2025年滬科新版選擇性必修3生物下冊階段測試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年滬科新版選擇性必修3生物下冊階段測試試卷882考試試卷考試范圍：全部知識(shí)點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級：______考號(hào)：______總分欄題號(hào)一二三四五總分得分評卷人得分一、選擇題(共5題，共10分)1、某線性DNA分子含有5000個(gè)堿基對（bp），先用限制酶a切割，再把得到的產(chǎn)物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如表所示。限制酶a、b的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。下列有關(guān)說法正確的是（）

。酶a切割產(chǎn)物長度（bp）

酶b再次切割產(chǎn)物長度（bp）

2100；1400；1000；500

1900；200；800；600；1000；500

A.該DNA分子中酶a與酶b的識(shí)別序列分別有3個(gè)和2個(gè)B.酶a與酶b切出的黏性末端不能相互連接C.酶a與酶b切斷的化學(xué)鍵不相同D.若酶a切割與該DNA序列相同的質(zhì)粒，得到的切割產(chǎn)物有4種2、下圖為哺乳動(dòng)物早期胚胎發(fā)育的過程；下列有關(guān)敘述不正確的是（）

A.過程a和b使胚胎中有機(jī)物的含量減少B.Ⅰ、Ⅱ時(shí)期的胚胎中都含有全能細(xì)胞C.胚胎移植必須使用處于Ⅱ或Ⅲ時(shí)期的胚胎D.圖示過程中，Ⅱ時(shí)期的胚胎開始出現(xiàn)細(xì)胞分化3、某種轉(zhuǎn)基因玉米能高效合成一種多肽類的蛋白酶抑制劑，積累于莖葉中，讓取食它的害蟲的消化酶受抑制無法消化食物而死。下列就該玉米對人類安全性的評論中，不符合生物學(xué)原理的是()A.不安全。這種玉米的果實(shí)(種子)也可能含有蛋白酶抑制劑，食用后使人因無法消化食物而患病B.不安全。該玉米的蛋白酶抑制劑基因可通過食物鏈富集并在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，使人體無法消化食物而患病C.安全。因?yàn)槿伺c害蟲消化酶的結(jié)構(gòu)存在差異，玉米的蛋白酶抑制劑對人體很可能無影響D.安全。人類通常食用煮熟的玉米食品，玉米的蛋白酶抑制劑已被高溫破壞，不會(huì)影響人的消化4、下列關(guān)于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)應(yīng)用的敘述，正確的是（）A.家庭制作果酒、果醋和泡菜通常都不是純種發(fā)酵B.利用乳酸菌制作酸奶過程中，先通氣培養(yǎng)，后密封發(fā)酵C.酯酸菌是兼性厭氧微生物，是原核生物D.果醋制作過程中發(fā)酵液pH逐漸降低，果酒制作過程中情況相反5、為了示蹤衰老細(xì)胞在機(jī)體中的分布，科研人員綜合利用基因工程和細(xì)胞工程的技術(shù)手段，將綠色熒光蛋白基因gf插入到了小鼠p16基因的下游，使兩個(gè)基因“融合”。轉(zhuǎn)基因小鼠的衰老細(xì)胞中，p16和gfp會(huì)特異性表達(dá)，從而使其在紫外光下呈綠色。下列分析錯(cuò)誤的是（）A.可用PCR技術(shù)特異性地快速擴(kuò)增綠色熒光蛋白基因gfpB.轉(zhuǎn)基因小鼠的p16基因和gfp基因具有各自獨(dú)立的啟動(dòng)子C.常用顯微注射法將改造好的融合基因注入小鼠的受精卵中D.可選擇發(fā)育到桑葚胚期的轉(zhuǎn)基因小鼠胚胎移植到受體母鼠子宮內(nèi)評卷人得分二、多選題(共5題，共10分)6、下列有關(guān)“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，不正確的是（）A.用蒸餾水使家兔的紅細(xì)胞吸水漲破，可獲取富含DNA的濾液B.植物材料需先用洗滌劑破壞細(xì)胞壁再吸水脹破，釋放DNAC.DNA不溶于95%的冷酒精，但可溶于2mol/L的NaCl溶液D.鑒定DNA時(shí)，將絲狀物加入二苯胺試劑中并進(jìn)行沸水浴，冷卻后觀察現(xiàn)象7、下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的敘述，正確的是（）A.為了防止培養(yǎng)過程中出現(xiàn)細(xì)菌污染，可以在培養(yǎng)液中添加抗生素B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基相同C.CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pHD.培養(yǎng)液應(yīng)該定期更換，以防止代謝物積累對細(xì)胞自身造成危害8、植物利用硝酸鹽需要硝酸還原酶，現(xiàn)有兩種煙草硝酸還原酶缺失突變體，為探究兩種突變體的突變是否在同一基因位點(diǎn)上，研究人員將兩種突變體進(jìn)行植物體細(xì)胞雜交。下列分析正確的是A.誘導(dǎo)兩種突變體進(jìn)行植物體細(xì)胞雜交時(shí)應(yīng)先用纖維素酶和果膠酶酶解得到原生質(zhì)體B.可用高Ca2+-高pH誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，細(xì)胞膜融合是細(xì)胞融合完成的標(biāo)志C.若雜種細(xì)胞能在硝酸鹽培養(yǎng)基上正常生長，說明兩種突變體的突變位點(diǎn)相同D.兩種突變體均不能在以硝酸鹽作為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長9、凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）位于線粒體膜間隙中，它既是對細(xì)胞凋亡起重要作用的蛋白質(zhì)，又具有氧化還原酶活性。有研究表明，AIF在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)量高于在正常胃細(xì)胞中的。某醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室人員從胃癌患者的胃癌組織中提取AIF基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并進(jìn)行鑒定，相關(guān)過程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.檢測AIF在胃細(xì)胞中的表達(dá)量，可能成為預(yù)防胃癌的手段B.AIF引起的細(xì)胞凋亡是基因所決定的細(xì)胞死亡，不受環(huán)境條件的影響C.圖中逆轉(zhuǎn)錄和PCR均可獲取DNA產(chǎn)物，兩個(gè)過程所需要的原料和酶是相同的D.電泳鑒定AIF基因時(shí)，DNA分子的遷移速率與凝膠濃度和DNA分子的大小等有關(guān)10、利用基因工程技術(shù)可使大腸桿菌生產(chǎn)人的胰島素原。下列相關(guān)敘述中，錯(cuò)誤的是（）A.人和大腸桿菌在合成胰島素原時(shí)，轉(zhuǎn)錄和翻譯的場所是相同的B.DNA連接酶能催化磷酸與脫氧核糖形成化學(xué)鍵C.通過檢測發(fā)現(xiàn)大腸桿菌中沒有胰島素原產(chǎn)生，則可判斷重組質(zhì)粒未導(dǎo)入受體菌D.人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原有較高的生物活性評卷人得分三、填空題(共7題，共14分)11、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？____________________________12、目的基因是指：______13、在___________條件下，DNA與___________反應(yīng)呈現(xiàn)______________，因此_____________可以作為鑒定DNA的試劑。14、不同國家的政府對待生殖性克隆人的態(tài)度是不同的?我們認(rèn)同我國政府對待生殖性克隆人研究的態(tài)度嗎？為什么？_____。15、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：_____、_____、_____、_____等。16、有時(shí)還需進(jìn)行______的鑒定。如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)______。17、蛋白質(zhì)工程在生物制藥上有廣泛的應(yīng)用。如果已經(jīng)確認(rèn)某種新蛋白質(zhì)可能具有特殊的抗癌功能，其氨基酸序列也已經(jīng)確認(rèn)，如何通過蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)這種新藥？如果回答有困難，可以向老師請教或通過互聯(lián)網(wǎng)查找答案。_____評卷人得分四、實(shí)驗(yàn)題(共2題，共4分)18、氨基丁酸（GABA）是具有降血壓；抗焦慮等功能的水溶性氨基酸。科研人員通過實(shí)驗(yàn)研究了白方腐乳在前發(fā)酵鹽腌和后發(fā)酵過程中GABA的含量變化；為尋找生產(chǎn)富含GABA腐乳的工藝奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)步驟如下：

