《葡萄植株中7種植物激素含量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法》編制說明

《葡萄植株中7種植物激素含量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜

法》（征求意見稿）編制說明

一、項(xiàng)目來源

本標(biāo)準(zhǔn)由廣西大學(xué)提出，廣西大學(xué)、廣西西大檢測(cè)有限公司、廣西亞

熱帶作物研究所、廣西壯族自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院、廣西思浦林科技

有限公司共同起草的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《葡萄植株中7種植物激素含量的測(cè)定液相

色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》。

二、項(xiàng)目背景及目的意義

為貫徹落實(shí)國家“十四五”規(guī)劃綱要和《“十四五”全國農(nóng)業(yè)綠色發(fā)

展規(guī)劃》推進(jìn)農(nóng)業(yè)綠色發(fā)展決策部署，加快推動(dòng)實(shí)施《廣西鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略

規(guī)劃（2018-2022年）》“實(shí)施特色農(nóng)業(yè)強(qiáng)優(yōu)工程，推動(dòng)鄉(xiāng)村產(chǎn)業(yè)振興”任

務(wù)要求，廣西壯族自治區(qū)人民政府辦公廳印發(fā)《廣西推進(jìn)水果產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量

發(fā)展實(shí)施方案》，提出“建設(shè)優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)，推進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)，強(qiáng)化科技攻關(guān)

與推廣”等措施，加快形成主業(yè)突出、鏈條完整、應(yīng)市均衡、效益顯著的

水果高質(zhì)量發(fā)展新格局，為鄉(xiāng)村全面振興奠定堅(jiān)實(shí)的產(chǎn)業(yè)基礎(chǔ)。

廣西溫光熱資源豐富，葡萄成熟期的自然條件好，兩造葡萄都能在高

價(jià)期上市，果農(nóng)收益好。據(jù)統(tǒng)計(jì)，廣西葡萄栽培面積在全國排名前十，已

成為南方重要的葡萄種植基地。2020年廣西葡萄栽培面積48.48萬畝，產(chǎn)值

75.09億元；2021年栽培面積47.01萬畝，產(chǎn)值達(dá)84.72億元，扣除釀酒葡萄，

鮮食葡萄平均畝產(chǎn)值1.9萬元。無論總產(chǎn)值還是單位面積產(chǎn)值都位于廣西水

果產(chǎn)業(yè)前茅，是廣西單位面積種植效益最好的果樹。但由于目前廣西葡萄

主栽品種較單一，且以少數(shù)幾個(gè)國外選育品種為主，擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的

優(yōu)良葡萄品種缺乏，需進(jìn)一步篩選研發(fā)優(yōu)質(zhì)葡萄品種。

研究發(fā)現(xiàn)，激素對(duì)葡萄營養(yǎng)生長的影響包括頂端優(yōu)勢(shì)、芽的休眠和萌

發(fā)、新梢的生長等，生殖生長包括開花結(jié)果、種子萌發(fā)、插條生根等，強(qiáng)

