生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范課件

生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范實(shí)驗(yàn)室生物安全操作者操作對(duì)象環(huán)境生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范所有操作人員必須經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，通過(guò)考核，獲得上崗證書(shū)；在開(kāi)始相關(guān)工作之前，應(yīng)對(duì)所從事的病原微生物及相關(guān)操作進(jìn)行危險(xiǎn)評(píng)估，根據(jù)國(guó)家對(duì)于各種微生物操作的危險(xiǎn)等級(jí)劃分和防護(hù)要求以及危險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果，制定全面、細(xì)致的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和程序文件，對(duì)于關(guān)鍵的危險(xiǎn)步驟設(shè)計(jì)出可行的防護(hù)措施并對(duì)這些細(xì)節(jié)了然于胸；熟悉各級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的一般規(guī)則，掌握各種儀器、設(shè)備、裝備的操作步驟和要點(diǎn)，對(duì)于各種可能的危害應(yīng)非常熟悉；應(yīng)掌握各種感染性物質(zhì)操作的一般準(zhǔn)則和技術(shù)要點(diǎn)。生物安全意識(shí)至關(guān)重要生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范實(shí)驗(yàn)室感染的傳播鏈容器中的病原體泄漏預(yù)防接種感染途徑/感染劑量傳播個(gè)人防護(hù)裝備易感宿主規(guī)程/設(shè)備潛伏期醫(yī)學(xué)監(jiān)測(cè)規(guī)程/設(shè)備生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的生物安全規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行規(guī)范儀器設(shè)備的使用規(guī)范針對(duì)感染性材料的操作規(guī)范個(gè)人防護(hù)用品的使用規(guī)范

……生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范

LaboratoryBiosafetyManual,3rdedition-labcommissioningandcertification-labbiosecurityconceptsBiosafety:Topromotetheuseofsafepracticesinthehandlingofpathogenicmicroorganismsinthelaboratory

duringtransportationinfieldinvestigationsinmanufacturingfacilitiesinhealth-carefacilitiesLaboratoryBiosafetyManual1stedition1983199320032004WHOLaboratoryBiosafetyManual-translatedintoF,S,P,Ch,Ru-availableonweb,CD-Rom,hardcopies生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范病原微生物實(shí)驗(yàn)室的生物危險(xiǎn)生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物危險(xiǎn)感染性的致病因子，無(wú)論是直接感染，還是間接地散播到環(huán)境中去，對(duì)人類(lèi)、動(dòng)物或植物都是一個(gè)現(xiàn)實(shí)的或潛在的危險(xiǎn)。AnimalsHumansPlants生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范實(shí)驗(yàn)室主要生物危害微生物氣溶膠吸入刺傷、割傷皮膚、黏膜污染食入感染的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物咬傷……還有許多不明原因的實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范病原微生物實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染的途徑生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范Pike等對(duì)3921例實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，已知原因的實(shí)驗(yàn)室感染只占全部感染的18％，不明原因的實(shí)驗(yàn)室感染卻高達(dá)82％。對(duì)不明原因的實(shí)驗(yàn)室感染的研究表明，大多數(shù)可能是病原微生物形成的感染性氣溶膠在空氣擴(kuò)散，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)工作人員吸入了污染的空氣感染發(fā)病的。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范實(shí)驗(yàn)室微生物氣溶膠的種類(lèi)飛沫核氣溶膠粉塵氣溶膠

兩類(lèi)微生物氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員都具有嚴(yán)重的危害性，其程度取決于微生物本身的毒力、氣溶膠的濃度、氣溶膠粒子大小、以及當(dāng)時(shí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的微小氣候條件。研究發(fā)現(xiàn)，粒徑>100

