養(yǎng)基應(yīng)澄清，無渾濁。B：PH測定，按各種培養(yǎng)基要求的PH±0.2。C：生物學(xué)指標(biāo)檢定，無菌實驗、被檢培養(yǎng)基相應(yīng)細菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制（一）無菌試驗：

每批配好的培養(yǎng)基須進行無菌試驗隨機選取5%-10%的量，如果配制大量的培養(yǎng)基，則任意選取10個平板或管裝培養(yǎng)基，35℃溫度下過夜培養(yǎng)，證明無菌生長為合格常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制（二）生長率測試：適用于液體和固體培養(yǎng)基：將菌培養(yǎng)液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進行平板計數(shù)，同時以新鮮配制的國標(biāo)培養(yǎng)基進行對照。菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的國標(biāo)培養(yǎng)基無統(tǒng)計學(xué)差異。常用培養(yǎng)基檢定用標(biāo)準菌株表2常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基質(zhì)控菌種生長情況結(jié)果血瓊脂

巧克力瓊脂營養(yǎng)瓊脂麥康凱瓊脂

中國藍瓊脂

SS瓊脂

沙保羅瓊脂

化膿鏈球菌肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌福氏志賀菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌福氏志賀菌金黃色葡萄球菌產(chǎn)氣腸桿菌鼠傷寒沙門菌大腸埃希菌白色假絲酵母菌++++++-++-++-+明顯乙型溶血環(huán)甲型溶血環(huán)24h生長生長分解乳糖，菌落紅色不分解乳糖，菌落無色透明不生長分解乳糖，菌落藍色不分解乳糖，菌落無色不生長粉紅色菌落無色菌落，中心黑色

常用培養(yǎng)基檢定用標(biāo)準菌株表2常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制生長生長，溶血生長部分抑制生長，黃色菌落生長，藍綠色菌落大量生長抑制生長++++++-脆弱擬桿菌產(chǎn)氣莢膜梭菌菌空腸彎曲菌大腸埃希菌霍亂弧菌副溶血弧菌霍亂弧菌大腸埃希菌厭氧血平板

彎曲菌瓊脂TCBS瓊脂堿性蛋白胨水

結(jié)果生長情況質(zhì)控菌種培養(yǎng)基

培養(yǎng)基保存環(huán)境

制成的培養(yǎng)基保存環(huán)境為4℃冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存，干燥培養(yǎng)基干粉含有活性物質(zhì)或遇熱易分解的物質(zhì)應(yīng)仔細查看存放條件，多數(shù)也須放在2-8℃條件保存。含有高濃度膽鹽的培養(yǎng)基存放于10-15℃。培養(yǎng)基配制的質(zhì)量控制培養(yǎng)基的制作過程必須統(tǒng)一培養(yǎng)基或添加劑的劑量、pH值、高溫滅菌的時間或溫度，都需遵照規(guī)定培養(yǎng)基名稱、本批配制量、配方、配制日期和配制人員姓名都必須詳細記錄

培養(yǎng)基制備控制程序

培養(yǎng)基配制所用的儀器設(shè)備必須經(jīng)過相應(yīng)的鑒定。配制培養(yǎng)基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的。培養(yǎng)基的配制程序不同的培養(yǎng)基配制時注意各類成分的用途。對于干燥培養(yǎng)基配制，同樣需要進行PH測驗。配制好的培養(yǎng)基（尤其是糖發(fā)酵管）不宜久放。因為培養(yǎng)基吸收空氣中的二氧化碳，會使培養(yǎng)基變酸，從而影響細菌的生長。培養(yǎng)基中的抑制劑及指示劑一定要精確稱量。七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控染色液的質(zhì)量控制