化葡萄抗逆性，增強(qiáng)葡萄對(duì)環(huán)境適應(yīng)性等多方面的調(diào)控[1]。植物激素是植物

1

體產(chǎn)生的、極其微量的、并對(duì)植物的生長發(fā)育起至關(guān)重要作用的信號(hào)分子，

幾乎調(diào)控著植物生長發(fā)育及環(huán)境適應(yīng)的方方面面，從胚胎發(fā)生、種子萌發(fā)、

植物器官的分化與發(fā)育、營養(yǎng)器官到生殖器官的轉(zhuǎn)化、開花、結(jié)果、種子

的生長發(fā)育，一直到植物的成熟與衰老；從植物根在土壤中獲取營養(yǎng)、光

合作用、呼吸作用到植物的各種代謝活動(dòng)；從植物適應(yīng)各種環(huán)境的變化、

到與微生物的共生與抗?fàn)幍?，都有植物激素的參與。可見，植物學(xué)研究無

法避開植物激素[2]。根據(jù)大量的生理學(xué)和遺傳學(xué)研究，每一類植物激素在不

同的發(fā)育和生長過程中發(fā)揮作用，植物激素對(duì)植物的調(diào)控作用是多種植物

激素通過信號(hào)網(wǎng)絡(luò)發(fā)揮作用，通過協(xié)同或拮抗作用影響植物生長發(fā)育的每

一過程[3]。目前已知的植物體內(nèi)產(chǎn)生的激素主要分類六大類，即生長素

（IAA）、赤霉素（GA）、細(xì)胞分裂素（CTK）、脫落酸（ABA）、乙烯（ETH）

和油菜素甾醇（BR），最近新確認(rèn)的植物激素有:多胺，水楊酸類，茉莉酸

（酯）等等。

生長素主要集中在幼嫩、正生長的部位，如禾谷類的胚芽鞘，雙子葉

植物的莖頂端、幼葉、花粉和子房以及正在生長的果實(shí)、種子等；衰老器

官中含量極少；它的產(chǎn)生具有“自促作用”。生長素具有兩重性，不僅能

促進(jìn)植物生長，也能抑制植物生長，如低濃度的生長素促進(jìn)植物生長，過

高濃度的生長素抑制植物生長。

高等植物中的赤霉素主要存在于幼根、幼葉、幼嫩種子和果實(shí)等部位。

赤霉素還可促進(jìn)果實(shí)發(fā)育和單性結(jié)實(shí)，打破塊莖和種子的休眠，促進(jìn)發(fā)芽。

干種子吸水后，胚中產(chǎn)生的赤霉素能誘導(dǎo)糊粉層內(nèi)a－淀粉酶的合成和其他

水解酶活性的增加，促使淀粉水解，加速種子發(fā)芽。目前報(bào)道的赤霉素成

[4]

員已超過136種，其中GA1、GA3、GA4和GA7有著較高的生物活性。

細(xì)胞分裂素是一類具有廣泛生物學(xué)效應(yīng)的植物激素。研究發(fā)現(xiàn)，植物

細(xì)胞分裂素能夠調(diào)節(jié)植物細(xì)胞分裂，組織、器官及個(gè)體的生長發(fā)育，營養(yǎng)

吸收、生物及非生物脅迫等諸多過程。在高等植物中，玉米素是細(xì)胞分裂

素的主要天然活性成分[5]。

脫落酸是一種具有倍半萜結(jié)構(gòu)的植物激素，在植物生長發(fā)育過程（特

2

別是種子休眠、萌發(fā)以及萌發(fā)后生長等）中具重要作用，并調(diào)控植物對(duì)環(huán)

境脅迫的響應(yīng)[5]。

水楊酸是一種酚類植物激素，可調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育，對(duì)植物的光合

作用、蒸騰作用和離子的吸收與運(yùn)輸有調(diào)節(jié)作用，還可以誘導(dǎo)植物細(xì)胞的

分化與葉綠體的生成。另外，水楊酸可以作為內(nèi)生信號(hào)參與植物對(duì)病原體

的抵御，誘導(dǎo)組織產(chǎn)生病程相關(guān)蛋白。當(dāng)植物的一部分受到病原體感染時(shí)，

它可以促進(jìn)該植物其他部分產(chǎn)生抗體，并通過形成揮發(fā)性的水楊酸甲酯在

不同植物間傳遞，共同抵御感染。

茉莉酸是存在于高等植物體內(nèi)的內(nèi)源生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，具有抑制植物生

長、花粉粒萌發(fā)、促進(jìn)葉片衰老、促進(jìn)氣孔關(guān)閉、提高抗性等生理作用，

是調(diào)節(jié)生物和非生物脅迫反應(yīng)的重要信號(hào)因子，例如，植物受到植食性昆

蟲侵害或機(jī)械損傷時(shí)，茉莉酸含量顯著升高，調(diào)控抗逆基因的表達(dá)[4]。

因此，通過測(cè)定葡萄中7種代表性植物激素（玉米素、玉米素核苷、生

長素、赤霉素、脫落酸、水楊酸、茉莉酸）的含量，為優(yōu)質(zhì)葡萄品種選育

提供科學(xué)依據(jù)。為滿足市場(chǎng)需求，進(jìn)一步制定葡萄植株中7種植物激素含量

測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)，推動(dòng)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

三、項(xiàng)目編制過程

（一）成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作組

本標(biāo)準(zhǔn)由廣西大學(xué)提出，《葡萄植株中7種植物激素含量的測(cè)定液相

色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》項(xiàng)目任務(wù)下達(dá)后，由廣西大學(xué)組織成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作

組，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組制定了起草編寫方案與進(jìn)度安排，明確任務(wù)職責(zé)，確

定工作技術(shù)路線，開展標(biāo)準(zhǔn)研制工作。具體編制工作由廣西大學(xué)為起草單

位組成的標(biāo)準(zhǔn)編制工作組負(fù)責(zé)，編制工作組成員如下：梁瓊月，范曉蘇，

王博，路丹，沈方科。

（二）收集整理文獻(xiàn)資料

標(biāo)準(zhǔn)編制工作組經(jīng)查閱，收集了國內(nèi)有關(guān)測(cè)定植物激素相關(guān)文獻(xiàn)資料。

3

主要有：

GB/T1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草

規(guī)則

GB/T27417-2017合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南

GB/T27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)

