DB45T 2578-2022 天然富硒農(nóng)產(chǎn)品硒含量鑒別與分類

ICS65.020.20CCSB3145IDB45/T2578—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并宣貫。本文件由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。本文件起草單位：廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所(廣西富硒農(nóng)業(yè)研究中心)、廣西壯族自治區(qū)土壤肥料工作站、廣西標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)。本文件主要起草人：劉永賢、潘麗萍、尹雪斌、謝羅松、何禮新、梁潘霞、邢穎、陳錦平、方順、廖青、江澤普。1DB45/T2578—2022天然富硒農(nóng)產(chǎn)品硒含量鑒別與分類本文件規(guī)定了天然富硒農(nóng)產(chǎn)品的術(shù)語和定義、產(chǎn)地環(huán)境、硒含量要求和檢測方法。本文件適用于廣西壯族自治區(qū)行政區(qū)域內(nèi)種植、養(yǎng)殖在天然富硒區(qū)生產(chǎn)的富硒農(nóng)產(chǎn)品的鑒別與分類。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5009.93食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中硒的測定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T21191原子熒光光譜儀GH/T1135富硒農(nóng)產(chǎn)品NY/T391綠色食品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量NY/T1121.1土壤檢測第1部分：土壤樣品的采集、處理和貯存3術(shù)語和定義GH/T1135界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1天然富硒農(nóng)產(chǎn)品naturalselenium-richagriculturalproducts通過生長在天然富硒區(qū)域而非任何方式的人為補(bǔ)充外源硒素，所獲得的富含微量元素硒的產(chǎn)品，其可食部分的總硒含量和有機(jī)硒含量符合本文件規(guī)定范圍的初級農(nóng)產(chǎn)品。3.2有機(jī)硒organicselenium通過生物轉(zhuǎn)化與氨基酸結(jié)合而成，一般主要以硒代氨基酸的形式存在。3.3硒代氨基酸seleno-aminoacids由硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸等組成的含硒氨基酸及其衍生物。注：生物體中含硒的蛋白質(zhì)為硒的主要存在形式，硒結(jié)合進(jìn)入蛋白質(zhì)取代了硫形成的硒代蛋氨酸，另一種是通過密碼子UGA翻譯形成硒代半胱氨酸。由這兩種方式形成的含硒氨基[來源：GH/T1135—2017，3.3]4產(chǎn)地環(huán)境應(yīng)符合NY/T391的要求。2DB45/T2578—20225硒含量要求5.1產(chǎn)地環(huán)境硒含量5.1.1土壤硒含量天然富硒農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地環(huán)境（包括天然富硒農(nóng)產(chǎn)品種植區(qū)或放養(yǎng)區(qū)及周邊同類型土地）中土壤硒含量應(yīng)符合表1的要求。表1天然富硒農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地環(huán)境（天然富硒區(qū)）土壤硒含量分類要求單位：mg/kg有效硒占總硒數(shù)%5.1.2養(yǎng)殖區(qū)水源地水質(zhì)總硒含量天然富硒水產(chǎn)品養(yǎng)殖區(qū)水源地水質(zhì)總硒含量不低于0.01mg/L。5.2天然富硒農(nóng)產(chǎn)品中總硒含量和有機(jī)硒含量要求應(yīng)符合表2的要求，符合有機(jī)硒占總硒含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)或硒代氨基酸占總硒含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)的指標(biāo)即可。表2天然富硒農(nóng)產(chǎn)品的總硒含量和有機(jī)硒（或硒代氨基酸）含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)%質(zhì)量分?jǐn)?shù)%注：有機(jī)硒占總硒含量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)、硒代氨基酸占總硒含量的質(zhì)3DB45/T2578—20226檢測方法6.1總硒含量按GB5009.93規(guī)定的方法測定。6.2土壤有效硒含量按附錄A規(guī)定的方法測定。6.3有機(jī)硒含量按附錄B規(guī)定的方法測定。6.4硒代氨基酸含量按GH/T1135規(guī)定的方法測定。