染色液要標(biāo)明配制或購入日期，選用適當(dāng)?shù)臉?biāo)準菌株作陽性及陰性對照鑒定。革蘭氏染色用金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌制備濃菌懸液進行質(zhì)量控制，每次質(zhì)控與標(biāo)本檢測同步進行。七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控各種染色液的監(jiān)控菌株染色液陽性對照菌陰性對照菌監(jiān)控頻度革蘭染色液金黃色葡萄球菌大腸埃希菌每天抗酸染色液結(jié)核分枝桿菌每次異染顆粒染色液白喉棒狀桿菌每次莢膜染色液肺炎克雷伯菌每批鞭毛染色液普通變形桿菌福氏志賀菌每次七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控試劑的質(zhì)量控制各類試劑，在配制或購入后均應(yīng)進行“有效”試驗，用已知陽性及陰性菌株進行試驗試劑須根據(jù)標(biāo)示配制，適當(dāng)儲存對較穩(wěn)定的試劑如靛基質(zhì)試劑應(yīng)在配制時及每周予以檢測，凡不穩(wěn)定的試劑每天使用時均應(yīng)檢測，合格后才能使用七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控表3常用試劑的陽性、陰性對照菌株常用試劑陽性對照菌株陰性對照菌株凝固酶試劑金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌觸酶試驗用試劑化膿鏈球菌V-P試驗用試劑陰溝腸桿菌大腸埃希菌大腸埃希菌陰溝腸桿菌氧化酶試劑銅綠假單胞菌大腸埃希菌

靛基質(zhì)試劑金黃色葡萄球菌七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控診斷血清的質(zhì)量控制購入的沙門菌屬、志賀菌屬、致病性大腸桿菌的診斷血清必須立即記錄其購入日期、觀察透明度、色彩有無變化和是否有沉淀物，然后置4℃冰箱保存使用前應(yīng)注意檢查診斷血清的批號、有效期，如發(fā)現(xiàn)渾濁或有絮狀沉淀物時，很可能系污染所致，不能再繼續(xù)使用七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控診斷血清的質(zhì)量控制使用前應(yīng)以陽性及陰性菌株進行檢測，觀察其效價及特異性不得將診斷血清置室溫保存,各種診斷血清均應(yīng)置冰箱中4℃保存每月用標(biāo)準菌株進行一次測定

八、檢驗過程的質(zhì)量控制

檢測質(zhì)量保證定期使用有證標(biāo)準物質(zhì)和次級標(biāo)準物質(zhì)（參考物質(zhì)）進行內(nèi)部質(zhì)量控制。參加實驗室間的比對或能力驗證利用相同或不同方法進行重復(fù)檢測對留存的樣品進行再檢測。重復(fù)計數(shù)要求菌落計數(shù)精密度控制直接計數(shù)，選擇同一標(biāo)本，要求檢驗人員進行菌落計數(shù)。自身同一平皿重復(fù)計數(shù)誤差應(yīng)小于7.7%實驗人員之間同一平皿重復(fù)計數(shù)誤差±18.2%自身同一梯度平行加樣兩皿間相對誤差小于7.7%實驗人員之間同一梯度計數(shù)誤差±18.2%不同梯度間菌落計數(shù)最終誤差小于7.7%菌種鑒定質(zhì)控菌種鑒定質(zhì)控要求，對所給的微生物菌種，按有關(guān)的方法及指標(biāo)進行生化、血清等方面的鑒定。鑒定質(zhì)量評價：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；具體操作技術(shù)是否熟練，結(jié)果報告是否正確。內(nèi)部質(zhì)量控制的推薦頻率菌落計數(shù)精密度控制：1次/3月；菌種鑒定控制：1次/半年或1年九、標(biāo)準菌株的來源和保存標(biāo)準菌株要求必須是形態(tài)、染色反應(yīng)、生理生化及血清學(xué)特性典型而穩(wěn)定的菌株實驗結(jié)果重復(fù)性好，極少發(fā)生變異國際社會認可來源于專門機構(gòu)九、標(biāo)準菌株的來源和保存標(biāo)準菌株來源美國典型菌種保藏中心ATCC衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心國家醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏中心九、標(biāo)準菌株的來源和保存標(biāo)準菌株的保存方法

