葉酸代謝障礙遺傳檢測

實用標準實用標準文案大全文案大全浙江殷欣生物技術有限公司葉酸代謝障礙遺傳檢測項目推薦書PCR+測序法葉酸代謝障礙遺傳檢測項目簡介開展葉酸代謝障礙遺傳檢測的必要性我國出生缺陷的嚴峻形勢出生缺陷已構成嬰兒和兒童死亡的主要原因，成為全世界尤其是發(fā)展中國家在人口健康方面面臨的重大公共衛(wèi)生問題。我國是一個出生缺陷高發(fā)國家。據(jù)2012年《國家人口發(fā)展戰(zhàn)略研究報告》，全國每年約有20-30萬肉眼可見先天畸形兒出生，加上出生后逐漸顯現(xiàn)出來的缺陷，出生缺陷總數(shù)高達80-120萬，約占每年出生人口總數(shù)的4%-6%。根據(jù)WHO和我國合作發(fā)表的《出生缺陷疾病經(jīng)濟負擔的評價》，我國每年因新生兒缺陷造成的直接損失達10億元人民幣，僅神經(jīng)管缺陷一項的直接經(jīng)濟損失超過2億。用于撫養(yǎng)殘疾兒的醫(yī)療費用支出每年超過50億，而大部分存活下來的出生缺陷兒因殘疾給一個家庭造成長達幾十年的心理負擔和精神痛苦更是無法用金錢衡量。由此可見，出生缺陷的現(xiàn)狀正嚴重威脅著我國的人口素質和生命質量，已經(jīng)不僅僅是一個嚴重的公共衛(wèi)生問題，而且成為影響經(jīng)濟發(fā)展和人民正常生活的社會問題。葉酸代謝能力具有較大的個體差異性目前，全世界已經(jīng)公認，婦女圍孕期增補葉酸可以預防胎兒神經(jīng)管缺陷(NTDs)的初發(fā)及再發(fā)。由于葉酸與DNA的合成密切相關，婦女圍孕期若攝入葉酸不足，則會導致同型半胱氨酸(HCY)向甲硫氨酸轉化出現(xiàn)障礙，導致高HCY血癥或低甲硫氨酸血癥。高HCY血癥可引起血管內皮損傷、促進血管平滑肌細胞增生，同時引起凝血和纖溶系統(tǒng)功能失調，使血液處于高凝狀態(tài)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，血漿中HCY水平升高與習慣性流產(chǎn)、胎盤早剝、胎兒生長受限、胎兒畸形、死胎、早產(chǎn)、低體重兒等現(xiàn)象的發(fā)生密切相關。低甲硫氨酸血癥則會引起S-腺苷甲硫氨勒S-腺苷同型半胱氨酸比值降低，抑制DNA甲基轉移酶活性和DNA甲基化，造成染色實用標準實用標準體不分離現(xiàn)象，引起多種胎兒畸形，如神經(jīng)管缺陷、唇腭裂和各種染色體缺陷病等。此外，有研究證明婦女在懷孕的前6周內如果攝入葉酸不足，則生育無腦兒和腦脊柱裂的畸形兒的可能性會增加4倍。葉酸在食物中分布很廣，它經(jīng)過人體腸道吸收后，經(jīng)葉酸還原酶作用，還原成具有生理活性的四氫葉酸，四氫葉酸作為細胞內一碳單位的載體，參與嘌呤和嘧啶合成，為DNA、蛋白質的甲基化提供甲基。葉酸代謝障礙是指由于葉酸代謝通路中的關鍵基因突變導致酶活性降低，使得已被機體吸收的葉酸不能正常發(fā)揮生理功能，一碳單位傳遞受阻，導致神經(jīng)管缺陷、流產(chǎn)、妊娠期高血壓疾病等發(fā)病風險增高。在葉酸代謝過程中，多種酶參與了葉酸的轉運和代謝，其中包括5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶還原酶(MTRR)。還原酹四氫葉酸羋胱氣酸保琉電B-合成甑 ATP5,1k甲m四氧葉酸合成amDNA蛋白質甲基化甲破還原酹四氫葉酸羋胱氣酸保琉電B-合成甑 ATP5,1k甲m四氧葉酸合成amDNA蛋白質甲基化甲破m創(chuàng)(MTR)1298A-C冬甲基⑦少PP+Pit同型半胱氣酸同型半紹K?、dTMPIDNA合站10-甲睢四氫葉酸二fi葉展」圖1.葉酸在體內的代謝途徑四氫葉酸甲基載體之一的5-甲基四氫葉酸是由5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)催化生成，是血液和細胞中存在的主要葉酸類型。