《動(dòng)物的克隆》課件

第三節(jié)動(dòng)物的克隆機(jī)械消化或者胰酶消化一、動(dòng)物細(xì)胞、組織培養(yǎng)1、什么方法取得離體的單個(gè)動(dòng)物細(xì)胞？2、離體的動(dòng)物細(xì)胞能否正常的生活、表現(xiàn)出正常的生命活動(dòng)？（胰蛋白酶）（1）貼壁生長：

懸浮液中分散的細(xì)胞緊貼培養(yǎng)瓶內(nèi)壁才能生長。（2）接觸抑制：

當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂。（3）正常的生命活動(dòng)：

生長、分裂、有規(guī)律的衰老、死亡等現(xiàn)象。2、適宜的環(huán)境條件無菌、無毒環(huán)境：加抗生素，定期更換培養(yǎng)液適宜的溫度和pH值：（如人體細(xì)胞培養(yǎng)）

溫度：36.5±0.5℃

pH值：適宜的氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）（一）培養(yǎng)條件三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程成分：無機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、維生素和動(dòng)物血清等1、含全部營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)…………原代培養(yǎng)物細(xì)胞系：可連續(xù)傳代的細(xì)胞原代培養(yǎng)物在首次傳代時(shí)就成為細(xì)胞系。能連續(xù)培養(yǎng)的

連續(xù)細(xì)胞系不能連續(xù)培養(yǎng)的

有限細(xì)胞系四、細(xì)胞系、細(xì)胞株（二倍體細(xì)胞）

（異倍體核型細(xì)胞）（1）惡性細(xì)胞系，異體致瘤性（2）保留接觸抑制，不致癌（遺傳物質(zhì)改變，不死性）2、細(xì)胞株：

通過一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞系。如：單抗細(xì)胞株

細(xì)胞株一般具有恒定的染色體組型、同工酶類型、病毒敏感性和生化特性等。遺傳物質(zhì)未改變。連續(xù)細(xì)胞株：可連續(xù)多次傳代的細(xì)胞株。有限細(xì)胞株：傳代次數(shù)有限的細(xì)胞株細(xì)胞系：泛指可傳代的細(xì)胞。細(xì)胞株:具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞系。五、克隆培養(yǎng)法（細(xì)胞克隆）2、特點(diǎn)：遺傳性狀均一、表現(xiàn)的性狀相似，便于研究異質(zhì)性細(xì)胞系克隆培養(yǎng)純系（克隆）3、最基本要求:保證所建成的克隆來源于單個(gè)細(xì)胞4、適合于克隆的細(xì)胞：

對(duì)環(huán)境有較大適應(yīng)范圍和具有較強(qiáng)獨(dú)立生存能力的細(xì)胞5、提高細(xì)胞克隆形成率的措施：選擇適宜的培養(yǎng)基添加血清（胎牛血清）

(能促進(jìn)細(xì)胞的生長、增殖和貼附)以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長（經(jīng)射線照射的小鼠成纖維細(xì)胞）激素刺激（胰島素等）使用CO2培養(yǎng)箱，調(diào)節(jié)PH

群體細(xì)胞>單細(xì)胞無限細(xì)胞系、轉(zhuǎn)化或腫瘤細(xì)胞>原代細(xì)胞、有限細(xì)胞系6、細(xì)胞克隆的主要用途：

從普通細(xì)胞系中分離出缺乏特殊基因的突變細(xì)胞系。

用于研究細(xì)胞的遺傳規(guī)律和生理特性。動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)及其應(yīng)用一、細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交

1、定義

指用自然或人工方法,使兩個(gè)或多個(gè)不同的細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的過程。不同基因型的細(xì)胞之間的融合就是細(xì)胞雜交。2、誘導(dǎo)方法動(dòng)物免疫分離B淋巴細(xì)胞細(xì)胞融合——淋巴細(xì)胞雜交瘤的制備雜交瘤細(xì)胞的篩選雜交瘤細(xì)胞的克隆單克隆抗體的提取二、單抗的制備過程單克隆抗體篩選雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系提取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞單克隆抗體的制備過程：特點(diǎn)：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖特點(diǎn)：特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備注射抗原免疫動(dòng)物的克隆繁殖一、動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度桑椹胚八分裂球受精卵二分裂球四分裂球囊胚原腸胚幼體組織、器官1、動(dòng)物的受精卵，卵裂球含有2-8個(gè)細(xì)胞時(shí)，每個(gè)細(xì)胞具有全能性。3、有的細(xì)胞只能分化為一種細(xì)胞，叫單能細(xì)胞。受精卵>>多能細(xì)胞>單能細(xì)胞>體細(xì)胞2、低等動(dòng)物細(xì)胞：全能性一般容易體現(xiàn)。1、高等動(dòng)物細(xì)胞3、癌細(xì)胞：仍能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞。