冷凍干燥法：最理想的保存方法，不改變菌種性狀，保存時間長手續(xù)繁瑣，需專門的冷凍干燥設(shè)備菌種保存中心均采用此法九、標(biāo)準菌株的來源和保存標(biāo)準菌株的保存方法冰凍保存法：此法較簡單，將細菌混懸于脫纖維羊血或脫脂牛奶中，置液氮或-20℃冰箱保存但細菌經(jīng)多次轉(zhuǎn)種，性狀可能發(fā)生變異九、標(biāo)準菌株的來源和保存標(biāo)準菌株的保存方法培養(yǎng)基保存法：最簡易方便的方法，適用于大多數(shù)實驗室（1）普通瓊脂斜面保存法：適于一般細菌的保存，置4℃冰箱可保存1個月。（2）血瓊脂斜面保存法：適于鏈球菌，可半月轉(zhuǎn)種一次。（3）半固體穿刺法：穿刺培養(yǎng)基并加液體石蠟，置4℃冰箱可保存3-6個月，適用于腸桿菌科細菌。九、標(biāo)準菌株的來源和保存食品微生物檢驗實驗室必備質(zhì)控菌株：大腸埃希菌ATCC25922大腸埃希菌ATCC35218銅綠假單胞菌ATCC27853金黃色葡萄球菌ATCC25923糞腸球菌ATCC29212十、實驗室安全防護培訓(xùn)與告之警示標(biāo)志防止空氣污染有毒有害物防護消除污染和廢物的處理食品微生物學(xué)檢驗

室間質(zhì)量評價室間質(zhì)量評價室間質(zhì)量評價是質(zhì)量保證體系的重要組成部分。實驗室應(yīng)參加外部的質(zhì)量控制活動，對其開展的每一項檢測均應(yīng)參加相應(yīng)的室間質(zhì)量控制。質(zhì)量控制中的比對實驗室應(yīng)定期對實驗用菌株、培養(yǎng)基、試劑等設(shè)置陽性對照、陰性對照和空白對照。實驗室應(yīng)對重要的檢驗設(shè)備（特別是自動化檢驗儀器）設(shè)置儀器比對。實驗室應(yīng)定期對實驗人員進行技術(shù)考核和人員比對。室間質(zhì)量評價室間質(zhì)量控制的一般性檢查項目1、儀器設(shè)備的操作書，使用、保養(yǎng)、維修記錄。2、培養(yǎng)基和試劑的配制記錄、培養(yǎng)基的保存方法、滅菌質(zhì)

量、有效期。3、室內(nèi)全面質(zhì)量控制的建立，工作人員熟練程度的考核和盲樣試驗的進行情況，檢驗操作手冊及操作規(guī)范性室間質(zhì)量評價熟練程度的考核用模擬食品標(biāo)本做質(zhì)量評價是目前國內(nèi)外廣泛采用的方法，主要評價實驗室在病原菌的分離、鑒定試驗等方面的工作情況。室間質(zhì)量評價熟練程度的考核由質(zhì)控管理機構(gòu)發(fā)放模擬標(biāo)本或菌種，實驗室按照日常的操作方法進行相應(yīng)的分離鑒定試驗。實驗室完成鑒定后在規(guī)定時間內(nèi)將結(jié)果反饋至參考實驗室，進行評價。微生物檢驗的質(zhì)量控制

——技術(shù)質(zhì)量考核方法基本操作及理論知識菌數(shù)測定技術(shù)（涂布法，枯草桿菌）生化試驗重現(xiàn)性（銅綠假單胞菌）模擬樣品檢出考核（在合格的基質(zhì)中加入定量指示菌）儀器的正確使用室間質(zhì)量評價質(zhì)控結(jié)果的分析與評價質(zhì)控管理機構(gòu)對每次質(zhì)控結(jié)果進行統(tǒng)計分析，將每一實驗室的結(jié)果與標(biāo)準進行比較和統(tǒng)計分析，發(fā)回評估報告。