NY/T2781-2015水稻中43種植物激素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

GB/T40179-2021植物中有機(jī)酸的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/串聯(lián)質(zhì)譜法

NY/T3949-2021植物源性食品中酚酸類化合物的測(cè)定高效液相色譜-

串聯(lián)質(zhì)譜法

DB12/T986-2020豆芽中6-芐基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸鈉、2,4-滴和

赤霉素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

DB51/T2383-2017植物及種子（果實(shí)）中脫落酸（ABA）含量的測(cè)定高

效液相色譜法

DB51/T2382-2017植物及種子（果實(shí)）中赤霉素（GA）含量的測(cè)定高

效液相色譜法

DB64/T1493-2017豆芽中赤霉素、6-芐基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸、2，

4-滴的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

DB51/T2384-2017植物及種子（果實(shí)）中吲哚乙酸（IAA）含量的測(cè)

定高效液相色譜法

DB22/T2598-2016人參中吲哚乙酸和吲哚丁酸的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜

/質(zhì)譜法

（三）研討確定標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容

2023年3月至5月，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組對(duì)收集到的資料進(jìn)行整理研究后，

組織召開了標(biāo)準(zhǔn)編制工作會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的整體框架結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究分析，并

對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵性內(nèi)容進(jìn)行了初步探討。經(jīng)工作組研究確定，標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容

主要包括：葡萄植株中7種植物激素含量的測(cè)定前處理方法、儀器檢測(cè)方

法、線性范圍、精密度、正確度、檢出限及測(cè)定下限，并邀請(qǐng)檢驗(yàn)單位對(duì)

4

其進(jìn)行驗(yàn)證。

（四）編寫形成征求意見稿

2023年9月底，標(biāo)準(zhǔn)工作組對(duì)試驗(yàn)及驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行多次討論、研究，

反復(fù)修改完善標(biāo)準(zhǔn)文本，最終形成了團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《葡萄植株中7種植物激素

含量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（討論稿）和（討論稿）編制說明。

四、標(biāo)準(zhǔn)制定原則

（一）實(shí)用性原則

本標(biāo)準(zhǔn)是在充分收集相關(guān)資料和文獻(xiàn)，分析前人關(guān)于葡萄植株中7種

植物激素含量測(cè)定的研究成果，堅(jiān)持與現(xiàn)行有關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地

方標(biāo)準(zhǔn)、團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致，開展標(biāo)準(zhǔn)起草工作。標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容符合當(dāng)前葡萄

植株中7種植物激素含量測(cè)定技術(shù)發(fā)展方向和市場(chǎng)需求，標(biāo)準(zhǔn)條款切實(shí)可

行，具有較強(qiáng)的實(shí)用性和可操作性。

（二）協(xié)調(diào)性原則

本標(biāo)準(zhǔn)編寫過程中充分尊重知識(shí)產(chǎn)權(quán)，同時(shí)注重本標(biāo)準(zhǔn)與相關(guān)法律法

規(guī)的銜接，在內(nèi)容上與現(xiàn)行法律法規(guī)、強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。

（三）規(guī)范性原則

本標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化

文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草，標(biāo)準(zhǔn)涉及的專業(yè)術(shù)語、基本要求、

設(shè)備要求表達(dá)準(zhǔn)確，引用數(shù)據(jù)來源真實(shí)可靠，指標(biāo)科學(xué)、論證充分，標(biāo)準(zhǔn)

質(zhì)量有保證。

（四）前瞻性原則

本標(biāo)準(zhǔn)在充分考慮當(dāng)前葡萄發(fā)展現(xiàn)狀、農(nóng)業(yè)種植產(chǎn)業(yè)發(fā)展水平和經(jīng)濟(jì)

發(fā)展?fàn)顩r的基礎(chǔ)上，標(biāo)準(zhǔn)條款規(guī)定的主要技術(shù)內(nèi)容盡可能與我國現(xiàn)有水平

相一致，避免起點(diǎn)、要求過低，為葡萄植株中7種植物激素含量測(cè)定技術(shù)

5

的推廣和應(yīng)用提供技術(shù)指導(dǎo)。

五、標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容及依據(jù)來源

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《葡萄植株中7種植物激素含量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜

法》主要章節(jié)內(nèi)容包括：儀器參數(shù)、前處理方法、檢出限及測(cè)定下限、精

密度、正確度。標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容及依據(jù)來源說明如下：

1儀器參數(shù)

