《甘薯中 13 種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量的測定》

ICS

CCS

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/GDNBXXXX—2023

甘薯中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量的測

定

Determinationof13carotenoidsinsweetpotato

（征求意見稿）

在提交反饋意見時(shí)，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

廣東省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會??發(fā)布

T/GDNBXXXX—2023

甘薯中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量的測定

1范圍

本文件規(guī)定了甘薯及其制品中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量測定原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、樣

品制備、提取方法、檢測條件、精密度、檢出限和定量限。

本文件適用于甘薯、甘薯粉、甘薯干制品中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)（紫黃質(zhì)，新黃質(zhì)，環(huán)氧玉米

黃質(zhì)，葉黃素，玉米黃質(zhì)，α-隱黃質(zhì)，ε-胡蘿卜素，β-隱黃質(zhì)，α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素，δ-胡蘿卜素，

γ-胡蘿卜素，番茄紅素）含量檢測。

2規(guī)范性引用文件

本文沒有規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

試樣冷凍干燥打粉之后，用乙醇-丙酮-正己烷混合液提取其中的13種類胡蘿卜素，干燥后用甲基叔

丁基醚溶液復(fù)溶，超高效液相色譜法測定，外標(biāo)法定量。

5試劑和材料(正文標(biāo)題)

試劑

5.1.1甲醇（CH4O）:色譜純。

5.1.2乙腈（C2H3N）:色譜純。

5.1.3甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3,MTBE]:色譜純。

5.1.42,6-二叔丁基對甲酚（C15H24O，BHT）:色譜純。

5.1.5甲酸（CH2O2）:色譜純。

5.1.6無水乙醇（C2H5OH）:分析純。

5.1.7丙酮（C3H6O）:分析純

5.1.8正己烷（C6H14）:色譜純。

標(biāo)準(zhǔn)品

5.2.1α-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：7488-99-5）：純度≥97%。

5.2.2β-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：7235-40-7）：純度≥95%。

5.2.3γ-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：472-93-5）：純度≥96%。

5.2.4δ-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：472-92-4）：純度≥95%。

5.2.5β-隱黃質(zhì)（C40H56O，CAS號：472-70-8）：純度≥98%。

5.2.6α-隱黃質(zhì)（C40H56O，CAS號：24480-38-4）：純度≥98%。

5.2.7葉黃素（C40H56O2，CAS號：172-40-2）：純度≥96%。

5.2.8番茄紅素（C40H56，CAS號：502-65-8）：純度≥95%。

5.2.9新黃質(zhì)（C40H56O4，CAS號：14660-91-4）：純度≥97%。

5.2.10紫黃質(zhì)（C40H56O4，CAS號：126-29-4）：純度≥95%。

1

T/GDNBXXXX—2023

5.2.11玉米黃質(zhì)（C40H56O2，CAS號：144-68-3）：純度≥97%。

5.2.12ε-胡蘿卜素（C40H56O4，CAS號：472-89-9）：純度≥98%。

5.2.13環(huán)氧玉米黃質(zhì)（C40H56O3，CAS號：640-03-9）：純度≥95%。

儀器與設(shè)備

5.3.1超高效液相色譜：配有DAD二極管陣列檢測器。

5.3.2旋渦混合器。

5.3.3離心機(jī)。

5.3.4電子天平：感量0.00001?g。

5.3.5冷凍干燥機(jī)。

5.3.6超聲清洗儀。

5.3.7粉碎機(jī)。

5.3.8氮吹儀。

材料

微孔濾膜：0.22?μm，有機(jī)系。

6分析步驟

通用要求

所有分析操作均應(yīng)室內(nèi)避光進(jìn)行。

樣品制備

甘薯和甘薯干切碎，液氮速凍后冷凍干燥，并用粉碎機(jī)打粉，樣品儲存在-20℃暗光環(huán)境。甘薯粉

試樣無需處理。

試劑配制

6.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（200μg/mL）

分別準(zhǔn)確稱取類胡蘿卜素單體標(biāo)準(zhǔn)品2g（精確至0.01mg），加入1mgBHT，轉(zhuǎn)移至10mL棕色

容量瓶中，用甲基叔丁基醚稀釋并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為200μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于-20℃

避光保存，保存期3個(gè)月。

6.3.2標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（100μg/mL）

準(zhǔn)確移取上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.1）5.0mL于10mL棕色容量瓶中，用甲基叔丁基醚定容至刻度，搖

勻，配制成質(zhì)量濃度為100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，4℃避光保存，保存期1周。

6.3.3標(biāo)準(zhǔn)系列溶液

分別移取上述標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1.2）0.00mL，0.01mL，0.05mL，0.10mL，0.50mL，1.00mL于

10mL棕色容量瓶中，用甲基叔丁基醚稀釋并定容配成濃度范圍0.0μg/mL~10.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列

