國家自然科學(xué)基金講座

新形勢下國家自然科學(xué)

基金申報的方法與策略

2012.10.31新形勢國家層面資助額度和年限的變化各領(lǐng)域研究熱點的變化指南內(nèi)容二審中評委人員的變化學(xué)校層面數(shù)量和比例的變化一、國家自然科學(xué)基金資助體系三大體系：項目資助體系人才培養(yǎng)資助體系環(huán)境條件項目體系國家自然科學(xué)基金資助格局項目資助體系人才培養(yǎng)體系面上項目重點項目重大項目重大研究計劃國際合作與交流國家杰出青年科學(xué)基金海外及港澳學(xué)者合作研究基金創(chuàng)新研究群體科學(xué)基金國家基礎(chǔ)科學(xué)人才培養(yǎng)基金青年科學(xué)基金\地區(qū)基金專項項目聯(lián)合資助定位：面上項目：全面均衡布局，瞄準(zhǔn)科學(xué)前沿，促進(jìn)學(xué)科發(fā)展，激勵原始創(chuàng)新；青年基金：“起步基金”，培育后繼人才，扶持獨立研究，激勵創(chuàng)新思維；重點項目：指南引導(dǎo)優(yōu)先領(lǐng)域，瞄準(zhǔn)國際前沿整合創(chuàng)新資源，孕育重點突破；重大項目：面向國家重大需求，選擇關(guān)鍵科學(xué)問題，匯聚力量多學(xué)科交叉；杰出青年科學(xué)基金、科學(xué)儀器基礎(chǔ)研究專款、重大國際(地區(qū))合作研究項目等。

對基礎(chǔ)研究和應(yīng)用基礎(chǔ)研究項目的資助主要資助類型：面上項目:

包括一般面上項目和青年基金項目自由探索，自由選題重點項目：學(xué)科前沿、新生長點；重要意義重大項目：重大科學(xué)問題杰出青年基金項目：45歲以下地區(qū)科學(xué)基金項目二、選題強調(diào)新穎、有特色關(guān)鍵是創(chuàng)新，國內(nèi)第一無優(yōu)勢最好選擇研究領(lǐng)域的主流方向有學(xué)科前沿研究內(nèi)容的潛在內(nèi)涵要有具體的切入點，避免“大、空、泛”要注重科學(xué)意義與學(xué)術(shù)價值要凝練申請項目的文字表述，要力爭用最少的文字，簡單易懂，讓評審者能迅速體會到項目的創(chuàng)新性和科學(xué)意義評價標(biāo)書好壞的首要條件是選題：選題不好，即使修改也不會中標(biāo)除上面提到的選題標(biāo)準(zhǔn)之外，針對醫(yī)學(xué)工作者，好的選題應(yīng)該是：（1）從臨床實際工作中提煉“申報的題目”，充分利用臨床病例，在此基礎(chǔ)上，再應(yīng)用模式材料—細(xì)胞、實驗動物拔高，或在基礎(chǔ)研究中發(fā)現(xiàn)的新現(xiàn)象，一定要與臨床病人相聯(lián)系；（2）要符合國際研究新動向（新理論、新技術(shù)）；（3）要考慮其科學(xué)意義和潛在的實際應(yīng)用價值—是否有潛在的用途或揭示新的致病機制

選題一定要有自己的工作基礎(chǔ)（自然基金特別強調(diào)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的工作基礎(chǔ)），一般要提前半年或一年選題，一旦選定后，注意工作積累，補充支持選題的實驗數(shù)據(jù)。三、如何撰寫申請書(一)摘要(限400字)