①豆腐白坯表面接種毛霉孢子后；在適宜的溫度和濕度下培養(yǎng)48h，獲得毛坯。

②將毛坯分層整齊地?cái)[放在瓶中；鹽腌5天。

③腌制后加入鹵湯；置于28℃恒溫箱中后發(fā)酵90天。

④分別采集各時(shí)段的腐乳坯樣品；測定GABA含量，結(jié)果如圖。

請分析并回答問題：

（1）前發(fā)酵過程中，毛坯的GABA含量發(fā)生明顯變化的原因是毛霉產(chǎn)生的_______促進(jìn)蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生GABA。

（2）步驟②中，加鹽腌制的正確操作是______________。此過程腐乳干重中的GABA含量下降，一方面與食鹽抑制毛霉生長，酶活性降低有關(guān)；另一方面，豆腐中的水分滲出，部分GABA會(huì)____________而導(dǎo)致測定值減小。

（3）后發(fā)酵所加的鹵湯中，具有抑菌防腐和調(diào)味的成分主要有_______。此過程中，發(fā)酵_______天后的白方腐乳出廠銷售比較適宜。19、科研人員以病毒表面S蛋白作為主要的病毒抗原；利用基因工程研制疫苗用于接種預(yù)防，簡要過程如圖所示。回答下列問題：

(1)新冠病毒是一種RNA病毒，一般先通過_____________________得到cDNA，再經(jīng)PCR技術(shù)獲取大量S蛋白基因，PCR的中文全稱是_____________________。