通過對(duì)比離子對(duì)、流動(dòng)相、碰撞能量等3種因素對(duì)目標(biāo)物的影響，進(jìn)一

步優(yōu)化以確保得到最適最優(yōu)的儀器參數(shù)條件。

1.1儀器條件優(yōu)化---離子對(duì)的選擇

由化合物性質(zhì)選擇合適的母離子掃描范圍，確定化合物母離子。再通

過子離子掃描模式確定子離子，以響應(yīng)較高的子離子作為定量離子。由于

儀器存在一定誤差，故母離子、子離子保留小數(shù)點(diǎn)后一位。

（1）玉米素

由圖可知，玉米素的母離子為220.21，其子離子136.02、220.15響應(yīng)較

強(qiáng)，故選取220.2/136作為玉米素的定量離子，220.2/220.2作為玉米素的

定性離子。

圖1玉米素離子對(duì)信息圖

（2）玉米素核苷

6

由圖可知，玉米素核苷的母離子為352.22，其子離子136.08、220.22

響應(yīng)較強(qiáng)，故選取352.2/136.1作為玉米素核苷的定量離子，352.2/220.2

作為玉米素核苷的定性離子。

圖玉米素核苷子離子碎片圖

圖2玉米素核苷離子對(duì)信息圖

（3）生長素

由圖可知，生長素的母離子為176.15，其子離子129.98、102.86響應(yīng)

較強(qiáng)，故選取176.1/130作為生長素的定量離子，176.1/102.9作為生長素

的定性離子。

圖3生長素離子對(duì)信息圖

（4）赤霉素

7

由圖可知，赤霉素的母離子為345.08，其子離子142.99、221.06響應(yīng)

較強(qiáng)，故選取345.1/143作為赤霉素的定量離子，345.1/221.1作為赤霉素

的定性離子。

圖4赤霉素離子對(duì)信息圖

（5）脫落酸

由圖可知，脫落酸的母離子為263.08，其子離子152.99、219.08響應(yīng)

較強(qiáng)，故選取263.1/153作為脫落酸的定量離子，263.1/219.1作為脫落酸

的定性離子。

圖5脫落酸離子對(duì)信息圖

（6）水楊酸

8

由圖可知，水楊酸的母離子為137.11，其子離子93.14、65.11響應(yīng)較

強(qiáng)，故選取137.1/93.1作為水楊酸的定量離子，137.1/65.1作為水楊酸的

定性離子。

圖6水楊酸離子對(duì)信息圖

（7）茉莉酸

由圖可知，茉莉酸的母離子為209.15，其子離子59.19響應(yīng)較強(qiáng)，故選

取209.1/59.2作為茉莉酸的定量離子。

圖7茉莉酸離子對(duì)信息圖

1.2儀器條件優(yōu)化---流動(dòng)相的選擇

以B:甲醇-A:甲酸水、B:甲醇-A:水、B:乙腈-A:甲酸水、B:乙腈-A:水T

分別作為流動(dòng)相，參照洗脫程序如表，得到如圖7-圖10,比較峰型及目標(biāo)峰

的分離程度，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)以B:甲醇-A:甲酸水為流動(dòng)相得到的峰型最佳，分離

度最好，故選擇B:甲醇-A:甲酸水作為流動(dòng)相。

表1洗脫程序

9

時(shí)間/min流速mL/min流動(dòng)相A比例/%流動(dòng)相B比例/%

00.38020

60.35050

80.30100

100.30100

10.10.38020

130.38020

（1）B:甲醇-A:甲酸水

圖87種激素色譜圖（流動(dòng)相：甲醇-甲酸水）

（2）B:甲醇-A:水

圖97種激素色譜圖（流動(dòng)相：甲醇-水）

（3）B:乙腈-A:甲酸水

10

圖107種激素色譜圖（流動(dòng)相：乙腈-甲酸水）

（4）B:乙腈-A:水

圖117種激素色譜圖（流動(dòng)相：乙腈-水）

1.3儀器條件優(yōu)化---碰撞氣能量

11

（1）玉米素

由圖可知，離子對(duì)220.2/136在20V碰撞能量時(shí)，響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇20V

作為離子對(duì)220.2/136的碰撞能量；離子對(duì)220.2/202.2在14V碰撞能量時(shí)，

響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇14V作為離子對(duì)220.2/202.2的碰撞能量。

圖12玉米素不同碰撞能響應(yīng)譜圖

（2）玉米素核苷

由圖可知，離子對(duì)352.2/220.2在20V碰撞能量時(shí)，響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇

20V作為離子對(duì)352.2/220.2的碰撞能量；離子對(duì)352.2/136.1在42V碰撞能

量時(shí)，響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇42V作為離子對(duì)352.2/136.1的碰撞能量。

圖12玉米素核苷不同碰撞能響應(yīng)譜圖

（3）生長素

12

由圖可知，離子對(duì)176.1/102.9在40V碰撞能量時(shí)，響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇

40V作為離子對(duì)176.1/102.9的碰撞能量；離子對(duì)176.1/130在18V碰撞能量

時(shí)，響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇18V作為離子對(duì)176.1/130的碰撞能量。

圖13生長素不同碰撞能響應(yīng)譜圖

（4）赤霉素

由圖可知，離子對(duì)345.1/143在36V碰撞能量時(shí)，響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇36V

作為離子對(duì)345.1/143的碰撞能量；離子對(duì)345.1/221.1在36V碰撞能量時(shí)，

響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇36V作為離子對(duì)345.1/221.1的碰撞能量。

圖14赤霉素不同碰撞能響應(yīng)譜圖

（5）脫落酸

由圖可知，離子對(duì)263.1/153在12V碰撞能量時(shí)，響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇12V

作為離子對(duì)263.1/153的碰撞能量；離子對(duì)263.1/219.1在14V碰撞能量時(shí)，

響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇14V作為離子對(duì)263.1/219.1的碰撞能量。

13

圖15脫落酸不同碰撞能響應(yīng)譜圖

（6）水楊酸

由圖可知，離子對(duì)137.1/93.1在18V碰撞能量時(shí)，響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇18V

作為離子對(duì)137.1/93.1的碰撞能量；離子對(duì)137.1/93.1在34V碰撞能量時(shí)，

響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇34V作為離子對(duì)137.1/93.1的碰撞能量。

圖16水楊酸不同碰撞能響應(yīng)譜圖

（7）茉莉酸

由圖可知，離子對(duì)209.1/59.2在14V碰撞能量時(shí)，響應(yīng)最強(qiáng)，故選擇14V

作為離子對(duì)209.1/59.2的碰撞能量。

14

圖17茉莉酸不同碰撞能響應(yīng)譜圖

經(jīng)過儀器方法開發(fā)與優(yōu)化，本標(biāo)準(zhǔn)提供了儀器參考條件如下：

A.高效液相色譜參考條件

a）色譜柱：WatersACQUITYUPLCBEHC18(1.7μm,2.1×100mm)，

或性能相當(dāng)者。

b）流動(dòng)相：A：0.1％甲酸-水溶液，B：甲醇。

c）流速：0.30mL/min，梯度洗脫程序見表2。

d）柱溫：40℃。

e）進(jìn)樣量：2μL。

表2梯度洗脫程序表

梯度時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%

08020

65050

80100

100100

10.18020

138020

15

B.質(zhì)譜分析參考條件

a)離子源：電噴霧離子源（ESI）；

b)掃描模式：正離子掃描模式和負(fù)離子掃描模式；

c)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

d)干燥氣、霧化氣、碰撞氣均為高純氮?dú)猓?/p>

e)離子源溫度：110℃；

f)電噴霧電壓：4800V；

g)碰撞氣流量：0.75mL/min；

h)去溶劑氣流量：6L/min；

i)去溶劑氣溫度：480℃；

j)監(jiān)測(cè)離子對(duì)、錐孔電壓、碰撞氣能量參數(shù)見表3。

表37種植物激素的保留時(shí)間、監(jiān)測(cè)離子對(duì)、錐孔電壓和碰撞能量

保留錐孔碰撞

序英文名定量離子定性離子

中文名稱時(shí)間電壓能量

號(hào)縮寫m/zm/z

minVV

正離子掃描模式

1玉米素Z1.30220.2/136220.2/136；220.2/202.25020；14

352.2/136.1；

2玉米素核苷ZR2.18352.2/136.15042；20

352.2/220.2

3生長素IAA4.39176.1/130176.1/130；176.1/102.95018；40

負(fù)離子掃描模式

4赤霉素A3GA33.79345.1/143345.1/143；345.1/221.15036；36

5水楊酸SA4.98137.1/93.1137.1/93.1；137.1/65.15018；34

6脫落酸ABA6.27263.1/219.1263.1/219.1；263.1/1535014；12

7茉莉酸JA7.38209.1/59.2209.1/59.25014

（二）前處理方法

取新鮮的葡萄植株，如葉、芽、果等供試樣，迅速用水洗凈樣品附著

的雜物，表面水分用吸水紙擦干，立即保存于液氮中，取出于研缽中加液

氮磨細(xì)，混勻，立即轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱避光保存。稱取0.2g（精確至0.1mg）