包括：研究方法、內(nèi)容、目標(biāo)、科學(xué)意義等。一般撰寫格式：如：“用……方法（手段）進(jìn)行……研究，探索/證明……問題，對闡明……機制／揭示……規(guī)律有重要意義，為……奠定基礎(chǔ)／提供……思路”或以前期工作中發(fā)現(xiàn)的一個新現(xiàn)象開頭，描述本項目將從哪些方面探索隱藏在該現(xiàn)象之后的機制和規(guī)律，并說明闡明之后的科學(xué)意義。可以是最先撰寫或最后撰寫采用分子生物學(xué)、組織學(xué)、電生理學(xué)及放射性示蹤等方法，研究低頻超聲選擇性開放血腫瘤屏障的作用效果，分析在血腫瘤屏障開放過程中參與血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接開放和胞吞轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白的變化，揭示低頻超聲開放血腫瘤屏障的作用機制。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合緩激肽對血腦屏障的選擇性開放作用，研究低頻超聲及低頻超聲與緩激肽協(xié)同作用對治療膠質(zhì)瘤的化療藥物卡鉑的轉(zhuǎn)運效果，以及對腦膠質(zhì)瘤大鼠生存時間的影響。本研究項目不僅能夠揭示低頻超聲開放血腫瘤屏障的作用機制，而且能為選擇性開放血腫瘤屏障和血腦屏障，治療腦膠質(zhì)瘤等神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供新途徑。(二)、項目組組成成員結(jié)構(gòu)合理：6-10名，其中高級1-2名、中級2-3名、技術(shù)人員1-2名、研究生不少于2名

青年科學(xué)基金：應(yīng)以青年人為主副高職以上人員不能在兩個以上的面上項目中出現(xiàn)（可以是兩個）備注：副高職以上人員出現(xiàn)的最多次數(shù)3次，但其中1項只能為重點或重大項目，注意基金委的要求在變化(三)、經(jīng)費申請實驗材料費：60-70%

人員費：（勞務(wù)費）5%

管理費：5%

儀器費：不填，要填則小于10%；不要購置5萬元以上儀器設(shè)備合作費/協(xié)作費：小于10%其他經(jīng)費資助（含部門匹配）：不填整體經(jīng)費要恰當(dāng)，過多和過少都對中標(biāo)無益(四)、立論依據(jù)這部分內(nèi)容是整個標(biāo)書的核心，一般評審標(biāo)書人員都是根據(jù)立題依據(jù)而做出判斷是否資助（同時結(jié)合工作基礎(chǔ)）對基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國際科學(xué)發(fā)展趨勢，論述項目科學(xué)意義。對應(yīng)用基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合學(xué)科前沿，圍繞國民經(jīng)濟和社會發(fā)展中的重要科技問題論述其應(yīng)用前景。立題依據(jù)在寫法上應(yīng)分段，一段說明一個問題。在研究領(lǐng)域（疾病診防治）層面從研究方向展開圍繞本項目擬解決的問題進(jìn)行歸納分析提出設(shè)想從研究領(lǐng)域（疾病診防治）切入研究意義立論依據(jù)1、項目的研究意義撰寫方法：從疾病入手，簡述其特點、危害，目前主要的治療方法及其存在的問題。

簡要分析該病發(fā)病機理和主要研究熱點，引出目前存在的主要問題，也就是本項目要解決的問題，以此為切入點提出假設(shè)，闡述如果實現(xiàn)預(yù)期目標(biāo)，對該病甚至相關(guān)疾病的預(yù)防、治療具有的理論意義和臨床價值。

在腦膠質(zhì)瘤組織中，盡管腫瘤細(xì)胞破壞了部分血腦屏障(BBB)的正常結(jié)構(gòu)，但血液與腦腫瘤組織之間仍然存在著屏障，即主要由腦腫瘤毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞形成的血腫瘤屏障(BTB)，顯著限制了治療性藥物向腫瘤組織中的轉(zhuǎn)運。在過去的10年中，為了將治療藥物選擇性轉(zhuǎn)運至腦腫瘤組織，科學(xué)家們進(jìn)行了大量的努力，例如，通過化學(xué)方法使藥物脂溶性增加，使用載體協(xié)助穿越血腫瘤屏障，頸動脈內(nèi)注射高滲溶液或其它能夠增加血腫瘤屏障通透性的藥物。然而這些在實驗階段均顯示良好療效的方法，因其選擇性開放血腦屏障的程度不一，在臨床前期實驗中均顯示出了治療的局限性，限制了它們的應(yīng)用。因此，如果能尋找到有效、高選擇性開放血腦屏障的方法，將能為腦腫瘤患者的臨床化療提供一個新的低損傷、高效能的治療方案。2、國內(nèi)外現(xiàn)狀分析（不等于綜述）特別要指出尚存在的或未解決的問題(可以是1~3段)存在問題：