5-甲基四氫葉酸參文案大全實用標準實用標準文案大全文案大全與的唯一已知反應是作為甲基供體，在甲硫氨酸合成酶催化下，以維生素B12為輔酶，促進血液中同型半胱氨酸再次甲基化生成甲硫氨酸（蛋氨酸），以維持正常的血漿同型半胱氨酸水平。隨后，甲硫氨酸被ATP磷酸化生成S-腺苷甲硫氨酸。S-腺苷甲硫氨酸參與機體內的生物大分子（包括DNA、蛋白質、脂類等）的甲基化，生成S-腺苷同型半胱氨酸。S-腺苷同型半胱氨酸再重新生成同型半胱氨酸，完成同型半胱氨酸代謝循環(huán)。因此，MTHFR催化生成5-甲基四氫葉酸這步酶促反應至關重要，是葉酸代謝通路中的限速步驟。5-甲基四氫葉酸的存在是同型半胱氨酸向甲硫氨酸轉變的必要條件，也是甲基傳遞的重要載體。在葉酸攝入量不變的情況下，5-甲基四氫葉酸的量受MTHFR的控制，即MTHFR酶活性高時5-甲基四氫葉酸的產(chǎn)量高，MTHFR酶活性低時5-甲基四氫葉酸的產(chǎn)量低。足量的5-甲基四氫葉酸是維持血液中同型半胱氨酸水平的重要因素，也是確保體內甲基化程度正常的保證。另外，維生素B12非常容易被氧化失活，甲硫氨酸合成酶失去維生素812的幫助無法完成5-甲基四氫葉酸和同型半胱氨酸的反應。甲硫氨酸合成酶還原酶（MTRR）具有甲基化還原維生素B12的作用，從而可以確保甲硫氨酸合成酶功能的發(fā)揮。如果MTRR基因突變造成酶活性降低，那么甲硫氨酸合成酶活性也隨之降低，同型半胱氨酸的轉化會受到影響，甲基傳遞也會出現(xiàn)障礙。MTHFR基因、MTRR基因與葉酸代謝障礙相關多態(tài)性位點MTHFR基因A1298c位點多態(tài)性A1298C是位于第一號染色體MTHFR基因第八個外顯子上第1298（1337）核苷酸的一個A/C多態(tài)，引起MTHFR基因編碼的蛋白第429個氨基酸由Glu變?yōu)锳a。在dbSNP數(shù)據(jù)庫中，世界人群中的該多態(tài)的頻率分布，A占0.77,C占0.23左右；中國人群中的分布A為0.81，C為0.19。研究發(fā)現(xiàn)，該位點的多態(tài)性是影響該酶的活性的一個重要因素。攜帶MTHFR1298c等位基因的酶活性為野生型的68％左右，因而阻礙了葉酸代謝，引起一系列疾病發(fā)病風險增加。MTHFR基因C677T位點多態(tài)性C677T是位于第一號染色體MTHFR基因第五個外顯子上的716(677)位mRNA上一個C/T多態(tài)，引起MTHFR基因編碼的蛋白第222個氨基酸由Ala(A)變?yōu)閂al(V)。在dbSNP數(shù)據(jù)庫中，世界人群中的該多態(tài)的頻率分布，C占0.78，T占0.22左右；中國人群中的分布C為0.67，T為0.34。研究發(fā)現(xiàn)，MTHFR677位點的多態(tài)性是影響該酶的活性的一個重要因素，導致酶活性和熱穩(wěn)定性下降。若以個體攜帶677CC基因型時其MTHFR活性為100%時，則攜帶CT基因型的活性為CC的67%,基因型為TT的只有25%。MTRR基因A66G位點多態(tài)性A66G是位于5P15.3-p15.2之間的MTRR基因第2個外顯子處的一個A/G多態(tài)，引起MTRR基因編碼的蛋白第22個氨基酸由Ile變?yōu)镸et(Ile22Met)。在dbSNP數(shù)據(jù)庫中世界人群中的該多態(tài)的頻率分布為A占57.4%,G占42.6%左右；中國人群中的該多態(tài)的頻率分布為：A占76%,G占24%左右。該位點是MTRR上的主要突變，引起甲基維生素缺乏癥E型，并經(jīng)常用來研究與神經(jīng)管缺陷、脊柱裂、Down綜合癥、白血病等疾病的關系。綜合以上研究證明，HCY代謝涉及十幾個酶，其中只有MTHFR、MTRR和CBS基因突變和HCY密切相關。其中以MTHFR677C-T突變影響最大。MTHFR1298A-C突變也使酶活性下降。