制備好的試樣于15mL塑料離心管中，加入2mL預(yù)冷（4℃）的提取劑，置

于5℃震蕩儀中以200r/min振蕩1h后，加入4mL預(yù)冷（4℃）的二氯甲烷，

16

再繼續(xù)震蕩1h后，取二氯甲烷層氮吹干。加入0.5mL預(yù)冷（4℃）的50%甲

醇溶液復(fù)溶，渦旋混勻后，經(jīng)0.22μm濾膜過濾，濾液供液相色譜-質(zhì)譜/

質(zhì)譜儀測(cè)定。

通過提取溶劑提取效率，優(yōu)化提取工藝以確保得到最適最優(yōu)的提取效

率。分別以異丙醇+水+鹽酸、異丙醇+水+甲酸、甲醇+水+鹽酸、甲醇+水+

甲酸作為提取溶劑，通過測(cè)定含量對(duì)不同提取溶劑的提取效率進(jìn)行評(píng)價(jià)，

不同提取溶劑的提取效率對(duì)比數(shù)據(jù)詳見表4。實(shí)驗(yàn)表明，作為提取劑時(shí)，提

取效率較高。綜上所述，選擇異丙醇+水+鹽酸=2+1+0.003作為提取溶劑。

表4提取溶劑對(duì)測(cè)定值的影響

含量ng/g

提取溶劑

玉米素

(v/v/v)玉米素赤霉素A3生長素水楊酸脫落酸茉莉酸

核苷

異丙醇+水+鹽酸

0.4132.210.1801.52128054925.5

=2+1+0.001

異丙醇+水+鹽酸

0.3681.170.2501.48136849825.0

=2+1+0.002

異丙醇+水+鹽酸

0.4852.300.2111.53114360226.4

=2+1+0.003

異丙醇+水+鹽酸

0.3481.850.2031.74138555822.1

=2+1+0.004

異丙醇+水+甲酸

0.3842.140.1421.30122750420.8

=2+1+0.001

異丙醇+水+甲酸

0.3732.140.1291.34130153121.9

=2+1+0.002

異丙醇+水+甲酸

0.3912.340.06351.46152355926.0

=2+1+0.003

異丙醇+水+甲酸

0.3632.070.09101.60126356820.4

=2+1+0.004

異丙醇+水+鹽酸

0.2580.4410.2481.54165955525.7

=2+1+0.001

異丙醇+水+鹽酸

0.2320.3760.2241.59165453029.7

=2+1+0.002

異丙醇+水+鹽酸0.2260.4080.1701.23152547823.4

17

=2+1+0.003

異丙醇+水+鹽酸

0.2670.3660.3071.62165348824.4

=2+1+0.004

異丙醇+水+甲酸

0.2220.4090.2681.46185050926.0

=2+1+0.001

異丙醇+水+甲酸

0.2540.3250.2061.33204453823.4

=2+1+0.002

異丙醇+水+甲酸

0.2520.3510.1150.655180944422.5

=2+1+0.003

異丙醇+水+甲酸

0.2470.3250.3420.558195851326.0

=2+1+0.004

（三）檢出限及測(cè)定下限

參照《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T27417-2017）

d信噪比法評(píng)估LOD。利用已知低濃度的分析物樣品與空白樣品的

測(cè)量信號(hào)進(jìn)行比較，確定能夠可靠檢出的最小的濃度。典型的可接受的信

噪比是2:1或3:1。以3倍基線噪聲作為檢出限，3倍檢出限作為測(cè)定下限。

稱樣量為0.2g，定容體積為0.5mL時(shí)，檢出限見表5。

表57種激素檢出限

序號(hào)待測(cè)組分檢出限/(ng/g)信噪比S/N

1玉米素0.2504.7

2玉米素核苷0.0253.8

3生長素0.1254.0

4赤霉素0.2503.4

5水楊酸0.1253.7

6脫落酸0.2504.5

7茉莉酸0.1254.1

18

（四）線性范圍

準(zhǔn)確移取10mg/L7種植物激素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配成質(zhì)量濃度分別為

0.1ng/mL~100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。由低質(zhì)量濃度到高質(zhì)量濃度依次對(duì)

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣，以被測(cè)物的峰面積為縱坐標(biāo)，以被測(cè)物的濃度為橫坐

標(biāo)，根據(jù)樣品含量建立適當(dāng)范圍的校準(zhǔn)曲線，得到待測(cè)物的線性方程和相

關(guān)系數(shù)如表6，詳細(xì)參數(shù)見圖18~圖24。

表67種激素線性方程及相關(guān)系數(shù)

相關(guān)系數(shù)