文獻(xiàn)復(fù)習(xí)不夠，對國內(nèi)外現(xiàn)狀缺乏真正了解，提出的問題別人已解決---低水平重復(fù)。對研究方法不熟悉，簡單移植或夸大其作用，缺乏實際應(yīng)用的可行性---無法實現(xiàn)預(yù)期目標(biāo)。

---已有方法與掌握方法的人的結(jié)合；

---方法理論上可行與現(xiàn)實可行性的結(jié)合。對國內(nèi)外現(xiàn)狀缺乏歸納分析，只是簡單羅列，缺乏邏輯性和針對性---總結(jié)與表達(dá)不夠。3、描述工作基礎(chǔ)

描述自己的前期工作結(jié)果，并說明這些工作結(jié)果與解決目前國內(nèi)外尚未解決的問題的關(guān)系(提出工作假說/假設(shè))；特別關(guān)鍵性的工作結(jié)果可以在文字后附上1-2個圖(最好是圖片，其他工作結(jié)果可附在后續(xù)工作基礎(chǔ)中，并注明)。4、說明本課題究竟去做什么，解決什么問題，這些問題的解決究竟有何科學(xué)意義和應(yīng)用價值/前景（最好能與在國內(nèi)外研究進(jìn)展一段中所指出的尚未解決或存在的問題有關(guān)聯(lián)）

我們在已結(jié)題的國家自然科學(xué)基金（No.)中，構(gòu)建了多基因重組單純皰疹病毒，研究了腦膠質(zhì)瘤的基因治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)應(yīng)用緩激肽選擇性開放大鼠血腫瘤屏障后，灌注重組單純皰疹病毒引起的腫瘤治療效果顯著優(yōu)于腫瘤內(nèi)局部注射重組單純皰疹病毒的效果。但是緩激肽選擇性開放血腦屏障持續(xù)時間短，應(yīng)用此方法進(jìn)行目前以靜脈滴注為主的化療藥物等的藥物轉(zhuǎn)運時，因血腦屏障開放時間的限制，難以達(dá)到有效提高腫瘤組織中藥物濃度的目的。

為了能夠達(dá)到臨床應(yīng)用的目的，必須找到持續(xù)時間長、高選擇性開放血腦屏障的方法，結(jié)合腦膠質(zhì)瘤術(shù)后存在減壓骨窗的特點，我們嘗試了采用低頻超聲輻照選擇性開放血腦屏障的方法。預(yù)先給予大鼠造影劑Optison后用低頻超聲輻照腦組織，結(jié)果發(fā)現(xiàn)輻照部位的血腦屏障出現(xiàn)了可逆性開放，且輻照部位沒有紅細(xì)胞滲出等損傷。血腦屏障在低頻輻照后30分鐘顯著開放，開放的持續(xù)時間為5小時，5小時后血腦屏障逐漸關(guān)閉。

應(yīng)用超聲調(diào)節(jié)血腦屏障通透性報道極少。高頻超聲能造成血腦屏障結(jié)構(gòu)的破壞。關(guān)于低頻超聲輻照開放血腦屏障方面的研究在國內(nèi)未見報道，國外研究也剛剛開始。令我們感到十分緊迫的是，最近，美國有人報道了用超聲手段選擇性開放血腦屏障的探索研究，這篇報道是應(yīng)用超聲開放了家兔的血腦屏障，但是采用的超聲頻率和其它技術(shù)條件以及動物模型與我們的都不同。結(jié)合我們的工作和國外的文獻(xiàn)報道，說明用超聲手段選擇性開放血腦屏障是一個有很大研究價值的新課題。應(yīng)用超聲開放血腦屏障的機制不清。近日，我們培養(yǎng)了大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(附圖)，建立了體外血腦屏障模型；采用免疫熒光法檢測發(fā)現(xiàn)，低頻超聲輻照后的體外血腦屏障模型上的微血管內(nèi)皮細(xì)胞的緊密連接相關(guān)蛋白Claudin-5呈不連續(xù)狀態(tài)分布，提示緊密連接開放(附圖)；透射電鏡掃描觀察到，正常大鼠輻照后30分鐘腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接開放(附圖)。這些結(jié)果提示，低頻超聲輻照引起的血腦屏障開放可能與內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接開放有關(guān)。