m的飛沫沉降很快，而粒徑<50

m的飛沫在0.4s內(nèi)就擴(kuò)散開(kāi)了；粒徑<5

m的飛沫核被人吸入后，可以到達(dá)肺深部的肺泡處；粒徑>5

m的飛沫核能夠被呼吸道的粘膜捕獲。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范可產(chǎn)生各種嚴(yán)重程度微生物氣溶膠的實(shí)驗(yàn)室操作生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范產(chǎn)生微生物氣溶膠的其它因素另外，一些在自然環(huán)境中可以繁殖的微生物，一旦進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的空調(diào)或通風(fēng)系統(tǒng)，污染了空調(diào)的冷卻水，則可以形成更廣泛的微生物氣溶膠污染。除了實(shí)驗(yàn)室操作可以產(chǎn)生微生物氣溶膠外，患有呼吸道傳染病或皮毛上染有病原微生物的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物也可以產(chǎn)生微生物氣溶膠。微生物氣溶膠在一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)產(chǎn)生后，還可以通過(guò)氣流轉(zhuǎn)移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整個(gè)建筑物的空氣。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范一、BSL-1和BSL-2實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（一）實(shí)驗(yàn)室的進(jìn)入未經(jīng)批準(zhǔn)，任何人不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。兒童不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域?？赡茉黾荧@得性感染的危險(xiǎn)性或感染后可能引起嚴(yán)重后果的人員不允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室或動(dòng)物房。BSL-2實(shí)驗(yàn)室門(mén)上應(yīng)標(biāo)有國(guó)際通用的生物危害警告標(biāo)志，包括通用的生物危險(xiǎn)性標(biāo)志，標(biāo)明傳染因子、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或其他人姓名、電話、以及進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的特殊要求。實(shí)驗(yàn)室的門(mén)應(yīng)保持關(guān)閉。工作人員進(jìn)入動(dòng)物房應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)特別批準(zhǔn)。與實(shí)驗(yàn)室工作無(wú)關(guān)的動(dòng)物不得帶入實(shí)驗(yàn)室。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（二）防護(hù)要求在實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)，必須穿著合適的工作服或防護(hù)服。在進(jìn)行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動(dòng)物的操作時(shí)，應(yīng)戴上合適的手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。在處理完感染性實(shí)驗(yàn)材料和動(dòng)物后，以及在離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域前，都必須洗手。為了防止眼睛或面部受到噴濺物的污染、碰撞或人工紫外線輻射的傷害，必須戴合適的安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護(hù)設(shè)備。嚴(yán)禁穿著實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾的鞋。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域儲(chǔ)存食品和飲料。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用過(guò)的防護(hù)服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范辦公室生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（三）有關(guān)操作的指導(dǎo)原則嚴(yán)禁用口吸移液管,嚴(yán)禁將實(shí)驗(yàn)材料置于口內(nèi)。嚴(yán)禁舔標(biāo)簽。所有的實(shí)驗(yàn)操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來(lái)進(jìn)行。應(yīng)限制使用注射針頭和注射器。除了進(jìn)行腸道外注射或抽取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體液外，注射針頭和注射器不能用于移液或用作其他用途。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂并執(zhí)行處理溢出物的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。出現(xiàn)溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質(zhì)時(shí)，必須向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人報(bào)告。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)如實(shí)記錄有關(guān)暴露和處理的情況，保存相關(guān)記錄。污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染（采用化學(xué)或物理學(xué)方法）。根據(jù)所處理的微生物因子的危險(xiǎn)度評(píng)估結(jié)果準(zhǔn)備專(zhuān)門(mén)的污水處理系統(tǒng)。只有保證在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)沒(méi)有受到污染的文件紙張才能帶出實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（四）實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)的管理原則實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔整齊，嚴(yán)禁擺放和實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品。每天工作結(jié)束后應(yīng)清除工作臺(tái)面的污染。若發(fā)生具有潛在危害性的材料溢出應(yīng)立即清除污染。所有受到污染的材料、標(biāo)本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須先清除污染。