序號(hào)待測(cè)組分濃度范圍線性方程

R

1玉米素0.1ng/mL~5ng/mLy=59562.1891x+1239.45070.9999

2玉米素核苷0.1ng/mL~5ng/mLy=58744.7424x+2434.62150.9999

3生長素0.1ng/mL~5ng/mLy=32095.2029x+1169.40450.9999

4赤霉素A30.1ng/mL~20ng/mLy=5807.1252x+1124.70390.9999

5水楊酸1.0ng/mL~100ng/mLy=41900.3549x+19245.56490.9999

6脫落酸1.0ng/mL~100ng/mLy=6286.5413x-811.36200.9999

7茉莉酸1.0ng/mL~100ng/mLy=7039.4284x+1768.58020.9999

19

圖18玉米素線性范圍

圖19玉米素核苷線性范圍

圖20赤霉素線性范圍

20

圖21生長素線性范圍

圖22水楊酸線性范圍

21

圖23脫落酸線性范圍

圖24茉莉酸線性范圍

22

（五）精密度

本試驗(yàn)分別取葡萄植株葉、芽、果三種樣品進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)定，對(duì)精

密度進(jìn)行評(píng)價(jià)，測(cè)定結(jié)果詳見表。

表7樣品中玉米素測(cè)定精密度

玉米素含量/（ng/g）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型偏差

測(cè)定值1測(cè)定值2測(cè)定值3測(cè)定值4測(cè)定值5測(cè)定值6平均值%

葉0.7420.7400.7390.7390.7460.7390.7410.4

芽0.8990.8420.8510.8880.8440.9000.8713.2

果0.4980.4980.5410.4990.4970.5520.5144.9

表8樣品中玉米素核苷測(cè)定精密度

玉米素核苷含量/（ng/g）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型偏差

測(cè)定值1測(cè)定值2測(cè)定值3測(cè)定值4測(cè)定值5測(cè)定值6平均值%

葉0.7350.7370.7270.7480.7330.7680.7412.0

芽0.9200.9180.9220.9100.8860.9210.9131.5

果0.1030.1000.1130.09830.09880.1010.1025.4

表9樣品中赤霉素測(cè)定精密度

赤霉素含量/（ng/g）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型偏差

測(cè)定值1測(cè)定值2測(cè)定值3測(cè)定值4測(cè)定值5測(cè)定值6平均值%

葉0.4490.4220.4630.5160.4560.4470.4596.8

芽0.9640.9140.9610.9560.9590.9390.9492.0

果24.524.424.524.424.424.424.40.2

23

表10樣品中生長素測(cè)定精密度

生長素含量/（ng/g）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型偏差

測(cè)定值1測(cè)定值2測(cè)定值3測(cè)定值4測(cè)定值5測(cè)定值6平均值%

葉3.743.653.703.763.683.713.711.0

芽1.261.231.201.221.231.171.222.5

果1.191.181.131.241.241.281.214.5

表11樣品中水楊酸測(cè)定精密度

水楊酸含量/（ng/g）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型偏差

測(cè)定值1測(cè)定值2測(cè)定值3測(cè)定值4測(cè)定值5測(cè)定值6平均值%

葉57.557.057.658.357.557.457.60.7

芽43.843.842.643.743.742.743.40.3

果3.723.703.483.703.803.673.682.9

表12樣品中脫落酸測(cè)定精密度

脫落酸含量/（ng/g）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型偏差

測(cè)定值1測(cè)定值2測(cè)定值3測(cè)定值4測(cè)定值5測(cè)定值6平均值%

葉23.825.125.026.125.025.125.03.0

芽18.320.319.919.820.119.819.73.6

果24.924.825.524.724.424.724.81.4

表13樣品中茉莉酸測(cè)定精密度

茉莉酸含量/（ng/g）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型偏差

測(cè)定值1測(cè)定值2測(cè)定值3測(cè)定值4測(cè)定值5測(cè)定值6平均值%

葉73.974.774.274.176.074.474.51.0

芽54.854.254.954.955.654.854.90.8

果11.711.311.711.312.011.711.62.4

24

由表可知，葡萄植株中葉、芽、果三種樣品6次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

偏差均低于10%，精密度符合GB/T27404-2008質(zhì)量要求。

（六）正確度

選取不同類型樣品分別進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，對(duì)正確度進(jìn)行評(píng)價(jià)，測(cè)定結(jié)果

詳見表。

表14葡萄葉樣品中玉米素的加標(biāo)回收率

測(cè)定項(xiàng)目玉米素（葡萄葉）

樣品加標(biāo)

測(cè)定結(jié)果/（ng/g）回收率

樣品類型含量量

要求范圍

1#2#3#4#5#6#ng/gng/g

低測(cè)定值1.521.521.591.501.591.51/

含1

加標(biāo)

量78.277.984.976.284.576.760%~120%

回收率%

中測(cè)定值5.265.495.455.235.435.17/

含0.7415

加標(biāo)

量90.495.094.189.993.788.760%~120%

回收率%

高測(cè)定值11.110.811.011.010.911.0/

含10

加標(biāo)