(2)PCR技術(shù)還需用到_____________________酶，該酶能夠使脫氧核苷酸從引物的_____________________端開始連接，據(jù)下圖分析，可選擇的引物是_____________________。

(3)為了驗(yàn)證表達(dá)的S蛋白與病毒S蛋白有相同的免疫反應(yīng)特性；請?jiān)O(shè)計(jì)簡單的檢測方案并預(yù)期檢測結(jié)果。

方案:_________________________________。

結(jié)果:_________________________________。評卷人得分五、綜合題(共3題，共24分)20、蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用；而且對人體沒有影響。我國科學(xué)家欲獲得高效表達(dá)蛋白A的轉(zhuǎn)基因大腸桿菌作為微生物農(nóng)藥，做了相關(guān)研究。

（1）研究者將重組質(zhì)粒置于經(jīng)__________處理的大腸桿菌細(xì)胞懸液中；獲得轉(zhuǎn)基因大腸桿菌。

（2）檢測發(fā)現(xiàn)；轉(zhuǎn)入的蛋白A基因在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計(jì)了與蛋白A基因結(jié)合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個(gè)堿基），并按圖中方式依次進(jìn)行4次PCR擴(kuò)增，以得到新的蛋白A基因。

①這是一種定點(diǎn)的__________技術(shù)。

②圖2所示的4次PCR應(yīng)該分別如何選擇圖1中所示的引物？請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”；若不選用該引物則劃“×”）__________。

。引物A引物B引物C引物DPCR1________________________________________PCR2________________________________________PCR3________________________________________PCR4________________________________________（3）研究者進(jìn)一步將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和__________分別導(dǎo)入大腸桿菌；提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用__________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高。為檢測表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，比較__________的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小。

（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時(shí)常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點(diǎn)是__________。21、Gateway克隆技術(shù)是一種快速；高效地構(gòu)建基因表達(dá)載體的方法，是基于λ噬菌體可以和大腸桿菌DNA的特定位點(diǎn)發(fā)生互換的特點(diǎn)設(shè)計(jì)的。Gateway克隆技術(shù)依賴于BP反應(yīng)和LR反應(yīng)，通過BP反應(yīng)將目的基因連接到質(zhì)粒1上，獲得克隆質(zhì)粒2，再通過LR反應(yīng)將目的基因連接到載體質(zhì)粒3上，獲得表達(dá)載體，如圖所示。請回答下列問題：

(1)為構(gòu)建基因表達(dá)載體，需先設(shè)計(jì)引物，通過PCR特異性擴(kuò)增目的基因，用于擴(kuò)增目的基因的引物需滿足的條件是______，為使PCR產(chǎn)物能參與后續(xù)交換，需要分別在2種引物上添加相應(yīng)的attB1和attB2序列，該序列應(yīng)添加在引物的______（填“3′端”或“5′端”）。

(2)BP反應(yīng)中，將帶有attB1和attB2序列的目的基因與質(zhì)粒1混合，加入BP克隆酶，attB和attP位點(diǎn)之間會(huì)發(fā)生互換。該反應(yīng)體系中可能含有未交換的質(zhì)粒1和交換后的質(zhì)粒2，為從體系中篩選出質(zhì)粒2，使混合體系中的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化用Ca2+處理的大腸桿菌，并涂布到含有青霉素的平板上。Ca2+處理的目的是______。理論上，在平板上長出菌落的大腸桿菌中含有的質(zhì)粒即為質(zhì)粒2，理由是______。

(3)LR反應(yīng)中，將質(zhì)粒2和質(zhì)粒3混合，加入LR克隆酶，attL和attR位點(diǎn)之間會(huì)發(fā)生互換。為從反應(yīng)體系中篩選出最終的基因表達(dá)載體，應(yīng)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌涂布到含有______的平板上。獲得的基因表達(dá)載體除含有圖示的目的基因和卡那霉素抗性基因外，還必須有______等。

(4)在LR反應(yīng)體系中，相應(yīng)片段發(fā)生互換后，所得產(chǎn)物______（填“能”或“不能”）再次互換回到初始狀態(tài)，原因是______。22、玉米是我國重要的農(nóng)作物；研究種子發(fā)育的機(jī)理對培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的玉米新品種具有重要作用。

（1）玉米果穗上的每一個(gè)籽粒都是受精后發(fā)育而來。我國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了甲品系玉米，其自交后的果穗上出現(xiàn)嚴(yán)重干癟且無發(fā)芽能力的籽粒，這種異常籽粒約占1/4。籽粒正常和干癟這一對相對性狀的遺傳遵循孟德爾的________定律。上述果穗上的正常籽粒均發(fā)育為植株，自交后，有些植株果穗上有約1/4干癟籽粒，這些植株所占比例約為________。