感染性材料的包裝和運(yùn)輸應(yīng)遵循國(guó)家和∕或國(guó)際的相關(guān)規(guī)定。如果窗戶(hù)可以打開(kāi)，則應(yīng)安裝防止節(jié)肢動(dòng)物進(jìn)入的紗窗。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（五）生物安全管理的指導(dǎo)原則實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)制訂和采用生物安全管理計(jì)劃以及實(shí)驗(yàn)室安全或/和操作手冊(cè)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能提供常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室安全培訓(xùn),并建立制度。實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人（或生物安全負(fù)責(zé)人）要將生物安全實(shí)驗(yàn)室的特殊危害告知實(shí)驗(yàn)室人員，同時(shí)要求他們閱讀生物安全或/和操作手冊(cè)，并遵循標(biāo)準(zhǔn)的操作程序。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)備有可供取閱的安全或/或操作手冊(cè)。所有實(shí)驗(yàn)室人員必須經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，了解所從事工作的危險(xiǎn)、掌握有關(guān)的管理規(guī)定和操作程序，通過(guò)考核后方可從事相關(guān)實(shí)驗(yàn)室工作。應(yīng)當(dāng)制訂節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物的控制方案。如有必要，應(yīng)為所有實(shí)驗(yàn)室人員提供適宜的醫(yī)學(xué)評(píng)估、監(jiān)測(cè)和治療，并建立健康檔案。實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)接受與所操作生物因子或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)潛在的因子相關(guān)的免疫接種或檢測(cè)。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范二、BSL-3實(shí)驗(yàn)室BSL-3的使用應(yīng)符合《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》的有關(guān)規(guī)定。張貼在實(shí)驗(yàn)室入口門(mén)上的國(guó)際生物危害警告標(biāo)志,應(yīng)注明生物安全級(jí)別以及管理實(shí)驗(yàn)室出入的負(fù)責(zé)人姓名，并說(shuō)明進(jìn)入該區(qū)域的所有特殊條件，如免疫接種狀況等。實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服應(yīng)為長(zhǎng)袖、背面開(kāi)口的隔離衣或連體衣，應(yīng)穿著鞋套或?qū)Ｓ眯?。?shí)驗(yàn)室防護(hù)服不能在實(shí)驗(yàn)室外穿著，且必須在清除污染后再清洗。最好使用一次性連體防護(hù)服。開(kāi)啟各種潛在感染性物質(zhì)的操作均必須在生物安全柜或其他類(lèi)似的防護(hù)設(shè)施中進(jìn)行。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范二、BSL-3實(shí)驗(yàn)室有些實(shí)驗(yàn)室操作，或在進(jìn)行感染了某些病原微生物的動(dòng)物操作時(shí)，必須配備呼吸防護(hù)裝備。實(shí)行雙人工作制，嚴(yán)禁任何人單獨(dú)在實(shí)驗(yàn)室工作。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)原始記錄未經(jīng)可靠消毒不得帶出實(shí)驗(yàn)室。通常使用傳真進(jìn)行原始記錄的傳輸。工作人員應(yīng)開(kāi)展健康監(jiān)測(cè)。應(yīng)收集并妥善保存工作人員的基線血清。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全柜的使用生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范生物安全柜內(nèi)感染性材料溢灑的處理當(dāng)發(fā)生少量溢灑時(shí)，應(yīng)用吸收紙巾立即處理，并立即用浸滿(mǎn)消毒液的毛巾或紗布對(duì)生物安全柜及其內(nèi)部的所以物品進(jìn)行擦洗。工作面消毒后應(yīng)更換手套，不論是摘下手套還是更換手套都要洗手。若發(fā)生大量溢灑，液體會(huì)通過(guò)生物安全柜前面或后面的格柵流到下面去，生物安全柜內(nèi)所有的物品都應(yīng)該進(jìn)行表面消毒并拿出生物安全柜，在確保生物安全柜的排水閥被關(guān)閉后，可將消毒液倒在工作臺(tái)面上，使液體通過(guò)格柵流到排水盤(pán)上。所有接觸溢出物品的材料都要進(jìn)行消毒和/或高壓滅菌處理。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的使用生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范儀器相關(guān)危險(xiǎn)干燥器爆裂、瓶子碎片和感染性物質(zhì)飛出培養(yǎng)物攪拌器，混合器，攪拌器產(chǎn)生氣溶膠、噴濺和溢出皮下注射針頭意外接種產(chǎn)生氣溶膠或感染性物質(zhì)溢出離心機(jī)產(chǎn)生氣溶膠、濺出和管子破裂超速離心機(jī)管子破裂高速攪拌器，組織勻漿器飛沫、滲漏和容器破裂超聲波破碎機(jī)、超聲波清潔器產(chǎn)生氣溶膠、聽(tīng)力受損、皮炎凍干機(jī)（冷凍干燥機(jī)）產(chǎn)生氣溶膠、直接接觸污染水浴微生物生長(zhǎng)，疊氮化鈉和一些金屬形成爆炸復(fù)合物生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范一、吸管和移液器的使用為防止感染，嚴(yán)禁用嘴吸液。應(yīng)使用機(jī)械移液裝置。所有的吸管都應(yīng)該有棉塞以減少對(duì)移液器或吸球的污染。建議使用帶有濾芯的吸頭。在BSL-2及以上級(jí)別實(shí)驗(yàn)室中，最好避免使用玻璃吸管。對(duì)于感染性材料不能用吸管吹打來(lái)達(dá)到混勻的目的，操作時(shí)吸管應(yīng)放入操作液面下的三分之二處，以防止產(chǎn)生氣泡和氣溶膠。從吸管吹出液體時(shí)也不要太用力，吸管內(nèi)的液體應(yīng)自動(dòng)流出，不要強(qiáng)制性排出預(yù)留液。污染的吸管應(yīng)立即浸沒(méi)在含有適宜的消毒劑的防破碎的容器里。在處理之前，應(yīng)浸泡足夠長(zhǎng)的時(shí)間。盛裝廢棄吸管的容器應(yīng)放在生物安全柜里，而非外面。嚴(yán)禁用帶有注射針頭的注射器吸液。為防止從吸管滴落的感染性物質(zhì)發(fā)生擴(kuò)散，工作臺(tái)表面應(yīng)放一塊具有吸收性能的材料，使用后應(yīng)按感染性廢棄物予以處理。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范二、離心機(jī)的使用離心分類(lèi)

轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（rpm）

微速離心

～15,00

低/高速離心

2,000～20,000

超速離心

～120,000

生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范離心可能造成的傷害途徑

離心機(jī)機(jī)械故障實(shí)驗(yàn)器材故障，如離心管等產(chǎn)生氣溶膠；操作者失誤。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范所有的離心機(jī)應(yīng)處于正常的工作狀態(tài)并具有合格的機(jī)械性能，要根據(jù)廠家的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。離心機(jī)應(yīng)放到適宜的位置和高度，以使工作人員能看見(jiàn)離心桶并便于進(jìn)行各項(xiàng)操作。用于離心的離心管和標(biāo)本容器應(yīng)該根據(jù)廠家要求選用，最好使用塑料制品，而且在使用前應(yīng)檢查有無(wú)破損。必須在安全柜內(nèi)打開(kāi)蓋子。使用轉(zhuǎn)頭時(shí)應(yīng)注意轉(zhuǎn)頭蓋與轉(zhuǎn)頭型號(hào)是否匹配。操作病原微生物時(shí)，離心桶的裝載、平衡、密封和打開(kāi)必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行?？针x心桶配平時(shí)應(yīng)該用蒸餾水或70％乙醇、異丙醇，不應(yīng)使用鹽水和次氯酸鹽溶液。離心管內(nèi)液面水平距管口應(yīng)留出一定空隙，以確保離心過(guò)程中液體不會(huì)溢出，尤其是使用角轉(zhuǎn)頭時(shí)更要注意。應(yīng)該每天檢查在特定的轉(zhuǎn)速下，離心杯的內(nèi)表面有無(wú)污物。離心轉(zhuǎn)頭和離心桶應(yīng)每天檢查有無(wú)腐蝕點(diǎn)以及極細(xì)的裂縫，以確保安全。離心桶、轉(zhuǎn)頭和離心機(jī)腔每次用后都應(yīng)該消毒。每次用后，應(yīng)該把離心桶倒放，以排凈離心配平的液體。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范對(duì)于高致病性病原微生物，必須要高度警惕離心過(guò)程中產(chǎn)生的氣溶膠風(fēng)險(xiǎn)。－大型離心機(jī)上應(yīng)加裝負(fù)壓罩，以及時(shí)吸出離心機(jī)排出的氣體，并排至實(shí)驗(yàn)室的過(guò)濾通風(fēng)系統(tǒng)，在BSL-3及以上級(jí)別實(shí)驗(yàn)室尤其要注意。－微型離心機(jī)則可放在安全柜內(nèi)離心，但要注意其對(duì)安全柜氣流的影響。－如果不能在安全柜內(nèi)離心也無(wú)負(fù)壓罩，則必須將密封的轉(zhuǎn)頭在安全柜內(nèi)打開(kāi)。－所有的離心管必須帶蓋密封，其開(kāi)啟應(yīng)在安全柜內(nèi)進(jìn)行。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范三、攪拌器、振蕩器、混勻器和超聲波破碎儀的使用

使用的管子、蓋子、杯子或瓶子都應(yīng)該保持完好，無(wú)裂隙、無(wú)變形。蓋子、墊圈應(yīng)恰好配套，保持完好。在混勻、振蕩和超聲波破碎過(guò)程中，器皿內(nèi)的壓力會(huì)增大，含有感染性材料的氣溶膠可能會(huì)從容器和蓋子間的空隙逸出。推薦使用塑料的，特別是聚四氟乙烯（PTFE）器皿，因?yàn)椴ＡЭ赡軙?huì)破裂，釋放出感染性物質(zhì)，而且可能傷及操作者。當(dāng)使用勻漿器、振蕩器和超聲波破碎儀時(shí)，應(yīng)有防護(hù)裝置，在生物安全柜里操作。使用渦旋振蕩器時(shí)，必須在生物安全柜內(nèi)操作，并且操作的容器必須為密閉的，以避免產(chǎn)生氣溶膠和發(fā)生液體濺灑。在操作結(jié)束后，應(yīng)在生物安全柜里開(kāi)啟容器。操作人員使用超聲波破碎儀時(shí)，應(yīng)有耳部聽(tīng)力保護(hù)裝置。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范四、組織研磨器的使用使用玻璃的研磨器時(shí)，應(yīng)戴上手套，手里再墊上一塊柔軟的紗布后操作。塑料（PTFE）的研磨器更安全。組織研磨器應(yīng)該在生物安全柜里操作和開(kāi)啟。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范五、冰箱和速凍器的使用和保養(yǎng)冰箱、低溫冰箱和固體干冰盒要定期除霜和清掃。其中所有的安瓿、凍存管等在貯存過(guò)程中已破裂的要及時(shí)拿走。在清掃的過(guò)程中應(yīng)配戴面部保護(hù)裝置并戴手套，清掃后，抽屜內(nèi)表面應(yīng)消毒處理。所有保存在冰箱里的容器等，都應(yīng)該有清楚的標(biāo)簽，并且標(biāo)簽上有內(nèi)容物的科學(xué)命名、貯存日期和貯存人姓名。無(wú)標(biāo)簽的和過(guò)期的材料應(yīng)高壓滅菌后丟棄。對(duì)于冰箱內(nèi)的儲(chǔ)存物應(yīng)有詳細(xì)的目錄。除非有防爆措施，嚴(yán)禁將易燃液體保存在冰箱里，冰箱的門(mén)上應(yīng)張貼這方面的注意事項(xiàng)。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范六、凍干機(jī)的使用對(duì)于高致病性病原微生物應(yīng)在BSL-3或以上級(jí)別實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行凍干。凍干機(jī)排出的氣體要經(jīng)過(guò)HEPA過(guò)濾并將排出管道插入裝有消毒液的容器中。對(duì)于凍干高致病性病原微生物產(chǎn)生的冷凝水應(yīng)收集入消毒液容器中并高壓滅菌處理。凍干機(jī)的機(jī)艙恢復(fù)到室溫后用適宜的消毒液擦拭。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范感染性材料的操作與防護(hù)規(guī)范生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范一、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)本的安全操作（一）標(biāo)本容器用于裝盛感染性標(biāo)本的容器可以是玻璃的，但為了保證安全，最好采用塑料制品（根據(jù)實(shí)際需要而定）。標(biāo)本的容器應(yīng)當(dāng)堅(jiān)固，不易破碎，蓋子或塞子蓋好后不應(yīng)有液體滲漏。所有的標(biāo)本都應(yīng)存放在容器內(nèi)。容器應(yīng)正確地貼上標(biāo)簽以利于識(shí)別，標(biāo)簽上應(yīng)有樣品名稱(chēng)、采集日期、編號(hào)等必要的信息。樣品的有關(guān)表格和/或說(shuō)明不要綁在容器外面，而應(yīng)單獨(dú)放在防水的袋子里，以防止發(fā)生污染而影響使用。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（二）標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)運(yùn)輸

