DB12T 652-2016 轉(zhuǎn)基因耐除草劑大豆DAS-68416-4及其衍生品種定性檢測 實時熒光PCR法　　

B23DB12Detectionofgeneticallymodifiedplantsandderivedproducts—QualitativePCRmethodforherbicide-resistantsoybeanDAS-68416-4天津市市場和質(zhì)量監(jiān)督管理委員會發(fā)布I本標準起草單位：天津市農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所、中國農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究所、天轉(zhuǎn)基因耐除草劑大豆DAS-68416-4及其衍生品種定性檢測實時熒光PCR法本標準規(guī)定了轉(zhuǎn)基因耐除草劑大豆DAS-684本標準適用于轉(zhuǎn)基因耐除草劑大豆DAS-68416-4及其衍下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和農(nóng)業(yè)部2031號公告—8—2013轉(zhuǎn)基因植物及其NY/T672轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測通用要求Lectin基因LectingeneDAS-68416-4轉(zhuǎn)化體特異性序列event-specificsequenceofDAS-68416-4根據(jù)轉(zhuǎn)基因耐除草劑大豆DAS-68416-5.1.2.2DAS-68416-4轉(zhuǎn)化分析天平感量0.1g和0.1mg熒光定量PC5.3.5.1標準樣品和試樣實時熒光P）；31×—10μmol/LDAS-68416-4-F2.0μL10μmol/LDAS-68416-4-R2.0μL10μmol/LDAS-68416-4-P2.0μL 25.0μL表2Lectin內(nèi)標基因PCR反應(yīng)體系1× 0.5μL0.5μL0.5μL2.0μL—25.0μL的基因組DNA（或采用大豆DAS-68416-4與非轉(zhuǎn)基因大豆基因組相比的拷貝數(shù)分數(shù)為0.1%~1.0%的DNA溶液）作為陽性對照；以水作為空白對照。6.1Lectin內(nèi)標準基因無典型擴增曲線，表明樣品中未檢出大豆成分，結(jié)果表述為“樣品中未檢測出6.2Lectin內(nèi)標準基因出現(xiàn)典型擴增曲線，因耐除草劑大豆DAS-68416-4轉(zhuǎn)化體成分，檢測結(jié)果為陽性”。46.3Lectin內(nèi)標準基因出現(xiàn)典型擴增曲線，擴增曲線，表明樣品中未檢測出DAS-68416-4轉(zhuǎn)化體成分，結(jié)果表述為“樣品中未檢測出轉(zhuǎn)基因耐除草劑大豆DAS-68416-4轉(zhuǎn)化體成分，檢測結(jié)果為之間，進行重復實驗。如重復實驗結(jié)果符合6.1～6.3的情形，依照6.1～6.3進行化體特異性序列，根據(jù)檢出參數(shù)情況，參照6.1～6.3對樣品進行判定。A.1Lectin基因?qū)崟r熒光PCR擴增產(chǎn)物核苷酸序列（AccCTTCTATGCCCCTGACACAAAAAGGCTTGCA1GCCCTCTACTCCACCCCCATCCACATTTGGGACAAAGAAACCGGTAGCGCTTCTATGCCCCTGACACAAAAAGGCTTGCA61TAATTTAGT