溶液。臨用現(xiàn)配。

6.3.4正己烷-丙酮-乙醇提取液

分別準(zhǔn)確移取正己烷10.0mL、丙酮10.0mL、乙醇10.0mL于棕色磨口瓶中，混合均勻獲得體積

比為1：1：1的正己烷-丙酮-乙醇提取液。

試樣提取

稱取0.5g已充分混勻的試樣粉末至15mL離心管中，加入5?mL含0.01%BHT(g?mL-1)的乙醇-丙酮-正

己烷提取液（6.3.4）進(jìn)行提取，并于室溫下充分震蕩混勻。室溫下漩渦振蕩2?min，于4℃條件下，2500?g

2

T/GDNBXXXX—2023

離心5?min，然后將上清液轉(zhuǎn)移至新的15?mL離心管中；重復(fù)以上提取步驟2次，將離心后上清液合并；

用氮吹儀氮吹至干，得到類胡蘿卜素。再用1?mL含有0.01%BHT(g?mL-1)的甲基叔丁基醚溶液復(fù)溶，超聲

震蕩10min使其完全溶解，用0.22μm濾膜過濾后，保存在棕色進(jìn)樣瓶中，用于液相色譜分析。

色譜條件

超高效液相色譜（5.3.1）色譜條件如下：

a)色譜柱：YMCCarotenoidC30色譜柱，柱長250mm，內(nèi)徑2mm，粒徑3μm；

b)流動(dòng)相A相：甲醇和乙腈(1∶3)，加入0.01%BHT)(gmL-1)和0.1%甲酸，流動(dòng)相B相為甲基叔

丁基醚加入0.01%BHT(gmL-1)，洗脫梯度按表1進(jìn)行；

c)流速為0.8mLmin-1；

d)檢測波長為450nm；

e)柱溫為23℃；

f)進(jìn)樣體積為1μL。

表1梯度洗脫條件

流動(dòng)相比例

時(shí)間/min

A%B%

08515

1.08020

2.07030

3.05545

4.04060

5.02575

5.108515

8.08515

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將13種類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（6.3.3）注入高效液相色譜儀中，得到峰面積，以類胡蘿卜素標(biāo)

準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制不同類胡蘿卜素的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

試樣測定

將待測液（6.4）注入高效液相色譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中13種類胡蘿卜

素單體濃度。以甘薯塊根為例的樣品高效液相色譜圖見附錄B。

7數(shù)據(jù)處理

試樣中13種類胡蘿卜素單體的含量Xi的計(jì)算按式（1）進(jìn)行：

式中:CV

??=????????(1)

1000M

3

T/GDNBXXXX—2023

Xi——為甘薯塊根中類胡蘿卜素的含量，單位為微克每克（μg/g）;

C——為通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算的到的類胡蘿卜素含量，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V——為塊根類胡蘿卜素提取時(shí)復(fù)溶液的體積；

M——為塊根類胡蘿卜素提取時(shí)所使用到的樣品重量。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的三次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示。

8精密度

在重復(fù)性條件下獲得的三次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

9檢出限和定量限

當(dāng)取樣量為0.5g、復(fù)溶體積為1mL，13種類胡蘿卜素單體的檢出限、定量限和加標(biāo)回收率如表2所示：

表213種類胡蘿卜素單體檢出限、定量限和加標(biāo)回收率

類胡蘿卜素檢出限(μgmL1)定量限(μgmL1)加標(biāo)回收率%

紫黃質(zhì)0.0030.009122.38

新黃質(zhì)0.0040.01585.80

環(huán)氧玉米黃質(zhì)0.0040.015108.02

葉黃素0.0030.012108.41

玉米黃質(zhì)0.0050.016118.38

α-隱黃質(zhì)0.0030.01101.00

ε-胡蘿卜素0.0030.011103.45

β-隱黃質(zhì)0.0040.01296.47

α-胡蘿卜素0.0030.0198.44

β-胡蘿卜素0.0040.01284.61

δ-胡蘿卜素0.0030.01192.90

γ-胡蘿卜素0.0050.01698.67

番茄紅素0.0180.0693.13

4

T/GDNBXXXX—2023

A

A

附錄A

（規(guī)范性）

標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的校正

A.1試驗(yàn)步驟

使用前，應(yīng)對葉黃素、玉米黃質(zhì)、α-隱黃質(zhì)、β-隱黃質(zhì)、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、番茄紅素

的標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度進(jìn)行校正，具體操作如下：

分別取葉黃素、β-隱黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（濃度約為200μg/ml）50μl,注入含10ml乙醇的1cm比色

皿中。以乙醇為空白，按表A.1中檢測波長測定其吸光度值，平行測定三次，取平均值。

取玉米黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（濃度約為200μg/ml）50μl，注入含10ml甲醇的1cm比色皿中。以甲醇

為空白，按表A.1中檢測波長測定其吸光度值，平行測定3次，取平均值。

分別取α-隱黃質(zhì)，α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素和番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（濃度約為200μg/ml）50

μl，注入含10ml正己烷的1cm比色皿中。以正己烷為空白，按表A.1中檢測波長測定其吸光度值，平行

測定三次，取平均值。

表A.1各類胡蘿卜素測定波長及比吸光系數(shù)

目標(biāo)物檢測波長（nm）E稀釋溶劑

葉黃素4450.2550乙醇

玉米黃質(zhì)4490.2620甲醇

α-隱黃質(zhì)4450.2636正己烷

β-隱黃質(zhì)4450.2460乙醇

α-胡蘿卜素4460.2725正己烷

β-胡蘿卜素4500.2620正己烷

番茄紅素4700.3450正己烷

A.2結(jié)果計(jì)算

按（A.1）計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度：