為防止發(fā)生意外滲漏或溢出而威脅操作者的安全，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)運(yùn)輸標(biāo)本時(shí)，應(yīng)使用金屬的或塑料材質(zhì)的第二層容器（如盒子）加以包裹，在第二層容器中應(yīng)該有標(biāo)本容器的支架，將標(biāo)本容器固定在支架上，以使其保持直立。第二層容器應(yīng)耐高壓或者能抵抗化學(xué)消毒劑的腐蝕，以便定期清除污染。封口處最好有一個(gè)襯圈，以防止發(fā)生滲漏。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（三）標(biāo)本的接收大規(guī)模接收標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在一個(gè)專(zhuān)用的房間或區(qū)域進(jìn)行。對(duì)于病原已知的按國(guó)家規(guī)定可在BSL-2操作的病原微生物或未知的感染性材料，最低應(yīng)在一個(gè)專(zhuān)用區(qū)域或房間接受，并在生物安全柜內(nèi)打開(kāi)外包裝，操作人員應(yīng)穿防水的防護(hù)服，戴生物安全專(zhuān)用口罩和眼罩、手套。按國(guó)家規(guī)定需要在BSL-3或以上級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作的病原微生物或標(biāo)本，應(yīng)按國(guó)家規(guī)定的防護(hù)等級(jí)，在相應(yīng)級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室的安全柜內(nèi)打開(kāi)，并采取相應(yīng)的防護(hù)措施為保證安全。不應(yīng)在普通的BSL-1實(shí)驗(yàn)室接受標(biāo)本。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（四）標(biāo)本包裝的打開(kāi)接收并打開(kāi)標(biāo)本包裝的人員應(yīng)受過(guò)防護(hù)培訓(xùn)（尤其是處理破裂的或滲露的容器）并應(yīng)知道所操作標(biāo)本的潛在的健康危害，操作時(shí)要采取合適的防護(hù)措施。所有標(biāo)本應(yīng)該在生物安全柜里打開(kāi)包裝，同時(shí)備有消毒劑以便隨時(shí)處理可能出現(xiàn)的標(biāo)本泄漏。打開(kāi)包裝前應(yīng)先仔細(xì)檢查每個(gè)容器的外觀、標(biāo)簽是否完整，標(biāo)簽、送檢報(bào)告與內(nèi)容物是否相符，是否有污染以及容器是否有破損等，要登記詳細(xì)的報(bào)告單并記錄處置方法。接受標(biāo)本應(yīng)由2人進(jìn)行。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范二、避免感染性物質(zhì)擴(kuò)散的方法為避免接種物從接種環(huán)上脫落，微生物接種環(huán)直徑應(yīng)為2～3mm并且完全閉合，柄的長(zhǎng)度不應(yīng)超過(guò)6cm以最大限度減少抖動(dòng)。應(yīng)該使用密閉的微型電加熱滅菌接種環(huán)，以免在開(kāi)放式的本生燈火焰上滅菌時(shí)感染性物質(zhì)濺落。最好使用一次性的、無(wú)需滅菌的接種環(huán)。小心操作干燥的痰標(biāo)本，以免產(chǎn)生氣溶膠。要高壓滅菌和/或丟棄的廢棄的標(biāo)本及培養(yǎng)物應(yīng)放在防滲漏的容器里，如實(shí)驗(yàn)室用的醫(yī)療廢物專(zhuān)用袋，這些袋子是耐高壓的。放入廢棄物容器前，標(biāo)本的頂部應(yīng)標(biāo)明是安全的（如用高壓標(biāo)簽）。應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行定期的終末消毒。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范三、避免感染性物質(zhì)吸入或接觸的規(guī)范在微生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)操作中釋放的較大顆粒和小液滴（直徑大于5μm）會(huì)很快落在操作臺(tái)表面以及操作者的手上，為了避免污染，操作者應(yīng)戴一次性手套。實(shí)驗(yàn)人員做實(shí)驗(yàn)時(shí)要避免觸摸嘴、眼和面部。嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室里吃東西、喝東西以及儲(chǔ)存食品和飲料。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不許咬筆、嚼口香糖。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不許化妝和配戴隱形眼睛。在任何可能導(dǎo)致潛在的傳染性物質(zhì)濺出的操作過(guò)程中，應(yīng)該保護(hù)面部、眼睛和嘴。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范四、避免傳染性物質(zhì)接種的規(guī)范要盡力避免由破裂的或有缺口的玻璃器皿引起的傳染性物質(zhì)的意外感染。盡量以塑料器皿代替玻璃器皿。應(yīng)用塑料吸管替代玻璃吸管。銳器皿如皮下接種針（針頭）、玻璃吸管和碎玻璃可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)人員感染，因此銳器要小心操作。為減少注射器和針頭造成的意外事故，應(yīng)盡量少用注射器和針頭（可以用簡(jiǎn)單的工具開(kāi)啟瓶塞，這樣就可以用吸管代替注射器和針頭）。必須使用注射器和針頭時(shí)，要采用銳器保護(hù)裝置。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范注射器的使用規(guī)范不要用注射器代替移液管不要重新給針頭蓋帽或夾針頭。使用針頭鎖定型注射器，以防針頭和注射器分離，或者使用一體的一次性注射器。運(yùn)用正確的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，如：