應(yīng)用低頻超聲選擇性開放血腦屏障主要可能由超聲波和造影劑對腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞造成的物理學(xué)上的和生化學(xué)上的反應(yīng)所致。例如，低頻超聲波可能導(dǎo)致造影劑在毛細(xì)血管內(nèi)膨脹和收縮，膨脹充滿整個毛細(xì)血管管腔，可能導(dǎo)致血管壁機械性拉長。我們推測這種拉長作用可能導(dǎo)致緊密連接的開放。同時，毛細(xì)血管內(nèi)壓力的變化也可誘發(fā)生化反應(yīng)，引起血腦屏障的開放，而且血壓的增加和改變也影響血腦屏障。造影劑的降解，可能引起一系列反應(yīng)開放血腦屏障。無論物理學(xué)的還是生化學(xué)的反應(yīng)，選擇性開放血腦屏障的最終作用點是腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞。

結(jié)合國外研究進(jìn)展和我們長期的關(guān)于選擇性開放血腦屏障機制方面的研究，我們認(rèn)為應(yīng)用低頻超聲選擇性開放血腦屏障的機制可能為：1.內(nèi)皮細(xì)胞的胞吞轉(zhuǎn)運作用增強；2.內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接部分開放；3.某些通道開放。本研究將主要集中在內(nèi)皮細(xì)胞的胞吞轉(zhuǎn)運作用和內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接的結(jié)構(gòu)和功能變化上，以探索尋找出選擇性開放血腦屏障的新靶點。

本項目首先要研究低頻超聲輻照選擇性開放血腦屏障的機制；進(jìn)一步把這種方法用于腦膠質(zhì)瘤的化療研究(膠質(zhì)瘤術(shù)后的骨窗更是應(yīng)用低頻超聲進(jìn)而開放血腦屏障的理想部位)，驗證低頻超聲輻照是否能夠選擇性開放血腫瘤屏障，用這種方法轉(zhuǎn)運化療藥物進(jìn)入膠質(zhì)瘤組織中，觀察其療效，同時研究低頻超聲輻照選擇性開放血腫瘤屏障的機制；

第三，由于緩激肽可以選擇性地開放血腦屏障，本研究將研究低頻超聲輻照和緩激肽協(xié)同作用對選擇性開放血腫瘤屏障的作用效果。期望達(dá)到高選擇性、持續(xù)時間長地開放血腫瘤屏障，更易于轉(zhuǎn)運化療藥物的目的。本研究不僅能為腦腫瘤患者的臨床化療提供一個新的低損傷、高效能的治療方案，也能為其它神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物治療提供新途徑。5、參考文獻(xiàn)要寫全作者，應(yīng)包含年限新的文獻(xiàn)（也最好引用自己的重要文獻(xiàn)），參考文獻(xiàn)以20篇左右為宜

A、要以英文文獻(xiàn)為主，同時也要引用國內(nèi)同行知名專家的文獻(xiàn)。

B、引言信息要全：文章題目、作者姓名、具體出處（包括期刊名、年份、卷期、頁碼等）。

C、主要引用近五年的文獻(xiàn)，最好能有申請當(dāng)年的最新文獻(xiàn)。(五)項目的研究內(nèi)容、研究目標(biāo)，以及擬解決的關(guān)鍵科學(xué)問題1、研究目標(biāo)要與研究內(nèi)容有區(qū)分，應(yīng)寫出本課題完成之后所達(dá)到的目的和能解決的科學(xué)問題撰寫要求：有限目標(biāo)，與研究內(nèi)容相呼應(yīng)，3條左右。