量103.8100.5102.9102.7102.0102.460%~120%

回收率%

25

表15葡萄葉樣品中玉米素核苷的加標(biāo)回收率

測(cè)定項(xiàng)目玉米素核苷（葡萄葉）

樣品加標(biāo)

測(cè)定結(jié)果/（ng/g）回收率

樣品類型含量量

要求范圍

1#2#3#4#5#6#ng/gng/g

低測(cè)定值1.751.761.751.731.771.77/

含1

加標(biāo)

量100.7101.8101.299.1102.6103.160%~120%

回收率%

中測(cè)定值5.505.325.495.505.585.49/

含0.7415

加標(biāo)

量95.291.694.995.296.894.960%~120%

回收率%

高測(cè)定值10.510.510.510.510.510.5/

含10

加標(biāo)

量97.797.597.897.597.598.060%~120%

回收率%

表16葡萄葉樣品中赤霉素的加標(biāo)回收率

測(cè)定項(xiàng)目赤霉素（葡萄葉）

樣品加標(biāo)

測(cè)定結(jié)果/（ng/g）回收率

樣品類型含量量

要求范圍

1#2#3#4#5#6#ng/gng/g

低測(cè)定值1.221.211.211.221.151.23/

含1

加標(biāo)

量76.075.375.476.068.777.260%~120%

回收率%

中測(cè)定值4.614.644.544.584.624.68/

含0.4595

加標(biāo)

量83.183.781.782.583.284.360%~120%

回收率%

高測(cè)定值9.369.349.349.349.358.98/

含10

加標(biāo)

量89.088.888.888.888.985.260%~120%

回收率%

26

表17葡萄葉樣品中生長素的加標(biāo)回收率

測(cè)定項(xiàng)目生長素（葡萄葉）

樣品加標(biāo)

測(cè)定結(jié)果/（ng/g）回收率

樣品類型含量量

要求范圍

1#2#3#4#5#6#ng/gng/g

低測(cè)定值4.504.524.404.514.504.57/

含1

加標(biāo)

量78.881.269.280.779.586.560%~120%

回收率%

中測(cè)定值7.517.897.867.908.017.83/

含3.715

加標(biāo)

量76.283.883.183.986.182.460%~120%

回收率%

高測(cè)定值11.712.212.412.212.311.9/

含10

加標(biāo)

量79.985.087.285.086.082.060%~120%

回收率%

表18葡萄葉樣品中水楊酸的加標(biāo)回收率

測(cè)定項(xiàng)目水楊酸（葡萄葉）

樣品加標(biāo)

測(cè)定結(jié)果/（ng/g）回收率

樣品類型含量量

要求范圍

1#2#3#4#5#6#ng/gng/g

低測(cè)定值58.558.458.458.558.558.5/

含1

加標(biāo)

量90.387.785.088.992.888.960%~120%

回收率%

中測(cè)定值61.861.762.561.961.961.8/

含57.65

加標(biāo)

量85.682.198.586.287.484.160%~120%

回收率%

高測(cè)定值65.866.066.265.865.865.9/

含10

加標(biāo)

量82.584.385.982.282.583.160%~120%

回收率%

27

表19葡萄葉樣品中脫落酸的加標(biāo)回收率

測(cè)定項(xiàng)目脫落酸（葡萄葉）

樣品加標(biāo)

測(cè)定結(jié)果/（ng/g）回收率

樣品類型含量量

要求范圍

1#2#3#4#5#6#ng/gng/g

低測(cè)定值25.925.825.825.825.925.8/

含1

加標(biāo)

量92.282.784.981.387.384.760%~120%

回收率%

中測(cè)定值29.329.829.629.829.729.5/

含25.05

加標(biāo)

量86.596.892.796.494.390.160%~120%

回收率%

高測(cè)定值33.933.334.333.633.833.5/

含10

加標(biāo)

量88.983.292.885.788.085.360%~120%

回收率%

表20葡萄葉樣品中茉莉酸的加標(biāo)回收率

測(cè)定項(xiàng)目茉莉酸（葡萄葉）

樣品加標(biāo)

測(cè)定結(jié)果/（ng/g）回收率

樣品類型含量量

要求范圍

1#2#3#4#5#6#ng/gng/g

低測(cè)定值75.575.575.475.575.575.4/

含1

加標(biāo)

量100.093.589.592.597.188.760%~120%

回收率%

中測(cè)定值78.778.778.778.779.278.6/

含74.55

加標(biāo)

量83.082.584.082.393.481.860%~120%

回收率%

高測(cè)定值82.983.082.882.983.083.0/

含10

加標(biāo)

量83.484.582.684.084.784.560%~120%

回收率%

28

表21