—吸液時(shí)要小心，盡量減少吸液體時(shí)產(chǎn)生氣泡

—避免使用注射器混勻感染性的液體；如果使用，保證針的端部在容器的液面下，并且不要太用力

—從膠塞瓶中拔出針管前，要用適當(dāng)?shù)目垢腥静牧辖竦拿撝薨橆^和塞子。

—不允許向空氣中直接排放注射器的氣泡，要將多余的液體或氣泡推入用抗感染材料浸濕的脫脂棉或有脫脂棉的小瓶中。感染性材料的所有操作都要在生物安全柜中進(jìn)行。對(duì)動(dòng)物進(jìn)行接種時(shí)要固定。滴鼻或者口腔接種時(shí)，使用鈍的針頭或套管，并在生物安全柜中操作。使用后用專(zhuān)用容器收集高壓滅菌，妥善處理。如使用一次性的針和注射器，在高壓消毒之前不要拆卸。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范五、血清分離的實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范操作時(shí)要戴手套及配戴眼睛和粘膜保護(hù)裝置。只有良好的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)才能避免濺出和氣溶膠產(chǎn)生，或?qū)⑦@種可能性降至最低。吸取血液及血清時(shí)要小心，不要傾倒。嚴(yán)禁用嘴吸液。吸管用后應(yīng)完全浸沒(méi)在適當(dāng)?shù)南疽豪?，并且在處理之前，或洗刷及滅菌再利用前要浸泡足夠長(zhǎng)的時(shí)間。帶有血凝塊的廢棄標(biāo)本管等，加蓋后應(yīng)當(dāng)放到適當(dāng)?shù)?、防滲漏的容器中，以備高壓和/或焚燒。應(yīng)備有合適的消毒液，用以隨時(shí)清除濺出物及溢出物。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范六、開(kāi)啟裝有凍干傳染性物質(zhì)安瓿的技術(shù)規(guī)范首先消毒安瓿的外表面。安瓿里如果有棉塞或纖維塞，應(yīng)先用砂輪在安瓿外表面的棉塞或纖維塞中部挫一劃痕。于劃痕處打破安瓿以前，先在手里墊一塊酒精浸透的棉花再握住安瓿，以免扎傷或/和污染手部。不同的操作根據(jù)國(guó)家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。輕輕地移去安瓿頂部并將其按污染物處理。如果棉塞或纖維塞仍然留在安瓿上，則將其用滅菌鑷子除去。向安瓿內(nèi)緩慢地加入液體以重懸內(nèi)容物，避免產(chǎn)生泡沫。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范七、含有感染性物質(zhì)的安瓿的儲(chǔ)存規(guī)范含有感染性物質(zhì)的安瓿不要浸入液氮，因?yàn)槠茡p的或密封不好的安瓿在移動(dòng)時(shí)可能會(huì)破裂或爆炸。如果要求以非常低的溫度保藏，安瓿也只應(yīng)保存在液氮上面的氣相中。否則，傳染性物質(zhì)應(yīng)該保存在低溫冰柜或在干冰中。實(shí)驗(yàn)室人員在從冷藏處拿出安瓿時(shí)，要配戴手和眼睛保護(hù)裝置。通過(guò)這種方式貯存的安瓿在從冷藏處拿出時(shí)應(yīng)對(duì)外表面進(jìn)行消毒。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范八、對(duì)血液、體液、組織和排泄物的防護(hù)規(guī)范（一）標(biāo)本的收集、貼標(biāo)簽及運(yùn)輸應(yīng)始終堅(jiān)持標(biāo)準(zhǔn)的防護(hù)措施；所有的操作都要戴手套完成。從病人或動(dòng)物身上采集血液應(yīng)由受過(guò)訓(xùn)練的人員來(lái)完成。進(jìn)行靜脈采血時(shí)，應(yīng)以專(zhuān)用的一次性安全真空采血器代替常規(guī)的針頭和注射器，這樣可使采集到的血液直接流入有塞子的運(yùn)輸管和/或培養(yǎng)管，并且針頭用后可以自毀。管子應(yīng)放在適當(dāng)?shù)娜萜骼镆詡溥\(yùn)往實(shí)驗(yàn)室（見(jiàn)第10章）和在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)運(yùn)輸（見(jiàn)本章實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)本的運(yùn)輸部份）。標(biāo)本表格應(yīng)放在防水的袋子或信封里。接收人員不應(yīng)打開(kāi)這些袋子，以防污染。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（二）標(biāo)本管或標(biāo)本容器的打開(kāi)標(biāo)本管應(yīng)該在生物安全柜里打開(kāi)。必須戴手套。推薦使用眼部和粘膜保護(hù)裝置[護(hù)目鏡或面罩（頭盔）]。防護(hù)服外應(yīng)再戴一個(gè)塑料圍裙。打開(kāi)標(biāo)本管的塞子時(shí)，應(yīng)在手里先墊上一塊紙或紗布再握住塞子，防止濺出。