無論分化還是癌變，變化的都是表現(xiàn)型，基因組成的完整性可以保留。一、動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度為什么動(dòng)物細(xì)胞很難表現(xiàn)出全能性？二、動(dòng)物難以克隆的根本原因：☆基因表達(dá)的調(diào)控使得細(xì)胞中合成了專一的蛋白質(zhì)。一類基因是維持生存的，在各種細(xì)胞中都處于活動(dòng)狀態(tài)（如呼吸氧化酶基因等）；另一類基因隨著組織器官和發(fā)育階段不同而選擇性表達(dá)（如胰島素基因、血紅蛋白基因等）?！钛芯勘砻鳎鞣N特化細(xì)胞的細(xì)胞核中物種基因組完整，具有全能性?！畹欠只蟮膭?dòng)物細(xì)胞基因組基因的活動(dòng)不完全三、核移植和動(dòng)物的克隆繁殖去核注核重組細(xì)胞1、核移植：

利用一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核（供體核）,來取代另一細(xì)胞中的細(xì)胞核，形成一個(gè)重建的“合子”（重組細(xì)胞），使發(fā)育成一個(gè)新的個(gè)體。

體細(xì)胞克?。菏褂玫墓w核來自體細(xì)胞1978年，童第周：

黑斑蛙→成體紅細(xì)胞核→去核的卵細(xì)胞中→發(fā)育成蝌蚪2、動(dòng)物克隆繁殖：1.閱讀課本P39-37，找出體細(xì)胞羊的克隆成功的證明了什么？克隆羊成功的部分原因克隆動(dòng)植物的應(yīng)用2.在體細(xì)胞核移植過程中選擇卵細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原因：卵細(xì)胞大易操作，細(xì)胞質(zhì)中缺少阻止核基因表達(dá)的調(diào)節(jié)蛋白2.在體細(xì)胞核移植過程中選擇卵細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原因：細(xì)胞質(zhì)中具有有效調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的蛋白因子，卵細(xì)胞大易操作，營養(yǎng)豐富同時(shí)也證明了動(dòng)物的細(xì)胞核具有全能性體細(xì)胞克隆羊成功的分子細(xì)胞生物學(xué)機(jī)理：動(dòng)物克隆的應(yīng)用：（1）有利于遺傳疾病的治療，優(yōu)良品種的培育（2）對(duì)物種的優(yōu)化、瀕危動(dòng)物的保護(hù)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的擴(kuò)群有重要意義（3）豐富人們的物質(zhì)生活，降低畜牧業(yè)的成本，縮短育種年限，提高生產(chǎn)效率在體細(xì)胞核移植過程中選擇卵細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原因：細(xì)胞質(zhì)中具有有效調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的蛋白因子，卵細(xì)胞大易操作，營養(yǎng)豐富

許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。3、動(dòng)物克隆成功的條件：DDCA4、某研究小組為測定藥物對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，準(zhǔn)備對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞(甲)和正常肝細(xì)胞(乙)進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列說法正確的是(

)A.在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，也可用胃蛋白酶處理B.細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO2的作用是刺激細(xì)胞的呼吸C.甲、乙細(xì)胞在持續(xù)的原代培養(yǎng)過程中，乙會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象D.僅用該培養(yǎng)液也能用來培養(yǎng)乙肝病毒C5.下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是(

)A.培養(yǎng)中的人效應(yīng)T細(xì)胞能產(chǎn)生單克隆抗體B.培養(yǎng)中的人B細(xì)胞能夠無限地增殖C.人的成熟紅細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)能形成細(xì)胞株D.用胰蛋白酶處理肝組織可獲得單個(gè)肝細(xì)胞D世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請(qǐng)仔細(xì)看圖后回答問題：b黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊卵腺細(xì)胞核重組細(xì)胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉abcd細(xì)胞核移植具有調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)有絲分裂有妊娠出生白面“