如：探索……問題，明確……關(guān)系，揭示……規(guī)律，闡明……原理（機制），建立……方法等。研究目標(biāo)：(1)研究低頻超聲輻照在選擇性開放血腫瘤屏障中的作用，探討低頻超聲輻照開放血腦屏障和血腫瘤屏障的作用機制。(2)研究低頻超聲輻照對治療膠質(zhì)瘤的化療藥物卡鉑的轉(zhuǎn)運效果的影響，以及對腦膠質(zhì)瘤大鼠生存時間的影響。(3)探索低頻超聲輻照和緩激肽的協(xié)同作用對血腫瘤屏障開放效果的影響，對腦膠質(zhì)瘤大鼠生存時間的影響，為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。2、研究內(nèi)容：為目標(biāo)服務(wù)，說明為完成目標(biāo)，去做什么；撰寫的一般模式：應(yīng)該逐條寫出所要解決的具體科學(xué)問題，如：1……;2……;3……;4……。在每一個科學(xué)問題之后，可以適當(dāng)有使讀者能看懂的必要說明、技術(shù)思路（也可包括關(guān)鍵動物及技術(shù)）；內(nèi)容要適當(dāng)，能確保在研究周期內(nèi)完成，面上項目一般為5-7個具體內(nèi)容。存在問題：

內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。撰寫要求：內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周期內(nèi)完成；與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)服務(wù)；篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。研究內(nèi)容：（1）建立C6腦膠質(zhì)瘤大鼠模型和體外血腫瘤屏障模型。（2）研究低頻超聲輻照選擇性開放血腦屏障和血腫瘤屏障的效果和機制：觀察低頻超聲對體內(nèi)和體外血腦屏障和血腫瘤屏障超微結(jié)構(gòu)和通透性的影響，分析緊密連接相關(guān)蛋白和質(zhì)膜微囊結(jié)構(gòu)蛋白的分布和表達(dá)變化。（3）研究低頻超聲輻照對治療膠質(zhì)瘤化療藥物卡鉑的轉(zhuǎn)運效果的影響，以及對腦腫瘤大鼠生存時間的影響。（4）研究低頻超聲和緩激肽的協(xié)同作用對血腫瘤屏障的開放效果的影響：觀察低頻超聲和緩激肽聯(lián)合應(yīng)用對血腫瘤屏障超微結(jié)構(gòu)和通透性的影響，緊密連接相關(guān)蛋白和質(zhì)膜微囊結(jié)構(gòu)蛋白的分布和表達(dá)變化；同時觀察二者聯(lián)合應(yīng)用對化療藥物的轉(zhuǎn)運效果和對腦腫瘤大鼠生存時間的影響。3、擬解決的關(guān)鍵問題：關(guān)鍵問題主要是指在課題研究過程中的關(guān)鍵點(瓶頸問題)，關(guān)鍵點解決了，雖然不代表課題全部完成，但能透視出課題順利完成的前景。研究過程中對達(dá)到預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究內(nèi)容或因素；為達(dá)到預(yù)期目標(biāo)所必須解決的關(guān)鍵技術(shù)和研究手段。關(guān)鍵問題要突出，且有一定難度。一般撰寫模式：包括兩個內(nèi)容或兩大句話，一是理論問題（某個研究內(nèi)容，要變著法說）；二是關(guān)鍵的技術(shù)問題。4、研究方法

存在問題：

過于簡單：在實驗方案中只有方法名稱而無具體步驟。

過于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實驗方法。

撰寫要求：以研究項目的需求為前提，盡量采用目前最先進(jìn)的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。5、技術(shù)路線

以研究內(nèi)容為主線，首先畫出一個技術(shù)路線(也就是研究思路與關(guān)鍵技術(shù))流程圖；然后圍繞前面提出的研究內(nèi)容，逐條詳細(xì)寫出完成各項內(nèi)容的主要實驗步驟(研究方法溶在其中)

存在問題：不清楚，不詳細(xì)，不可行。

撰寫要求：清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。

撰寫方法：以時間順序為主線設(shè)計技術(shù)路線以研究內(nèi)容為主線設(shè)計技術(shù)路線分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。詳細(xì)地寫清楚每個具體步驟。細(xì)胞水平實驗部分：