（2）為闡明籽粒干癟性狀的遺傳基礎(chǔ)，研究者克隆出候選基因A/a。將A基因?qū)氲郊灼废抵?，獲得了轉(zhuǎn)入單個(gè)A基因的轉(zhuǎn)基因玉米。假定轉(zhuǎn)入的A基因已插入a基因所在染色體的非同源染色體上，請從下表中選擇一種實(shí)驗(yàn)方案及對應(yīng)的預(yù)期結(jié)果以證實(shí)“A基因突變是導(dǎo)致籽粒干癟的原因”________。

。實(shí)驗(yàn)方案預(yù)期結(jié)果I．轉(zhuǎn)基因玉米×野生型玉米。

II．轉(zhuǎn)基因玉米×甲品系。

III．轉(zhuǎn)基因玉米自交。

IV．野生型玉米×甲品系。

①正常籽粒：干癟籽?！?：1

②正常籽粒：干癟籽?！?：1

③正常籽粒：干癟籽?！?：1

④正常籽粒：干癟籽?！?5：1

（3）現(xiàn)已確認(rèn)A基因突變是導(dǎo)致籽粒干癟的原因，序列分析發(fā)現(xiàn)a基因是A基因中插入了一段DNA（見圖1），使A基因功能喪失。甲品系果穗上的正常籽粒發(fā)芽后，取其植株葉片，用圖1中的引物1、2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若出現(xiàn)目標(biāo)擴(kuò)增條帶則可知相應(yīng)植株的基因型為_________。

（4）為確定A基因在玉米染色體上的位置，借助位置已知的M/m基因進(jìn)行分析。用基因型為mm且籽粒正常的純合子P與基因型為MM的甲品系雜交得F1，F(xiàn)1自交得F2。用M、m基因的特異性引物，對F1植株果穗上干癟籽粒（F2）胚組織的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果有1、2、3三種類型，如圖2所示。

統(tǒng)計(jì)干癟籽粒（F2）的數(shù)量，發(fā)現(xiàn)類型1最多、類型2較少、類型3極少。請解釋類型3數(shù)量極少的原因________。參考答案一、選擇題(共5題，共10分)1、A【分析】【分析】

分析題圖：a酶和b酶識(shí)別的脫氧核苷酸序列不同；但切割后產(chǎn)生的黏性末端相同；

分析表格：a酶可以把原有DNA切成4段，說明有該DNA分子上有3個(gè)切口，即a酶的識(shí)別序列有3個(gè)；b酶把大小是2100的DNA切成大小分別為1900和200兩個(gè)片段，把大小是1400的DNA切成大小分別為800和600兩個(gè)片段，且a酶和b酶的識(shí)別位點(diǎn)不同，說明b酶的識(shí)別序列有2個(gè)。

【詳解】

A、酶a可以把原有線性DNA切成4段，說明該DNA分子上有3個(gè)切口，即酶a的識(shí)別序列有3個(gè)；酶b把長度為2100bp的DNA切成長度分別為1900bp和200bp的兩個(gè)片段，把長度為1400bp的DNA切成長度分別為800bp和600bp的兩個(gè)片段，說明酶b在該DNA分子上有2個(gè)切口，即酶b的識(shí)別序列有2個(gè)；A正確；

B、由圖可以看出，酶a和酶b切割后產(chǎn)生的黏性末端相同；它們之間能相互連接，B錯(cuò)誤；

C；限制酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵；C錯(cuò)誤；

D；酶a的識(shí)別序列有3個(gè)；僅用酶a切割與該DNA分子序列相同的質(zhì)粒，得到的切割產(chǎn)物有3種，D錯(cuò)誤。

故選A。2、C【分析】【分析】

分析圖示可知：Ⅰ表示桑椹胚；Ⅱ表示囊胚，Ⅲ表示原腸胚。

【詳解】

A、過程a表示卵裂形成桑椹胚，過程b表示桑椹胚形成囊胚；這兩個(gè)過程細(xì)胞均需要消耗能量，故胚胎中有機(jī)物的含量均減少，A正確；

B；Ⅰ表示桑椹胚；含有的所有細(xì)胞都是全能細(xì)胞，Ⅱ表示囊胚，含有的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞為全能細(xì)胞，B正確；

C；胚胎移植必須使用處于Ⅰ桑椹胚或Ⅱ囊胚時(shí)期的胚胎；C錯(cuò)誤；

D；早期胚胎在Ⅱ囊胚時(shí)期開始出現(xiàn)細(xì)胞分化；D正確。

故選C。

【點(diǎn)睛】3、B【分析】【分析】

1；（1）目前科學(xué)家對基因的結(jié)構(gòu)、基因間的相互作用以及基因的調(diào)控機(jī)制等都了解得相當(dāng)有限。（2）許多轉(zhuǎn)移的基因是異種生物的基因。（3）外源基因插入宿住基因組的部位往往是隨機(jī)的。因此在轉(zhuǎn)基因生物中；有時(shí)候會(huì)出現(xiàn)一些人們意想不到的后果。