尤其2個位點的雜合突變相互影響，可以用來解釋常規(guī)劑量服用葉酸對預防NTD35%~50%的作用。有關MTHFR突變的meta分析結果顯示；MTHFR對NTD患兒的OR值為1.7;對母親OR值為1.8;對父親的OR值為1.9;當母親和孩子都是純合子，677C-T突變風險就增加了7倍。同時，有研究證明677C-T突變可能是先天性心臟病的高危因素之一，婦女妊娠期間補充葉酸和多種維生素能有效降低胎兒先天性心臟病的患病風險。除此還見到與唐氏綜合征及唇腭裂有關的報道。圖2.MTHFR677CTT和1298A—C基因多態(tài)性和神經(jīng)管缺陷風險的Meta分析通過對體內葉酸水平與不同基因型別的統(tǒng)計學研究發(fā)現(xiàn)，血中高濃度葉酸時，MTHFR的各基因型與個體體內的HCY水平無差；而當?shù)蜐舛热~酸水時，TT型個體體內的HCY水平比TC、CC型明顯升高；在葉酸攝入量相同時，血清葉酸水平CC型為6.19ng/mL，CT型為6.20ng/mL，TT型為5.17ng/mL,其中TT比TC、CC型個體的血清葉酸水平降低20.2%，TT基因型血清葉酸水平是其他基因型的0.65，因此比其他兩型攝入葉酸高1.4倍才使其的葉酸水平基本一致。人群研究表明，婦女妊娠期間補充葉酸和多種維生素能有效降低胎兒先天性心臟病的患病風險；對伴有高HCY血癥的成人口服葉酸10mg/d治療1年后，發(fā)現(xiàn)血漿葉酸水平明顯上升、血漿HCY明顯下降、動脈分支的血流調節(jié)性顯著上升。長期葉酸治療可以改善動脈內皮功能，可能阻止動脈粥樣硬化；對高HCY血癥患者用葉酸(5mg/d)和維生素B6(250mg/d)進行治療，6周后血漿HCY濃度全部恢復正常；每天補充葉酸500pg/d以上，可以使第一次中風的發(fā)生率降低18%。由此可見，由于MTHFR和MTRR基因位點多態(tài)性在不同種族、地域、民族中有不同的頻度分布，這就要求在制定圍孕期葉酸補服方案時不能使用統(tǒng)一模式、執(zhí)行統(tǒng)一標準。項目信息殷欣生物MTHFR和MTRR基因檢測項目，即葉酸代謝障礙遺傳檢測項目，用于定性檢測樣本中MTHFR基因C677T位點、A1298c位點和MTRR基因A66G位點。為臨床醫(yī)生評估個體葉酸遺傳代謝能力提供參考；在此基礎上，給予個體精準的葉酸和維生素補服計劃，降低出生缺陷的發(fā)生以及由HCY增高引發(fā)各種疾病或并發(fā)癥。項目名稱：人MTHFR和MTRR基因檢測通用名稱：葉酸代謝障礙遺傳檢測英文名稱：HumanMTHFRandMTRRGeneDetection預期用途：主要用于對育齡婦女孕期/圍產(chǎn)期的葉酸利用能力的遺傳風險進行評估，評估的結果可用于指導受檢婦女進行孕期營養(yǎng)利用異常導致疾病的預防，并且有利于這些營養(yǎng)利用能力異常所致疾病的病因學研究及患者臨床個性化治療的實施。適用科室以及人群如下表所示：科室人群應用婦產(chǎn)科孕前/圍孕期女性孕期保健基礎篩查：出生缺陷（神經(jīng)管畸形、先心病、唐氏綜合征、唇腭裂等）、復發(fā)性流產(chǎn)、妊高癥的一級預防。

生殖中心不孕不育人群：女性不良孕產(chǎn)（畸胎/流產(chǎn)/胚停等）、男性少精癥/弱精癥不孕不育、不良孕產(chǎn)的輔助性病因診斷。體檢中心體檢人群基因體檢：腦卒中、H型高血壓的一級預防。兒科兒童兒童保健篩查：促進兒童營養(yǎng)健康，預防巨幼細胞貧血、認知能力障礙、孤獨癥等。項目申請報告:報告領取單' 葉酸代謝障礙遺傳檢測項目申請單請于十個工檢ES《年月升到魏曉請于十個工檢ES《年月升到魏曉潁至報吉中■:葉酸代謝障礙遺傳檢測1S名， 年袋，住別? 出生E用」民族工或靂邑IS；地址；出生濟陷克族史［有/無卜疾陶更樣本漏號?華本空勁￡蹙鉆接送橙醫(yī)加?中本茶笠日期?