體外血腦屏障模型和血腫瘤屏障模型的建立低頻超聲輻照測定低頻超聲輻照后不同時間點的TEER值透射電鏡觀察不同時間點緊密連接相關(guān)蛋白和質(zhì)膜微囊蛋白的分布及其超微結(jié)構(gòu)改變免疫熒光法檢測不同時間點緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1,Claudin-5,Occludin和質(zhì)膜微囊蛋白Caveolin-1,Caveolin-2的分布變化研究不同時間點TEER值與緊密連接、胞吞轉(zhuǎn)運之間的相關(guān)關(guān)系，明確低頻超聲選擇性開放血腦屏障和血腫瘤屏障的作用機制。RT-PCR法測定不同時間點緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1,Claudin-5,Occludin和質(zhì)膜微囊蛋白Caveolin-1,Caveolin-2的mRNA表達(dá)水平變化Westernblot法測定不同時間點緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1,Claudin-5,Occludin和質(zhì)膜微囊蛋白Caveolin-1,Caveolin-2蛋白表達(dá)水平變化(1)細(xì)胞培養(yǎng)：取大鼠腦皮層組織勻漿，葡聚糖高速梯度離心，提取離心液底部的大鼠腦微血管段，然后通過膠原酶消化后培養(yǎng)獲取腦血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)一步通過內(nèi)皮細(xì)胞免疫磁珠純化內(nèi)皮細(xì)胞，培養(yǎng)成功后行VIII因子相關(guān)抗原鑒定。通過離心液上部的膠質(zhì)層培養(yǎng)，膠質(zhì)細(xì)胞免疫磁珠純化獲取星形膠質(zhì)細(xì)胞，行膠質(zhì)纖維酸性蛋白鑒定。(2)體外血腦屏障模型的建立：接種星形膠質(zhì)細(xì)胞于Transwell的下室，培養(yǎng)7天后，接種第3代BMEC于Transwell的上室，共同培養(yǎng)7天。(3)

體外血腫瘤屏障模型的建立：將C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞均勻接種于6孔板中，同時接種第3代BMEC于Transwell的上室，培養(yǎng)24小時后，把接種了BMEC的Transwell移到接種了C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的6孔板中，共同培養(yǎng)5天。(4)

體外血腦屏障和血腫瘤屏障功能的檢測：觀察TEER值變化，并用透射電鏡觀察緊密連接及吞飲小泡的改變，用免疫熒光檢測緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Claudin-5和Occludin以及質(zhì)膜微囊結(jié)構(gòu)蛋白Caveolae中Caveolin-1、Caveolin-2的分布變化，RT-PCR法及westernblot法測定上述蛋白的mRNA和蛋白表達(dá)水平變化。(5)

研究低頻超聲輻照不同時間點的TEER值與緊密連接、胞吞轉(zhuǎn)運之間的相關(guān)關(guān)系，明確低頻超聲選擇性開放血腦屏障和血腫瘤屏障的作用機制。6、可行性分析

寫這部分內(nèi)容的時候，千萬不要忘記前述的關(guān)鍵問題，要對能夠解決所提出的關(guān)鍵問題進(jìn)行具體說明和論證。一般應(yīng)包括以下寫作順序：(1)理論上可行：研究技術(shù)思路說明，說明為什么這樣做可行；(2)技術(shù)上可行：關(guān)鍵技術(shù)說明(關(guān)鍵技術(shù)要有文獻(xiàn)標(biāo)注，最好是本實驗室發(fā)表的)；(3)關(guān)鍵實驗材料：可行性說明及佐證(關(guān)鍵材料必須已經(jīng)具備或可以獲得，應(yīng)附有證明,放在其他附件清單中)；(4)對所具備的實驗條件進(jìn)行分析；(5)對項目組成員搭配及其運用技術(shù)方法的能力分析。7、創(chuàng)新性對創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)的。一般包括原始創(chuàng)新和跟蹤創(chuàng)新，理論創(chuàng)新和技術(shù)創(chuàng)新。

原始創(chuàng)新：

填補空白或修改傳統(tǒng)的理論；新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。跟蹤創(chuàng)新：