4DB45/T2578—2022土壤有效硒含量的測定方法A.1原理土壤有效硒經(jīng)磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀（KH2PO4-K2HPO4）緩沖溶液（pH7.0）浸提后，在酸性條件下與硼氫化鉀或硼氫化鈉反應(yīng)生成硒化氫（H2Se），由載氣（氬氣）帶入原子化器中進(jìn)行原子化，在硒空心陰極燈照射下，基態(tài)硒原子被激發(fā)至高能態(tài)，在去活化回到基態(tài)時(shí)，發(fā)射出特征波長的熒光，其熒光強(qiáng)度與硒含量成正比。按外標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液比較進(jìn)行定量，按色譜保留時(shí)間進(jìn)行定性。A.2試劑除另有說明外，本方法所用試劑均為優(yōu)級純，水為GB/T6682中規(guī)定的一級水。1)磷酸二氫鉀。2)磷酸氫二鉀。3)氫氧化鉀(或氫氧化鈉)。4)鹽酸（含量：36.038.0。5)硼氫化鉀(或硼氫化鈉)。A.3試劑配制A.3.11mol/LKH2PO4-K2HPO4緩沖溶液（pH7.0）稱取6.80gKH2PO4和11.40gK2HPO4，溶于水并稀釋定容至1000mL容量瓶中，搖勻，備用。A.3.25％鹽酸溶液(體積分?jǐn)?shù))量取50mL鹽酸，溶于水并稀釋定容至1000mL容量瓶中，搖勻，備用。A.3.3還原劑稱取1.0g氫氧化鉀（或氫氧化鈉），用水溶解后再加入7.5g硼氫化鉀（或硼氫化鈉），溶解，定容至500mL容量瓶中，搖勻，備用。A.3.4硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液取1000mg/L硒標(biāo)準(zhǔn)液1.0mL，5％鹽酸溶液（A.3.2）定容至1000mL，此儲(chǔ)備液濃度為1mg/L。A.4儀器主要有：1)原子熒光光度計(jì)，應(yīng)符合GB/T21191的規(guī)定，配備硒的元素?zé)簦?)氣浴振蕩裝置；3)分析天平，精度為1mg；4)pH計(jì)：精度為0.01；5)實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。5DB45/T2578—2022A.5分析步驟A.5.1樣品的制備按照NY/T1121.1要求，將采集后樣品在實(shí)驗(yàn)室中風(fēng)干、粉碎、過篩、保存。在樣品采集、運(yùn)輸、制備和保存過程中應(yīng)避免沾污和待測元素?fù)p失。A.5.2試樣浸提稱取1.000xg（精確至0.001g）的風(fēng)干過篩（0.15mm）土壤樣品于100mL干燥塑料離心管中，加入15mLKH2PO4-K2HPO4緩沖溶液（A.3.1置于25℃、200rpm的恒溫振蕩器中提取90min。然后再4000rpm下離心15min，上清液用0.45μm的濾紙過濾，于4℃下儲(chǔ)存待測。A.5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用5％鹽酸（A.3.2）逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（A.3.4），最后配制成濃度為1μg/L、2μg/L、4μg/L、6μg/L、10μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）。A.5.4空白試驗(yàn)按照A.5.2相同的試劑和步驟進(jìn)行空白試驗(yàn)。A.5.5測定A.5.5.1儀器參考條件參數(shù)如下：1)負(fù)高壓：270V；2)燈電流：80mA；3)原子化溫度：800℃;4)爐高：8mm；5)載氣流速：300mL/min；6)屏蔽氣流速：800mL/min；7)測量方式：標(biāo)準(zhǔn)曲線法；8)讀數(shù)方式：峰面積；9)延遲時(shí)間：1s；10)讀數(shù)時(shí)間：15s；11)加液時(shí)間：8s；12)進(jìn)樣體積：0.5mL。A.5.5.2進(jìn)樣測定將制備好的試樣導(dǎo)入原子熒光光度計(jì)中，按照與繪制校準(zhǔn)曲線相同儀器工作條件進(jìn)行測定。如果被測硒元素濃度超過校準(zhǔn)曲線濃度范圍，應(yīng)稀釋后重新進(jìn)行測定。同時(shí)，將制備好的空白試樣導(dǎo)入原子熒光分光光度計(jì)中，按照與繪制校準(zhǔn)曲線相同儀器工作條件進(jìn)行測定。A.6結(jié)果計(jì)算與表示按公式A.1計(jì)算試樣中硒的含量，以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。6DB45/T2578—2022式中：X——試樣中硒的含量，單位為毫克每千克（mg/kgC——試樣浸提液測定濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；C0——試樣空白浸提液測定濃度，單位為納克每毫升（ng/mLm——試樣質(zhì)量，單位為克（gV——試樣浸提液總體積，單位為毫升（mL）。A.7結(jié)果的允許誤差精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10％。