生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（三）用于顯微鏡觀察的薄膜和涂片的操作

用顯微技術(shù)檢測(cè)固定并染色的血液、痰和排泄物等標(biāo)本時(shí)，可能并未殺死涂片上的所有微生物和病毒，所以這些涂片等物品應(yīng)用鑷子來(lái)操作，妥善保存，并且在丟棄以前要消毒和/或高壓滅菌。

生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（四）對(duì)組織標(biāo)本的操作應(yīng)使用福爾馬林固定。應(yīng)避免進(jìn)行冰凍切片。如果必須進(jìn)行的話，應(yīng)罩住冷凍機(jī)，操作者戴防護(hù)面罩。消毒時(shí)，儀器的溫度至少應(yīng)升至20℃。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（五）消毒推薦使用次氯酸鹽和高級(jí)消毒劑進(jìn)行消毒。一般新配制的次氯酸鹽溶液有效氯含量應(yīng)為1g/L，但用于消毒溢出的血液，有效氯含量則應(yīng)為5g/L。戊二醛可用于表面消毒。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范九、對(duì)可能含有朊病毒（Prion）的材料的預(yù)防措施生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范人類(lèi)TSE

首次報(bào)告時(shí)間克雅氏病

散發(fā)性 1921

家族性 1924

醫(yī)源性 1974

新型 1996Gerstmann-Straussler-Scheinker病 1928Kuru（庫(kù)魯） 1955致死性家族性失眠癥 1986動(dòng)物TSE

首次報(bào)告時(shí)間瘙癢病綿羊 1730山羊 1872南歐野羊 1992傳染性水貂腦病 1965馬騾和麋鹿的慢性消耗病 1967牛海綿狀腦病 1986貓海綿狀腦病 家貓 1990

美洲獅 1992

非洲獵豹 1992

豹貓 1994

老虎 1996捕獲的野生反芻動(dòng)物海綿狀腦病

Nyala 1987

大羚羊 1988

阿拉伯大羚羊 1989

非洲大羚羊 1989

紕角鹿 1989

單彎刀角大羚羊 1993 Ankole 1995

野牛 1996人類(lèi)及動(dòng)物可傳播海綿狀腦病生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范朊病毒病為人畜共患癥

最早于200年前發(fā)現(xiàn)羊瘙癢病(Scrapie),后來(lái)發(fā)現(xiàn)CJD、Kuru，1986年發(fā)現(xiàn)瘋牛病。人和動(dòng)物中已知有近20種可傳播性海綿腦?。═SE），朊病毒病在人類(lèi)主要有以下5種：

1.庫(kù)魯病(Kuru); 2.克-雅氏癥（CJD）; 3.由瘋牛傳染的變異型克-雅氏癥(nvCJD); 4.吉斯特曼-斯召斯列綜合癥(GSS); 5.致死性家族性失眠綜合癥(FFI)生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范

這些病的共同特點(diǎn)是：中樞神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行性退行性海綿樣變,其標(biāo)志性四大神經(jīng)病理特征是：朊病毒病的共同病理特點(diǎn)

