微生物檢驗(yàn)技能-細(xì)菌的接種與培養(yǎng)

常用培養(yǎng)基制備知道細(xì)菌生長繁殖的條件知道細(xì)菌生長繁殖的方式和速度知道常用培養(yǎng)基的制備程序知道培養(yǎng)基的種類和用途學(xué)會(huì)正確制備培養(yǎng)基細(xì)菌生長繁殖的條件營養(yǎng)物質(zhì)氫離子濃度(pH)：大多數(shù)病原菌pH7.2～7.6溫度：病原菌最適生長溫度37℃氣體：氧氣和CO2

細(xì)菌繁殖的方式和速度生長繁殖方式：無性繁殖方式，即二分裂。生長繁殖速度：多數(shù)細(xì)菌分裂一代需20～30min。結(jié)核分枝桿菌需18～20h。培養(yǎng)基培養(yǎng)基是指用人工方法，將細(xì)菌等微生物生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)按比例混合，調(diào)節(jié)pH，高壓滅菌而成的營養(yǎng)混合物。培養(yǎng)基培養(yǎng)基的用途：分離純化微生物、擴(kuò)增微生物、傳代與保存微生物、鑒別微生物、研究微生物的生理生化特性、制造疫苗、菌苗或其他微生物制劑。培養(yǎng)基的主要成分及其作用營養(yǎng)物質(zhì)：蛋白胨、肉浸液及牛肉膏、糖類、血液、雞蛋與動(dòng)物血清、無機(jī)鹽、生長因子水分凝固物質(zhì)：瓊脂、明膠、卵白抑制劑：常用的有膽鹽、煌綠等抑制革蘭陽性菌生長；亞碲酸鹽、四硫磺酸鹽及多種抗生素等指示劑：為了觀察細(xì)菌是否利用分解糖類、氨基酸等物質(zhì)，常在某些培養(yǎng)基中加入一定種類的指示劑，如酚紅、溴甲酚紫、中性藍(lán)等常用酸堿指示劑培養(yǎng)基的分類

按物理性狀分類液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基

按用途分類基礎(chǔ)培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有基礎(chǔ)生長所需的基本營養(yǎng)成分，最常用的是肉浸液，俗稱肉湯，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。營養(yǎng)培養(yǎng)基最常用的是血瓊脂平板、巧克力血平板等選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基皰肉培養(yǎng)基、巰基乙醇酸納培養(yǎng)基培養(yǎng)基的選擇根據(jù)標(biāo)本來源和可能存在的病原菌，確定選用各種分離培養(yǎng)基。伊紅美藍(lán)/麥康凱用于篩選革蘭陰性桿菌。培養(yǎng)基的選擇從血液、骨髓中分離病原菌用血液增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備程序制備程序：調(diào)配、溶化、矯正pH、過濾澄清、分裝、滅菌、鑒定7個(gè)主要步驟分裝量：瓊脂斜面分裝量約為試管容量的1/4，斜面長度約為試管長度的2/3；液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基為試管長度的1/3；瓊脂平板平皿內(nèi)徑為9cm，傾注培養(yǎng)基13-15ml，若內(nèi)徑為7cm，傾注培養(yǎng)基7-8ml滅菌：高壓蒸汽滅菌法最常用原料稱量加熱溶化水培養(yǎng)基培養(yǎng)基比色管酚紅指示劑目視pH矯正pH矯正相同培養(yǎng)基蒸餾水過酸過堿標(biāo)準(zhǔn)比色管待測管培養(yǎng)基蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)比色管待測管培養(yǎng)基蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)比色管待測管培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)基的包扎培養(yǎng)基的包扎細(xì)菌生長繁殖的條件有哪些？敘述培養(yǎng)基的制備程序。簡述培養(yǎng)基的種類及用途。細(xì)菌接種技術(shù)知道平板劃線法、斜面、液體和半固體培養(yǎng)基等各種接種方法知道接種細(xì)菌用具、接種細(xì)菌的環(huán)境要求學(xué)會(huì)正確選擇并使用接種細(xì)菌用具的方法明確各種培養(yǎng)基的用途細(xì)菌的人工培養(yǎng)無菌技術(shù)：是防止微生物進(jìn)入物品或機(jī)體，同時(shí)防止被檢物中可能存在病原微生物污染周圍環(huán)境及工作人員的規(guī)范操作技術(shù)。進(jìn)行無菌操作時(shí)應(yīng)注意的問題：無菌室、無菌試管、接種環(huán)（針）、微生物實(shí)驗(yàn)室的管理、個(gè)人防護(hù)。細(xì)菌的接種工具接種與分離技術(shù)平板劃線分離法：1.分區(qū)劃線2.連續(xù)劃線斜面接種法穿刺接種法液體培養(yǎng)基接種法傾注平板法涂布接種法細(xì)菌接種目的及方法平板劃線接種法：目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長，形成單個(gè)菌落，以獲得純菌。方法分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本液體培養(yǎng)基接種法穿刺接種法：用于觀察細(xì)菌動(dòng)力斜面接種法傾注培養(yǎng)法：用于細(xì)菌計(jì)數(shù)簡述細(xì)菌接種的基本方法。簡述細(xì)菌各種接種方法的意義。如何做到無菌操作？細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)學(xué)會(huì)使用不同的方法培養(yǎng)細(xì)菌知道接種細(xì)菌用具、接種細(xì)菌的環(huán)境要求學(xué)會(huì)正確選擇并使用接種細(xì)菌用具的方法知道細(xì)菌在各種培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象細(xì)菌培養(yǎng)方法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）培養(yǎng)溫度：35℃（采用恒溫培養(yǎng)箱）培養(yǎng)時(shí)間：18～24h二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等恒溫孵育箱恒溫孵育箱恒溫孵育箱二氧化碳培養(yǎng)箱厭氧罐厭氧袋厭氧手套箱細(xì)菌在平板上的生長現(xiàn)象菌落定義：指單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性菌落類型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。菌落菌落與菌苔菌落菌落與菌苔菌落(S型)菌落(R型)混濁生長形成沉淀：多見于鏈狀排列的細(xì)菌形成菌膜：多見于厭氧菌液體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象菌膜對照沉淀渾濁液體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象有鞭毛細(xì)菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴(kuò)散生長，穿刺線邊緣模糊。無鞭毛細(xì)菌：只沿穿刺線生長，穿刺線邊緣清晰。半固體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象半固體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象斜面培養(yǎng)基生長現(xiàn)象敘述細(xì)菌培養(yǎng)方法有哪些。簡述細(xì)菌在各種培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象。從哪些方面描述菌落的性狀？劃線接種法平板劃線接種法：目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長，形成單個(gè)菌落，以獲得純菌。方法分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本分區(qū)劃線法分區(qū)劃線法連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法與連續(xù)劃線法分區(qū)劃線生長現(xiàn)象連