檢剌項目；葉薜林曲障酒選作檢測事史與查曲初步饞折|注彳誥認苴書寫意的信息,文案大全文案大全實用標準知情同意書本項目m中國疾病預防控制中心婦幼保健中心在醫(yī)療保健系統(tǒng)內組評、密愿，本項目果桿方法為無創(chuàng)，無痛，無副作用的口腔粘度細電妥桿；拴冽方法為pc艮和測序技術.可以惆褥檢■鼓據(jù)的選帷.本項目用于定性檢測受檢者體中MTTFI?其因匚677一位點、A12Q8C位點和MT艮艮品因R&G位點的突變狀況.為臨界醫(yī)生評估個體葉酸迪隹代謝筌力提供參考，在此基礎匕給予個瑋精準的葉酸和弟學南補朋計劃，降低出生虢陷的發(fā)生.本項目楮測信息全程果用條帶碼標識，所有流程不會透漏受檢者的任何個人相關后息，可以有效保護受檢者的隱私.本項目與傳統(tǒng)的帶床檢查和輔助法斷方式相同.為醫(yī)生讒治疾病提供在埴件方面的卷號依據(jù).我已充分了薜婦幼分子遺悻醫(yī)學檢兼項目的性質,合理的預期目的和必饕性.并充分理噪了以上內容，我同意接受為幼分子遺傳醫(yī)學卷臉項目，并進行ZI腔粘膜果樹和D檢測.受松萬控宣：日期檢測原理：根據(jù)國家生物基因檢測技術應用評估認證中心頒布的《中國人口健康服務基因位點認證規(guī)程》，對大量基因位點的支持文獻、分子生物學機理研究、中國人群適用性等進行綜合分析評估，以下位點通過國家生物基因檢測技術應用評估認證中心認定，與葉酸利用能力有關:MTHFRC677T、MTHFRA1298C、MTRRA66G。檢測方法采用PCR反應結合探針技術，針對上述基因的3個多態(tài)性位點，設計了3對特異性引物，一個反應體系中通過兩種不同通道檢測一個位點的基因多態(tài)性。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結果的定性分析。具體包括以下步驟。（1）檢測的樣品類型與采樣方法檢測的樣品類型為口腔粘膜上皮細胞，使用專用的口腔粘膜上皮細胞采樣方法和器材。采用此方法，具有無創(chuàng)、取材便捷、操作簡單的優(yōu)點。（2）基因組DNA的抽提方法采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖系統(tǒng)，可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的DNA片段大、純度高，質量穩(wěn)定可靠。（3）測序實用標準實用標準文案大全文案大全根據(jù)測序結果進行序列比對，檢測目的基因有沒突變。L 口腔黏膜來樣 2.抽提樣本DNA3.PCR擴增 4.產(chǎn)物測序圖3.項目檢測流程示意圖圖4.ABI3730測序儀測序結果示意圖項目特色：全面：涵蓋與葉酸代謝障礙相關的3個重要位點，本項目同時為國家婦幼保健中心推廣的公共實施項目中所推薦的3個位點。實用：能夠檢測幾乎所有臨床相關報道的缺失情況，充分滿足常規(guī)診斷需求。準確：與位點測序結果結果符合率100%。報告解讀:

***法靛葉酸代謝障麗遺傳梅I琥告單IIIIIIIIIIIIIIII性時女***法靛葉酸代謝障麗遺傳梅I琥告單IIIIIIIIIIIIIIII性時女口性號E年科R+*■住賽號］物測技末?笆舊E?FOk泡序等檢需倍息差怠曲苗砧率現(xiàn)世11陸鼻分為?來翼現(xiàn)風步.-*苗砧率現(xiàn)世11陸鼻分為?來翼現(xiàn)風步.-*?

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中度風險孕前中度風險孕前3個月至整個孕期：每天增補葉酸0.8毫克、2.6微克維生素B12孕前3個月至整個孕期：每天增補葉酸0.8毫克。對于MTRR高度風險66AG或GG的受檢者（報告中第3個箭頭向上），還要增補2.6微克維生素B12兒14-16周即可確診；脊柱裂17-18周診斷效果較好；腦脊膜膨出16-19周最佳時機，不僅要注意檢查顱骨環(huán)