2；轉(zhuǎn)基因食品的安全問題是雙刃劍；既有安全性也有不安全性?；蚴怯羞z傳效應(yīng)的DNA片段，屬于大分子有機(jī)物，外源基因進(jìn)入動(dòng)物和人體的消化道后會(huì)被消化成小分子物質(zhì)，不能直接進(jìn)入動(dòng)物和人體細(xì)胞內(nèi)，更談不上通過食物鏈的富集和在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。

【詳解】

A；該種玉米的果實(shí)（種子）也可能含有蛋白酶抑制劑；食用后使人因無法消化食物而患病，不安全，A正確；

B；生物體攝取的蛋白酶抑制劑基因會(huì)被生物體消化為小分子核苷酸被吸收；不會(huì)在體內(nèi)表達(dá)，是安全的，B錯(cuò)誤；

C；由于不同物種的酶在結(jié)構(gòu)上有差異；該抑制劑對人體消化酶無影響，因此對人體是安全的，C正確；

D；人類通常食用煮熟的玉米；該抑制劑會(huì)被高溫破壞，因此不會(huì)影響人體，是安全的，D正確。

故選B。4、A【分析】【分析】

果酒制作原理是利用酵母菌無氧呼吸生成酒精和CO2。果醋制作原理是利用醋酸菌有氧呼吸生成醋酸。酸奶制作原理是利用乳酸菌無氧呼吸生產(chǎn)乳酸。制作果酒時(shí)；應(yīng)該先通氣后密封，先通氣的目的是讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸而大量繁殖，再密封的目的是讓酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生酒精。

【詳解】

A；家庭制作果酒、果醋和泡菜通常都是利用天然的微生物進(jìn)行發(fā)酵；不是純種發(fā)酵，A正確；

B；利用乳酸菌制作酸奶過程中；由于乳酸菌是厭氧型微生物，需要密封發(fā)酵，B錯(cuò)誤；

C；醋酸菌是耗氧微生物；是原核生物，C錯(cuò)誤；

D、果醋制作過程中發(fā)酵液pH逐漸降低，果酒制作過程中由于產(chǎn)生CO2；發(fā)酵液pH也逐漸降低，D錯(cuò)誤。

故選A。5、B【分析】【分析】

基因工程的操作步驟：(1)目的基因的獲取；方法有從基因文庫中獲??；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟?；虮磉_(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；根據(jù)受體細(xì)胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣，將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；(4)目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因-DNA分子雜交技術(shù)②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA-分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原-抗體雜交技術(shù)；個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A；綠色熒光蛋白基因gfp為DNA片段；可用PCR技術(shù)特異性地快速擴(kuò)增，A正確；

B；將綠色熒光蛋白基因gfp插入到了小鼠p16基因的下游；使兩個(gè)基因“融合”，因此p16基因和gfp基因共用了一個(gè)啟動(dòng)子，它們之間關(guān)聯(lián)表達(dá)，B錯(cuò)誤；

C；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；C正確；

D；胚胎移植時(shí)；應(yīng)選擇處于桑葚胚或囊胚期的胚胎，D正確。

故選B。二、多選題(共5題，共10分)6、A:B:D【分析】【分析】

1；DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同（0.14mol/L溶解度最低）；

2；DNA不溶于酒精溶液；但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精；

3；DNA的鑒定：在沸水浴條件下；DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色，因此二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

【詳解】

A；兔屬于哺乳動(dòng)物；哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，吸水漲破，得不到含DNA的濾液，A錯(cuò)誤；

B；植物材料需先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜；B錯(cuò)誤；

C；DNA不溶于95%的冷酒精和0.14mol/L的NaCl溶液；而溶于2mol/L的NaCl溶液，C正確；

D；將絲狀物溶于2mol/L的NaCL溶液后加入二苯胺試劑；沸水浴冷卻后呈藍(lán)色，D錯(cuò)誤。

故選ABD。

【點(diǎn)睛】7、A:C:D【分析】【分析】

1；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織；將它分散成單個(gè)細(xì)胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。

2；由于動(dòng)物細(xì)胞生活的內(nèi)環(huán)境還有一些成分尚未研究清楚；所以需要加入動(dòng)物血清以提供一個(gè)類似生物體內(nèi)的環(huán)境，因此在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需加入血清、血漿等一些天然成分。

3；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：

（1）無菌；無毒的環(huán)境：對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理；通常還要在培養(yǎng)液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物累積對細(xì)胞自身產(chǎn)生危害。

（2）營養(yǎng)物質(zhì)：無機(jī)物（無機(jī)鹽；微量元素等）；有機(jī)物（糖、氨基酸、促生長因子等）、血清和血漿(提供細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份)。