在前人工作基礎(chǔ)上補充、完善現(xiàn)有理論；對原有技術(shù)、方法進(jìn)行修改后產(chǎn)生1＋1＞2的效果。這部分內(nèi)容主要從兩方面寫：

一是指出本研究中所從事的哪些內(nèi)容迄今國內(nèi)外尚沒有文獻(xiàn)報道；在寫作過程當(dāng)中，可以前期發(fā)現(xiàn)的特色性工作基礎(chǔ)開頭。切記，避免出現(xiàn)“首次…了”，“填補…空白”字樣；二是寫出本課題解決以后的科學(xué)意義（特別是能吸引人的地方）。

(1)應(yīng)用低頻超聲輻照選擇性開放血腫瘤屏障，在國內(nèi)外尚無報道。申請者旨在深入研究低頻超聲輻照開放血腫瘤屏障的作用效果及開放的分子機制。(2)多學(xué)科交叉研究低頻超聲輻照不同時間的Ki值或TEER值與緊密連接、胞吞轉(zhuǎn)運的相關(guān)關(guān)系，能夠從理論上完善低頻超聲輻照開放血腫瘤屏障作用機制的研究，同時能夠為選擇性開放血腦屏障提供新思路、新靶點。(3)研究低頻超聲輻照以及低頻超聲輻照與緩激肽協(xié)同作用，對治療膠質(zhì)瘤的化療藥物卡鉑的轉(zhuǎn)運效果的影響，以及對腦腫瘤大鼠生存時間的影響，能夠為腦膠質(zhì)瘤的治療提供新途徑。8、年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果

年度研究計劃：

按年度/半年列出：研究內(nèi)容及其階段目標(biāo)；擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動、國際合作與交流計劃等。

預(yù)期研究結(jié)果：

理論成果：建立/豐富/補充/填補......

技術(shù)方法：建立/完善…...

專利：可望獲得……

論文：國際、國內(nèi)

（自然基金注重SCI收錄英文論文發(fā)表）人才培養(yǎng)：青年科技骨干、博碩研究生

(四)、研究工作基礎(chǔ)這部分很重要，通常應(yīng)寫出兩部分：1、相關(guān)工作積累：含論文、專利、成果；以往工作相關(guān)技術(shù)；也可以包括學(xué)術(shù)思想與科研團(tuán)隊。存在問題：內(nèi)容過簡；與申請項目無關(guān)。2、本課題所進(jìn)行的前期的實實在在的具體工作，尤其要放上與本課題直接相關(guān)的具體研究結(jié)果（不怕多,但也不要寫成要申請的內(nèi)容都做完了）。(1)在不同膠質(zhì)瘤模型上證明了B2受體的表達(dá)程度與血腦屏障開放程度正相關(guān)[1]；證明了人腦膠質(zhì)瘤上緩激肽B2受體表達(dá)存在差異，B2受體的表達(dá)水平同膠質(zhì)瘤病理級別呈正相關(guān)正相關(guān)[2]；從分子水平上闡明了緩激肽開放血腦屏障的時間機制正相關(guān)[3]

，這一結(jié)果為解決臨床上RMP-7選擇性開放血腦屏障轉(zhuǎn)運藥物的問題提供了理論依據(jù)。這些為本項目提供了動物模型以及分子生物學(xué)等實驗技術(shù)上的保證。

(2)應(yīng)用選擇性開放血腦屏障的方法研究了大鼠腦膠質(zhì)瘤的基因治療[4]，為本項目的應(yīng)用研究部分，提供了保證。

(3)建立了采用低頻超聲輻照選擇性開放血腦屏障的方法。成功掌握了提取、分離大鼠原代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的方法(附圖3)，并且建立了穩(wěn)定的腦微血管內(nèi)皮二倍體細(xì)胞系及星形膠質(zhì)細(xì)胞系和體外血腦屏障模型。(4)對低頻超聲輻照選擇性開放血腦屏障的機制進(jìn)行了初步探討?！@些研究為本項目關(guān)于機制方面的研究奠定了基礎(chǔ)。(5)有長期從事血腦屏障研究的經(jīng)