7DB45/T2578—2022有機(jī)硒含量的測定方法B.1原理試樣經(jīng)酸加熱消化后所含六價(jià)硒還原成四價(jià)硒，將四價(jià)硒在鹽酸介質(zhì)中還原成硒化氫，由載氣（氫氣）帶入原子化器中進(jìn)行原子化，在硒特制空心陰極燈照射下，基態(tài)硒原子被激發(fā)至高能態(tài)，在去活化回到基態(tài)時(shí)，發(fā)射出特征波長的熒光，其熒光強(qiáng)度與硒含量成正比。與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。樣品總硒含量由無機(jī)硒和有機(jī)硒組成，有機(jī)硒含量可通過總硒含量與無機(jī)硒含量差減獲得。樣品在超純水中經(jīng)70℃高溫水浴中振蕩抽提，再用超聲波提取后，離心去掉膠體有機(jī)成分，最后用環(huán)己烷充分萃取小分子有機(jī)物，分離出溶解于水相的無機(jī)硒，按照GB5009.93總硒測定方法進(jìn)行無機(jī)硒測定。B.2試劑除另有說明外，本方法所用試劑均為優(yōu)級純，水為GB/T6682中規(guī)定的一級水。1)硝酸；2)高氯酸；3)鹽酸；4)磷酸氫二鉀；5)氫氧化鈉；6)硼氫化鈉；7)鐵氰化鉀。B.3試劑配制B.3.1混合酸：硝酸+高氯酸(4+1)按體積比（4:1）分別量取硝酸和高氯酸混合，搖勻，備用。B.3.25%鹽酸溶液量取50mL鹽酸，溶于水并稀釋定容至1000mL容量瓶中，搖勻，備用。B.3.3硼氫化鈉溶液(8g/L)稱取8.0g硼氫化鈉(NaBH4),溶于氫氧化鈉溶液(5g/L)中，然后定容至1000mL。B.3.4鐵氰化鉀(100g/L)稱取10.0g鐵氰化鉀(K3Fe(CN)6)，溶于100mL水中，混勻。B.3.5硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液取1000mg/L硒標(biāo)準(zhǔn)液1.0mL，5％鹽酸溶液（B.3.2）定容至1000mL，此儲(chǔ)備液濃度為1mg/L。B.4儀器主要有：1)原子熒光光度計(jì)，應(yīng)符合GB/T21191的規(guī)定，配備硒的元素?zé)簦?DB45/T2578—20222)電熱板或微波消化器；3)分析天平，精度為1mg；4)pH計(jì)：精度為0.01；5)實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。B.5分析步驟B.5.1試樣制備糧食：試樣用水洗三次，于60℃烘干，粉碎，儲(chǔ)于塑料瓶內(nèi)，備用。蔬菜及其他植物性食物：取可食部用水洗凈后用紗布吸去水滴，打成勻漿后備用。其它固體試樣：粉碎，混勻，備用。液體試樣：混勻，備用?？偽鴾y定試樣制備：稱取0.500xg～2.00xg（精確至0.001g）試樣，液體試樣吸取1.00mL～10.00mL，置于50mL三角瓶內(nèi)，加20.0mL混合酸及幾粒玻璃珠，蓋上表面皿冷消化過夜。次日于電熱板上加熱，并及時(shí)補(bǔ)加混合酸。當(dāng)溶液變?yōu)榍辶翢o色并伴有白煙時(shí)，再繼續(xù)加熱至剩余體積2mL左右，切不可蒸干。冷卻，再加5mL6mol/L鹽酸，繼續(xù)加熱至溶液變?yōu)榍辶翢o色并伴有白煙出現(xiàn)，以完全將六價(jià)硒還原成四價(jià)硒。冷卻，轉(zhuǎn)移定容至25mL容量瓶中。同時(shí)做空白試驗(yàn)。無機(jī)硒測定試樣制備：準(zhǔn)確稱取試樣0.500xg～2.00xg（精確至0.001g），液體試樣吸取1.00mL~10.00mL，粉碎后置于150mL三角瓶中，加入25mL超純水，置70℃水浴振蕩提取30min，再經(jīng)超聲波提取20min，然后在4000r／min條件下離心15min或用定量濾紙過濾，殘?jiān)貜?fù)1～2次，合并上清液或?yàn)V液，用環(huán)已烷萃取3～5次（必要時(shí)可增加環(huán)已烷用量及萃取次數(shù)分離出水相，在70℃水浴上蒸發(fā)至約5mL～10mL，按上述總硒測定試樣進(jìn)行處理。同時(shí)做空白試驗(yàn)。B.5.2待測試樣制備取10.0mL試樣消化液置于15mL比色管中，加濃鹽酸2.0mL，鐵氰化鉀溶液(100g/L)1.0mL，混勻待測。B.5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用5％鹽酸逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（B.3.5最后配制成濃度為1μg/L、2μg/L、4μg/L、6μg/L、10μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）。B.5.4測定B.5.4.1儀器參考條件屏蔽氣流速：800mL/min；測量方式：標(biāo)準(zhǔn)曲線法；讀數(shù)方式：峰面積；延遲時(shí)間：1s；讀數(shù)時(shí)間：15s；加液時(shí)間：8s；進(jìn)樣體積：0.5mL。B.5.4.2進(jìn)樣測定將制備好的試樣導(dǎo)入原子熒光光度計(jì)中，按照與繪制校準(zhǔn)曲線相同儀器工作條件進(jìn)行測定。如果被測硒元素濃度超過校準(zhǔn)曲線濃度范圍，應(yīng)稀釋后重新進(jìn)行測定。同時(shí)，將制備好的空白試樣導(dǎo)入原子熒光分光光度計(jì)中，按照與繪制校準(zhǔn)曲線相同儀器工作條件進(jìn)行測定。B.6結(jié)果計(jì)算與表示9DB45/T25