（3）溫度和pH（36.5±0.5℃；7.2～7.4）。

（4）氣體環(huán)境（95%的空氣+5%CO2的混合氣體），其中5%CO2氣體是為保持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定。

【詳解】

A；抗生素可以抑制細(xì)菌的生長；所以在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中可以在培養(yǎng)液中添加抗生素，用以防治細(xì)菌的污染，A正確；

B；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基不同；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液通常需要加入動(dòng)物血清、血漿，B錯(cuò)誤；

C；在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中；氣體環(huán)境是95%的空氣+5%CO?的混合氣體，其中5%CO?氣體是為保持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定，C正確；

D；代謝產(chǎn)物積累會(huì)對細(xì)胞自身造成危害；營養(yǎng)物質(zhì)減少不利于細(xì)胞的培養(yǎng)，所以動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要定期更換培養(yǎng)液，為細(xì)胞提供充足營養(yǎng)并防治代謝產(chǎn)物積累危害細(xì)胞，D正確。

故選ACD。8、A:D【分析】【分析】

植物體細(xì)胞雜交過程：1；酶解法去壁獲取原生質(zhì)體；2、人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合；3、再生出新細(xì)胞壁；標(biāo)志著原生質(zhì)體融合完成；4、經(jīng)脫分化和再分化過程，通過組織培養(yǎng)把雜種細(xì)胞培育成雜種植株。

【詳解】

A；植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠；因此先用纖維素酶和果膠酶酶解得到原生質(zhì)體，A正確；

B；植物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是再生形成新的細(xì)胞壁；B錯(cuò)誤；

C；若雜種細(xì)胞能在硝酸鹽培養(yǎng)基上正常生長；說明兩種突變體的植物體細(xì)胞雜交后代能夠合成硝酸還原酶，即兩種突變體的突變基因位點(diǎn)不同，雜交后未突變的基因重新組合在一起，控制了硝酸還原酶的合成，C錯(cuò)誤；

D；據(jù)題可知；植物利用硝酸鹽需要硝酸還原酶，兩種突變體煙草硝酸還原酶都缺失，因此均不能在以硝酸鹽作為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長，D正確。

故選AD。9、B:C【分析】【分析】

DNA分子具有可解離的基團(tuán)；在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，這個(gè)過程就是電泳。DNA分子的遷移速率與凝膠濃度和DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。

【詳解】

A；根據(jù)題干信息；有研究表明，AIF在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)量高于在正常胃細(xì)胞中的，因此檢測AIF在胃細(xì)胞中的表達(dá)量，可能成為預(yù)防胃癌的手段，A正確；

B；AIF引起的細(xì)胞凋亡是基因所決定的細(xì)胞死亡；會(huì)受環(huán)境條件的影響，B錯(cuò)誤；

C；逆轉(zhuǎn)錄和PCR均可獲取DNA產(chǎn)物；兩個(gè)過程所需要的原料均是脫氧核苷酸，但逆轉(zhuǎn)錄需要逆轉(zhuǎn)錄酶，而PCR需要耐高溫的DNA聚合酶，C錯(cuò)誤；

D；電泳鑒定AIF基因時(shí)；DNA分子的遷移速率與凝膠濃度和DNA分子的大小等有關(guān)，分子越大，遷移速率越慢，D正確。

故選BC。10、A:C:D【分析】【分析】

大腸桿菌是原核生物；原核細(xì)胞與真核細(xì)胞相比，最大的區(qū)別是原核細(xì)胞沒有被核膜包被的成形的細(xì)胞核（沒有核膜；核仁和染色體）；原核細(xì)胞只有核糖體一種細(xì)胞器；原核細(xì)胞中，轉(zhuǎn)錄和翻譯在相同時(shí)空中進(jìn)行，而真核生物的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程在不同時(shí)間和空間進(jìn)行。

【詳解】

A；人體胰島細(xì)胞是真核細(xì)胞；在合成胰島素原時(shí)，轉(zhuǎn)錄在細(xì)胞核中進(jìn)行，翻譯在細(xì)胞質(zhì)的核糖體上進(jìn)行，原核細(xì)胞沒有細(xì)胞核，A錯(cuò)誤；

B；DNA連接酶能在兩個(gè)相同黏性末端配對后的磷酸與脫氧核糖之間形成化學(xué)鍵（磷酸二酯鍵）；B正確；

C；通過檢測；大腸桿菌中沒有胰島素原產(chǎn)生，不能判斷重組質(zhì)粒未導(dǎo)入受體菌，也可能是導(dǎo)入后沒有表達(dá)，C錯(cuò)誤；

D；大腸桿菌是原核生物；沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不能對胰島素原進(jìn)行加工，因此人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原沒有生物活性，D錯(cuò)誤。

故選ACD。三、填空題(共7題，共14分)11、略

【解析】避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種12、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】是人們所需要轉(zhuǎn)移或改造的基因13、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】沸水浴二苯胺藍(lán)色二苯胺14、略

