微生物檢驗技能-細菌的接種與培養(yǎng)

常用培養(yǎng)基制備知道細菌生長繁殖的條件知道細菌生長繁殖的方式和速度知道常用培養(yǎng)基的制備程序知道培養(yǎng)基的種類和用途學會正確制備培養(yǎng)基細菌生長繁殖的條件營養(yǎng)物質氫離子濃度(pH)：大多數(shù)病原菌pH7.2～7.6溫度：病原菌最適生長溫度37℃氣體：氧氣和CO2

細菌繁殖的方式和速度生長繁殖方式：無性繁殖方式，即二分裂。生長繁殖速度：多數(shù)細菌分裂一代需20～30min。結核分枝桿菌需18～20h。培養(yǎng)基培養(yǎng)基是指用人工方法，將細菌等微生物生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質按比例混合，調節(jié)pH，高壓滅菌而成的營養(yǎng)混合物。培養(yǎng)基培養(yǎng)基的用途：分離純化微生物、擴增微生物、傳代與保存微生物、鑒別微生物、研究微生物的生理生化特性、制造疫苗、菌苗或其他微生物制劑。培養(yǎng)基的主要成分及其作用營養(yǎng)物質：蛋白胨、肉浸液及牛肉膏、糖類、血液、雞蛋與動物血清、無機鹽、生長因子水分凝固物質：瓊脂、明膠、卵白抑制劑：常用的有膽鹽、煌綠等抑制革蘭陽性菌生長；亞碲酸鹽、四硫磺酸鹽及多種抗生素等指示劑：為了觀察細菌是否利用分解糖類、氨基酸等物質，常在某些培養(yǎng)基中加入一定種類的指示劑，如酚紅、溴甲酚紫、中性藍等常用酸堿指示劑培養(yǎng)基的分類

按物理性狀分類液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基

按用途分類基礎培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)基基礎培養(yǎng)基基礎培養(yǎng)基含有基礎生長所需的基本營養(yǎng)成分，最常用的是肉浸液，俗稱肉湯，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。營養(yǎng)培養(yǎng)基最常用的是血瓊脂平板、巧克力血平板等選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基皰肉培養(yǎng)基、巰基乙醇酸納培養(yǎng)基培養(yǎng)基的選擇根據(jù)標本來源和可能存在的病原菌，確定選用各種分離培養(yǎng)基。伊紅美藍/麥康凱用于篩選革蘭陰性桿菌。培養(yǎng)基的選擇從血液、骨髓中分離病原菌用血液增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備程序制備程序：調配、溶化、矯正pH、過濾澄清、分裝、滅菌、鑒定7個主要步驟分裝量：瓊脂斜面分裝量約為試管容量的1/4，斜面長度約為試管長度的2/3；液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基為試管長度的1/3；瓊脂平板平皿內徑為9cm，傾注培養(yǎng)基13-15ml，若內徑為7cm，傾注培養(yǎng)基7-8ml滅菌：高壓蒸汽滅菌法最常用原料稱量加熱溶化水培養(yǎng)基培養(yǎng)基比色管酚紅指示劑目視pH矯正pH矯正相同培養(yǎng)基蒸餾水過酸過堿標準比色管待測管培養(yǎng)基蒸餾水標準比色管待測管培養(yǎng)基蒸餾水標準比色管待測管培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)基的包扎培養(yǎng)基的包扎細菌生長繁殖的條件有哪些？敘述培養(yǎng)基的制備程序。簡述培養(yǎng)基的種類及用途。細菌接種技術知道平板劃線法、斜面、液體和半固體培養(yǎng)基等各種接種方法知道接種細菌用具、接種細菌的環(huán)境要求學會正確選擇并使用接種細菌用具的方法明確各種培養(yǎng)基的用途細菌的人工培養(yǎng)無菌技術：是防止微生物進入物品或機體，同時防止被檢物中可能存在病原微生物污染周圍環(huán)境及工作人員的規(guī)范操作技術。進行無菌操作時應注意的問題：無菌室、無菌試管、接種環(huán)（針）、微生物實驗室的管理、個人防護。細菌的接種工具接種與分離技術平板劃線分離法：1.分區(qū)劃線2.連續(xù)劃線斜面接種法穿刺接種法液體培養(yǎng)基接種法傾注平板法涂布接種法細菌接種目的及方法平板劃線接種法：目的：使混合的細菌呈單個分散生長，形成單個菌落，以獲得純菌。方法分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標本液體培養(yǎng)基接種法穿刺接種法：用于觀察細菌動力斜面接種法傾注培養(yǎng)法：用于細菌計數(shù)簡述細菌接種的基本方法。簡述細菌各種接種方法的意義。如何做到無菌操作？細菌培養(yǎng)技術學會使用不同的方法培養(yǎng)細菌知道接種細菌用具、接種細菌的環(huán)境要求學會正確選擇并使用接種細菌用具的方法知道細菌在各種培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象細菌培養(yǎng)方法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）培養(yǎng)溫度：35℃（采用恒溫培養(yǎng)箱）培養(yǎng)時間：18～24h二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等恒溫孵育箱恒溫孵育箱恒溫孵育箱二氧化碳培養(yǎng)箱厭氧罐厭氧袋厭氧手套箱細菌在平板上的生長現(xiàn)象菌落定義：指單個細菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細菌集團。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性菌落類型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細菌堆積物。菌落菌落與菌苔菌落菌落與菌苔菌落(S型)菌落(R型)混濁生長形成沉淀：多見于鏈狀排列的細菌形成菌膜：多見于厭氧菌液體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象菌膜對照沉淀渾濁液體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象有鞭毛細菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴散生長，穿刺線邊緣模糊。無鞭毛細菌：只沿穿刺線生長，穿刺線邊緣清晰。半固體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象半固體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象斜面培養(yǎng)基生長現(xiàn)象敘述細菌培養(yǎng)方法有哪些。簡述細菌在各種培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象。從哪些方面描述菌落的性狀？劃線接種法平板劃線接種法：目的：使混合的細菌呈單個分散生長，形成單個菌落，以獲得純菌。方法分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標本分區(qū)劃線法分區(qū)劃線法連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法與連續(xù)劃線法分區(qū)劃線生長現(xiàn)象連