朊病毒病在臨床上潛伏期很長(zhǎng)（5-50年），一旦發(fā)病6個(gè)月至1年全部死亡，表現(xiàn)為進(jìn)行性癡呆，共濟(jì)失調(diào)，震顫?？张葑冃曰蚝＞d樣變（Spongiforchanges）;神經(jīng)元丟失(Neuronloss);3.星形細(xì)胞增生（Astrocytosis）;4.淀粉樣斑沉積(Amyloidosis);生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范

長(zhǎng)度：254aa

表達(dá)組織：中樞神經(jīng)系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)存在位置：細(xì)胞膜正常PrPC：a-螺旋為主，b-片層3%，可溶，易消化致病性PrPSc：b-片層45-55%，不可溶，抗消化朊蛋白(PrP)的特點(diǎn)PrPCPrPScfactors?生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范朊病毒的特殊性質(zhì)耐受蛋白酶的消化和常規(guī)消毒作用，只有強(qiáng)堿(1~2NNaOH)，高壓消毒(136℃,2小時(shí))才能滅活；不含核酸，用常規(guī)PCR無(wú)法檢測(cè)；超長(zhǎng)的潛伏期（平均20年），發(fā)病前無(wú)法檢測(cè)和診斷；變異和跨種族感染，具有大量的潛在感染來(lái)源，主要為牛、羊、鹿等反芻動(dòng)物，未知的潛在儲(chǔ)存宿主可能很廣，傳播的潛在危險(xiǎn)不明，很難預(yù)測(cè)和控制；受感染器官多—已知主要為腦髓，但潛伏期中除神經(jīng)系統(tǒng)以外，各種器官組織均有感染性；感染途徑多—已知有消化道（食入）、神經(jīng)、血液均可感染。由正常PrPc轉(zhuǎn)化成惡性PrPsc的機(jī)理和因素不清，難以預(yù)防；100%病死率，缺乏治療藥物，無(wú)法研制預(yù)防疫苗。

生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（一）操作要點(diǎn)因?yàn)殡貌《镜牡挚沽軓?qiáng)，因此一旦發(fā)生污染其清除是很困難的，故操作朊病毒的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用專(zhuān)用的設(shè)備，而不要和其它實(shí)驗(yàn)室共享設(shè)備。所有的操作都應(yīng)在生物安全柜里進(jìn)行。在操作過(guò)程中產(chǎn)生的危險(xiǎn)因素主要有氣溶膠、意外吸入及皮膚的割傷或刺傷。因此，在操作的過(guò)程中，必須穿一次性的實(shí)驗(yàn)室保護(hù)服（罩衫和圍裙）和戴手套（病理學(xué)操作者要在兩層橡膠手套之間戴鋼網(wǎng)手套）。使用一次性的塑料器皿取代玻璃器皿。由于可能導(dǎo)致污染，不應(yīng)使用組織處理機(jī)，可代之以塑料的廣口瓶和大口杯。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范（二）消毒處理（一）福爾馬林固定的組織即使經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的浸泡仍認(rèn)為具有感染性，應(yīng)按感染性材料處理。含有朊病毒的組織學(xué)樣品可用96%的甲酸處理1小時(shí)以充分滅活。工作臺(tái)上的廢棄物以及一次性手套、罩衫、圍裙應(yīng)采用多孔負(fù)荷蒸汽滅菌器在134～137℃高壓滅菌18分鐘一個(gè)循環(huán)，或高壓3分鐘6個(gè)循環(huán)后焚燒處理。污染了朊病毒的感染性廢液應(yīng)用含有效氯濃度為20g/L（2%）（終濃度）的次氯酸鈉處理1小時(shí)。多聚甲醛噴霧劑不能使朊病毒的滴度下降，朊病毒對(duì)紫外線照射也有抗性。但還必須用標(biāo)準(zhǔn)方法凈化安全柜（如福爾馬林薰蒸），以滅活其它可能存在的病原因子。朊病毒污染的生物安全柜和其它表面可用含有效氯濃度為20g/L（2%）的次氯酸鈉處理1小時(shí)。生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范器械應(yīng)在含有效氯濃度為20g/L（2%）的次氯酸鈉中浸泡1小時(shí)，并且在高壓滅菌前用清水洗凈。使用過(guò)的鋼網(wǎng)手套和Kevlar手套在內(nèi)的非一次性器械必須滅菌后方可再次使用。不能高壓滅菌的器具可以重復(fù)用含有效氯濃度為20g/L（2%）的次氯酸鈉浸濕1小時(shí)以上的方法來(lái)消毒，并且需適當(dāng)再清洗以除去殘留的次氯酸鈉。高效空氣過(guò)濾器（HEPA）在拆除后應(yīng)用最低達(dá)1000℃的溫度焚燒。焚燒前要求如下處理：拆除前用油漆（lacquerhairspray）噴灑過(guò)濾器的暴露面。拆除過(guò)程中“包