【分析】【詳解】

對待生殖性克隆人的研究，我國政府一再重申四不原則：不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)。因?yàn)樯承钥寺。ㄒ簿褪强寺∪耍?，違反人類繁衍的自然法則，損害人類作為自然人的尊嚴(yán)，會(huì)引起嚴(yán)重的道德、倫理、社會(huì)和法律問題。所以，現(xiàn)階段生殖性克隆絕對不可以應(yīng)用于人類本身?！窘馕觥空J(rèn)同。因?yàn)樯承钥寺。ㄒ簿褪强寺∪耍?，違反人類繁衍的自然法則，損害人類作為自然人的尊嚴(yán)，會(huì)引起嚴(yán)重的道德、倫理、社會(huì)和法律問題。所以，現(xiàn)階段生殖性克隆絕對不可以應(yīng)用于人類本身。15、略

【分析】略【解析】營養(yǎng)無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓氣體環(huán)境16、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】個(gè)體生物學(xué)水平抗蟲性狀。17、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)工程的基本途徑：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列，以下按照基因工程的一般步驟進(jìn)行。該蛋白質(zhì)的氨基酸序列已知，因此通過蛋白質(zhì)工程，生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥的基本過程為：根據(jù)已知的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建形成基因表達(dá)載體→將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥?！窘馕觥扛鶕?jù)已知的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建形成基因表達(dá)載體→將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥四、實(shí)驗(yàn)題(共2題，共4分)18、略

【分析】【分析】

腐乳的制作過程主要是：讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制。

1；讓豆腐上長出毛霉：將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)；將籠屜中的溫度控制在15～18℃，并保持在一定的濕度。約48h后，毛霉開始生長，3d之后菌絲生長旺盛，5d后豆腐塊表面布滿菌絲。豆腐塊上生長的毛霉來自空氣中的毛霉孢子。

2；加鹽腌制：將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中；同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增高鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。加鹽研制的時(shí)間約為8d左右．加鹽可以析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬，在后期的制作過程中不會(huì)過早酥爛。同時(shí)，鹽能抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。

3；加鹵湯裝瓶：鹵湯直接關(guān)系到腐乳的色、香、味。鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。鹵湯中的酒可以選用料酒、黃酒、米酒、高粱酒等；含量一般控制在12%左右。加酒可以抑制微生物的生長，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。香辛料種類很多，如胡椒、花椒、八角、桂皮、姜、辣椒等。香辛料可以調(diào)制腐乳的風(fēng)味，也具有防腐殺菌的作用。可據(jù)個(gè)人口味配置鹵湯。

4；密封腌制。

【詳解】

（1）前發(fā)酵過程中，毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶促進(jìn)豆腐中的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生GABA，使得毛坯的GABA含量明顯升高。

（2）步驟②中；加鹽腌制的正確操作是將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中，同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增高鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。鹽能抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。此過程腐乳干重中的GABA含量下降的原因可能是：①食鹽會(huì)抑制毛霉生長，酶的活性降低；②豆腐中的水分滲出，部分GABA會(huì)溶解于水而導(dǎo)致測定值減小。

（3）鹵湯是由料酒及各種香辛料配制而成的；可以抑制微生物的生長，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。后發(fā)酵過程中GABA的含量變化曲線圖顯示，在60天以后，GABA的含量達(dá)到最大值且保持相對穩(wěn)定，所以此時(shí)出廠銷售白方腐乳比較適宜。

【點(diǎn)睛】

解答本題的關(guān)鍵是掌握腐乳的制作的相關(guān)流程和知識(shí)要點(diǎn)，主要依靠學(xué)生對課本知識(shí)的理解和掌握，并結(jié)合題目中所給的GABA為水溶性氨基酸這一關(guān)鍵信息回答問題，同時(shí)需要學(xué)生在做題時(shí)思考符合經(jīng)濟(jì)效益的選擇?！窘馕觥康鞍酌钢饘蛹欲}隨著層數(shù)的加高增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些隨水流失（溶解于水中）香辛料和料酒6019、略

【分析】【分析】

PCR原理：在解旋酶作用下；打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈。

【詳解】

（1）利用RNA得到相應(yīng)DNA的方法為逆轉(zhuǎn)錄；起作用的酶為逆轉(zhuǎn)錄酶。在體外將DNA擴(kuò)增的技術(shù)是PCR，中文名稱為多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。

（2）PCR技術(shù)是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)；該過程需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)能夠使脫氧核苷酸從引物的3'端開始連接，使子代DNA從5'向3'延伸；進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，還應(yīng)選擇一對方向相反的引物，且與模板的3'端結(jié)合，據(jù)圖可知，應(yīng)選擇Ⅱ；Ⅲ。

（3）細(xì)胞內(nèi)是否合成了由目的基因控制的蛋白質(zhì)，使用抗原-抗體雜交法檢測，為了檢驗(yàn)表達(dá)的S蛋白是否與病毒S蛋白有相同的免疫反應(yīng)特性，可用S蛋白與新冠病毒肺炎康復(fù)患者血清進(jìn)行抗原-抗體雜交實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行檢測，本實(shí)驗(yàn)是驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果是唯一的，因此本實(shí)驗(yàn)結(jié)果是出現(xiàn)雜交帶?！窘馕觥?1)逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。

(2)熱穩(wěn)定DNA聚合酶##Taq酶3'II；Ⅲ

(3)用表達(dá)的S蛋白與新冠病毒肺炎康復(fù)患者血清進(jìn)行抗原-抗體雜交實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)雜交帶五、綜合題(共3題，共24分)20、略

【分析】含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒；空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會(huì)造成基因污染；有效成分純度較高。

【分析】

1；基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@?。焕肞CR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因；啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法;

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

（1）大腸桿菌需事先用氯化鈣進(jìn)行處理；增大細(xì)胞壁的通透性，使之處于易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)，以便重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。

（2）①根據(jù)題意和圖示分析；經(jīng)過4次PCR技術(shù)后獲得了新的基因，這是一種定點(diǎn)的基因突變技術(shù)。

②與研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好；因而設(shè)計(jì)了與蛋白A基因結(jié)合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個(gè)堿基），因此4次PCR應(yīng)該分別選擇如圖所示的引物，如下表所示：

。

引物A

引物B

引物C

引物D

PCR1

√

√

×

×

PCR2

×

×

√

√

PCR3

×

×

×

×

PCR4

√

×

×

√

（3）將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒；空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）分別導(dǎo)入大腸桿菌；提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用抗原-抗體雜交方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高。為檢測表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，比較抑菌圈的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小。

（4）作為微生物農(nóng)藥；使用時(shí)常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，是因?yàn)榈鞍譇基因的發(fā)酵產(chǎn)物對人；畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會(huì)造成基因污染；有效成分純度較高。

【點(diǎn)睛】

本題主要考查基因工程、PCR技術(shù)等相關(guān)知識(shí)，考生需要理解和記憶相關(guān)知識(shí)，并學(xué)會(huì)應(yīng)用所學(xué)知識(shí)正確答題。【解析】CaCl2基因突變。

。

引物A

引物B

引物C

引物D

PCR1

√

√

×

×

PCR2

×

×

√

√

PCR3

×

×

×

×

PCR4

√

×

×

√

21、略

【分析】【分析】

PCR過程：①變性：當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)；DNA解旋為單鏈；②溫度下降到50℃左右時(shí)，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對分別與兩條單鏈DNA結(jié)合；③延伸：再將溫度上升到72℃左右，反應(yīng)體系中的4種脫氧核苷酸在耐高溫的TaqDNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈。

【詳解】

（1）引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對的短單鏈核苷酸序列；并依賴其完整的3′—OH實(shí)現(xiàn)子鏈的延伸，因此用于擴(kuò)增目的基因的引物需要與目的基因兩端的堿基序列互補(bǔ)配對。

DNA聚合酶延伸DNA子鏈時(shí)；是將脫氧核苷酸加到。引物的3′端，為了不破壞目的基因，attB1和attB2序列應(yīng)添加在引物的5′端。

（2）用Ca2+處理后的大腸桿菌會(huì)處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。題圖中質(zhì)粒2含有青霉素抗性基因且不具有ccdB基因；導(dǎo)入該質(zhì)粒的大腸桿菌能在含有青霉素的平板上增殖；而質(zhì)粒1含有ccdB基因，其表達(dá)的產(chǎn)物能抑制大腸桿菌的增殖，因此，理論上在平板上長出菌落的大腸桿菌中含有的質(zhì)粒即為質(zhì)粒2。

（3）題圖中質(zhì)粒1和質(zhì)粒3中均含有ccdB基因；其表達(dá)的產(chǎn)物能抑制大腸桿菌的增殖；質(zhì)粒2只含有青霉素抗性基因而不含卡那霉素抗性基因，因而含有該質(zhì)粒的大腸桿菌不能在含有卡那霉素的平板上生存；質(zhì)粒4含有卡那霉素抗性基因且不含有ccdB基因，因而含有該質(zhì)粒的大腸桿菌能在含有卡那霉素的平板上增殖。獲得的基因表達(dá)載體必須含有目的基因；標(biāo)記基因、啟動(dòng)子和終止子等。

（4）LR反應(yīng)體系中，attL與attR序列交換后序列變?yōu)閍ttP與attB序列，體系中的LR克隆酶具有專一性，不能催化attP與attB序列之間的互換，故所得產(chǎn)物不能再次回到初始狀態(tài)?！窘馕觥?1)能與目的基因兩端的堿基序列互補(bǔ)配對5′端。

(2)使大腸桿菌處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生